kl le thi thuy lien 2015 660 6

LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực khóa luận tốt nghiệp Vật liệu Y sinh thuộc Viện Khoa học Vật liệu ứng dụng, Viện Khoa học công nghệ Việt Nam em nhận hướng dẫn hỗ trợ nhiệt tình từ Q Thầy Cơ, Anh Chị bạn làm khóa luận Vì vậy, khóa luận cho em xin chân thành gửi lời cảm ơn Quý Thầy Cô, Anh Chị bạn làm khóa luận Em xin gửi đến TSKH Hồng Ngọc Anh kính trọng lịng biết ơn sâu sắc Cô quan tâm, tận tình hướng dẫn truyền đạt cho em kiến thức kinh nghiệm để em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn đến cô Đỗ Thị Tuyến tạo điều kiện thuận lợi để em thực đề tài Viện Sinh học Nhiệt đới Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến chị Th.S Nguyễn Thị Thanh Thảo quan tâm, giúp đỡ em thực khóa luận Em xin cám ơn chân thành chị Nguyễn Thị Thùy Trang, môn Dược lý, Khoa Dược, Trường ĐH Y Dược TPHCM giúp đỡ hướng dẫn em thời gian em thực đề tài trường Em xin gửi lời tri ân đến Quý Thầy Cô khoa Khoa học ứng dụng, trường đại học Tôn Đức Thắng, người truyền đạt kiến thức tận tình hướng dẫn cho em suốt thời gian em theo học trường Tp Hồ Chí Minh, tháng 12 năm 2014 Sinh viên thực Lê Thị Thùy Liên Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên TÓM TẮT Trên giới có nhiều nghiên cứu tác dụng dược lý nọc rắn cạp nong Bungarus fasciatus, có tác dụng giảm đau, kháng viêm Trong khóa luận sâu vào phân tích thành phần nọc rắn cạp nong B.fasciatus Việt Nam, khảo sát tác dụng giảm đau kháng viêm nọc Thu mua nọc rắn cạp nong Vĩnh Sơn - Việt Nam, sau tiến hành chạy sắc ký lọc gel gel Superdex HR75, thu phân đoạn có khối lượng khác Sau tiến hành khảo sát sơ khối lượng phân tử phân đoạn tách từ nọc rắn cạp nong phương pháp điện di Tiến hành khảo sát tác dụng giảm đau, kháng viêm nọc rắn toàn phần phân đoạn tách với liều 0,34 mg/kg chuột nhắt trắng, nhận thấy số phân đoạn phân đoạn tách cho tác dụng giảm đau kháng viêm tốt nọc toàn phần tốt thuốc đối chứng Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên MỤC LỤC  DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VỀ RẮN VÀ NỌC RẮN 1.1.1 Nguồn gốc 1.1.2 Phân bố địa lý 1.1.3 Phân loại 1.1.4 Nọc rắn ứng dụng nọc rắn y học 1.2 RẮN CẠP NONG 1.2.1 Hình thái học 1.2.2 Phân bố địa lý 1.2.3 Đặc điểm sinh học 1.2.4 Cách lấy nọc rắn 1.2.5 Thành phần hóa học, độc tính tác dụng dược lý nọc rắn cạp nong Bungarus fasciatus 1.2.5.1 Thành phần hóa học Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên 1.2.5.2 Độc tính 1.2.5.3 Tác dụng giảm đau nọc rắn 1.2.5.4 Tác dụng kháng viêm nọc rắn 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU NỌC RẮN CẠP NONG BUNGARUS FASCIATUS TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM 1.3.1 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 