Khéo tay hay làm Khéo tay hay làm Khéo tay hay làmkl le minh duong

TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƢỜNG ĐẠI HỌC TƠN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA DỊCH CHIẾT TỪ CÂY MẬN (Syzygium samarangense) VÀ CHÙM RUỘT (Phyllanthus acidus) Sinh viên thực hiện: LÊ MINH ĐƢƠNG Lớp : 08SH1D Khố : 2008 - 2013 TP Hồ Chí Minh, năm 2013 TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƢỜNG ĐẠI HỌC TƠN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA DỊCH CHIẾT TỪ CÂY MẬN (Syzygium samarangense) VÀ CHÙM RUỘT (Phyllanthus acidus) Giảng viên hƣớng dẫn: TS HUỲNH THỊ BẠCH YẾN Sinh viên thực hiện: LÊ MINH ĐƢƠNG Lớp : 08SH1D Khố : 2008 - 2013 TP Hồ Chí Minh, năm 2013 i LỜI CẢM ƠN Con xin khắc ghi công ơn Cha Mẹ ngƣời thân nuôi dƣỡng giáo dục nên ngƣời Em xin gửi lòng biết ơn đến: + Ban giám hiệu Trƣờng Đại Học Tơn Đức Thắng Tp Hồ Chí Minh hỗ trợ tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt q trình học tập + Các thầy Bộ mơn Công nghệ Sinh học thầy cô Khoa Khoa Học Ứng Dụng Khoa khác dày công dạy dỗ, truyền thụ kiến thức cho em suốt 4,5 năm giảng đƣờng Đại Học + Tập thể thầy trực phịng thí nghiệm trƣờng Đại học Tôn Đức Thắng tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt q trình thí nghiệm + Đặt biệt em xin chân thành cảm ơn TS Huỳnh Thị Bạch Yến Cơ tận tình giúp đỡ, hƣớng dẫn, dành nhiều thời gian công sức để truyền đạt cho em kiến thức quí báu, tạo điều kiện thuận lợi cho em hồn thành khóa luận Chân thành cảm ơn tất bạn bè thƣơng yêu, động viên, giúp đỡ suốt 4,5 năm qua! Sinh viên thực Lê Minh Đƣơng ii LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm chấp nhận hình thức xử lý Nhà trƣờng vi phạm Luật sở hữu trí tuệ Quyền tác giả iii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii TÓM TẮT vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÍ HIỆU viii DANH SÁCH CÁC BẢNG ix DANH SÁCH CÁC HÌNH xi DANH SÁCH CÁC BIỂU ĐỒ xiii Chƣơng MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích 1.3 Yêu cầu Chƣơng TỔNG QUAN 2.1 GIỚI THIỆU VỀ CÂY CHÙM RUỘT 2.2 GIỚI THIỆU VỀ CÂY MẬN 2.3 VÀI NÉT VỀ CÁC VI KHUẨN SỬ DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU 2.3.1 Giới thiệu Staphylococcus aureus 2.3.1.1 Đặc điểm sinh học 2.3.1.2 Khả gây bệnh 2.3.2 Giới thiệu Escherichia coli 10 2.3.2.1 Đặc điểm sinh học .10 2.3.2.2 Khả gây bệnh 13 2.4 MỘT SỐ CHẤT KHÁNG SINH KHÁNG VI KHUẨN VÀ DƢỢC LIỆU TỰ NHIÊN 15 2.4.1 Một số kháng sinh kháng vi khuẩn 15 2.4.2 Một số dƣợc liệu tự nhiên 15 Chƣơng NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 17 3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 17 iv 3.2 VẬT LIỆU 17 