Khảo sát thành phần hóa học của vỏ thân cây me rừng phyllanthus emblica linn

MỤC LỤC Lời cảm ơn Danh mục kí hiệu chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục sơ đồ Danh mục hình Danh mục phụ lục LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm thực vật Me rừng 1.2 Các nghiên cứu dược tính Me rừng 1.3 Các nghiên cứu thành phần hóa học .4 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 13 2.1 Hóa chất, thiết bị, phương pháp 13 2.2 Nguyên liệu 14 2.3 Điều chế loại cao .14 2.4 Cơ lập hợp chất hữu có cao ethyl acetate 15 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 20 3.1 Khảo sát cấu trúc hợp chất PEE04 20 3.2 Khảo sát cấu trúc hợp chất PA1 23 3.3 Khảo sát cấu trúc hợp chất PA2 26 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 30 4.1 Kết luận .30 4.2 Đề xuất 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO 32 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT 1H-NMR 13C-NMR HSQC HMBC brs s d dd m 𝛿 J ppm RP-18 Rf EA C Me H SKC SKLM G Mg Hz Proton (1) Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (1)) Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon (13)) Heteronuclear Single Quantum Correlation (Phổ tương tác dị hạt nhân qua liên kết) Heteronuclear Multiple Bond Coherence (Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết) Broad singlet (mũi đơn rộng) Singlet (Mũi đơn) Doublet (Mũi đôi) Double of doublet (Mũi đôi - đôi) Multiplet (Mũi đa) Chemical shift (Độ chuyển dịch hoá học) Coupling constant (Hằng số ghép spin) Part per million (Một phần triệu) Reversed Phase-18 (Pha đảo C-18) Retention factor (Hệ số lưu giữ) Ethyl Acetate Chloroform Methanol n-Hexane Sắc ký cột Sắc ký lớp mỏng Gam Miligam Hertz DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số hợp chất cô lập từ Phyllanthus emblica Linn Bảng 2.1 Sắc kí cột silica gel cao ethyl acetate 15 Bảng 2.2 Sắc kí cột silica gel phân đoạn EA4 16 Bảng 2.3 Sắc kí cột silica gel phân đoạn EA4.6 17 Bảng 2.4 Sắc kí cột silica gel phân đoạn EA4.3 18 Bảng 2.5 Sắc kí cột silica gel phân đoạn EA4.7 19 Bảng 3.1 Dữ liệu phổ NMR hợp chất PEE04 periplogenin 22 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ NMR hợp chất PA1và 16-dehydropregenolone 25 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ NMR hợp chất PA2 phyllanthol 28 DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1 Quy trình điều chế loại cao từ vỏ thân Me rừng 15 Sơ đồ 2.2 Quy trình lập số hợp chất từ cao ethyl acetate 19 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cây Me rừng Hình 1.2 Vỏ thân Me rừng Hình 1.3 Cấu trúc số hợp chất cô lập từ Phyllanthus emblica Linn 12 Hình 3.1 Cấu trúc số tương quan HMBC hợp chất