NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH TRÍCH LY VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA HỢP CHÁT ANTHOCYANIN TỪ ĐẬU ĐEN (VIGNA CVLINDRICA4)

IH CM TP.HCM KHOA CỌNG NGH SINH H C -  - BẨI BÁO CÁO KHOÁ LU N T T NGHI P Tên đ tƠi: NGHIÊN C U QUY TRỊNH TRệCH LY VẨ KH O SÁT HO T TệNH SINH H C C A H P CH T ANTHOCYANIN T U EN (VIGNA CYLINDRICA) KHOA CỌNG NGH SINH H C CHUYÊN NGẨNH: CỌNG NGH TH C PH M GVHD: Th.S Nguy n Th L Thu SVTH: Nguy n Th Kim Ngơn MSSV: 1053010478 Khố: 2010-2014 Bình D ng, tháng n m 2014 Báo cáo khoá lu n t t nghi p GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu L IC M Tr N c tiên em xin chân thành c m n Ban giám hi u tr ng iH cM Thành Ph H Chí Minh t o u ki n v v t ch t c ng nh v tinh th n đ em có th h c t p t t Ti p theo em xin c m n th y cô, b n bè mà em có c h i đ h c h i,…trong su t th i gian em ng i gh nhà tr c ti p xúc ng, đ c bi t th y khoa Cơng Ngh Sinh H c nói chung th y chun ngành nói riêng Trong kho ng th i gian b n n m h c t i tr ng d is d yd ,h t n tình c a th y cơ, s chia s giúp đ c a b n bè,…đã giúp em có đ ng d n c nh ng ki n th c, nh ng kinh nghi m nh ng k n ng vô c n thi t đ em tr thành h n cu c s ng Em xin chúc quỦ th y cô nh ng ng th ng i b n thân ng d i s c kho , thành công cu c s ng Em xin dành l i c m n chân thành sâu s c nh t c a đ n Nguy n Th L Thu - gi ng viên khoa công ngh sinh h c, chuyên ngành th c ph m c ng gi ng viên h hành, giúp đ h ng d n em th c hi n đ tài khoá lu n t t nghi p Cô đ ng ng d n t n tình su t trình th c hi n đ tài khố lu n t t nghi p Em xin chúc cô kho m nh, h nh phúc g t hái nhi u thành công h n Cu i em xin dành l i tri ân sâu s c nh t đ n ba, m - ng n ng, d y d , t o m i u ki n cho đ c h c h i, đ i nuôi c ti p xúc v i th gi i Con c u mong ba, me m nh kho , bình an s ng v i đ có c h iđ c đ n đáp công n to l n c a ba, m [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] Báo cáo khoá lu n t t nghi p GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu M CL C DANH M C B NG i DANH M C HÌNH ii TV N PH N I: T NG QUAN TẨI LI U Anthocyanin 1.1 Gi i Thi u Anthocyanin 1.2 Vai trò c a h p ch t Anthocyanin 15 1.3 M t s nghiên c u v Anthocyanin 17 Gi i thi u v đ u đen 18 2.1 c m th c v t 18 2.2 Thành ph n ch t màu có đ u đen 21 Ph ng pháp trích ly 22 PH N II: V T LI U VẨ PH NG PHÁP NGHIÊN C U V t li u nghiên c u 25 2.1 a m nghiên c u 25 2.2 Nguyên li u 25 2.3 Hoá ch t s d ng 25 2.4 D ng c thi t b s d ng 25 Ph ng pháp nghiên c u 27 3.1 Quy trình trích ly Anthocyanin d ki n 27 3.2 S đ nghiên c u quy trình trích ly Anthocyanin 29 3.3 N i dung nghiên c u 30 [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] Báo cáo khoá lu n t t nghi p 3.3.1 Kh o sát b GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu c sóng h p th c c đ i c a d ch trích Anthocyanin 30 3.3.2 Kh o sát y u t nh h ng đ n q trình trích ly Anthocyanin 31 3.3.3 Kh o sát ho t tính sinh h c 38 3.3.4 Kh o sát m t s đ c tính c a Anthocyanin thô 41 PH N III: K T QU - TH O LU N 3.1 K t qu kh o sát b c sóng h p th c c đ i c a d ch trích Anthocyanin 43 3.2 K t qu kh o sát y u t nh h ng đ n q trình trích ly Anthocyanin 44 3.3 K t qu kh o sát ho t tính sinh h c 50 3.4 Kh o sát m t s đ c tính c a Anthocyanin thô 55 K T LU N VẨ KI N NGH TẨI LI U THAM KH O 61 PH L C i [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] Báo cáo khoá lu n t t nghi p GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu DANH M C B NG B ng 1.1: M t s Anthocyanin ph bi n B ng 1.2: Các Anthocyanin m t s ngu n th c v t 10 B ng 1.3: Thành ph n dinh d ng h t đ u đen 100g n đ c 21 B ng 2.1: B trí thí nghi m kh o sát nh h ng c a dung d ch acid đ n trích ly 32 B ng 2.2: B