3.2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 17 3.2.2 Vi khuẩn thí nghiệm 17 3.2.3 Thiết bị dụng cụ 17 3.2.4 Hóa chất mơi trƣờng sử dụng nghiên cứu 18 3.3 PHƢƠNG PHÁP ĐO VÒNG KHÁNG KHUẨN 19 3.4 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 3.4.1 Nội dung 1: Khảo sát khả kháng hai loại vi khuẩn dịch chiết thô từ Mận .20 3.4.1.1 Phƣơng pháp tiến hành thí nghiệm .20 3.4.1.2 Phƣơng pháp thực .21 3.4.2 Nội dung 2: Khảo sát khả kháng hai loại vi khuẩn dịch chiết thô từ lá, vỏ thân trái Chùm ruột 23 3.4.2.1 Phƣơng pháp tiến hành thí nghiệm 23 3.4.2.2 Phƣơng pháp thực .24 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 26 4.1 Kết khảo sát khả ức chế hai loại vi khuẩn dịch chiết thô từ Mận 26 4.1.1 Dịch chiết từ Mận già với dung môi trích ly ethanol 70% nƣớc cất 26 4.1.2 Dịch ép Mận 32 4.1.3 Dịch chiết từ Mận non trích ly dung môi ethanol 70% nƣớc .32 4.2 Kết khảo sát khả ức chế loại vi khuẩn dịch chiết thô từ Chùm ruột 39 4.2.1 Dịch ép trái Chùm ruột 39 4.2.2 Dịch chiết từ vỏ thân Chùm ruột trích ly dung mơi ethanol 70% 39 v 4.2.3 Dịch chiết từ Chùm ruột già trích ly dung môi ethanol 70% nƣớc .40 4.2.4 Dịch chiết từ Chùm ruột non trích ly dung mơi ethanol 70% nƣớc 49 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56 5.1 KẾT LUẬN 56 5.2 KIẾN NGHỊ 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 vi TÓM TẮT SV Lê Minh Đƣơng, Trƣờng Đại Học Tôn Đức Thắng Đề tài: “Khảo sát tính kháng khuẩn dịch chiết từ Mận (Syzygium samarangense) Chùm ruột (Phyllanthus acidus)” Đƣợc thực từ tháng 9/2012 đến tháng 12/2012 Tại phịng thí nghiệm chuyên đề - Khoa Khoa Học Ứng Dụng, Bộ môn Công Nghệ Sinh Học, Trƣờng Đại Học Tôn Đức Thắng TP Hồ Chí Minh Giảng viên hƣớng dẫn: TS Huỳnh Thị Bạch Yến Lá Chùm ruột Mận đƣợc chiết dung môi ethanol 70% nƣớc, dịch ép từ Mận, dịch ép từ trái Chùm ruột dịch chiết từ vỏ thân Chùm ruột đƣợc chiết ethanol 70% Sau tiến hành thử khả diệt khuẩn chủng vi khuẩn Gram dƣơng (Staphylococcus aureus) Gram âm (Escherichia coli) Kết đạt đƣợc nhƣ sau: - Dịch chiết từ Mận loại dung mơi ethanol 70% nƣớc có khả ức chế yếu chủng vi khuẩn Gram dƣơng: Staphylococcus aureus vi khuẩn Gram âm: Escherichia coli Dịch chiết từ Mận dung môi ethanol 70% theo tỉ lệ (4:1) cho kết ức chế chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus Escherichia coli mạnh dịch chiết trích ly theo tỷ lệ khác Các dịch chiết từ Mận loại dung môi theo tỉ lệ (1:1) (2:1) không ức chế đƣợc chủng vi khuẩn Dịch chiết từ Mận theo tỉ lệ (3:1) ức chế đƣợc vi khuẩn Staphylococcus aureus mà không ức chế đƣợc vi khuẩn Escherichia coli Dịch ép nguyên chất từ Mận khơng có khả ức chế loại vi khuẩn - Dịch