Khảo sát thành phần và hàm lượng các lớp chất trong lipid tổng của vẹm xanh (Nha Trang, Khánh Hòa)

Vẹm xanh Perna viridis L. là một trong những đối tượng có giá trị cao được ngư dân nuôi trồng. Bài viết trình bày khảo sát thành phần và hàm lượng các lớp chất trong lipid tổng của vẹm xanh (Nha Trang, Khánh Hòa); Thành phần và hàm lượng lớp chất lipid.

Tuyển tập Hội nghị Khoa học thường niên năm 2018 ISBN: 978-604-82-2548-3 KHẢO SÁT THÀNH PHẦN VÀ HÀM LƯỢNG CÁC LỚP CHẤT TRONG LIPID TỔNG CỦA VẸM XANH (NHA TRANG, KHÁNH HÒA) 2 Lê Thị Thanh Trà , Trần Quốc Toàn , Đỗ Tiến Lâm , Phạm Quốc Long Bộ mơn Kỹ thuật Hóa học - Khoa Mơi trường, email: traltt@tlu.edu.vn Viện Hóa học Hợp chất Thiên nhiên, Viện Hàn lâm Khoa học Việt Nam GIỚI THIỆU CHUNG Vẹm xanh Perna viridis L đối tượng có giá trị cao ngư dân ni trồng Chúng xem lồi có chất lượng cao lồi thân mềm hai mảnh vỏ, chúng chứa lượng sắt, selen vitamin cao, lượng Protein cao gấp lần Hàu, lượng chất béo thấp lại giàu axit -3 [3] Chính vậy, chúng xem nguồn thực phẩm bổ dưỡng người yêu thích, nguồn lợi quan trọng nhiều quốc gia giới Theo thống kê FAO (2014), sản lượng Vẹm xanh đạt 159.474 toàn giới [2] Ở Việt Nam, Vẹm xanh đối tượng khai thác mạnh Khơng lồi có giá trị kinh tế cao mà Vẹm xanh (Perna viridis L.) nói riêng lồi hai mảnh vỏ nói chung cịn có ý nghĩa quan trọng giám sát sinh học Việc nghiên cứu kỹ thành phần hóa học, thành phần lipid hoạt chất điển hình có trọng vẹm xanh có ý nghĩa quan trọng để tạo sản phẩm có giá trị dinh dưỡng dược học cao thời gian tới NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu Mẫu vẹm xanh perna viridis lấy khu vực Nha Trang, Khánh Hịa Các phân tích hóa sinh thực phịng thí nghiệm thuộc Viện Hóa học Hợp chất Thiên nhiên, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam viện Sinh vật biển A.V Zhirmunsky, Phân viện Viễn Đông, Viện Hàn lâm Khoa học Liên bang Nga Phương pháp nghiên cứu Chiết lipid tổng Mẫu chiết phương pháp Blight EG Dyer DJ [1] Mẫu vẹm xanh sau tách vỏ, để nước nghiền nhỏ Bổ sung hệ dung môi CH2 Cl2 : CH3 OH, 1:2 (v:v) cho vào siêu âm 1,5 giờ, lọc giấy lọc tách riêng phần dịch bã Cho phần dịch lọc vào phễu chiết, bổ sung thêm nước cất, lắc để phân lớp chiết lấy phần chứa lipid tổng Cô quay chân không để loại dung môi, thu lipid tổng Lipid tổng bảo quản CHCl3 -5o C Mẫu làm lặp lại lần Lớp chất lipid tổng Để xác thành phần hàm lương lớp chất lipid tổng sử dụng sắc kí mỏng chiều kết hợp với phần mềm phân tích hình ảnh Sorbfil TLC Videodensitometer DV (Liên Bang Nga) để xác định hàm lượng lớp chất lipid tổng dựa diện tích cường độ màu chương trình phân tích hình ảnh [5] Lipid tổng chấm lên mỏng sorbfil (6  cm) vệt lipid tổng với lượng tương ứng l; 10 l, 15 l chạy hệ dung mơi n-hexan/dietyl ete/axit acetic (70:30:1, v:v:v) với tồn mỏng chạy chấm chấn hệ dung môi CHCl3 /CH3 OH (2:1, v:v) Bản mỏng 461 Tuyển tập Hội nghị Khoa học thường niên năm 2018 ISBN: 978-604-82-2548-3 Bảng Thành phần hàm lượng lớp chất lipid lipid tổng vẹm màu H2 SO4 /C2 H5 OH 