Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.

Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.

TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU

Muỗi Anopheles trên Thế giới và Việt Nam

Muỗi Anopheles Meigen, 1818 thuộc họ muỗi Culicidae Meigen,1818.

Muỗi có khoảng 3.500 loài, được phân chia thành ba phân họ: Toxorhynchitinae (Edwards, 1932), Culicinae (Meigen, 1818) và Anophelinae (Meigen, 1818) Trong đó, phân họ Anophelinae được chia thành ba giống: Bironella (Theobald, 1905), Chagasia (Cruz, 1906) và Anopheles (Meigen, 1818), nhưng chỉ một số loài thuộc giống Anopheles có khả năng truyền sốt rét (SR) ở người Các loài muỗi truyền SR khác nhau tùy thuộc vào vùng địa lý.

Một số véc tơ truyền bệnh sốt rét quan trọng bao gồm: An gambiae, An funestus, An arabiensis ở Châu Phi; An albimanus tại Trung Mỹ; An darlingi ở Nam Mỹ; An quadrimaculatus tại Bắc Mỹ; An stephensi ở vịnh Ả Rập; An sacharovi tại Thổ Nhĩ Kỳ; An culicifacies, An dirus, An minimus ở Ấn Độ; An anthropophagus, An dirus, An minimus tại Trung Quốc; An superpictus ở vùng Trung Á; An messeae tại Đông Âu; An atropavus ở Tây Âu; An farauti tại Australia; và An dirus, An minimus, An epiroticus ở Đông Nam Á.

Bên cạnh các véc tơ SR chính, còn tồn tại nhiều véc tơ phụ có vai trò thứ yếu trong việc truyền bệnh, với mỗi véc tơ có vùng phân bố riêng biệt Trong một khu vực địa lý, có thể có nhiều véc tơ chính và phụ, và vai trò của chúng có thể thay đổi theo thời gian và không gian Tại Việt Nam, Viện Sốt rét-Ký sinh trùng-Côn trùng đã xuất bản khóa định loại muỗi Anopheles vào năm 1968, xác định 32 loài Các nghiên cứu của Lê Xuân Hợi (1995) và Lê Khánh Thuận (1975) đã chỉ ra sự phân bố và đặc điểm sinh lý của muỗi Anopheles tại miền Bắc và khu vực Nam Trường Sơn Trần Đức Hinh (1995) đã thống kê 59 loài Anopheles trên toàn quốc, phân tích sự phân bố theo cảnh quan và độ cao, với 5 loài xuất hiện ở mọi vùng tự nhiên và 29 loài chỉ gặp ở một số khu địa lý nhất định Năm 2008, Viện Sốt rét-Ký sinh trùng-Côn trùng Trung ương đã công bố Bảng định loại muỗi Anophelinae tại Việt Nam.

62 loài (chưa kể An harrisoni - một loài đồng hình trong nhóm loài An. minimus).

Số loài có khả năng truyền sốt rét chỉ có 15 loài, bao gồm 03 véc tơ chính (An minimus, An dirus, An epiroticus), 08 véc tơ phụ (An aconitus,

An campestris, An indefinitus, An jeyporiensis, An maculatus, An sinensis,

An subpictus, An vagus.) và 04 loài muỗi nghi ngờ là véc tơ (An lesteri, An.nimpe, An interruptus, An culicifacies).

Muỗi Culicinae trên Thế giới và Việt Nam

Phân họ muỗi Culicinae thuộc họ muỗi Culicidae có phân bố rộng rãi trên toàn cầu và đóng vai trò quan trọng trong dịch tễ học, dẫn đến nhiều nghiên cứu về phân loại, hình thái, sinh học và biện pháp phòng chống Nhiều công trình nghiên cứu đã được thực hiện, nổi bật là nghiên cứu của Horsfall (1955) về đặc tính sinh học liên quan đến dịch bệnh, và các tác phẩm của Clements (1992, 1999, 2012) về sinh lý học và vai trò truyền bệnh của muỗi Ameen (1982) đã khảo sát tập tính và lựa chọn vật chủ của muỗi, trong khi Hawley (1988) tập trung vào sinh học của muỗi Ae albopictus Wharton (1962) cũng nghiên cứu sinh học và vai trò truyền bệnh của muỗi Mansonia tại Malaysia Bên cạnh đó, Tổ chức Y tế thế giới (WHO) đã công bố nhiều tài liệu về bệnh giun chỉ do muỗi truyền Đặc biệt, công trình “Aedes aegypti (L) the Yellow fever mosquito” của Christopher (1960) cung cấp cái nhìn toàn diện về đặc điểm sinh học, sinh thái và vai trò truyền bệnh của muỗi Ae aegypti.

Phân họ muỗi Culicinae đóng vai trò quan trọng trong dịch tễ học, với nhiều loài là vật trung gian truyền các bệnh nguy hiểm như sốt vàng, sốt xuất huyết Dengue, viêm não Nhật Bản và giun chỉ Nghiên cứu về các loài muỗi này đã được thực hiện đầy đủ ở nhiều quốc gia Trong số 44 giống muỗi thuộc phân họ này, các giống Aedes, Culex và Lutzia đặc biệt có vai trò dịch tễ quan trọng.

Mansonia khẳng định vai trò quan trọng của một số loài muỗi trong việc truyền bệnh, như Ae aegypti và Ae albopictus, là véc tơ chính của sốt vàng, sốt xuất huyết dengue và chikungunya Ngoài ra, Cx tritaeniorhynchus và Cx vishnui là tác nhân gây viêm não Nhật Bản, trong khi Cx quinquefasciatus, Ma uniformis và Ma anulifera là véc tơ chủ yếu truyền bệnh giun chỉ bạch huyết.