1.3.2 Tình hình nghiên cứu giới 10 1.4 SẮC KÝ LỌC GEL PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN NỌC RẮN CẠP NONG BUNGARUS FASCIATUS 11 1.4.1 Khái niệm 11 1.4.2 Nguyên tắc sắc ký lọc gel 12 1.4.3 Pha tĩnh sắc ký lọc gel 12 1.4.4 Chọn cột 12 1.4.5 Dung môi tốc độ dòng chảy 13 1.4.6 Ứng dụng sắc ký lọc gel 13 1.4.7 Các phận thiết bị sắc ký lọc gel 14 1.5 PHƯƠNG PHÁP ĐÔNG KHÔ 15 1.5.1 Khái niệm 15 1.5.2 Nguyên tắc phương pháp đông khô 16 1.5.3 Ưu điểm phương pháp đông khô 16 1.6 PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI 17 Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên 1.6.1 Khái niệm 17 1.6.2 Nguyên tắc điện di 17 1.6.3 Nguyên tắc tách hợp chất điện di 17 1.6.4 Ứng dụng phương pháp điện di 17 1.7 CÁC MƠ HÌNH NGHIÊN CỨU DƯỢC LÝ 17 1.7.1 Mơ hình nghiên cứu kháng viêm 17 1.7.2 Mơ hình nghiên cứu giảm đau 20 1.7.2.1 Mơ hình giảm đau trung ương 20 1.7.2.2 Mơ hình giảm đau ngoại biên 20 1.8 PHÂN TÍCH THỐNG KÊ KẾT QUẢ 21 CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 22 2.1 TÁCH PROTEIN TRONG NỌC RẮN CẠP NONG BUNGARUS FASCIATUS BẰNG SẮC KÝ LỌC GEL TRÊN GEL SUPERDEX 75 22 2.1.1 Dụng cụ hóa chất 22 2.1.2 Tiến hành thí nghiệm 23 2.2 KHẢO SÁT KHỐI LƯỢNG PHÂN TỬ CỦA CÁC PHÂN ĐOẠN TÁCH TỪ NỌC RẮN CẠP NONG BUNGARUS FASCIATUS BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI 26 2.2.1 Dụng cụ hóa chất 26 2.2.2 Tiến hành thí nghiệm 27 Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên 2.3 KHẢO SÁT TÁC DỤNG GIẢM ĐAU NGOẠI BIÊN CỦA NỌC RẮN CẠP NONG BUNGARUS FASCIATUS TOÀN PHẦN VÀ CÁC PHÂN ĐOẠN CỦA NÓ BẰNG PHƯƠNG PHÁP GÂY ĐAU QUẶN BẰNG ACID ACETIC 30 2.3.1 Dụng cụ hóa chất 30 2.3.2 Đối tượng thử nghiệm 31 2.2.3 Thuốc thử nghiệm 31 2.2.4 Tiến hành thử nghiệm 32 2.4 KHẢO SÁT TÁC DỤNG GIẢM ĐAU TRUNG ƯƠNG CỦA NỌC RẮN CẠP NONG BUNGARUS FASCIATUS TOÀN PHẦN VÀ CÁC PHÂN ĐOẠN CỦA NĨ BẰNG PHƯƠNG PHÁP GÂY ĐAU BẰNG KÍCH THÍCH NHIỆT 33 2.4.1 Dụng cụ hóa chất 33 2.4.2 Đối tượng thử nghiệm 34 2.4.3 Thuốc thử nghiệm 34 2.4.4 Tiến hành thử nghiệm 35 2.5 KHẢO SÁT TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM CỦA NỌC RẮN CẠP NONG BUNGARUS FASCIATUS TOÀN PHẦN VÀ CÁC PHÂN ĐOẠN CỦA NÓ BẰNG CARRAGEENAN 36 2.5.1 Dụng cụ hóa chất 36 2.5.2 Đối tượng thử nghiệm 37 2.5.3 Thuốc thử nghiệm 37 2.5.4 Tiến hành thử nghiệm 37 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 39 Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên 3.1 KẾT QUẢ SẮC KÝ LỌC GEL 39 3.