Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.

Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.Nghiên cứu sản xuất hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh tại phòng thí nghiệm và thử nghiệm phòng chống muỗi tại xã Tân Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam, năm 20202021.

TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU

Muỗi Anopheles trên Thế giới và Việt Nam

Muỗi Anopheles Meigen, 1818 thuộc họ muỗi Culicidae Meigen,1818.

Có khoảng 3.500 loài muỗi được phân chia thành 3 phân họ: Toxorhynchitinae, Culicinae và Anophelinae Trong đó, phân họ Anophelinae bao gồm 3 giống: Bironella, Chagasia và Anopheles, nhưng chỉ một số loài thuộc giống Anopheles có khả năng truyền sốt rét cho con người Các loài muỗi truyền sốt rét khác nhau tồn tại ở các vùng địa lý khác nhau.

Một số véc tơ truyền bệnh sốt rét quan trọng bao gồm: An gambiae, An funestus, An arabiensis ở châu Phi; An albimanus tại Trung Mỹ; An darlingi ở Nam Mỹ; An quadrimaculatus ở Bắc Mỹ; An stephensi tại vịnh Ả Rập; An sacharovi ở Thổ Nhĩ Kỳ; An culicifacies, An dirus, An minimus ở Ấn Độ; An anthropophagus, An dirus, An minimus tại Trung Quốc; An superpictus ở vùng Trung Á; An messeae ở Đông Âu; An atropavus tại Tây Âu; An farauti ở Australia; và An dirus, An minimus, An epiroticus ở Đông Nam Á.

Bên cạnh các véc tơ SR chính, còn tồn tại một số véc tơ phụ có vai trò thứ yếu trong việc truyền bệnh, với mỗi véc tơ có vùng phân bố nhất định Trong cùng một khu vực địa lý, có thể xuất hiện nhiều véc tơ chính và phụ, và vai trò của chúng có thể thay đổi theo thời gian và không gian Tại Việt Nam, năm 1968, Viện Sốt rét-Ký sinh trùng-Côn trùng đã công bố khóa định loại muỗi Anopheles với 32 loài Nghiên cứu của Lê Xuân Hợi (1995) về phân bố muỗi Anopheles ở miền Bắc và Lê Khánh Thuận (1975) về đặc điểm sinh lý, sinh thái của muỗi Anopheles khu vực Nam Trường Sơn đã chỉ ra sự đa dạng loài Trần Đức Hinh (1995) đã thống kê 59 loài Anopheles trên toàn quốc, phân tích sự phân bố theo cảnh quan và vùng địa lý tự nhiên, với 5 loài xuất hiện ở mọi vùng, 20 loài chỉ có ở vùng núi đồi, và 29 loài chỉ gặp ở một số khu vực nhất định Năm 2008, Viện Sốt rét-Ký sinh trùng-Côn trùng Trung ương đã phát hành Bảng định loại muỗi Anophelinae tại Việt Nam.

62 loài (chưa kể An harrisoni - một loài đồng hình trong nhóm loài An. minimus).

Số loài có khả năng truyền sốt rét chỉ có 15 loài, bao gồm 03 véc tơ chính (An minimus, An dirus, An epiroticus), 08 véc tơ phụ (An aconitus,

An campestris, An indefinitus, An jeyporiensis, An maculatus, An sinensis,

An subpictus, An vagus.) và 04 loài muỗi nghi ngờ là véc tơ (An lesteri, An.nimpe, An interruptus, An culicifacies).

Muỗi Culicinae trên Thế giới và Việt Nam

Phân họ muỗi Culicinae thuộc họ muỗi Culicidae có sự phân bố rộng rãi trên toàn thế giới và đóng vai trò quan trọng trong dịch tễ học, do đó đã thu hút nhiều nghiên cứu từ các tác giả trong các lĩnh vực như phân loại, hình thái, sinh học và vai trò truyền bệnh Nhiều công trình nghiên cứu đã được thực hiện, đáng chú ý là nghiên cứu của Horsfall (1955) về đặc tính sinh học của muỗi liên quan đến dịch bệnh, và các tác phẩm của Clements (1992, 1999, 2012) về sinh lý học và vai trò truyền bệnh của muỗi Ameen (1982) đã khảo sát tập tính của muỗi, trong khi Hawley (1988) tập trung vào sinh học của muỗi Ae albopictus Công trình của Wharton (1962) nghiên cứu về muỗi Mansonia ở Malaysia cũng rất đáng chú ý Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) cũng đã công bố nhiều tài liệu về bệnh giun chỉ bạch huyết do muỗi truyền Đặc biệt, công trình “Aedes aegypti (L) the Yellow fever mosquito” của Christopher (1960) cung cấp thông tin phong phú về sinh học, sinh thái và vai trò truyền bệnh của muỗi Ae aegypti.

Phân họ muỗi Culicinae đóng vai trò quan trọng trong dịch tễ học, với nhiều loài là vật trung gian truyền các bệnh nguy hiểm như sốt vàng, sốt xuất huyết Dengue, viêm não Nhật Bản và giun chỉ Nghiên cứu về các loài muỗi này đã được thực hiện tương đối đầy đủ ở nhiều quốc gia Trong số 44 giống muỗi thuộc phân họ này, các giống Aedes, Culex và Lutzia có vai trò dịch tễ đặc biệt quan trọng.

Mansonia khẳng định vai trò quan trọng của một số loài muỗi như Ae aegypti và Ae albopictus trong việc truyền bệnh sốt vàng, sốt xuất huyết dengue và chikungunya Các loài muỗi như Cx tritaeniorhynchus và Cx vishnui là véc tơ chính truyền viêm não Nhật Bản, trong khi Cx quinquefasciatus, Ma uniformis và Ma anulifera là những tác nhân chính trong việc truyền bệnh giun chỉ bạch huyết.