Muỗi trải qua ba giai đoạn phát triển trong chu kỳ sống của chúng, bao gồm trứng, bọ gậy và quăng, tất cả đều diễn ra trong môi trường nước Những nghiên cứu về đặc điểm sinh thái của muỗi cho thấy sự quan trọng của các giai đoạn này trong việc hiểu rõ hơn về vòng đời và hành vi của chúng.

Nghiên cứu về bọ gậy của muỗi cho thấy rằng địa hình không ảnh hưởng trực tiếp đến sự phân bố của muỗi, nhưng có tác động gián tiếp thông qua các ổ nước thích hợp cho sự phát triển của bọ gậy Tại Việt Nam, nghiên cứu muỗi bắt đầu từ đầu thế kỷ 20, nhưng chỉ diễn ra rời rạc trước năm 1945, chủ yếu phục vụ cho quân đội và các đồn điền của thực dân Pháp Sau cách mạng tháng Tám năm 1945, nghiên cứu về muỗi Culicidae, đặc biệt là muỗi Anopheles, được tiến hành đầy đủ hơn Các công trình nổi bật như của Galliard (1947, 1950) đã nghiên cứu muỗi ở Vịnh Bắc bộ, trong khi Stone (1966) là người đầu tiên đưa ra bảng định loại muỗi ở Việt Nam Stojanovich và Scott (1966) đã tổng hợp khu hệ muỗi Việt Nam với 169 loài thuộc 15 giống, trong đó giống Anopheles có 41 loài và muỗi Culicinae có 128 loài.

Hương xua muỗi trên Thế giới và Việt Nam

1.3.1 Hương xua muỗi trên thế giới

Hương xua muỗi được phát triển vào những năm 1890 bởi chuyên gia Nhật Bản Eiichiro Ueyanma Từ năm 1957, hương xua muỗi đã trở nên phổ biến tại Trung Quốc và Thái Lan, được chứng minh là giảm hơn 80% số lượng muỗi đốt người trong các khu vực nghiên cứu Với giá thành rẻ và cách sử dụng dễ dàng, hương xua muỗi hiện đang được nhiều quốc gia trên thế giới áp dụng, góp phần quan trọng trong việc giảm mật độ muỗi đốt người.

Tại Ấn Độ, biện pháp sử dụng dây tẩm hóa chất để xua muỗi đang phát triển mạnh mẽ Dây xua này tương tự như hương vòng nhưng có giá thành rẻ hơn, thường được nhúng trong dung dịch hóa chất diệt côn trùng Khi được đốt, dây xua tỏa ra khói có khả năng diệt và xua đuổi muỗi cũng như ruồi hút máu Nguyên liệu chính là sợi đay với đường kính khoảng 0,9cm và nặng khoảng 2,8g/m, sử dụng hóa chất esbiothrin Ngoài ra, các loại hóa chất diệt côn trùng khác cũng có thể được dùng để tẩm dây Dây xua muỗi được sản xuất thành từng đoạn, khi cháy sẽ tỏa khói trong khoảng 10-12 giờ nếu được treo trong phòng Để đảm bảo an toàn, nên đốt dây xua trong một ống lưới bằng thép nhằm tránh va chạm với các vật liệu khác.

Hương muỗi chứa các hoạt chất pyrethroid đã được thử nghiệm trong không gian 25 m³ để chống muỗi truyền sốt rét An dirus, cho thấy muỗi An dirus nhạy cảm hơn so với Cx pipiens pallens tại Nhật Bản Các hương muỗi như dl, d-T80-allethrin, d, d-prallethrin và metoxymetyl-tetrafluorobenzyl tetramethyl-cyclopropanecarboxylate (K-3050) với liều 0,05-0,5% có hiệu quả trong việc ngăn ngừa muỗi tiếp xúc với con người Khói hương không chỉ làm rối loạn muỗi mà còn có thể tê liệt và tiêu diệt chúng Hương xua muỗi là một biện pháp phổ biến trong cộng đồng vì tính đơn giản, hiệu quả và chi phí thấp Khi đốt, hương cháy âm ỉ trong khoảng 8 giờ, phát tán hóa chất xua diệt muỗi đều đặn vào không khí.

1.3.2 Hương xua muỗi ở Việt Nam Ở Việt Nam, hương xua muỗi được sản xuất với hoạt chất chính là hóa chất nhóm pyrethroid có tác dụng g y độc hại cho các loại côn trùng Hoạt chất trộn với một số chất dễ cháy như mùn cưa và một chất kết dính như tinh bột, hoạt chất này có tác dụng gây chết tức thời các loại côn trùng đang bay. Hương xua muỗi thường được sản xuất dưới dạng hương que có thời gian sử dụng ngắn và dạng hương vòng có thời gian sử dụng dài hơn.

Trong các loại pyrethroid tổng hợp dùng để làm hương, allethrin và một số hoạt chất dễ bay hơi khác có tác dụng xua đuổi và diệt muỗi ngay khi hương đang cháy Bên cạnh pyrethroid, DDT cũng được sử dụng trong một số sản phẩm hương xua muỗi của Trung Quốc, tuy nhiên hiệu quả không cao và có thể gây độc hại Để tạo ra khói hương có mùi dễ chịu, các nhà sản xuất thường thêm hương liệu vào quá trình sản xuất.

Sản phẩm hương vòng tại Việt Nam được làm từ nguyên liệu thân thiện với môi trường, hiệu quả trong việc xua đuổi côn trùng nhưng vẫn đảm bảo an toàn cho người sử dụng Công thức tối ưu của các sản phẩm này cho phép nồng độ hóa chất tác động từ từ lên côn trùng, làm chúng yếu dần và chết, do đó an toàn cho sức khỏe người tiêu dùng.