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHỐI LƯỢNG PHÂN TỬ CỦA CÁC PHÂN ĐOẠN TÁCH TỪ NỌC RẮN BUNGARUS FASCIATUS BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI 40 3.3 KẾT QUẢ KHẢO SÁT TÁC DỤNG GIẢM ĐAU NGOẠI BIÊN CỦA NỌC RẮN CẠP NONG BUNGARUS FASCIATUS TOÀN PHẦN VÀ CÁC PHÂN ĐOẠN CỦA NÓ BẰNG PHƯƠNG PHÁP GÂY ĐAU QUẶN BẰNG ACID ACETIC 42 3.4 KẾT QUẢ KHẢO SÁT TÁC DỤNG GIẢM ĐAU TRUNG ƯƠNG CỦA NỌC RẮN CẠP NONG BUNGARUS FASCIATUS TOÀN PHẦN VÀ CÁC PHÂN ĐOẠN CỦA NĨ BẰNG PHƯƠNG PHÁP GÂY ĐAU BẰNG KÍCH THÍCH NHIỆT 45 3.5 KẾT QUẢ KHẢO SÁT TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM CỦA NỌC RẮN CẠP NONG BUNGARUS FASCIATUS TỒN PHẦN VÀ CÁC PHÂN ĐOẠN CỦA NĨ BẰNG CARRAGEENAN 48 3.5.1 Tác dụng kháng viêm nọc toàn phần với liều 0,34 mg/kg 49 3.5.2 Tác dụng kháng viêm phân đoạn với liều 0,34 mg/kg 50 3.5.3 Tác dụng kháng viêm phân đoạn với liều 0,34 mg/kg 51 3.5.4 Tác dụng kháng viêm phân đoạn với liều 0,34 mg/kg 52 3.5.5 Tác dụng kháng viêm phân đoạn với liều 0,34 mg/kg 54 3.5.6 Tác dụng kháng viêm phân đoạn với liều 0,34 mg/kg 55 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN 57 4.1 KẾT LUẬN 57 Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên 4.2 KIẾN NGHỊ 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 PHỤ LỤC Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Ký hiệu Tiếng Anh ACE Angiotensin-converting enzyme APS Ammonium persulfate Tiếng Việt B.fasciatus Bungarus fasciatus C Nhóm chứng ĐC Nhóm đối chứng GABA Gamma-aminobutyric acid LD50 Mean lethal dose NMDA N-Methyl-D-Aspartate NSAID Liều tử vong trung bình NonSteroidal Anti-Inflammatory Drug Thuốc kháng viêm khơng steroid NTP Nọc tồn phần PĐ Phân đoạn PL Phụ lục SDS TEMED Sodium dodecyl sulfate Tetramethylethylenediamine Th.S Thạc sĩ TSKH Tiến sĩ khoa học UV Ultra Violet Khóa luận tốt nghiệp đại học Tia cực tím Lê Thị Thùy Liên DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Một số thuốc chữa bệnh chuẩn đốn bệnh có nguồn gốc từ nọc rắn Bảng 1.2 Các thông số kĩ thuật hệ thống sắc ký lọc gel 15 Bảng 2.1 Thành phần gel 27 Bảng 2.2 Thành phần dung dịch xử lý protein 28 Bảng 2.3 Thành phần dung dịch đệm chạy điện di 28 Bảng 2.4 Thành phần dung dịch nhuộm Coomassie Blue R-250 29 Bảng 2.5 Thành phần dung dịch giải nhuộm 29 Bảng 3.1 Khối lượng phân đoạn sau chạy sắc ký lọc gel 40 Bảng 3.2 Số lần đau quặn chuột nhóm thử vào thời điểm khảo sát 42 Bảng 3.3 Thời gian phản ứng giật đuôi mạnh chuột (giây) nhóm thử vào thời điểm khảo sát 45 Bảng 3.4 Độ sưng phù chân chuột trung bình (%) 48 Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên 63 [37] Yipeng Wang and et al (2008), “Snake Cathelicidin from Bungarus fasciatus is potent Peptide Antibiotics”, PloS one , 3(9): 1-9 Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên PHỤ LỤC PL1 KẾT QUẢ KHẢO SÁT TÁC DỤNG GIẢM ĐAU NGOẠI BIÊN CỦA NỌC TOÀN PHẦN VÀ CÁC PHÂN ĐOẠN NỌC RẮN CẠP NONG B.FASCIATUS LIỀU 0,34 MG/KG Nhóm Chuột 5-10 phút 20-25 phút 35-40 phút 12 10 17 3 10 19 10 16 11 6 7 18 14 10 24 18 3 0 0 9 CHỨNG ĐỐI