Nghiên cứu về đặc điểm sinh thái của muỗi cho thấy trong chu kỳ sống của chúng có ba giai đoạn phát triển chính ở môi trường nước: trứng, bọ gậy và quăng.

Bọ gậy của một loài muỗi thường phân bố theo địa hình hoặc môi trường nước nhất định Laird (1988) cho rằng địa hình không trực tiếp ảnh hưởng đến sự phân bố của muỗi, nhưng có tác động gián tiếp qua hệ thống ổ nước, ảnh hưởng đến sự phát triển của bọ gậy và từ đó đến sự phân bố của muỗi trưởng thành Tại Việt Nam, nghiên cứu về muỗi bắt đầu từ đầu thế kỷ 20, nhưng trước năm 1945, các nghiên cứu chỉ mang tính chất rời rạc phục vụ cho quân đội và các đồn điền thực dân Sau cách mạng tháng Tám năm 1945, nghiên cứu về muỗi Culicidae, đặc biệt là muỗi Anopheles, được tiến hành bài bản hơn Nổi bật trong số các công trình nghiên cứu là các tác phẩm của Galliard (1947, 1950) về muỗi ở Vịnh Bắc bộ, và Stone (1966) là người đầu tiên đưa ra bảng định loại muỗi ở Việt Nam Stojanovich và Scott (1966) đã thống kê khu hệ muỗi với 169 loài thuộc 15 giống, trong đó giống Anopheles có 41 loài và muỗi Culicinae có 128 loài.

Hương xua muỗi trên Thế giới và Việt Nam

1.3.1 Hương xua muỗi trên thế giới

Hương xua muỗi được phát triển vào những năm 1890 bởi chuyên gia Nhật Bản Eiichiro Ueyanma Từ năm 1957, hương này đã trở nên phổ biến ở Trung Quốc và Thái Lan, giúp giảm hơn 80% số lượng muỗi đốt người trong các khu vực nghiên cứu Với giá thành rẻ và dễ sử dụng, hương xua muỗi hiện đang được áp dụng rộng rãi trên toàn thế giới, góp phần đáng kể vào việc giảm mật độ muỗi đốt người.

Tại Ấn Độ, biện pháp sử dụng dây tẩm hóa chất để xua muỗi đang phát triển mạnh mẽ Dây xua này tương tự như hương vòng nhưng có giá thành thấp hơn, thường được nhúng trong dung dịch hóa chất diệt côn trùng Khi đốt, dây tỏa ra khói có khả năng diệt và xua đuổi muỗi cũng như ruồi hút máu Nguyên liệu phổ biến được sử dụng là sợi đay với đường kính khoảng 0,9cm và nặng khoảng 2,8g/m, trong khi hóa chất diệt côn trùng thường dùng là esbiothrin Các hóa chất khác cũng có thể được sử dụng để tẩm dây xua muỗi Sản phẩm này được sản xuất thành từng đoạn và khi cháy, nó có thể tỏa khói trong khoảng 10-12 giờ nếu được treo trong phòng Để đảm bảo an toàn, nên đốt dây xua trong một ống lưới bằng thép để tránh va chạm với các vật liệu khác.

Hương muỗi chứa các hoạt chất pyrethroid đã được thử nghiệm để chống muỗi truyền sốt rét An dirus tại Nhật Bản, cho thấy muỗi An dirus nhạy cảm hơn Cx pipiens pallens Hương xua muỗi chủ yếu nhằm ngăn chặn tiếp xúc giữa muỗi và người, bằng cách tạo ra khói kích thích khiến muỗi bị nhiễu loạn, từ đó ngăn chúng đốt người hoặc làm chúng tê liệt và chết Phương pháp này phổ biến trong cộng đồng vì tính đơn giản, hiệu quả và chi phí thấp Khi đốt, hương cháy âm ỉ trong khoảng 8 giờ, và khói hương chứa hóa chất xua diệt muỗi sẽ tỏa ra đều đặn vào không khí.

1.3.2 Hương xua muỗi ở Việt Nam Ở Việt Nam, hương xua muỗi được sản xuất với hoạt chất chính là hóa chất nhóm pyrethroid có tác dụng g y độc hại cho các loại côn trùng Hoạt chất trộn với một số chất dễ cháy như mùn cưa và một chất kết dính như tinh bột, hoạt chất này có tác dụng gây chết tức thời các loại côn trùng đang bay. Hương xua muỗi thường được sản xuất dưới dạng hương que có thời gian sử dụng ngắn và dạng hương vòng có thời gian sử dụng dài hơn.

Trong các loại pyrethroid tổng hợp dùng để làm hương, allethrin và một số hoạt chất dễ bay hơi khác được sử dụng để xua đuổi và tiêu diệt côn trùng ngay khi hương đang cháy Bên cạnh pyrethroid, DDT cũng có mặt trong một số sản phẩm hương xua muỗi của Trung Quốc, tuy nhiên hiệu quả của nó thấp và có thể gây độc hại Để tạo ra mùi hương dễ chịu, các nhà sản xuất thường thêm hương liệu vào quy trình sản xuất khói hương.

Sản phẩm hương vòng tại Việt Nam được sản xuất từ nguyên liệu thân thiện với môi trường, hiệu quả trong việc xua đuổi côn trùng mà vẫn an toàn cho người dùng Với công thức tối ưu, hương vòng đảm bảo nồng độ hóa chất tác động từ từ, khiến côn trùng yếu dần và chết, do đó bảo vệ sức khỏe người sử dụng.