Các loại hương xua diệt muỗi sản xuất tại Việt Nam bao gồm hương xua muỗi dạng que, được phát triển bởi Viện Sốt rét - Ký sinh trùng Những sản phẩm này hiện đang được lưu hành chính thức và trong giai đoạn thử nghiệm, nhằm góp phần bảo vệ sức khỏe cộng đồng khỏi bệnh sốt rét và các bệnh do muỗi truyền.

Hương xua côn trùng Trung ương chứa hoạt chất Metofluthrin (C18H20 F4 O3), có tác dụng hiệu quả trong việc xua đuổi muỗi Culex, Aedes và Anopheles, đặc biệt là ở khu vực thành phố và đồng bằng ven biển Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu nào về hiệu quả của hương xua trong vùng miền núi đối với muỗi truyền SR Ngoài ra, một số sản phẩm hương xua khác cũng được phát triển bởi các Viện nghiên cứu như Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương và Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Quy Nhơn Hương muỗi được đánh giá là dễ sử dụng và có giá thành rẻ.

Nghiên cứu này là bước đầu tiên trong việc khám phá khả năng xua muỗi của tinh dầu bạch đàn chanh, do chưa có công trình nào nghiên cứu về thành phần tinh dầu trong hương xua muỗi.

Một số loài thực vật xua muỗi

Khả năng xua đuổi côn trùng của thực vật đã được sử dụng từ hàng ngàn năm, với phương pháp treo cây dược liệu trong nhà hoặc trồng xung quanh nhà vẫn phổ biến ở các nước đang phát triển Nhiều loài thực vật được dùng để xông hơi hoặc đốt khói nhằm xua đuổi muỗi, và hiện nay, chúng còn được chiết xuất thành dầu bôi lên da hoặc quần áo Đây là sản phẩm xua đuổi côn trùng đầu tiên được ghi nhận trong các tài liệu cổ của Hy Lạp, La Mã và Ấn Độ Chất xua đuổi côn trùng từ thực vật được sử dụng rộng rãi trong dân gian ở các vùng nông thôn nhiệt đới, là phương pháp bảo vệ khỏi muỗi đốt hiệu quả và tiết kiệm Tại châu Âu và Bắc Mỹ, mùi hương tự nhiên từ các loài cây này cũng được ưa chuộng, trở thành một biện pháp an toàn và đáng tin cậy trong việc phòng chống muỗi.

Tinh dầu và chiết xuất từ cây trong chi sả (Poaceae) thường được sử dụng làm thành phần trong thuốc chống muỗi có nguồn gốc thực vật, chủ yếu từ Cymbopogon nardus Loại tinh dầu này đã được Ấn Độ sử dụng để đẩy lùi muỗi từ đầu thế kỷ 20 và được đăng ký sử dụng thương mại tại Hoa Kỳ vào năm 1948 Mặc dù tinh dầu sả chỉ bảo vệ khỏi muỗi trong khoảng hai giờ, nó chứa các hợp chất như citronellal, citronellol, geraniol, citra, -pinen, và limonene, có hiệu quả tương đương với DEET Tuy nhiên, do tinh dầu bay hơi nhanh chóng, hiệu quả xua đuổi giảm nhanh Để kéo dài thời gian bảo vệ, có thể trộn tinh dầu Cymbopogon winterianus với các chất cao phân tử như vanillin (5%) hoặc chất mỡ động vật, giúp giảm sự bay hơi của tinh dầu.

Tinh dầu sả không chỉ được sử dụng rộng rãi như một chất xua muỗi khi thoa lên da, mà ở châu Phi, châu Á và Mỹ Latinh, người dân còn sử dụng lá cây Neem để xua đuổi muỗi nhờ vào mùi hương khó chịu của chúng Lá khô của cây Neem thường được treo trong nhà hoặc trồng gần nhà với hy vọng xua muỗi, mặc dù chưa có bằng chứng rõ ràng về hiệu quả này Hơn nữa, hạt cây Neem đã được chiết xuất để sản xuất chất xua đuổi côn trùng trong nông nghiệp.

Họ Lamiaceae, bao gồm các loại thảo mộc và dược liệu, cùng với họ Poaceae (cỏ thơm) và họ Pinaceae (thông và cây tuyết tùng), thường được sử dụng như thuốc chống côn trùng trên toàn cầu.

Tinh dầu có khả năng xua đuổi muỗi hiệu quả, nhưng chúng thường bay hơi nhanh, làm giảm hiệu quả này Những loại tinh dầu hiệu quả nhất bao gồm tinh dầu sả, húng tây, geraniol, bạc hà, tuyết tùng, hoắc hương và đinh hương, có thể đẩy lùi muỗi trong khoảng 60 - 180 phút Để khắc phục tình trạng bay hơi nhanh, có thể sử dụng các tá dược hoặc phụ gia để kéo dài thời gian xua đuổi Ví dụ, tinh dầu từ củ nghệ và lá húng quế kết hợp với 5% vanillin có thể bảo vệ khỏi ba loài muỗi trong 6 - 8 giờ Ngoài ra, việc trộn tinh dầu Cymbopogon winterianus với vanillin (5%) hoặc chất mỡ động vật cũng giúp kéo dài thời gian bảo vệ Công nghệ vi nang cũng được áp dụng để làm chậm quá trình bay hơi, tạo ra giọt dầu ổn định, từ đó nâng cao hiệu quả xua đuổi muỗi.