chiết từ Chùm ruột loại dung mơi ethanol 70% nƣớc có khả ức chế chủng vi khuẩn Gram dƣơng: Staphylococcus aureus chủng vi khuẩn Gram âm: Escherichia coli mức trung bình Khả kháng khuẩn dịch chiết tăng dần theo tỉ lệ Dịch chiết từ Chùm ruột dung môi ethanol theo tỉ lệ (4:1) cho kết ức chế loại vi khuẩn S aureus, E coli mạnh vii Dịch chiết từ vỏ thân Chùm ruột dung môi ethanol 70% theo tỉ lệ (1:4) có khả ức chế đƣợc chủng vi khuẩn Dịch ép từ trái Chùm ruột khơng có khả ức chế chủng vi khuẩn viii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÍ HIỆU CFU : Colony forming unit (đơn vị hình thành khuẩn lạc) CRG (1:1) : dịch chiết thô Chùm ruột già đƣợc chiết dung môi theo tỉ lệ 20g : 20ml dung môi CRG (2:1) : dịch chiết thô Chùm ruột già đƣợc chiết dung môi theo tỉ lệ 40g : 20ml dung môi CRG (3:1) : dịch chiết thô Chùm ruột già đƣợc chiết dung môi theo tỉ lệ 45g : 15ml dung môi CRG (4:1) : dịch chiết thô Chùm ruột già đƣợc chiết dung môi theo tỉ lệ 60g : 15ml dung môi CRN (1:1) : dịch chiết thô Chùm ruột non đƣợc chiết dung môi theo tỉ lệ 20g : 20ml dung môi CRN (2:1) : dịch chiết thô Chùm ruột non đƣợc chiết dung môi theo tỉ lệ 40g : 20ml dung môi CRN (3:1) : dịch chiết thô Chùm ruột non đƣợc chiết dung môi theo tỉ lệ 45g : 15ml dung môi CRN (4:1) : dịch chiết thô Chùm ruột non đƣợc chiết dung môi theo tỉ lệ 60g : 15ml dung môi E : dung môi ethanol 70% MG (1:1) : dịch chiết thô Mận già đƣợc chiết dung môi theo tỉ lệ 20g : 20ml dung môi MG (2:1) : dịch chiết thô Mận già đƣợc chiết dung môi theo tỉ lệ 40g : 20ml dung môi MG (3:1) : dịch chiết thô Mận già đƣợc chiết dung môi theo tỉ lệ 45g : 15ml dung môi MG (4:1) : dịch chiết thô Mận già đƣợc chiết dung môi theo tỉ lệ 60g : 15ml dung môi 45 S aureus E coli Dung môi nƣớc S aureus E coli Dung môi ethanol 70% Hình 4.12 Kết khảo sát đƣờng kính vô trùng dịch chiết Chùm ruột già với dung môi nƣớc ethanol 70% theo tỉ lệ (1:1) S aureus E coli 46 S aureus E coli Dung môi nƣớc S aureus E coli Dung mơi ethanol 70% Hình 4.13 Kết khảo sát đƣờng kính vơ trùng dịch chiết Chùm ruột già với dung môi nƣớc ethanol 70% theo tỉ lệ (2:1) S aureus E coli 47 S aureus E coli Dung môi nƣớc S aureus E coli Dung mơi ethanol 70% Hình 4.14 Kết khảo sát đƣờng kính vơ trùng dịch chiết Chùm ruột già với dung môi nƣớc ethanol 70% theo tỉ lệ (3:1) S aureus E coli 48 S aureus E coli Dung môi nƣớc S aureus E coli Dung mơi ethanol 70% Hình 4.15 Kết khảo sát đƣờng kính vơ trùng dịch chiết Chùm ruột già với dung môi nƣớc ethanol 70% theo tỉ lệ (4:1) S aureus E coli 49 4.2.4 Dịch chiết từ Chùm ruột non trích ly dung môi ethanol 70% nƣớc Kết đo đƣờng kính vịng vơ khuẩn dịch