Các loại hương xua diệt muỗi được sản xuất tại Việt Nam bao gồm hương xua muỗi dạng que, do Viện Sốt rét - Ký sinh trùng phát triển Sản phẩm này hiện đang được lưu hành chính thức và cũng có dạng thử nghiệm.

Hương xua côn trùng Trung ương chứa hoạt chất Metofluthrin (C18H20 F4 O3), có công thức hóa học là 2,3,5,6-Tetrafluoro-4-(methoxymethyl) benzyl 2,2-dimethyl-3-(prop-1-en-1-yl) cyclopropanecarboxylate Sản phẩm này đã được thử nghiệm hiệu quả trong việc xua đuổi muỗi Culex, Aedes và Anopheles, cùng với nhiều loài muỗi gây phiền toái khác, đặc biệt là ở khu vực thành phố và đồng bằng ven biển Tuy nhiên, hiện chưa có nghiên cứu nào về hiệu quả của hương xua trong việc phòng chống muỗi truyền SR ở miền núi Ngoài ra, còn có một số sản phẩm hương xua từ các viện nghiên cứu khác như Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương và Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Quy Nhơn Hương muỗi được đánh giá là dễ sử dụng và có giá thành rẻ.

Nghiên cứu này đánh giá khả năng xua muỗi của tinh dầu bạch đàn chanh, một thành phần chưa được nghiên cứu trong các sản phẩm hương xua muỗi trước đây Đây là bước đầu tiên trong việc khám phá hiệu quả của tinh dầu này trong việc xua đuổi muỗi.

Một số loài thực vật xua muỗi

Khả năng xua đuổi côn trùng của thực vật đã được sử dụng từ hàng ngàn năm, với phương pháp treo cây dược liệu trong nhà hoặc trồng xung quanh là cách đơn giản và phổ biến ở các nước đang phát triển Nhiều loài thực vật được dùng để xông hơi hoặc đốt khói nhằm đuổi muỗi, và chúng còn được chiết xuất thành dầu bôi lên da hoặc quần áo Đây là những sản phẩm xua đuổi côn trùng đầu tiên được ghi nhận trong các tài liệu cổ đại của Hy Lạp, La Mã và Ấn Độ Các chất xua đuổi côn trùng từ thực vật rất phổ biến trong dân gian ở các vùng nông thôn nhiệt đới, cung cấp phương pháp bảo vệ chống muỗi đốt hiệu quả và tiết kiệm Đặc biệt, ở châu Âu và Bắc Mỹ, mùi hương tự nhiên từ các loại cây này được ưa chuộng, trở thành một giải pháp an toàn và đáng tin cậy để phòng chống muỗi.

Tinh dầu và chiết xuất từ cây trong chi sả (Poaceae) thường được sử dụng làm thành phần trong thuốc chống muỗi nguồn gốc thực vật, đặc biệt là từ Cymbopogon nardus, được áp dụng tại châu Âu và Bắc Mỹ Được Ấn Độ sử dụng để đẩy lùi muỗi từ đầu thế kỷ 20, sản phẩm này đã được đăng ký sử dụng thương mại tại Hoa Kỳ vào năm 1948 Tuy nhiên, tinh dầu sả chỉ bảo vệ khỏi muỗi trong khoảng hai giờ do chứa các hợp chất như citronellal, citronellol, geraniol, citra, - pinen và limonene, có hiệu quả tương tự như DEET nhưng nhanh chóng bay hơi Để kéo dài thời gian bảo vệ, có thể trộn tinh dầu Cymbopogon winterianus với các chất cao phân tử như vanillin (5%) hoặc chất mỡ động vật, giúp giảm sự bay hơi của tinh dầu.

Ngoài việc sử dụng tinh dầu sả như một chất xua muỗi phổ biến, người dân ở châu Phi, châu Á và Mỹ La Tinh còn áp dụng lá cây Neem để đuổi muỗi nhờ vào mùi hương khó chịu của chúng Lá khô của cây Neem thường được treo trong nhà hoặc trồng gần khu vực sinh sống để xua đuổi muỗi, mặc dù chưa có bằng chứng cụ thể về hiệu quả Hơn nữa, hạt cây Neem đã được chiết xuất để sản xuất chất xua đuổi côn trùng trong nông nghiệp.

Họ Lamiaceae, bao gồm các loại thảo mộc và dược liệu, họ Poaceae với các loại cỏ thơm, cùng họ Pinaceae chứa thông và cedar, đều được sử dụng rộng rãi trên toàn cầu như những phương thuốc chống côn trùng hiệu quả.

Tinh dầu có khả năng xua đuổi muỗi hiệu quả, nhưng chúng thường bay hơi nhanh, dẫn đến giảm hiệu quả Các loại tinh dầu như sả, húng tây, geraniol, bạc hà, tuyết tùng, hoắc hương và đinh hương có thể đẩy lùi muỗi và các bệnh như sốt rét trong khoảng 60 - 180 phút Để cải thiện thời gian bảo vệ, có thể sử dụng tá dược hoặc phụ gia làm chậm sự bay hơi, như tinh dầu nghệ và húng quế kết hợp với 5% vanillin, giúp kéo dài hiệu quả xua đuổi lên đến 6 - 8 giờ Ngoài ra, việc trộn tinh dầu Cymbopogon winterianus với vanillin hoặc chất béo động vật cũng có thể gia tăng thời gian bảo vệ Gần đây, công nghệ vi nang đã được áp dụng để giảm tốc độ bay hơi của tinh dầu, tạo ra những giọt dầu ổn định, từ đó nâng cao hiệu quả xua muỗi.