Nghiên cứu năm 2004 của nhóm tác giả Trung Quốc đã chỉ ra rằng một số tinh dầu không chỉ có khả năng xua đuổi côn trùng nhờ mùi thơm tự nhiên mà còn có thể tiêu diệt muỗi trưởng thành khi sử dụng ở nồng độ cao Nghiên cứu đã thử nghiệm hoạt tính diệt muỗi đối với loài Culex pipiens quinquefasciatus bằng 5 loại tinh dầu: bạc hà, sả, húng tây, họ cam và họ cúc, thông qua phương pháp xông hơi khử trùng trong bình nón kín Kết quả cho thấy tinh dầu họ cam có độc tính cao nhất, trong khi tinh dầu húng tây tiêu diệt muỗi trưởng thành nhanh nhất với thời gian chỉ 6,087 phút Phân tích hóa học tinh dầu họ cam bằng máy sắc ký GC/MS xác định các thành phần chính là Alpha citral (33,50%) và citral (35,77%), cho thấy citral có hiệu quả diệt muỗi trưởng thành trong thời gian ngắn Tất cả 5 loại tinh dầu đều chứng tỏ có tác dụng đáng kể đối với muỗi trưởng thành loài Cx pipiens quinquefasciatus.

Năm 2010, Specos và cộng sự nghiên cứu hạt vi nang siêu nhỏ chứa tinh dầu sả (citronella) qua phức hợp coacervation, áp dụng cho ngành dệt bông nhằm xua đuổi côn trùng Hiệu quả xua muỗi Aedes aegypti được đánh giá qua sự tiếp xúc của vải dệt với da người, cho thấy vải xử lý với microencapsulated tinh dầu citronella có khả năng bảo vệ kéo dài hơn 90% trong 3 tuần so với vải phun dung dịch ethanol Phương pháp tạo phức hợp coacervation là cách đơn giản, chi phí thấp để thu được tinh dầu đóng gói cho ứng dụng dệt may Năm 2011, Anitha và nhóm nghiên cứu Ấn Độ cũng cho thấy polyester dệt với hạt microencapsulation tinh dầu sả chanh đạt hiệu quả chống muỗi cao nhất (92%) so với các loại vải khác Năm 2013, các hạt tinh dầu dạng microencapsulation được đưa vào bao bì thực phẩm để chống lại côn trùng, trong khi một nhóm tác giả Ethiopia đánh giá hiệu lực diệt của 10 loại tinh dầu đối với muỗi Anopheles arabiensis ở Đông Châu Phi.

Eucaliptus globules (bạch đàn xanh), Mentha spicata (bạc hà bông), Nigella sativa (hồ tiêu), Schinus molle và Lippia adoensis (xạ hương) là những loại tinh dầu được nghiên cứu Phương pháp thử sinh học đánh giá hiệu quả xua diệt của các tinh dầu này được thực hiện theo hướng dẫn của Trung tâm kiểm soát và phòng ngừa dịch bệnh (CDC), sử dụng chai thủy tinh trung tính 250 ml.

Vào năm 2014, Jayant Udakhe cùng các cộng sự Ấn Độ đã nghiên cứu các giải pháp tự nhiên để thay thế hóa chất thương mại, khám phá bạch đàn, hoa oải hương và viên nang siêu nhỏ từ sả Họ đã thử nghiệm thành phần hóa học của viên nang siêu nhỏ và tinh dầu bằng phương pháp sắc ký khí Kết quả cho thấy hoạt tính chống côn trùng của loại vải microcapsule này rất hiệu quả, đặc biệt trong việc xua đuổi ấu trùng bọ cánh cứng.

Cây bạch đàn chanh và ứng dụng trong xua muỗi

Bạch đàn chanh (Eucalyptus citriodora) là cây gỗ lớn với nhánh non có cạnh và lá thơm mùi sả, chanh Lá non có phiến và lông, thon dài, dần hẹp cong thành hình lưỡi liềm ở nhánh trưởng thành, có màu lam tươi và dài đến 17cm Hoa của cây mọc ở nách lá, với lá đài rụng thành chóp và nhị nhiều Quả nang nằm trong đài tồn tại, chia thành 4 mảnh.

Bộ phận dùng: Tinh dầu – Oleum Eucalypti.

Bạch đàn chanh, loài cây đặc hữu của Queensland, Australia, hiện đã được trồng rộng rãi trên toàn cầu, bao gồm cả Việt Nam.

Tinh dầu bạch đàn chanh đã được biết đến và sử dụng từ hàng trăm năm, với thành phần chính là hỗn hợp phức tạp của nhiều monoterpenes và sesquiterpenes, cùng các phenol, oxit, este, rượu, ete, andehyt và keton Thành phần này thay đổi theo từng loài, khu vực trồng, khí hậu, loại đất, tuổi của lá, chế độ pH bón và phương pháp tách chiết Tinh dầu bạch đàn chanh có hoạt tính trừ sâu nhờ vào các thành phần như 1,8-cineole, citronellal, citronellol, citronellyl acetate, p-cymene, eucamalol, limonene và linalool.

Nghiên cứu tại Trung Quốc cho thấy hàm lượng tinh dầu trong lá bạch đàn chanh tươi dao động từ 0,5% đến 2% Tinh dầu này thường có màu vàng nhạt, với tỉ trọng từ 0,915 đến 0,925 ở 15°C và chỉ số chiết quang từ -1.

5 0 C Tinh dầu có thành phần chủ yếu citronellal (60-80%); citronellol (15- 20%), ngoài ra còn lượng nhỏ alcol bậc I quy ra geraniol (11,14%), geranial và các thành phần khác (2%) [17].