chiết từ chùm ruột già theo tỉ lệ khác thể bảng sau: Bảng 4.5 Đƣờng kính trung bình vịng vơ khuẩn dịch chiết từ Chùm ruột non Đƣờng kính trung bình vịng vơ khuẩn chủng Dịch chiết vi khuẩn (mm) X ± SD E coli S aureus CRN_N (1:1) 8,50  0,25 10,33  0,08 CRN_E (1:1) 8,33  0,08 11,33  0,08 CRN_N (2:1) 10,33  0,08 12,83  0,08 CRN_E (2:1) 12,00  0,75 13,67  0,08 CRN_N (3:1) 13,17  0,08 15,17  0,08 CRN_E (3:1) 15,33  0,08 15,67  0,08 CRN_N (4:1) 16,17  0,08 16,67  0,08 CRN_E (4:1) 17,33  0,08 17,50  0,25 Chú thích: CRN_N , CRN_E: dịch chiết từ Chùm ruột non dung môi nước cất ethanol 70% (1:1), (2:1), (3:1), (4:1): tỉ lệ nguyên liệu trích ly so với dung mơi 50 Biểu đồ 4.5 So sánh đƣờng kính trung bình vịng vơ khuẩn dịch chiết tỉ lệ khác S aureus E coli 51 Biểu đồ 4.6 So sánh khả kháng khuẩn dịch chiết thô từ Chùm ruột non dung môi nƣớc ethanol 70% S aureus E coli Từ hình biểu diễn kết khảo sát đƣờng kính vịng vơ khuẩn, bảng xử lý số liệu đồ thị cho thấy dịch chiết từ Chùm ruột non có khả kháng chủng vi khuẩn S.aureus (Gram dƣơng) E.coli (Gram âm) Các dịch chiết có khả ức chế E.coli S.aureus tƣơng đƣơng Tỉ lệ dịch chiết tăng dần khả kháng khuẩn tăng dần Tỉ lệ nguyên liệu chiết dung mơi (1:1) đƣờng kính vịng vơ khuẩn nhỏ tỉ lệ (4:1) đƣờng kính vịng vơ khuẩn lớn Cụ thể, dịch chiết CRN_N (1:1) có đƣờng kính vịng vơ khuẩn chủng vi khuẩn E coli S aureus lần lƣợt là: 8,50  0,25 (mm) 10,33  0,08 (mm) Dịch chiết CRG_E (1:1) có đƣờng kính vịng vô khuẩn chủng vi khuẩn E coli S aureus lần lƣợt là: 8,33  0,08 (mm) 11,33  0,08 (mm) Dịch chiết CRN_N (4:1) có đƣờng kính vịng vơ khuẩn chủng vi khuẩn E coli S aureus lần lƣợt là: 16,17  0,08 (mm) 16,67  0,08 (mm) Dịch chiết CRN_E (4:1) có đƣờng kính vịng vơ khuẩn chủng vi khuẩn E coli S aureus lần lƣợt là: 17,33  0,08 (mm) 17,50  0,25 (mm) Khả kháng khuẩn dịch chiết mức trung bình nhạy cảm Tuy không mạnh thuốc kháng sinh nhƣng với khả ức chế vi khuẩn mức trung bình cho ta thấy dịch chiết dùng nhƣ thuốc chữa bệnh nhiễm khuẩn 52 S aureus E coli Dung môi nƣớc E coli S aureus Dung mơi ethanol 70% Hình 4.16 Kết khảo sát vịng vơ trùng dịch chiết Chùm ruột non với dung môi nƣớc ethanol 70% theo tỉ lệ (1:1) S aureus E coli 53 S aureus E coli Dung môi nƣớc S aureus E coli Dung mơi ethanol 70% Hình 4.17 Kết khảo sát vịng vơ khuẩn dịch chiết Chùm ruột non với dung môi nƣớc ethanol 70% theo tỉ lệ (2:1) S aureus E coli 54 E coli S aureus Dung môi nƣớc E coli S aureus Dung mơi ethanol 70% Hình 4.18 Kết khảo sát vịng vơ khuẩn dịch chiết Chùm ruột non với dung môi nƣớc ethanol 70% theo tỉ lệ (3:1) S aureus E coli 55 S aureus E coli Dung môi nƣớc S aureus E coli Dung mơi ethanol 