CHỨNG Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên 11 1 2 3 15 5 6 16 11 1 3 PHÂN ĐOẠN 11 1 5 0 1 0 1 NỌC TỒN PHẦN Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên 3 31 12 12 6 7 11 10 2 14 1 11 1 0 14 20 8 12 0 0 PHÂN ĐOẠN 4 5 10 PHÂN ĐOẠN PHÂN ĐOẠN Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên PHÂN ĐOẠN 0 13 10 2 14 4 11 5 13 0 0 8 Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên PL2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT TÁC DỤNG GIẢM ĐAU TRUNG ƯƠNG CỦA NỌC TOÀN PHẦN VÀ CÁC PHÂN ĐOẠN NỌC RẮN CẠP NONG B.FASCIATUS LIỀU 0,34 MG/KG Trước Sau 30 Sau 60 Sau 90 Sau 120 tiêm phút phút phút phút 1,16 1,86 1,39 1,73 1,45 1,20 1.26 1,30 1,54 1,66 1,90 1,82 1,95 2,43 2,08 2,40 1,10 1,95 2,04 1,95 1,99 1,56 1,53 1,41 1,67 1,64 1,01 1,93 1,88 1,64 1,55 1,79 1,79 1,74 1,73 2,11 2,02 2,08 1,11 1,65 1,70 3,12 4,16 1,70 1,72 2,40 6,95 8,01 4,35 2,65 ĐỐI 2,30 7,05 7,39 3,40 2,45 CHỨNG 2,00 5,23 6,76 3,07 2,06 2,09 5,38 7,00 3,10 2,33 2,10 5,79 7,05 3,18 2,41 Nhóm Chuột CHỨNG Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên 1,95 4,89 6,50 2,88 1,88 1,78 3,62 5,21 1,97 1,86 1,46 1,69 1,56 1,45 1,00 1,82 1,79 1,74 1,81 1,86 1,91 1,34 1,08 2,47 1,09 1,78 1,52 2,34 1,73 2,12 1,21 1,38 0,99 1,08 0,99 1,31 1,30 0,91 0,95 1,01 1,47 1,73 1,34 2,03 1,87 1,52 1,38 1,78 1,70 1,13 1,68 1,67 1,58 1,65 1,83 1,53 1,55 1,62 2,13 1,90 1,13 1,12 2,11 1,50 1,47 PHÂN 1,72 1,37 1,69 1,68 1,82 ĐOẠN 1,11 1,13 1,33 1,68 1,64 1,68 1,60 1,85 1,34 1,70 1,41 1,63 2,06 1,45 1,65 1,20 1,50 2,15 2,30 1,84 1,16 1,43 0,96 1,36 1,29 NỌC TỒN PHẦN Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên 1,15 1,61 1,59 1,23 1,77 1,25 1,40 2,38 1,75 2,65 1,44 2,00 2,24 1,49 1,58 1,46 1,21 1,22 1,57 1,64 1,61 1,92 1,36 1,70 1,22 1,19 1,40 1,21 1,09 1,06 1,07 1,13 2,00 1,96 1,32 1,51 1,54 1,71 1,94 2,24 1,57 1,59 1,29 1,57 1,20 1,31 1,20 1,50 1,51 1,67 PHÂN 1,26 1,78 1,49 1,94 2,22 ĐOẠN 1,17 1,38 1,36 1,17 1,38 1,82 1,19 1,23 2,06 1,87 1,30 1,43 1,48 1,91 1,45 1,56 1,29 1,32 2,53 1,51 1,51 0,92 1,17 1,26 1,36 PHÂN 1,70 1,12 1,47 1,78 1,86 ĐOẠN 1,34 1,48 1,60 2,34 1,29 1,29 1,49 1,64 2,30 2,17 PHÂN ĐOẠN Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên 1,17 1,56 1,73 1,43 1,65 1,47 1,26 2,86 1,30 2,30 1,26 1,17 1,39 1,52 1,42 1,65 1,34 1,47 1,39 1,34 1,53 1,23 1,78 1,16 1,18 1,35 1,40 0,96 1,65 1,29 1,74 1,39 1,40 1,30 1,33 PHÂN 1,22 1,28 1,30 1,58 1,50 ĐOẠN 5 1,60 1,38 1,54 1,58 1,39 1,74 1,42 1,28 1,46 1,60 1,52 1,68 1,78 1,78 1,38 1,82 1,50 1,52 1,32 1,90 Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên PL3 KẾT QUẢ KHẢO SÁT TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM CỦA NỌC TOÀN PHẦN VÀ CÁC PHÂN ĐOẠN CỦA NỌC RẮN CẠP NONG B.FASCIATUS LIỀU 0,34 MG/KG