Nghiên cứu thành phần hóa học trong tinh dầu bạch đàn chanh trồng ở

Australia, Boland, and colleagues provide the following data on essential oil composition: citronellal (80.1%), isoisopulegol (3.4%), linalool (0.7%), β-caryophyllene (0.4%), β-pinene (0.4%), α-pinene (0.1%), and α-para-dimethylstyrene (0.1%) Other compounds such as α-terpineol, geraniol, 1,8-cineole, globulol, and viridiflorol are present only in trace amounts.

Lá chứa tinh dầu với mùi dễ chịu và tính kháng khuẩn mạnh, được ứng dụng rộng rãi trong công nghệ hóa mỹ phẩm, sản xuất xà phòng, chất tẩy rửa và sát trùng Tinh dầu bạch đàn thường được sử dụng làm thuốc sát khuẩn tại chỗ, đặc biệt trong điều trị các bệnh nhiễm khuẩn đường hô hấp trên và một số bệnh ngoài da Khi trộn với dầu Ô liu, tinh dầu này có thể dùng làm thuốc gây sung huyết da để điều trị thấp khớp.

Tinh dầu bạch đàn chanh còn được dùng làm thuốc trị bỏng, làm thuốc g y long đờm trong trường hợp viêm phế quản mạn tính và hen.

Tinh dầu Bạch đàn chanh chứa một lượng lớn Citronella, làm cho nó trở thành nguồn nguyên liệu tự nhiên quý giá trong công nghệ chuyển hóa Nó được sử dụng để sản xuất các sản phẩm như hydroxycitronellal, citrolellylnitrile và menthon.

Bạch đàn chanh chứa đến 99% citronellal và geraniol, hai hợp chất quan trọng trong ngành công nghiệp nước hoa và mỹ phẩm Tinh dầu bạch đàn không chỉ có mùi hương dễ chịu mà còn hiệu quả trong việc xua đuổi muỗi, đặc biệt khi bôi lên da Tại Ấn Độ, nghiên cứu cho thấy tinh dầu bạch đàn có khả năng bảo vệ khỏi muỗi Cx quinquefasciatus trong khoảng thời gian từ 120 đến 180 phút.

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Mục tiêu 1

Quy trình tạo hương xua muỗi từ tinh dầu bạch đàn chanh (Eucalyptus citriodora) đã được xây dựng nhằm đánh giá hiệu lực diệt muỗi trong điều kiện phòng thí nghiệm Nghiên cứu này không chỉ giúp phát triển sản phẩm tự nhiên để kiểm soát muỗi mà còn cung cấp thông tin quan trọng về khả năng xua đuổi của tinh dầu bạch đàn chanh.

Tinh dầu bạch đàn chanh, với công thức hóa học C10H18O, chứa thành phần chính là citronellal với nồng độ đạt ≥85% Tinh dầu này có mật độ 0,857 g/ml ở nhiệt độ 25°C và được cung cấp bởi hãng Sigma-Aldrich, Mỹ.

- Hương có thành phần tinh dầu bạch đàn chanh (Citronellal)

- Muỗi An minimus và Aedes aegypti và Cx quinquefasciatus chủng phòng thí nghiệm

2.1.2 Thời gian và địa điểm nghiên cứu:

- Thời gian nghiên cứu: 06/2020 đến 12/2020.

- Địa điểm nghiên cứu: Phòng thí nghiệm khoa Côn trùng.

2.1.3 Thiết kế phương pháp nghiên cứu: a) Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu thử nghiệm.

- Nghiên cứu tạo hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh.

- Đánh giá hiệu lực diệt muỗi của hương xua chứa tinh dầu bạch đàn chanh bằng cách sử dụng buồng thử thủy tinh 70cm x 70cm x 70cm.

- Lựa chọn hương xua có tỷ lệ tinh dầu thích hợp để thử nghiệm tại thực địa.

Nghiên cứu đánh giá tác dụng không mong muốn của hương xua đối với người tham gia thử nghiệm, với cỡ mẫu được thiết lập cho mỗi tỷ lệ tinh dầu bạch đàn chanh qua ba lần thử nghiệm sinh học Phương pháp chọn mẫu được áp dụng là chọn mẫu có chủ đích nhằm đảm bảo tính chính xác và đáng tin cậy của kết quả nghiên cứu.

Viện Sốt rét – Ký sinh trùng – Côn trùng Trung ương sản xuất các loại hương với tỷ lệ tinh dầu bạch đàn chanh khác nhau, theo quy trình sản xuất hương xua.

- Lựa chọn các loại hương có tỷ lệ muỗi chết tốt nhất cho thử nghiệm đánh giá hiệu lực diệt muỗi tại thực địa.

Nghiên cứu đánh giá hiệu lực diệt muỗi của hương xua chứa tinh dầu bạch đàn chanh được thực hiện trong buồng thử thủy tinh kích thước 70cm x 70cm x 70cm, sử dụng các loại muỗi An minimus, Ae aegypti và Cx quinquefasciatus từ phòng thí nghiệm, với ba lần lặp lại Thí nghiệm theo dõi số lượng muỗi ngã trong khoảng thời gian từ 0 đến 20 phút để tính toán KT50, KT90 và tỷ lệ muỗi chết sau 24 giờ Đối chứng được thực hiện với hương không chứa tinh dầu.

- Đánh giá tác dụng không mong muốn của những người thử nghiệm hương trong phòng thí nghiệm:

+ Dựa vào bảng câu hỏi in sẵn về các triệu chứng gặp phải khi thử nghiệm trong phòng thí nghiệm

Sau khi thử nghiệm, phỏng vấn sẽ được thực hiện vào ngày hôm sau để theo dõi các triệu chứng như đau đầu, ngứa ngáy, ho, buồn nôn, mùi khó chịu, hắt hơi, kích thích mắt và sổ mũi Phương pháp xác định và đo lường các biến số sẽ được áp dụng để thu thập dữ liệu chính xác.