5%, sau sấy mỏng nhiệt độ 240o C đến lớp chất màu hoàn toàn khoảng thời gian 10 phút Phân tích axit béo Mẫu lipid tổng metyl H2 SO4 % CH3 OH 80o C vòng tiếng Tinh chế tách sản phẩm Thành phần hàm lượng axit béo có mẫu vẹm xác định phân tích GC GC-MS Hàm STT Rf Lớp chất lượng (%) 0.02 Lipid phân cực 22.23 0.09 Sterol 15.26 0.15 Thành phần khác 1.95 0.25 Axit béo tự 18.86 0.37 Triacylglycerol 29.40 0.46 Monoankyldiacylglycerol 8.59 0.64 Hidrocacbon sáp 3.71 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Thành phần hàm lượng lớp chất lipid Axit béo Hàm lượng lipid tổng chiếm 1,03  0,15 % Các axit béo 14:0 (7,61 %), 16:0 (23,1 %), khối lượng mẫu thịt vẹm 16:1n-7: (9,35 %), 18:0 (6,89 %), 18:1n-7 (2,63 %), 20:1n-11 (2,39 %), 20:4n-6 (4,75 %, arachidonic acid AA), 20:5n-3 (9,38 %, EPA), 22:5n-3 (1,24 %, DPA) 22:6n-3 (6,82 %, DHA) axit béo có lipid tổng ngao (Bảng 2) Axit béo no chiếm 40,66 %, axit béo không no chiếm 48,61 %, thành phần khác chiếm 7,94 % (bao gồm DMA (dimethyacetal) phytanic) 2,79 % không xác định a Bản mỏng b Cường độ lớp chất dạng axit Hình Hình ảnh phân tích định lượng lớp chất lipid vẹm Bảng Thành phần axit andehit béo có lipid tổng vẹm xanh Lipid tổng vẹm xanh có chứa lớp chất xác định: hidrocacbon sáp, monoankyl diacylglycerol, triacylglycerol, axit béo tự do, sterols, lipid phân cực (Hình 1) Các lớp chất xác định cách so sánh với chất chuẩn xác định Trong triacylglycerol chiếm hàm lượng cao với 29,4 % Lớp chất lipid phân cực thành phần thứ hai chiếm 22,2 %, lớp chất gồm có phospholipid glycolipid, chứa axit béo quan trọng hình thành nên lớp màng tế bào hầu hết sinh vật sống, đặc biệt màng tế bào động vật [4] Hàm lượng hidrocacbon sáp bé với 3,7 % Các lớp chất khác axit béo tự do, sterol, monoankyldiacylglycerol chiếm 18,9 %; 15,3 % 8,6 % (Bảng 1) Thời STT gian lưu 3.74 4.457 5.298 5.523 5.883 6.096 6.708 6.812 7.291 10 7.889 11 8.729 12 9.215 13 9.397 14 10.426 15 11.339 462 Diện tích % 1112887 7.61 85004.8 0.58 73660 0.50 3375828 23.10 1366296 9.35 96193.6 0.66 66362.7 0.45 200988.1 1.38 50821.2 0.35 1020325 6.98 1007702 6.89 124110.6 0.85 384758 2.63 174226.5 1.19 22559.3 0.15 Axit/andehit béo 14:0* 15:0* DMA 16:1 16:0* 16:1n-7* i-17:0* Phytanic 17:0* 17:1n-7 DMA 18:0 18:0* 18:1n-9* 18:1n-7* 18:2n-6* 18:3n-6 Tuyển tập Hội nghị Khoa học thường niên năm 2018 ISBN: 978-604-82-2548-3 Thời STT gian lưu 16 11.955 17 12.391 18 13.53 19 14.581 20 15.387 21 15.569 22 15.915 23 16.802 24 17.773 25 19.262 26 20.732 27 23.229 28 25.143 29 25.488 30 28.692 31 29.253 32 33.062 33 36.513 34 39.667 35 44.353 36 48.645 Diện tích % Axit/andehit béo 28658.6 71558.1 82048.4 38060.2 350049.1 189770.2 167709.5 26280.3 35265.3 80377.9 694568.6 25074.3 1371276 34838 82719.7 244675 51729.4 171114.4 122373.5 181614.5 997121.4 0.20 0.49 0.56 0.26 2.39 1.30 1.15 0.18 0.24 0.55 4.75 0.17 9.38 0.24 0.57 1.67 0.35 1.17 0.84 1.24 6.82 19:1n-7 18:3n-3* 18:4n-3* 20:0* 20:1n-11* 20:1n-9* 20:1n-7* i-21:0 20:2n-6* 20:3n-6 20:4n-6* 20:4n-3 20:5n-3* 21:3n-6 