70% Hình 4.19 Kết khảo sát vịng vơ khuẩn dịch chiết Chùm ruột non với dung môi nƣớc ethanol 70% theo tỉ lệ (4:1) S aureus E coli 56 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Qua thời gian thực đề tài: “Khảo sát tính kháng khuẩn dịch chiết từ Mận (Syzygium samarangense) Chùm ruột (Phyllanthus acidus)”, rút đƣợc kết sau:  Hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết từ Mận - Dịch chiết từ Mận có khả kháng hai chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus Escherichia coli mức yếu - Dịch chiết từ Mận dung môi ethanol 70% theo tỉ lệ (4:1) cho kết ức chế vi khuẩn Staphylococcus aureus mạnh loại dịch chiết từ Mận - Dịch chiết từ Mận dung môi ethanol 70% nƣớc theo tỉ lệ (1:1) (2:1) không ức chế đƣợc chủng vi khuẩn - Khả kháng khuẩn Mận già Mận non gần tƣơng đƣơng  Hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết từ Chùm ruột - Dịch chiết từ Chùm ruột có khả ức chế hai chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus Escherichia coli cấp độ trung bình nhạy cảm - Dịch chiết từ Chùm ruột dung môi ethanol 70% theo tỉ lệ (4:1) cho kết ức chế loại vi khuẩn Staphylococcus aureus Escherichia coli mạnh so với loại dịch chiết từ Chùm ruột - Dịch chiết từ Chùm ruột dung môi ethanol 70% nƣớc theo tỉ lệ (1:1) có khả ức chế chủng vi khuẩn thấp - Dịch chiết từ Chùm ruột già có khả kháng khuẩn mạng dịch chiết từ Chùm ruột non 57 - Dịch chiết từ Chùm ruột có tác dụng kháng khuẩn mạnh dịch chiết từ Mận - Đối với Mận Chùm ruột sử dụng dịch chiết dung môi ethanol 70% cho hiệu kháng khuẩn tốt dung môi nƣớc  Đánh giá khả kháng khuẩn hai đối tƣợng : Khả kháng khuẩn dịch chiết từ Chùm ruột mạnh so với dịch chiết từ Mận 5.2 KIẾN NGHỊ Vì thời gian thực đề tài ngắn, kết thu đƣợc khảo sát bƣớc đầu, đề nghị tiếp tục nghiên cứu số nội dung nhƣ: - Khảo sát khả kháng khuẩn dịch chiết thô Mận Chùm ruột dung môi khác nhƣ: methanol, benzen, chloroform, ether ethylic, ethylacetat, butanol… - Thử nghiệm khả kháng khuẩn dịch chiết thô Mận Chùm ruột chủng vi sinh khác - Phân tích thành phần dịch chiết từ Mận Chùm ruột, từ tìm qui trình tinh chiết chất có hoạt tính sinh học Mận Chùm ruột 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học, (2008), Thực Hành Vi Sinh Đại Cương, Trƣờng Đại Học Tôn Đức Thắng Nguyễn Thanh Bảo, (2006) Vi Khuẩn Học Trƣờng Đại Học Y Dƣợc TP Hồ Chí Minh Tr 42-48, 90-94 Nguyễn Ngọc Thanh Hà, (2004), Điều tra tình hình chăn nuôi, nuôi cấy phân lập thử kháng sinh đồ số loài vi khuẩn gây viêm vú tiềm ẩn đàn bò sữa Thành phố Cần Thơ Luận văn Thạc sĩ Trƣờng Đại Học Cần Thơ Phạm Hồng Hộ, (2006), Cây có vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất trẻ Hồ Xuân Ngân, (2007), Phân Lập Vi Khuẩn Escherichia coli Gây Viêm Vú Trên Đàn Bò Sữa Tại Thành Phố Cần Thơ Luận Văn Tốt Nghiệp Trƣờng Đại Học Cần Thơ Tr 28-37 Trần Thị Phận, (2004), Vi Sinh Vật Thú Y, Trƣờng Đại Học Cần Thơ Tr.5, 17, 18-21 Nguyễn Kim Phi Phụng, (2007), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Nhà xuất Đại học quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Tr 20-23, 34-36 Nguyễn Vĩnh Phƣớc, (1997), Vi sinh vật học thú y tập Trƣờng Đại Học Trung Cấp Chuyên Nghiệp Hà Nội Nguyễn Nhƣ Thanh, Nguyễn Bá Hiên Trần Thị Lan Hƣơng, (1997), Vi Sinh Vật Thú Y Nhà Xuất Bản Nông Nghiệp Tr.5, 80-85 10 Trần Linh Thƣớc, (2007) Phương Pháp Phân Tích Vi Sinh Trong Nước Và Thực Phẩm Nhà Xuất Bản Giáo Dục 11 Giang Thị Thanh Tuyền, (2012), Khảo sát khả diệt khuẩn Me đất hoa vàng (Oxalis corniculata L) rau Càng cua (Peperomia pellucida Kunth) 59 TÀI LIỆU TỪ INTERNET 12 http://www.botanyvn.com/cnt.asp?param=edir&v=Phyllanthus%20acidus &list=species 13 https://sites.google.com/site/raurungvietnam/rau-than-go-lon/cay-chumruot 14 http://caythuoc.chothuoc24h.com/cay-thuoc/9999/548 15 http://vi.wikipedia.org/wiki/M%E1%BA%ADn 16 http://vi.wikipedia.org/wiki/Ch%C3%B9m_ru%E1%BB%99t 17 http://www.flickr.com/photos/phuonglovejesus2782010/5474169222/in/p hotostream/ 18 http://www.nk-biotek.com.vn/admins/upload/KS-PPKSD.pdf 19 http://benhnhietdoi.vn/data/files/documents/Huong_dan_thu_nghiem_nha y_cam_khang_sinh.pdf 20 http://www.nihe.org.vn/new-vn/thuong-quy-va-huong-dan-kythuat/936/Ky-thuat-khoanh-giay-khang-sinh-khuech-tan.vhtm 21 http://www.duoclieu.org/2012/02/phuong-phap-thu-tac-dung-khangkhuan.html 22 http://www.duoclieu.org/2012/09/cac-phuong-phap-chiet-xuat-duoclieu.html 23 www.extension.org/pages/28432/staphylococcus-aureus 24 vietbao.vn/Suc-khoe/Nhieu-cach-phong-nhiem Ecoli/2131341026/248 25 http://alobacsi.vn/20110428083314981p0c347/phuong-thuoc-tu-chumruot.htm 26 http://www.baoanhdatmui.vn/vcms/html/news_detail.php?nid=13243 27 www.extension.org/pages/28432/staphylococcus-aureus ... acidus) Giảng viên hƣớng dẫn: TS HUỲNH THỊ BẠCH YẾN Sinh viên thực hiện: LÊ MINH ĐƢƠNG Lớp : 08SH1D Khoá : 2008 - 2013 TP Hồ Chí Minh, năm 2013 i LỜI CẢM ƠN Con xin khắc ghi công ơn Cha Mẹ ngƣời thân... TP Hồ Chí Minh 3.2 VẬT LIỆU 3.2.1 Đối tƣợng nghiên cứu Cây Mận: phận dùng: non, già Cây Chùm Ruột: phận dùng: non, già, vỏ thân trái Tất đƣợc thu hái khu vực quận 7, thành phố Hồ Chí Minh 3.2.2... Chân thành cảm ơn tất bạn bè thƣơng yêu, động viên, giúp đỡ suốt 4,5 năm qua! Sinh viên thực Lê Minh Đƣơng ii LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Tơi xin chịu hồn tồn trách