- Sản xuất hương có chứa tinh dầu bạch đàn chanh, bột hương, keo, phụ gia.

- Hương chứa tinh dầu bạch đàn chanh được thăm dò ở các tỷ lệ tinh dầu: 10%, 20%, 30%.

- Sử dụng muỗi An minimus, Ae aegypti và Cx quinquefasciatus để đánh giá tác dụng diệt của hương xua: Muỗi sống, muỗi ngã, muỗi chết

- Xác định KT50, KT90 muỗi An minimus, Ae aegypti và

- Xác định tỷ lệ muỗi chết trung bình ± SD sau 24 giờ thử nghiệm.

- Xác định giá trị p với độ tin cậy 95%.

- Các triệu chứng xảy ra đối với những người tham gia thử nghiệm hương.

- Xác định tỷ lệ % tác dụng không mong muốn xảy ra đối với người tham gia thử nghiệm. g) Các chỉ số đánh giá:

- Đánh giá tác dụng diệt muỗi của hương xua dựa vào tỷ lệ muỗi chết sau

24 giờ thử nghiệm trong buồng thử thủy tinh 70cm x 70cm x 70cm:

+ Sau 24 giờ số muỗi chết từ 90 - 100% là hương có tác dụng diệt muỗi tốt.+ Sau 24 giờ số muỗi chết từ 70-89 % là hương có tác dụng diệt muỗi trung bình.

+ Sau 24 giờ số muỗi chết dưới 70% là hương có tác dụng diệt muỗi kém.

- Tỷ lệ % tác dụng không mong muốn của người tham gia thử nghiệm g, Các kỹ thuật sử dụng trong nghiên cứu:

- Quy trình sản xuất hương mộc

Bước 1: Chuẩn bị nguyên liệu và máy

* Chuẩn bị máy làm hương:

+ Lắp đầu dẫn tăm vào máy, căn chỉnh độ dài bột 21 cm.

+ Bật nguồn điện, bật công tắc máy và chạy thử.

Bước 2: Trộn nguyên liệu trong máy trộn bột

+ Cho bột hương, bột keo vào máy trộn và bật máy trộn trong 2 phút. + Tắt máy 2 phút.

+ Đổ nước, tinh dầu vào máy trộn, bật máy trộn 2 phút, tắt máy.

Bước 3: Chạy máy làm hương

+ Bột sau khi trộn, được đưa vào phễu của máy làm hương 2/3 dung tích phễu.

+ Một người liên tục cho từng tăm hương qua lỗ tra tăm của máy làm hương, lưu ý cho phần để bột hương bám tăm vào trước.

+ Tăm hương đ được gắn bột và được máy đẩy vào khay đựng.

+ Một người liên tục thu hương từ khay đựng ra giá phơi.

+ Khi gần hết bột trong phễu, tiếp tục đổ bột bổ sung vào phễu.

+ Phần bột không bám vào tăm và bột từ những tăm hương chưa bám đều được thu trở lại vào phễu.

Bước 4: Phơi hương: Dàn đều hương theo hàng trên giá tại khu vực râm, thoáng, có mái che.

Bước 5: Vệ sinh dụng cụ

+ Vệ sinh máy trộn và máy làm hương sạch sẽ.

+ Rửa đầu dẫn tăm bằng nước sạch.

+ Bảo dưỡng máy định kì 1 lần/tháng.

Bước 6: Tẩm tinh dầu (Nếu tạo ra hương tinh dầu)

Sau khi hương mộc đ khô sẽ tiến hành nhúng hương vào tinh dầu theo tỷ lệ đ chọn (xem quy trình sản xuất hương xua chứa tinh dầu)

+ Đóng dấu số lô, ngày sản xuất và hạn sử dụng lên nhãn.

+ Cho vào mỗi túi nilon 18 que hương, tra nh n, dán bao.

- Kỹ thuật thử hiệu lực diệt muỗi sử dụng buồng thủy tinh 70cm x 70cm x 70cm [20]

- Đốt 0,6 gam hương trong lồng thử.

- Sau khi cháy hết thì thả vào lồng thử 20 muỗi cái chưa hút máu 2-5 ngày tuổi nuôi trong phòng thí nghiệm, được hút glucoza 10%.

- Theo dõi số lượng muỗi quỵ trong suốt 20 phút, đếm số muỗi ng mỗi phút.

- Sau 20 phút thu thập muỗi được thử nêu trên ra cốc sạch và cho hút glucose 10%.

- Tính tỷ lệ muỗi quỵ và chết sau 24 giờ sau sẽ được tính toán

- Nếu ở lô đối chứng có số muỗi chết > 20% thử nghiệm phải hủy bỏ, chết từ 5%- 20% kết quả được điều chỉnh bằng công thức Abbot:

% tỷ lệ chết lô thử nghiệm - % tỷ lệ chết lô đối chứng

Tỷ lệ % muỗi chết thực = x 100

100- % tỷ lệ chết lô đối chứng Mỗi mẫu hương, tiến hành thử nghiệm 3 lần

- Ghi kết quả thử trên phiếu ghi kết quả (theo mẫu) Đánh giá hiệu lực :

+ Sau 24 giờ số muỗi chết từ 90-100% là hương có tác dụng diệt muỗi tốt

+ Sau 24 giờ số muỗi chết từ 70-90% là hương có tác dụng diệt muỗi trung bình

+ Sau 24 giờ số muỗi chết dưới 70% là hương có tác dụng diệt muỗi kém. h) Phương pháp kiểm soát nhiễu và sai số trong nghiên cứu

- Các kỹ thuật phải tuân thủ đúng theo hướng dẫn của quy trình chuẩn.