PEE04 23 Hình 3.2 Cấu trúc số tương quan HMBC hợp chất PA1 25 Hình 3.3 Cấu trúc số tương quan HMBC hợp chất PA2 29 DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC Phụ lục Phổ 1H-NMR hợp chất PEE04 Phụ lục Phổ 13C-NMR hợp chất PEE04 Phụ lục 2a Phổ 13C-NMR dãn rộng hợp chất PEE04 Phụ lục Phổ DEPT hợp chất PEE04 Phụ lục Phổ HSQC hợp chất PEE04 Phụ lục Phổ HMBC hợp chất PEE04 Phụ lục Phổ 1H-NMR hợp chất PA1 Phụ lục Phổ 13C-NMR hợp chất PA1 Phụ lục Phổ DEPT (CDCl3) hợp chất PA1 Phụ lục Phổ COSY (CDCl3) hợp chất PA1 Phụ lục 10 Phổ HSQC (CDCl3) dãn rộng hợp chất PA1 Phụ lục 11 Phổ HMBC (CDCl3) dãn rộng hợp chất PA1 Phụ lục 12 Phổ 1H-NMR (CDCl3) hợp chất PA2 Phụ lục 12a Phổ 1H-NMR dãn rộng (CDCl3) hợp chất PA2 Phụ lục 13 Phổ 13C-NMR (CDCl3) hợp chất PA2 Phụ lục 14 Phổ HMBC (CDCl3) hợp chất PA2 Phụ lục 15 Phổ HMBC (CDCl3) dãn rộng hợp chất PA2 LỜI MỞ ĐẦU Chi Phyllanthus chi lớn, bao gồm khoảng 500 đến 700 loài, chia thành 10 đến 11 chi nhỏ, bao gồm chi Isocladus, Kirganelia, Cicca, Emblica, Conani, Gomphidium, Phyllanthodendron, Xylophylla, Botryanthus, Ericocus Phyllanthus [6] Bên cạnh loài Phyllanthus amarus Schum et Thonn (cây Diệp hạ châu đắng), Phyllanthus urinaria L (cây Diệp hạ châu ngọt), Phyllanthus reticulatus Poir (cây Phèn đen) dùng nhiều thuốc chữa bệnh gan, sỏi thận,…[2], năm gần đây, Me rừng (Phyllanthus emblica Linn.) quan tâm ứng dụng y học cổ truyền y học đại Cây Me rừng (Phyllanthus emblica Linn.) thuộc chi Phyllanthus Cây dùng phổ biến y học cổ truyền Việt Nam nhiều nước giới Ở nước ta, mọc phổ biến đồi trọc, rừng thưa Quả dùng chữa cảm mạo, phát sốt, ho, đau cổ họng, miệng khô khát, rễ dùng để trị viêm ruột, đau bụng ngoài, cao huyết áp, nấu nước rửa bên ngồi trị lở lt, mẫn ngứa, cịn thân vỏ có tác dụng hạ huyết áp [2] Bên cạnh việc sử dụng thuốc y học cổ truyền, hợp chất cô lập từ Me rừng chứng minh có tác dụng hạ men gan, chống oxi hóa, kháng khuẩn [1] Mặc dù giới có nhiều nghiên cứu thành phần hóa học Me rừng, Việt Nam, nghiên cứu thành phần hóa học cịn hạn chế, đặc biệt chưa có nghiên cứu thành phần hóa học vỏ thân Chính mà chọn vỏ thân Me rừng để nghiên cứu với mong muốn làm rõ thêm thành phần hóa học, từ hiểu thêm tác dụng chữa bệnh đóng góp chứng khoa học có giá trị vào kho dược liệu Y học Việt Nam CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm thực vật Me rừng Tên thông thường Việt Nam Me rừng Ngoài ra, Me rừng có tên gọi khác tùy thuộc vùng miền mận rừng, me tròn, chùm ruột núi, chùm ruột rừng, mác kham (Tày), diều cam (Dao), xì xà Liên (K’Ho) [2] Tên khoa học: Phyllanthus emblica Linn Thuộc họ: Thầu dầu (Euphorbiaceae) Hình 1.1 Cây Me rừng Hình 1.2 Vỏ thân Me rừng Cây Me