Nghiên cứu năm 2004 của nhóm tác giả Trung Quốc cho thấy một số tinh dầu tự nhiên không chỉ có khả năng xua đuổi côn trùng mà còn tiêu diệt muỗi trưởng thành khi sử dụng ở nồng độ cao Nghiên cứu đã thử nghiệm với 5 loại tinh dầu: bạc hà, sả, húng tây, họ cam và họ cúc, trên loài muỗi Culex pipiens quinquefasciatus Phương pháp thử nghiệm sử dụng bình nón kín với 10-15 con muỗi cái và theo dõi trong 24 giờ Kết quả cho thấy tinh dầu họ cam có độc tính mạnh nhất, trong khi tinh dầu húng tây có thời gian tiêu diệt muỗi nhanh nhất (6,087 phút) Phân tích hóa học tinh dầu họ cam bằng máy sắc ký GC/MS xác định các thành phần chính là Alpha citral (33,50%) và citral (35,77%), với citral cho thấy hoạt động diệt muỗi hiệu quả trong thời gian ngắn Tất cả 5 loại tinh dầu đều có tác dụng đáng kể đối với muỗi trưởng thành.

Năm 2010, Specos và cộng sự đã nghiên cứu hạt vi nang siêu nhỏ chứa tinh dầu sả (citronella) thông qua phức hợp coacervation, áp dụng cho ngành dệt bông để kiểm tra hiệu quả xua đuổi côn trùng Vải dệt được xử lý bằng tinh dầu microencapsulated cho hiệu quả xua đuổi muỗi Aedes aegypti lên tới 90% trong 3 tuần, cao hơn so với vải phun dung dịch ethanol Phương pháp tạo phức hợp coacervation được đánh giá là đơn giản, chi phí thấp và có thể mở rộng Năm 2011, Anitha và nhóm nghiên cứu Ấn Độ đã chứng minh rằng vải polyester có thể đạt hiệu quả chống muỗi cao nhất (92%) khi áp dụng phương pháp Pad-dry-cure Ngoài ra, vào năm 2013, các hạt tinh dầu microencapsulation cũng được sử dụng trong bao bì thực phẩm để chống lại côn trùng, và một nhóm tác giả Ethiopia đã đánh giá hiệu lực diệt muỗi Anopheles arabiensis với 10 loại tinh dầu khác nhau.

Eucalyptus globulus (bạch đàn xanh), Mentha spicata (bạc hà bông), Nigella sativa (hồ tiêu), Schinus molle và Lippia adoensis (xạ hương) là những loại tinh dầu được nghiên cứu Phương pháp thử sinh học được thực hiện theo hướng dẫn của Trung tâm kiểm soát và phòng ngừa dịch bệnh (CDC), sử dụng chai thủy tinh trung tính 250 ml để đánh giá hiệu quả xua diệt của các tinh dầu này.

Vào năm 2014, Jayant Udakhe và nhóm nghiên cứu Ấn Độ đã tìm kiếm các giải pháp tự nhiên thay thế cho hóa chất thương mại, với bạch đàn, hoa oải hương và viên nang siêu nhỏ sả là những ứng cử viên tiềm năng Họ đã sử dụng phương pháp sắc ký khí để phân tích thành phần hóa học của các viên nang siêu nhỏ và tinh dầu, đồng thời thử nghiệm hoạt tính chống côn trùng của chúng đối với ấu trùng bọ cánh cứng, cho thấy khả năng xua đuổi hiệu quả.

Cây bạch đàn chanh và ứng dụng trong xua muỗi

Bạch đàn chanh (Eucalyptus citriodora) là cây gỗ lớn với nhánh non có cạnh Lá cây có mùi thơm đặc trưng giống sả và chanh, lá ở nhánh non có phiến và lông, thon dài, dần dần cong thành hình lưỡi liềm ở nhánh trưởng thành, có màu lam tươi, dài đến 17cm Hoa của bạch đàn chanh mọc ở nách lá, với lá đài rụng thành chóp và nhiều nhị Quả của cây có hình nang, nằm trong đài tồn tại và chia thành 4 mảnh.

Bộ phận dùng: Tinh dầu – Oleum Eucalypti.

Bạch đàn chanh, loài cây đặc hữu của Queensland, Australia, hiện đã được trồng rộng rãi trên toàn thế giới, bao gồm cả Việt Nam.

Tinh dầu bạch đàn chanh đã được biết đến và sử dụng từ hàng trăm năm qua Nghiên cứu của Brooker và Kleinig (2006) chỉ ra rằng tinh dầu này là hỗn hợp phức tạp của nhiều monoterpenes và sesquiterpenes, cùng với các hợp chất như phenol, oxit, este, rượu, ete, andehyt và keton Thành phần của tinh dầu phụ thuộc vào loài cây, khu vực trồng, khí hậu, loại đất, tuổi của lá, chế độ pH và bón phân, cũng như phương pháp tách chiết Hoạt tính trừ sâu của tinh dầu bạch đàn chanh được xác định bởi các thành phần như 1,8-cineole, citronellal, citronellol, citronellyl acetate, p-cymene, eucamalol, limonene và linalool.

Nghiên cứu tại Trung Quốc cho thấy hàm lượng tinh dầu trong lá bạch đàn chanh tươi dao động từ 0,5-2% Tinh dầu này thường có màu vàng nhạt, với tỉ trọng từ 0,915-0,925 ở 15 độ C và chỉ số chiết quang từ -1 đến -0.

5 0 C Tinh dầu có thành phần chủ yếu citronellal (60-80%); citronellol (15- 20%), ngoài ra còn lượng nhỏ alcol bậc I quy ra geraniol (11,14%), geranial và các thành phần khác (2%) [17].

Nghiên cứu thành phần hóa học trong tinh dầu bạch đàn chanh trồng ở

Australia, Boland, and colleagues provided the following data on essential oil composition: citronellal (80.1%), isoisopulegol (3.4%), linalool (0.7%), β-caryophyllene (0.4%), β-pinene (0.4%), α-pinene (0.1%), and α-para-dimethylstyrene (0.1%) Other compounds such as α-terpineol, geraniol, 1,8-cineole, globulol, and viridiflorol were present only in trace amounts.