Thể tích chân chuột qua ngày (1/100 mL) Nhóm CHỨNG Trước Sau Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày viêm 16 15 14 14 13 11 11 16 18 16 14 13 11 12 12 19 18 16 12 12 11 12 11 17 16 15 13 13 15 14 10 17 18 15 14 13 15 13 10 17 16 14 15 15 14 15 10 17 17 16 14 15 14 15 17 17 14 15 15 14 14 11 17 18 16 15 15 15 14 10 12 18 18 18 17 15 16 16 11 16 16 17 15 14 13 13 12 13 21 17 18 16 15 16 16 13 15 15 18 16 16 13 13 12 11 11 11 11 12 Chuột Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên ĐỐI 16 16 18 15 15 12 13 17 16 12 12 13 12 11 10 18 16 14 12 13 12 12 10 16 17 13 15 12 13 12 12 20 16 13 14 13 13 13 11 17 16 12 12 12 13 13 12 19 15 16 12 12 13 13 9 17 14 12 13 12 13 13 10 18 16 15 14 15 13 13 11 10 18 18 16 15 13 13 13 13 10 11 11 12 12 11 19 16 18 16 17 15 15 12 19 17 16 17 15 16 16 10 20 19 18 18 16 14 14 10 17 15 14 13 12 12 12 11 18 15 16 14 16 13 13 12 21 17 17 16 14 14 14 10 18 15 16 14 12 14 14 10 19 16 15 13 13 13 13 CHỨNG NỌC TOÀN PHẦN Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên 10 19 17 20 21 16 16 14 10 18 15 17 17 16 13 14 10 16 19 18 16 16 14 13 15 15 14 13 13 13 13 11 18 17 14 13 14 14 12 14 14 14 14 14 13 13 11 17 17 14 13 14 13 13 10 19 15 15 14 14 13 13 17 14 14 13 13 13 11 PHÂN 11 20 16 13 14 12 13 13 ĐOẠN 10 16 14 15 15 14 13 13 12 20 17 14 14 12 13 13 15 15 14 14 13 12 12 11 17 14 15 13 14 12 12 11 17 14 14 14 14 12 13 10 19 17 16 14 14 13 12 PHÂN 17 17 14 14 14 13 13 ĐOẠN 3 10 18 15 13 14 13 13 13 10 17 16 15 14 13 13 14 PHÂN ĐOẠN Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên 12 20 16 14 13 14 14 13 10 16 14 14 13 12 13 11 11 17 16 15 13 14 13 11 13 20 16 14 14 15 13 13 10 17 15 16 17 14 13 13 12 19 19 18 17 16 11 11 10 18 15 17 15 13 14 14 PHÂN 16 16 14 14 11 13 13 ĐOẠN 11 19 18 16 14 13 12 12 10 19 15 14 13 12 14 14 12 20 18 18 17 14 14 14 12 20 18 17 17 15 16 16 12 19 18 18 14 12 12 13 12 20 14 15 16 14 14 14 10 16 15 13 13 13 13 13 11 18 15 13 12 11 8 11 19 14 15 14 14 13 13 10 18 17 18 19 16 15 15 11 17 15 14 15 12 14 14 PHÂN ĐOẠN Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên 10 19 16 17 16 13 14 14 11 19 16 16 14 13 13 13 Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên Khóa luận tốt nghiệp đại học Lê Thị Thùy Liên ... ngày ý Ngày với hỗ trợ trang thi? ??t bị phịng thí nghiệm đại, nhà nghiên cứu khoa học tìm giải pháp điều trị khơng an tồn, tác dụng phụ mà cịn đạt hiệu cao từ hợp chất thi? ?n nhiên có hoạt tính sinh... Dung môi tốc độ dòng chảy 13 1.4.6 Ứng dụng sắc ký lọc gel 13 1.4.7 Các phận thi? ??t bị sắc ký lọc gel 14 1.5 PHƯƠNG PHÁP ĐÔNG KHÔ 15 1.5.1 Khái niệm ... MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THI? ??U VỀ RẮN VÀ NỌC RẮN 1.1.1 Nguồn gốc 1.1.2 Phân bố địa lý 1.1.3