rừng phân bố rộng khắp vùng nhiệt đới châu Á, tìm thấy lồi thực vật Việt Nam, Ấn Độ, Thái Lan,… Riêng Việt Nam, Me rừng phân bố nhiều tỉnh trung du miền núi phía Bắc Cao Bằng, Lạng Sơn, Vĩnh Phúc, … [1] Cây Me rừng thường loại gỗ nhỏ, ưa sáng, ưa nóng, chịu khơ hạn tốt, thân cao – mét, phân nhiều cành, cành nhỏ mềm, có lơng, dài 20cm Lá xếp thành hai dãy cành nhỏ trông giống kép lông chim, cuống ngắn Lá kèm nhỏ hình ba cạnh Hoa nhỏ, đơn tính gốc Cụm hoa thành xim co mọc nách phía cành, với nhiều hoa đực vài hoa Quả hình cầu trước mọng, sau khơ thành nang Hạt hình ba cạnh, màu hồng nhạt Cây hoa từ tháng đến tháng 11 hàng năm 1.2 Các nghiên cứu dược tính Me rừng 1.2.1 Dược tính theo y học cổ truyền Dựa vào nghiên cứu trước dược tính theo y học cổ truyền, hầu hết tất phận lồi thực vật có công dụng chữa bệnh Ở Ấn Độ, Me rừng thành phần nhiều thuốc cổ truyền dùng để chữa sỏi niệu, bệnh gan, có tác dụng bảo vệ chống độc hại gan Cịn Việt Nam, Me rừng khô thường dùng để trị tiêu chảy đau bụng Hơn hết, Me rừng dùng nguồn vitamin C dồi với tên “Myrobalan emblic”, chữa bệnh cảm mạo, phát sốt, ho, đau cổ họng, miệng khô khát (dùng 10 – 30 sắc uống ngày), trị bệnh đái tháo đường, trị ho, lợi tiểu, nhuận tràng Cịn rễ có vị đắng, chát, tính mát dùng để trị viêm ruột, đau bụng ngoài, cao huyết áp (dùng 15 – 20g sắc uống ngày) Bên cạnh đó, nấu nước rửa bên ngồi để trị lở loét, mẩn ngứa Vỏ thân rễ có vị đắng, chát, tính mát, sắc lấy nước uống làm lợi tiểu, chữa phù thũng tăng huyết áp [1–2] 1.2.2 Dược tính theo y học đại Trên giới có nhiều cơng trình nghiên cứu dược tính theo y học đại Me rừng, phải kể đến số nghiên cứu tác dụng dược lý hợp chất quan trọng Me rừng acid gallic, acid ellagic, phyllaemblicin B, phyllaemblicin C, putranjivain A, emblicamin A B…  Tác dụng kháng khuẩn chống oxi hóa Năm 2007, từ dịch chiết Me rừng, Xiaoli Liu cộng nghiên cứu thành cơng khả kháng khuẩn chống oxi hóa từ dịch chiết Dịch chiết thu phương pháp chiết với chất lỏng siêu tới hạn cao chiết với methanol [22] Kết nghiên cứu cho thấy cao chiết phương pháp chiết với chất lỏng siêu tới hạn có khả kháng khuẩn loại vi khuẩn gram âm (E coli, P aeruginosa, S typhi), gram dương (S aureus, B cereus B subtilis) kể nấm (C abican, C tropicalis A niger) gây hại thực phẩm Điều xem góp phần vào việc sử dụng sản phẩm thay để kiểm soát vi khuẩn bảo quản thực phẩm từ tự nhiên Ngoài ra, vào năm 2016, từ dịch chiết ethanol Me rừng, Sirinya Pientaweeratch cộng cho thấy khả chống oxi hóa với nồng độ ức chế 50% (IC50) xác định phương pháp khử gốc tự 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DDPH) 1.70  0.07 mg/mL phương pháp khử gốc tự 