Lá chứa tinh dầu với mùi dễ chịu và tính kháng khuẩn mạnh, được ứng dụng rộng rãi trong công nghệ hóa mỹ phẩm, sản xuất xà phòng, chất tẩy rửa và sát trùng Tinh dầu bạch đàn thường được sử dụng làm thuốc sát khuẩn tại chỗ, đặc biệt trong điều trị các bệnh nhiễm khuẩn đường hô hấp trên và một số bệnh ngoài da Khi trộn với dầu Ô liu theo tỷ lệ tương đương, tinh dầu này có thể được dùng làm thuốc gây sung huyết da để điều trị thấp khớp.

Tinh dầu bạch đàn chanh còn được dùng làm thuốc trị bỏng, làm thuốc g y long đờm trong trường hợp viêm phế quản mạn tính và hen.

Tinh dầu Bạch đàn chanh chứa một lượng lớn Citronella, là nguồn nguyên liệu tự nhiên quý giá trong công nghệ chuyển hóa Nó được sử dụng để sản xuất các sản phẩm như hydroxycitronellal, citrolellylnitrile và menthon.

Bạch đàn chanh chứa đến 99% citronellal và geraniol, hai hợp chất chính tạo nên hương liệu trong ngành nước hoa và mỹ phẩm Tinh dầu bạch đàn cũng được sử dụng hiệu quả trong việc xua đuổi muỗi, đặc biệt khi bôi lên da Tại Ấn Độ, nghiên cứu cho thấy tinh dầu bạch đàn có khả năng bảo vệ khỏi muỗi Cx quinquefasciatus trong khoảng thời gian từ 120 đến 180 phút.

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Mục tiêu 1

Quy trình tạo hương xua muỗi sử dụng tinh dầu bạch đàn chanh (Eucalyptus citriodora) đã được xây dựng và đánh giá hiệu lực diệt muỗi trong môi trường phòng thí nghiệm Nghiên cứu này nhằm tìm ra phương pháp hiệu quả để xua đuổi muỗi, góp phần bảo vệ sức khỏe cộng đồng.

Tinh dầu bạch đàn chanh, với thành phần chính là citronellal có công thức hóa học C10H18O, được chiết xuất từ cây bạch đàn chanh Sản phẩm này có nồng độ ≥85% và mật độ 0,857 g/ml ở nhiệt độ 25°C Tinh dầu bạch đàn chanh được cung cấp bởi hãng Sigma-Aldrich, Mỹ.

- Hương có thành phần tinh dầu bạch đàn chanh (Citronellal)

- Muỗi An minimus và Aedes aegypti và Cx quinquefasciatus chủng phòng thí nghiệm

2.1.2 Thời gian và địa điểm nghiên cứu:

- Thời gian nghiên cứu: 06/2020 đến 12/2020.

- Địa điểm nghiên cứu: Phòng thí nghiệm khoa Côn trùng.

2.1.3 Thiết kế phương pháp nghiên cứu: a) Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu thử nghiệm.

- Nghiên cứu tạo hương xua muỗi chứa tinh dầu bạch đàn chanh.

- Đánh giá hiệu lực diệt muỗi của hương xua chứa tinh dầu bạch đàn chanh bằng cách sử dụng buồng thử thủy tinh 70cm x 70cm x 70cm.

- Lựa chọn hương xua có tỷ lệ tinh dầu thích hợp để thử nghiệm tại thực địa.

Trong nghiên cứu này, chúng tôi đánh giá tác dụng không mong muốn của hương xua đối với những người tham gia thử nghiệm Mẫu nghiên cứu bao gồm việc thử nghiệm sinh học với mỗi tỷ lệ tinh dầu bạch đàn chanh được thực hiện lặp lại 3 lần Phương pháp chọn mẫu được áp dụng là chọn mẫu có chủ đích để đảm bảo tính chính xác và đáng tin cậy của kết quả nghiên cứu.

Viện Sốt rét – Ký sinh trùng – Côn trùng Trung ương sản xuất các loại hương với tỷ lệ tinh dầu bạch đàn chanh khác nhau Quy trình sản xuất hương xua được áp dụng nhằm đảm bảo hiệu quả và chất lượng sản phẩm.

- Lựa chọn các loại hương có tỷ lệ muỗi chết tốt nhất cho thử nghiệm đánh giá hiệu lực diệt muỗi tại thực địa.

Nghiên cứu đánh giá hiệu lực diệt muỗi của hương xua chứa tinh dầu bạch đàn chanh được thực hiện trong buồng thử thủy tinh kích thước 70cm x 70cm x 70cm, sử dụng các loài muỗi An minimus, Ae aegypti và Cx quinquefasciatus từ phòng thí nghiệm Thí nghiệm được lặp lại 3 lần, theo dõi số lượng muỗi ngã trong khoảng thời gian từ 0 đến 20 phút để tính toán KT50, KT90 và tỷ lệ muỗi chết sau 24 giờ Đối chứng sử dụng hương không chứa tinh dầu để so sánh hiệu quả.

- Đánh giá tác dụng không mong muốn của những người thử nghiệm hương trong phòng thí nghiệm:

+ Dựa vào bảng câu hỏi in sẵn về các triệu chứng gặp phải khi thử nghiệm trong phòng thí nghiệm

Sau khi thử nghiệm, phỏng vấn sẽ được tiến hành vào ngày hôm sau để theo dõi các triệu chứng như đau đầu, ngứa ngáy, ho, buồn nôn, mùi, hắt hơi, kích thích mắt và sổ mũi Phương pháp xác định và đo lường các biến số sẽ được áp dụng để đảm bảo tính chính xác trong quá trình nghiên cứu.