21:3n-3 21:5n-6 21:5n-3 22:4n-6* 22:5n-6 22:5n-3* 22:6n-3* nhỏ axit mạch nhánh dạng iso tìm thấy (0,84 %), bao gồm i-17:0 i-21:0 Trong q trình este hóa lipid tổng, ngồi metyl este axit béo chúng tơi cịn xác định DMA plasmalogen (dạng ankenyl ankyl phospholipid) bị metyl hóa DMA 18:0 (octadecanal dimetylacetal) chiếm % lớn (6,98 %), ngồi cịn có DMA 16:1 (0,50 %) Đây kiện quan trọng để xác định dạng phân tử phospholipid lipid phân cực KẾT LUẬN Đã khảo sát hàm lượng lipid tổng vẹm xanh 1,03  0,15 % Đã khảo sát thành phần lớp chất lipid tổng định lượng thành phần Hàm lượng triacylglycerol lipid phân cực thành phần với tổng hàm lượng 50% Đã phân tích thành phần axit béo vẹm xanh có axit béo thiết yếu khơng bão hịa n-3 n-6 chiếm tỉ lệ cao với 30% Lời cảm ơn: Cơng trình thực hỗ trợ kinh phí từ Hợp phần số 05 mã số VAST.TĐ.DLB.05/16-18 thuộc dự án KHCN Trọng điểm cấp Viện HLKH&CN Việt Nam * Các axit xác định GC-MS DMA (dimetylaxetal) andehit béo Phytanic: axit 3,7,11,15-tetrametyl hexadecaic Các axit béo khơng no có nối đơi (monounsaturated fatty acids, MUFA) chiếm 18,21 % axit béo không no đa nối đôi (poliunsaturated fatty acids, PUFA) chiếm 30,40 % Điều đặc biệt số PUFA, axit béo khơng no có số nối đôi từ trở lên (highly unsaturated fatty acids HUFA) chiếm 88 % Thêm vào đó, hàm lượng -3 vẹm xanh đạt 19,59 % cao gấp gần lần -6 (10,57 %) Ngồi ra, phân tích thành phần chúng tơi cịn nhận thấy số axit mạch lẻ, có số axit lần đầu xác định vẹm xanh, với hàm lượng thấp Bao gồm axit 15:0 (0,58 %), i-17:0 (0,66 %), 17:0 (1,38 %), 17:1n-7 (0,35 %), 19-1n-7 (0,20 %), i-21:0 (0,18 %), 21:3n-6 (0,24 %), 21:3n-3 (0,57 %), 21:5n-6 (1,67 %), 21:5n-3 (0,35 %) Một lượng TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] E G Bligh W J Dyer, 1959 A rapid method of total lipid extraction and purification Canadian Journal of Biochemistry and Physiology, Vol 37 , pp 911-917 [2] http://www.fao.org/fishery/statistics/en [3] Ngô Văn Tứ, Nguyễn Kim Quốc Việt, 2009 Phương pháp Von-Ampe hòa tan anot xác định PbII , CdII , Zn II vẹm xanh đầm Lăng Cơ – Thừa Thiên Huế Tạp chí khoa học, Đại học Huế, số 50, Tr 155-163 [4] Phạm Quốc Long Châu Văn Minh, 2004 Lipid axit béo hoạt tính sinh học có nguồn gốc thiên nhiên NXB Khoa học Kỹ thuật, 70 Trần Hưng Đạo, Hà Nội [5] V I Svetashev V E Vaskovky, 1972 A simplified technique for thin-layer microchromatography of lipids J Chromatogr., Vol 67, pp 376-378 463 ... phospholipid lipid phân cực KẾT LUẬN Đã khảo sát hàm lượng lipid tổng vẹm xanh 1,03  0,15 % Đã khảo sát thành phần lớp chất lipid tổng định lượng thành phần Hàm lượng triacylglycerol lipid phân... mỏng b Cường độ lớp chất dạng axit Hình Hình ảnh phân tích định lượng lớp chất lipid vẹm Bảng Thành phần axit andehit béo có lipid tổng vẹm xanh Lipid tổng vẹm xanh có chứa lớp chất xác định:... Bảng Thành phần hàm lượng lớp chất lipid lipid tổng vẹm màu H2 SO4 /C2 H5 OH 5%, sau sấy mỏng nhiệt độ 240o C đến lớp chất màu hoàn toàn khoảng thời gian 10 phút Phân tích axit béo Mẫu lipid tổng