3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid (ABTS) 4.45  0.10 mg/mL [13]  Tác dụng bảo vệ gan Năm 2008, từ dịch chiết vỏ thân Me rừng, S.K El-Desouky cộng cơng bố dịch có chứa phenolic, flavonoid tanin Với số thử nghiệm chuột, kết thu cho thấy dịch chiết có tác dụng chống rối loạn chức gan tác dụng ethanol [15] Sau đó, năm 2010, loạt nghiên cứu Sharma Bhawna cộng công bố dịch chiết ethanol Me rừng có tác dụng hạ men gan, phục hồi chức gan với liều lượng 75 mg/kg/ngày thử nghiệm chuột [12]  Tác dụng kháng virus Vào năm 2011, Yang Fei Xiang cộng cô lập hợp chất 1,2,4,6‐tetra‐O‐galloyl‐β‐D‐glucose (75), sau họ tiến hành loạt thử nghiệm với tác dụng chống virus HSV (Herpes Simplex virus) loại (HSV1 HSV-2) Kết cho thấy hoạt chất ngăn chặn lây nhiễm virus tế bào giai đoạn đầu [26] Năm 2017, He Yan cộng từ dịch chiết rễ Me rừng tìm hai hợp chất chalconoid emblirol A (21) emblirol B (22) có tác dụng kháng virus khảm thuốc (TMV) gây bệnh khảm thuốc lá, với khả ức chế 79,6% 82,1% (nồng độ thử nghiệm 1mg/mL) [5]  Tác dụng gây độc tế bào ung thư Năm 2012, Xiaoli Liu cộng cô lập từ cao etyl acetat Me rừng thử nghiệm hoạt tính sinh học số hợp chất số hợp chất 22 17 19 20, 23 14 Phụ lục Phổ DEPT hợp chất PEE04 18 22 19 18 21a 21b 17 18 19 17 21 22 Phụ lục Phổ HSQC hợp chất PEE04 22 19 18 21a 21b 17 17 21 22 20, 23 Phụ lục Phổ HMBC hợp chất PEE04 21 19 18 16 Phụ lục Phổ 1H-NMR hợp chất PA1 14 13 12 10 16 20 17 Phụ lục Phổ 13C-NMR hợp chất PA1 15 11 19 21 18 16 14 19 21 20 17 Phụ lục Phổ DEPT (CDCl3) hợp chất PA1 13 18 21 16 18 19 21 16 Phụ lục Phổ COSY (CDCl ) hợp chất PA1 19 18 21 16 21 16 Phụ lục 10 Phổ HSQC (CDCl3) hợp chất PA1 19 18 21 16 18 19 21 13 14 17 20 Phụ lục 11 Phổ HMBC (CDCl3) hợp chất PA1 19 18 Phụ lục 12 Phổ 1H-NMR hợp chất PA2 27a 27b 24 23 26 30 27a Phụ lục 12a Phổ 1H-NMR dãn rộng hợp chất PA2 27b 2,16 25 22 19 21 12 10 28 15 30 11 24 27 17 13 14 18 Phụ lục 13 Phổ 13C-NMR hợp chất PA2 26 23 24 27a 27 18 Phụ lục 14 Phổ HSQC (CDCl ) hợp chất PA2 27b 26 23 27a 27 24 15 13 12 24 18 Phụ lục 15 Phổ HMBC (CDCl ) hợp chất PA2 27b ... cứu thành phần hóa học cịn hạn chế, đặc biệt chưa có nghiên cứu thành phần hóa học vỏ thân Chính mà chúng tơi chọn vỏ thân Me rừng để nghiên cứu với mong muốn làm rõ thêm thành phần hóa học, từ... thận,…[2], năm gần đây, Me rừng (Phyllanthus emblica Linn. ) quan tâm ứng dụng y học cổ truyền y học đại Cây Me rừng (Phyllanthus emblica Linn. ) thuộc chi Phyllanthus Cây dùng phổ biến y học cổ truyền Việt... kéo vệt EA :Me (99:1) 4.6 Nhiều vết 15 Ghi Đã khảo sát Đã khảo sát Chưa khảo sát Đã Khảo sát EA5 EA :Me (95:5) 6.2 EA6 EA :Me (9:1) 11.2 EA7 EA :Me (8:2) 6.7 EA8 EA :Me (7:3) 10.5 EA9 Me (100%) 9.8