- Sản xuất hương có chứa tinh dầu bạch đàn chanh, bột hương, keo, phụ gia.

- Hương chứa tinh dầu bạch đàn chanh được thăm dò ở các tỷ lệ tinh dầu: 10%, 20%, 30%.

- Sử dụng muỗi An minimus, Ae aegypti và Cx quinquefasciatus để đánh giá tác dụng diệt của hương xua: Muỗi sống, muỗi ngã, muỗi chết

- Xác định KT50, KT90 muỗi An minimus, Ae aegypti và

- Xác định tỷ lệ muỗi chết trung bình ± SD sau 24 giờ thử nghiệm.

- Xác định giá trị p với độ tin cậy 95%.

- Các triệu chứng xảy ra đối với những người tham gia thử nghiệm hương.

- Xác định tỷ lệ % tác dụng không mong muốn xảy ra đối với người tham gia thử nghiệm. g) Các chỉ số đánh giá:

- Đánh giá tác dụng diệt muỗi của hương xua dựa vào tỷ lệ muỗi chết sau

24 giờ thử nghiệm trong buồng thử thủy tinh 70cm x 70cm x 70cm:

+ Sau 24 giờ số muỗi chết từ 90 - 100% là hương có tác dụng diệt muỗi tốt.+ Sau 24 giờ số muỗi chết từ 70-89 % là hương có tác dụng diệt muỗi trung bình.

+ Sau 24 giờ số muỗi chết dưới 70% là hương có tác dụng diệt muỗi kém.

- Tỷ lệ % tác dụng không mong muốn của người tham gia thử nghiệm g, Các kỹ thuật sử dụng trong nghiên cứu:

- Quy trình sản xuất hương mộc

Bước 1: Chuẩn bị nguyên liệu và máy

* Chuẩn bị máy làm hương:

+ Lắp đầu dẫn tăm vào máy, căn chỉnh độ dài bột 21 cm.

+ Bật nguồn điện, bật công tắc máy và chạy thử.

Bước 2: Trộn nguyên liệu trong máy trộn bột

+ Cho bột hương, bột keo vào máy trộn và bật máy trộn trong 2 phút. + Tắt máy 2 phút.

+ Đổ nước, tinh dầu vào máy trộn, bật máy trộn 2 phút, tắt máy.

Bước 3: Chạy máy làm hương

+ Bột sau khi trộn, được đưa vào phễu của máy làm hương 2/3 dung tích phễu.

+ Một người liên tục cho từng tăm hương qua lỗ tra tăm của máy làm hương, lưu ý cho phần để bột hương bám tăm vào trước.

+ Tăm hương đ được gắn bột và được máy đẩy vào khay đựng.

+ Một người liên tục thu hương từ khay đựng ra giá phơi.

+ Khi gần hết bột trong phễu, tiếp tục đổ bột bổ sung vào phễu.

+ Phần bột không bám vào tăm và bột từ những tăm hương chưa bám đều được thu trở lại vào phễu.

Bước 4: Phơi hương: Dàn đều hương theo hàng trên giá tại khu vực râm, thoáng, có mái che.

Bước 5: Vệ sinh dụng cụ

+ Vệ sinh máy trộn và máy làm hương sạch sẽ.

+ Rửa đầu dẫn tăm bằng nước sạch.

+ Bảo dưỡng máy định kì 1 lần/tháng.

Bước 6: Tẩm tinh dầu (Nếu tạo ra hương tinh dầu)

Sau khi hương mộc đ khô sẽ tiến hành nhúng hương vào tinh dầu theo tỷ lệ đ chọn (xem quy trình sản xuất hương xua chứa tinh dầu)

+ Đóng dấu số lô, ngày sản xuất và hạn sử dụng lên nhãn.

+ Cho vào mỗi túi nilon 18 que hương, tra nh n, dán bao.

- Kỹ thuật thử hiệu lực diệt muỗi sử dụng buồng thủy tinh 70cm x 70cm x 70cm [20]

- Đốt 0,6 gam hương trong lồng thử.

- Sau khi cháy hết thì thả vào lồng thử 20 muỗi cái chưa hút máu 2-5 ngày tuổi nuôi trong phòng thí nghiệm, được hút glucoza 10%.

- Theo dõi số lượng muỗi quỵ trong suốt 20 phút, đếm số muỗi ng mỗi phút.

- Sau 20 phút thu thập muỗi được thử nêu trên ra cốc sạch và cho hút glucose 10%.

- Tính tỷ lệ muỗi quỵ và chết sau 24 giờ sau sẽ được tính toán

- Nếu ở lô đối chứng có số muỗi chết > 20% thử nghiệm phải hủy bỏ, chết từ 5%- 20% kết quả được điều chỉnh bằng công thức Abbot:

% tỷ lệ chết lô thử nghiệm - % tỷ lệ chết lô đối chứng

Tỷ lệ % muỗi chết thực = x 100

100- % tỷ lệ chết lô đối chứng Mỗi mẫu hương, tiến hành thử nghiệm 3 lần

- Ghi kết quả thử trên phiếu ghi kết quả (theo mẫu) Đánh giá hiệu lực :

+ Sau 24 giờ số muỗi chết từ 90-100% là hương có tác dụng diệt muỗi tốt

+ Sau 24 giờ số muỗi chết từ 70-90% là hương có tác dụng diệt muỗi trung bình

+ Sau 24 giờ số muỗi chết dưới 70% là hương có tác dụng diệt muỗi kém. h) Phương pháp kiểm soát nhiễu và sai số trong nghiên cứu

- Các kỹ thuật phải tuân thủ đúng theo hướng dẫn của quy trình chuẩn.