- Thử nghiệm đươc thực hiện cùng một nhóm cán bộ có kinh nghiệm.

- Số liệu thu thập được ghi trên biểu mẫu bằng giấy sau đó được nhập và máy tính. i) Phương pháp phân tích và xử lý số liệu:

Nhập số liệu bằng phần mềm Excell và phân tích bằng phần mềmProbit, SPSS.

Mục tiêu 2

Đánh giá hiệu quả của hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh (Eucalyptus citriodora) tại xã T n Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam cho thấy tác dụng tích cực trong việc đuổi muỗi Tuy nhiên, cũng cần lưu ý đến các tác dụng không mong muốn có thể xảy ra Sự chấp nhận của cộng đồng đối với sản phẩm hương xua này là một yếu tố quan trọng, phản ánh sự tin tưởng và nhu cầu sử dụng trong cuộc sống hàng ngày.

Hương bạch đàn chanh chứa 20% tinh dầu Citrollal, đã được thử nghiệm trong phòng thí nghiệm và chọn lựa để thực hiện thí nghiệm tại thực địa.

Hương xua hóa chất do Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung ương sản xuất, với thành phần hoạt chất chính là Metofluthrin (C18H20 F4 O3) Hóa chất này có tên gọi là 2,3,5,6-Tetrafluoro-4-(methoxymethyl) benzyl 2,2-dimethyl-3-(prop-1-en-1-yl) cyclopropanecarboxylate, được sử dụng hiệu quả trong việc xua đuổi côn trùng.

- Hương không chứa hóa chất hay tinh dầu (Hương mộc).

- Người dân trong khu vực nghiên cứu sử dụng hương xua.

2.2.2 Thời gian và địa điểm nghiên cứu:

- Thời gian nghiên cứu: 12/2020 đến 9/2021.

- Địa điểm nghiên cứu: X T n Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam.

Hình 1 Sơ đồ khu vực nghiên cứu

Cơ sở chọn điểm nghiên cứu:

Hà Nam là tỉnh thuộc vùng Đồng bằng sông Hồng, giáp Hà Nội ở phía Bắc, Hưng Yên và Thái Bình ở phía Đông, Ninh Bình ở phía Nam, Nam Định ở Đông Nam, và Hòa Bình ở phía Tây, cách Hà Nội 60 km Tỉnh có địa hình đa dạng với đồng bằng và đồi núi, trong đó khoảng 10-15% diện tích là vùng đồi núi bán sơn địa, có nhiều núi đá vôi và đồi rừng Khu vực này, đặc biệt là xã Tân Sơn huyện Kim Bảng, nổi bật với các giải đồi đất thấp và thung lũng ruộng, cùng hệ thống sông ngòi dày đặc tạo ra nhiều diện tích mặt nước Điều kiện tự nhiên này cũng thuận lợi cho sự phát triển của các loại muỗi như Culex, Aedes, Anopheles, và Mansonia, là lý do chúng tôi chọn đây làm địa điểm nghiên cứu.

2.2.3 Thiết kế phương pháp nghiên cứu: a) Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu thử nghiệm có đối chứng.

Sau khi xác định được tỷ lệ tinh dầu bạch đàn chanh hiệu quả trong việc diệt muỗi, hương xua chứa 20% tinh dầu đã được sử dụng để thử nghiệm khả năng xua muỗi tại thực địa Nghiên cứu cũng đánh giá tác dụng không mong muốn và mức độ chấp nhận của cộng đồng đối với hương xua từ những người tham gia thử nghiệm cũng như người dân sử dụng sản phẩm này.

- Đánh giá hiệu lực xua muỗi: Thu thập toàn bộ các loài muỗi

- Đánh giá tác dụng không mong muốn: chọn 80 hộ (1 xóm) trong thôn để phát hương xua. c) Phương pháp chọn mẫu: chọn mẫu có chủ đích. d) Nội dung nghiên cứu:

Trong quá trình điều tra thành phần loài muỗi trước thử nghiệm, nghiên cứu được thực hiện theo quy trình của Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung ương, kéo dài trong 4 đêm cho mỗi hộ gia đình Các phương pháp điều tra bao gồm: sử dụng mồi người trong nhà từ 18 đến 24 giờ, soi chuồng gia súc từ 19 đến 23 giờ, và đặt bẫy đèn trong nhà từ 18 đến 6 giờ, với mỗi thôn có 2 bẫy đèn tại 2 nhà khác nhau để tránh trùng lặp với nhà mồi bắt muỗi.

- Thử nhạy cảm của muỗi với hóa chất lambdacyhalothrin 0,05% và permethrin 0,75% theo quy trình của WHO.

- Đánh giá hiệu lực xua muỗi của hương xua chứa tinh dầu bạch đàn theo hướng dẫn của WHO:

Chọn 3 nhà có vị trí thuận lợi cho sự phát triển của muỗi, đảm bảo khoảng cách tối thiểu giữa các nhà thử nghiệm là 100 mét Các nhà thử nghiệm cần tuân thủ các yêu cầu: không sử dụng hóa chất diệt côn trùng trong 6 tháng gần đây và khi thực hiện thử nghiệm, cần đóng bớt cửa sổ để tránh gió từ bên ngoài, nhưng vẫn phải mở ít nhất 1 cửa Phòng ngồi bắt muỗi trong các nhà thử nghiệm cần có diện tích tương đồng, khoảng 15 - 20 m².