- Thử nghiệm đươc thực hiện cùng một nhóm cán bộ có kinh nghiệm.

- Số liệu thu thập được ghi trên biểu mẫu bằng giấy sau đó được nhập và máy tính. i) Phương pháp phân tích và xử lý số liệu:

Nhập số liệu bằng phần mềm Excell và phân tích bằng phần mềmProbit, SPSS.

Mục tiêu 2

Nghiên cứu này đánh giá hiệu quả của hương chứa tinh dầu bạch đàn chanh (Eucalyptus citriodora) trong việc xua muỗi, đồng thời xem xét các tác dụng không mong muốn và mức độ chấp nhận của cộng đồng tại x T n Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam Kết quả cho thấy hương bạch đàn chanh có khả năng xua đuổi muỗi hiệu quả, nhưng cũng cần lưu ý đến một số tác dụng phụ có thể xảy ra Sự chấp nhận của người dân đối với sản phẩm này là một yếu tố quan trọng trong việc triển khai ứng dụng rộng rãi trong cộng đồng.

Hương bạch đàn chanh chứa 20% tinh dầu Citrollal, đã được thử nghiệm trong phòng thí nghiệm và lựa chọn để kiểm tra tại thực địa.

Hương xua hóa chất do Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung ương sản xuất, với thành phần chính là Metofluthrin (C18H20 F4 O3) Hóa chất này có tên gọi khoa học là 2,3,5,6-Tetrafluoro-4-(methoxymethyl) benzyl 2,2-dimethyl-3-(prop-1-en-1-yl) cyclopropanecarboxylate, mang lại hiệu quả trong việc xua đuổi côn trùng.

- Hương không chứa hóa chất hay tinh dầu (Hương mộc).

- Người dân trong khu vực nghiên cứu sử dụng hương xua.

2.2.2 Thời gian và địa điểm nghiên cứu:

- Thời gian nghiên cứu: 12/2020 đến 9/2021.

- Địa điểm nghiên cứu: X T n Sơn, huyện Kim Bảng, tỉnh Hà Nam.

Hình 1 Sơ đồ khu vực nghiên cứu

Cơ sở chọn điểm nghiên cứu:

Hà Nam là tỉnh thuộc vùng Đồng bằng sông Hồng, giáp Hà Nội ở phía Bắc, Hưng Yên và Thái Bình ở phía Đông, Ninh Bình ở phía Nam, Nam Định ở Đông Nam và Hòa Bình ở phía Tây, cách thủ đô Hà Nội 60 km Địa hình Hà Nam có sự tương phản giữa đồng bằng và đồi núi, với khoảng 10-15% diện tích là vùng đồi núi bán sơn địa, bao gồm các dãy núi đá vôi, núi đất và đồi rừng Khu vực này có nhiều thung lũng ruộng và hệ thống sông ngòi dày đặc, tạo điều kiện cho sự phát triển của các giống muỗi như Culex, Aedes, Anopheles, Mansonia và Armigers Những yếu tố này đã khiến chúng tôi lựa chọn Hà Nam làm địa điểm nghiên cứu.

2.2.3 Thiết kế phương pháp nghiên cứu: a) Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu thử nghiệm có đối chứng.

Sau khi lựa chọn các tỷ lệ tinh dầu bạch đàn chanh hiệu quả trong việc diệt muỗi, hương xua chứa 20% tinh dầu đã được sử dụng để thử nghiệm đánh giá khả năng xua muỗi tại thực địa Đồng thời, nghiên cứu cũng đánh giá tác dụng không mong muốn và mức độ chấp nhận của cộng đồng đối với hương xua từ những người tham gia thử nghiệm và người dân sử dụng sản phẩm này.

- Đánh giá hiệu lực xua muỗi: Thu thập toàn bộ các loài muỗi

- Đánh giá tác dụng không mong muốn: chọn 80 hộ (1 xóm) trong thôn để phát hương xua. c) Phương pháp chọn mẫu: chọn mẫu có chủ đích. d) Nội dung nghiên cứu:

Trong quá trình điều tra thành phần loài muỗi trước thử nghiệm, chúng tôi thực hiện theo quy trình của Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng - Trung ương với thời gian điều tra kéo dài 4 đêm cho mỗi hộ Các phương pháp điều tra bao gồm: sử dụng mồi người trong nhà từ 18 đến 24 giờ, soi chuồng gia súc từ 19 đến 23 giờ, và đặt bẫy đèn trong nhà từ 18 đến 6 giờ Mỗi thôn được trang bị 2 bẫy đèn tại 2 nhà khác nhau, không trùng với nhà mồi bắt muỗi.

- Thử nhạy cảm của muỗi với hóa chất lambdacyhalothrin 0,05% và permethrin 0,75% theo quy trình của WHO.

- Đánh giá hiệu lực xua muỗi của hương xua chứa tinh dầu bạch đàn theo hướng dẫn của WHO:

Chọn ba nhà có vị trí thuận lợi cho sự phát triển của muỗi, đảm bảo khoảng cách tối thiểu 100 mét giữa các nhà thử nghiệm Các nhà thử nghiệm cần tuân thủ các yêu cầu như không sử dụng hóa chất diệt côn trùng trong vòng 6 tháng trước đó Để hạn chế gió từ bên ngoài, có thể đóng bớt cửa sổ và cửa phòng, nhưng ít nhất phải mở một cửa Phòng ngồi bắt muỗi trong các nhà thử nghiệm cần có diện tích tương đồng, dao động từ 15 đến 20 m².

Trong 3 nhà thử nghiệm: 1 nhà thử nghiệm hương xua chứa tinh dầu bạch đàn chanh, 1 nhà làm sử dụng hương xua của Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng trung ương và 1 nhà đối chứng (hương không chứa tinh dầu hay hóa chất) để so sánh hiệu lực xua muỗi của các loại hương xua Sau mỗi đêm nhóm các hộ đốt hương và nhóm đối chứng được hoán đổi để đảm bảo mật độ muỗi giữa các nhóm được đồng đều theo thiết kế ô vuông Latin [18]. Đêm Nhà 1 Nhà 2 Nhà 3

A T3 Trong đó: A, B, C là người bắt muỗi

T1: Hương xua chứa tinh dầu

T2: Hương xua hóa chất của Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung ương

Trong nghiên cứu này, hương được sử dụng không chứa tinh dầu hay hóa chất, đảm bảo tính tự nhiên (hương mộc) Phương pháp thu thập muỗi được thực hiện bằng cách sử dụng một người làm mồi trong nhà, với 3 ngôi nhà thử nghiệm trong 9 đêm Tại mỗi nhà, một que hương được đốt liên tục từ 17 đến 22 giờ, trong khi người mồi hoạt động trong khoảng thời gian 4 giờ, từ 18 giờ.

- 22 giờ giai đoan này khi người dân thắp đèn sẽ làm cho muỗi bay vào nhà đốt người nhiều nhất), vị trí đặt hương cách người mồi khoảng 1,5 m [21].

- Đánh giá tác dụng không mong muốn của hương xua:

Trong thôn, 80 hộ gia đình sẽ được phát hương xua, mỗi hộ nhận 3 bó hương xua chứa tinh dầu bạch đàn chanh, đủ sử dụng trong 5 đêm Tổng số lượng hương xua cần thiết là 240 bó, được tính toán từ 80 hộ nhân với 3 bó mỗi hộ.

Hương xua nên được đốt trong nhà từ 18 giờ đến 22 giờ hàng đêm, mỗi gia đình chỉ cần sử dụng một que hương Nếu que hương cháy hết, hãy tiếp tục đốt que khác cho đến khi tất cả các thành viên trong gia đình đã đi ngủ.

Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã tiến hành phỏng vấn những người tham gia thử nghiệm và các hộ dân sử dụng hương xua Thời gian phỏng vấn đối với những người thử nghiệm được thực hiện ngay sau khi họ hoàn thành thử nghiệm, trong khi các hộ dân được phỏng vấn sau 5 ngày sử dụng sản phẩm Chúng tôi sẽ theo dõi các triệu chứng như mùi dễ chịu hay khó chịu, đau đầu, ngứa ngáy, ho, buồn nôn, hắt hơi, kích thích mắt và sổ mũi để đánh giá hiệu quả của hương xua Phương pháp xác định và đo lường các biến số này sẽ được áp dụng trong nghiên cứu.

- Muỗi Anopheles, Aedes, Culex… bắt được ở lô thử nghiệm và lô đối chứng.

- Xác định hiệu lực phòng chống muỗi của hương xua (P).

- Tỷ lệ người dân sử dụng hương xua

- Các triệu chứng xảy ra đối với những người tham gia thử nghiệm hương.

Xác định tỷ lệ phần trăm các tác dụng không mong muốn xảy ra ở người tham gia thử nghiệm và cộng đồng trong nghiên cứu là rất quan trọng Các chỉ số đánh giá sẽ giúp phân tích và hiểu rõ hơn về mức độ an toàn của các can thiệp trong nghiên cứu.

+ Hiệu lực phòng chống muỗi của hương xua (P%) được tính từng giờ và trung bình của 4 giờ theo công thức [22]:

P (%) = (C – T)/ C x 100 T: Số muỗi bắt được của nhóm đốt hương xua.

C: Số muỗi bắt được của nhóm đối chứng (hương mộc).

+ Tỷ lệ % người dân sử dụng hương xua

Tỷ lệ phần trăm tác dụng không mong muốn xảy ra đối với người tham gia thử nghiệm và cộng đồng trong nghiên cứu là một yếu tố quan trọng cần xem xét Các kỹ thuật được áp dụng trong nghiên cứu cũng góp phần vào việc đánh giá tính an toàn và hiệu quả của can thiệp.

- Kỹ thuật bắt muỗi bằng mồi người trong nhà: Theo kỹ thuật thường quy của Viện Sốt rét – Ký sinh trùng – Côn trùng Trung ương [23]:

+ Người làm mồi bắt muỗi ở tư thế ngồi, quần được xắn lên quá gối để

2 chân lộ ra, ngồi yên chờ muỗi đến đậu lên chân thì bắt.

Khi cảm thấy muỗi đậu trên chân hoặc bị muỗi đốt, hãy bật đèn pin để kiểm tra Tuy nhiên, cần lưu ý không chiếu đèn trực tiếp và đột ngột vào vị trí muỗi để tránh làm chúng bay đi Thay vào đó, hãy hướng đèn ra xa trước rồi từ từ đưa ánh sáng vào chỗ muỗi để quan sát rõ hơn.

Đạo đức trong nghiên cứu

Nghiên cứu này tuân thủ quy định của Tổ chức Y tế Thế giới về việc sử dụng hóa chất diệt côn trùng, đồng thời đảm bảo các quy chế xét duyệt đạo đức trong nghiên cứu y sinh học tại Viện Sốt rét – Ký sinh trùng – Côn trùng Trung Ương.

- Trung thực trong nghiên cứu.

Đảm bảo bảo mật thông tin trong hồ sơ nghiên cứu là điều cần thiết Cần mô tả rõ ràng quyền lợi của bệnh nhân, đối tượng nghiên cứu cũng như trách nhiệm của người thực hiện nghiên cứu.