Trong 3 nhà thử nghiệm: 1 nhà thử nghiệm hương xua chứa tinh dầu bạch đàn chanh, 1 nhà làm sử dụng hương xua của Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng trung ương và 1 nhà đối chứng (hương không chứa tinh dầu hay hóa chất) để so sánh hiệu lực xua muỗi của các loại hương xua Sau mỗi đêm nhóm các hộ đốt hương và nhóm đối chứng được hoán đổi để đảm bảo mật độ muỗi giữa các nhóm được đồng đều theo thiết kế ô vuông Latin [18]. Đêm Nhà 1 Nhà 2 Nhà 3

A T3 Trong đó: A, B, C là người bắt muỗi

T1: Hương xua chứa tinh dầu

T2: Hương xua hóa chất của Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung ương

Trong nghiên cứu T3, đối chứng được thực hiện với hương không chứa tinh dầu hay hóa chất (hương mộc) Phương pháp thu thập muỗi được tiến hành bằng cách sử dụng một người mồi trong nhà, thực hiện tại 3 nhà khác nhau trong 9 đêm Tại các nhà thử nghiệm, một que hương được đốt liên tục từ 17-22 giờ, trong khi người mồi hoạt động trong thời gian 4 giờ, từ 18 giờ.

- 22 giờ giai đoan này khi người dân thắp đèn sẽ làm cho muỗi bay vào nhà đốt người nhiều nhất), vị trí đặt hương cách người mồi khoảng 1,5 m [21].

- Đánh giá tác dụng không mong muốn của hương xua:

Trong thôn, 80 hộ gia đình được phát hương xua, mỗi hộ nhận 3 bó hương chứa tinh dầu bạch đàn chanh, đủ sử dụng trong 5 đêm Tổng số hương xua cần thiết là 240 bó, tính toán từ 80 hộ nhân với 3 bó mỗi hộ.

Hương xua nên được đốt trong nhà từ 18 giờ đến 22 giờ mỗi đêm, với mỗi hộ gia đình chỉ cần sử dụng một que hương Nếu que hương cháy hết, có thể đốt tiếp que khác cho đến khi tất cả các thành viên trong gia đình đã đi ngủ.

Bài phỏng vấn được thực hiện với những người thử nghiệm và người dân sử dụng hương xua, trong đó thời gian phỏng vấn cho nhóm thử nghiệm diễn ra ngay sau khi họ hoàn thành thử nghiệm, còn nhóm hộ dân được phỏng vấn sau 5 ngày sử dụng Các triệu chứng được theo dõi bao gồm mùi dễ chịu hay khó chịu, đau đầu, ngứa ngáy, ho, buồn nôn, hắt hơi, kích thích mắt và sổ mũi Phương pháp xác định và đo lường các biến số cũng được thực hiện để đánh giá hiệu quả của sản phẩm.

- Muỗi Anopheles, Aedes, Culex… bắt được ở lô thử nghiệm và lô đối chứng.

- Xác định hiệu lực phòng chống muỗi của hương xua (P).

- Tỷ lệ người dân sử dụng hương xua

- Các triệu chứng xảy ra đối với những người tham gia thử nghiệm hương.

Xác định tỷ lệ phần trăm tác dụng không mong muốn xảy ra đối với người tham gia thử nghiệm và cộng đồng tham gia nghiên cứu là rất quan trọng Các chỉ số đánh giá sẽ giúp cung cấp cái nhìn tổng quan về mức độ an toàn và hiệu quả của nghiên cứu.

+ Hiệu lực phòng chống muỗi của hương xua (P%) được tính từng giờ và trung bình của 4 giờ theo công thức [22]:

P (%) = (C – T)/ C x 100 T: Số muỗi bắt được của nhóm đốt hương xua.

C: Số muỗi bắt được của nhóm đối chứng (hương mộc).

+ Tỷ lệ % người dân sử dụng hương xua

Tỷ lệ phần trăm tác dụng không mong muốn xảy ra ở những người tham gia thử nghiệm và người dân trong nghiên cứu là một yếu tố quan trọng cần xem xét Các kỹ thuật được sử dụng trong nghiên cứu đóng vai trò quyết định trong việc thu thập và phân tích dữ liệu, từ đó đánh giá chính xác mức độ an toàn và hiệu quả của sản phẩm hoặc phương pháp điều trị.

- Kỹ thuật bắt muỗi bằng mồi người trong nhà: Theo kỹ thuật thường quy của Viện Sốt rét – Ký sinh trùng – Côn trùng Trung ương [23]:

+ Người làm mồi bắt muỗi ở tư thế ngồi, quần được xắn lên quá gối để

2 chân lộ ra, ngồi yên chờ muỗi đến đậu lên chân thì bắt.

Khi cảm thấy có muỗi đậu trên chân hoặc đang bị muỗi đốt, bạn nên sử dụng đèn pin để kiểm tra Tuy nhiên, cần lưu ý không chiếu đèn trực tiếp và đột ngột vào vị trí muỗi để tránh làm chúng bay đi Hãy hướng đèn ra xa trước, sau đó từ từ đưa ánh sáng về phía muỗi cho đến khi nhìn rõ chúng thì dừng lại.

Đạo đức trong nghiên cứu

Nghiên cứu này tuân thủ quy định của Tổ chức Y tế Thế giới về việc sử dụng hóa chất diệt côn trùng, cũng như các quy chế xét duyệt đạo đức trong nghiên cứu y sinh học của Viện Sốt rét – Ký sinh trùng – Côn trùng Trung Ương.

- Trung thực trong nghiên cứu.

Đảm bảo bảo mật thông tin trong hồ sơ nghiên cứu là rất quan trọng Cần mô tả rõ ràng quyền lợi của bệnh nhân và đối tượng nghiên cứu, đồng thời xác định trách nhiệm của người nghiên cứu để tạo niềm tin và minh bạch trong quá trình thực hiện nghiên cứu.