trí thí nghi m kh o sát nh h ng c a n ng đ c n đ n trích ly 33 B ng 2.3: B trí thí nghi m kh o sát t l dung môi (ml): nguyên li u (g) đ n trích ly 35 B ng 2.4: B trí thí nghi m kh o sát nh h ng c a nhi t đ đ n trích ly 36 B ng 2.5: B trí thí nghi m kh o sát nh h ng c a th i gian đ n trích ly 38 B ng 2.6: B trí thí nghi m kháng oxy hoá 40 B ng 3.1: nh h ng c a dung d ch acid đ n q trình trích ly 44 B ng 3.2: nh h ng c a n ng đ c n đ n q trình trích ly 45 B ng 3.3: nh h ng c a t l dung môi nguyên li u đ n kh n ng trích ly Anthocyanin 46 B ng 3.4: nh h ng c a nhi t đ đ n kh n ng trích ly Anthocyanin 48 B ng 3.5: nh h ng c a th i gian đ n kh n ng trích ly Anthocyanin 49 B ng 3.6 : Ho t tính kháng khu n c a d ch trích Anthocyanin 52 B ng 3.7: M t s đ c tính c a Anthocyanin thô 55 B ng 3.8 Ph n tr m màu l i theo th i gian 95oC – 1000C 55 B ng 3.9: Màu c a Anthocyanin pH khác 56 [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] Page i Báo cáo khoá lu n t t nghi p GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu DANH M C HỊNH Hình 1.1: Anthocyanin d ng th Hình 1.2: Anthocyanin d ng trung tính ng Hình 1.3: Các Anthocyanin ph bi n rau qu Hình 1.4: Khung s n c b n c a Anthocyanin Hình 1.5: C u trúc chuy n hoá c a Anthocyanin n c Hình 1.6 : Cây đ u đen 19 Hình 1.7 : H t đ u đen 19 Hình 1.8 : u đen (Vigna unguiculata ssp cylindrica ) 20 Hình 2.1: S đ quy trình trích ly Anthocyanin 27 Hình 2.2: S đ giai đo n nghiên c u quy trình trích ly Anthocyanin 30 Hình 2.3: S đ quy trình th ho t tính b t g c t DPPH 39 Hình 3.1: th xác đ nh b Hình 3.2 : th bi u di n kh n ng kháng oxy hố 50 c sóng h p ph c c đ i c a d ch trích 43 Hình 3.3 : Kh n ng kháng khu n c a Anthocyanin thô đ i v i E.coli 53 Hình 3.4: Kh n ng kháng khu n c a Anthocynin thô v i B.subtilis 54 Hình 3.5: B t Anthocyanin thô 55 Hình 3.6: Màu c a Anthocyanin theo pH 56 Hình 4.1 : S đ hồn thi n quy trình trích ly Anthocyanin t đ u đen 59 [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] Page ii Báo cáo khoá lu n t t nghi p GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu TV N T xa x a, ông cha ta bi t s d ng nh ng h p ch t thiên nhiên đ ch a b nh, làm th c ph m, m ph m nhi u ng d ng cu c s ng Vi t Nam v i khí h u nhi t đ i gió mùa th m th c v t đa d ng ngu n cung c p tài nguyên sinh h c quỦ giá.Vì th vi c tìm hi u, tách chi t thành ph n có l i c a lồi th c v t u c n thi t đ góp ph n vào vi c khai thác s d ng có hi u qu h n Hi n th gi i xu h ng nghiên c u quay v h p ch t thiên nhiên chúng có tính an tồn cao cho ng i s d ng Anthocyanin h p ch t h u c có ngu n g c thiên nhiên, thu c nhóm flavonoid, có màu đ , đ tía, tím Chúng có m t h u h t th c v t b c cao tìm th y hoa qu , rau c , h t… nh hoa b t gi m, qu nho, dâu, b p c i tím, g o n p than, g o đ ,…và c h t h c đ u nh đ u đ , đ u đen Anthocyanin ngày đ c quan tâm đ u t nghiên c u, ch bi n s n xu t b i chúng khơng nh ng có màu s c t x u, an tồn cho s c kho ng i đ p, tiêu th khơng gây tác h i i mà cịn có nhi u ho t tính sinh h c quỦ nh : kh n ng kháng oxy hoá cao nh h n ch s hình thành g c t do, t ng c ng s c đ kháng, ch ng viêm, h n ch s phát tri n c a t bào ung th , tác d ng ch ng tia phóng x … u đen có tên khoa h c Vigna cylindrica thu c h đ u, g i h c đ i đ u hay ô đ u, th ông y th ng ng dùng làm nguyên li u cho n dân dã nh xơi, chè,…Bên c nh đ u đen không đ n thu n m t th c ph m bình th ng mà cịn tác d ng phòng ch a b nh hàm l c bi t l p v bên ngồi có ch a ng ch t ch ng oxy hoá cao h n nhi u so v i lo i đ u khác g p 10 l n so v i cam Các thu c tính ch ng oxy hóa m nh c a đ u đen ch y u n ng đ cao c a ch t Anthocyanin nh delphinidin, petunidin, malvidin [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] Page Báo cáo khoá lu n t t nghi p n GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu c ta, vùng tr ng đ u đen phân b r t r ng t B c vào Nam v i di n tích đáng k Tuy v y, đ u đen ch đ th c s d ng ch bi n n thơng ng hàng ngày Do v y, quy t đ nh th c hi n đ tài: “Nghiên c u quy trình trích ly vƠ kh o sát ho t tính sinh h c c a h p ch t Anthocyanin t u đen (Vigna cylindrica)” đ t n d ng ho t tính sinh h c quỦ có h t đ u đen, nâng cao giá tr th ng m i c a h t đ u đen nh m mang l i l i ích cho ng i nông dân c ng nh cung c p m t ngu n ch t màu có ngu n g c t nhiên, an toàn cho s c kho ng i tiêu dùng M c tiêu đ tƠi: o Xây d ng quy trình tách chi t, thu nh n ch t màu Anthocyanin t h t đ u đen phịng thí nghi m o Kh o sát tính kháng khu n kh n ng ch ng oxy hố c a Anthocyanin thu t d ch trích N i dung nghiên c u: o Kh o sát b c sóng h p th c c đ i c a d ch trích Anthocyanin o Kh o sát y u t (n nh h ng c a q trình trích ly Anthocyanin: h dung mơi c lo i acid), n ng đ c n, t l dung môi nguyên li u, nhi t đ trích ly, th i gian trích ly o Kh o sát ho t tính sinh h c: kh n ng kháng oxy hoá, kh n ng kháng khu n o Kh o sát m t s đ c tính c a Anthocynain thô: đ polyphenol, nh h ng c a pH [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] đ n m, đ b n màu, hàm l màu s c ng Anthocyanin Page Báo cáo khoá lu n t t nghi p GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu ANTHOCYANIN 1.1 Gi i Thi u Anthocyanin[7] Anthocyanin hi n thu c nhóm ch t màu t nhiên tan n c l n nh t th gi i th c v t Thu t ng Anthocyanin b t ngu n t ti ng Hy L p Anthocyanin s k t h p gi a Anthos – ngh a hoa Kysanesos – ngh a màu xanh Tuy nhiên, khơng ch có màu xanh Anthocyanin mang đ n cho th c v t nhi u màu s c r c r khác nh h ng, đ , cam gam màu trung gian Các Anthocyanin m t h t nhóm đ ng đ c g i anthocyanidin hay aglycon M i Anthocyanidin có th b glycosyl hóa acylate b i lo i đ t i v trí khác Vì th l ng acid khác ng Anthocyanin l n h n Anthocyanidin t 15-20 l n 1.1.1 C u trúc hóa h c c a Anthocyanin [7,12,14] Anthocyanin thu c nhóm h p ch t flavonoid, có kh n ng hịa tan n c ch a không bào V b n ch t, Anthocyanin nh ng h p ch t glycoside c a d n xu t polyhydroxy polymethoxy c a mu i flavylium ho c 2-phenylbenzopyrylium T t c Anthocyanindin đ u có ch a vịng pyran oxy hố tr t Tuy nhiên ng d i ta ch a bi t đ c ch c ch n nguyên t nào: oxy hay cacbon mang n tích ng t Do Anthocyanindin th ng đ c bi u di n d i d ng cơng th c trung tính Hình 1.1: Anthocyanin d ng th ng Hình 1.2: Anthocyanin [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] d ng trung tính Page Báo cáo khoá lu n t t nghi p Nh n tích d GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu ng t mà Anthocyanindin dung d ch acid tác d ng v i nh ng cation t o mu i đ c v i acid Cịn dung d ch ki m Anthocyanindin l i tác d ng nh anion t o mu i đ Cho đ n nay, ng i ta xác đ nh đ c v i base c 18 lo i aglycon khác nhau, lo i ph bi n nh t pelargonidin, cyanidin, delphinidin, peonidin, petunidin maldivin Hình 1.3: Các Anthocyanin ph bi n rau qu Trong t nhiên, Anthocyanin r t hi m glycosyl hóa) Nhóm hydroxy t tr ng thái t (khơng b v trí C-3 làm cho phân t Anthocyanidin tr nên không n đ nh làm gi m kh n ng hòa tan c a so v i Anthocyanin t ng ng Vì v y, s glycosyl hóa ln di n đ u tiên [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] v trí nhóm 3-hydroxy Page Báo cáo khoá lu n t t nghi p GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu l: Chi u dày cuvet, cm; K: pha loãng; V: Th tích d ch trích, l Ph l c 3: K t qu thí nghi m kh o sát trình trích ly Anthocyanin Kh o sát b c sóng h p th c c đ i B ng 1.1: K t qu kh o sát b B c sóng c c đ i c a Anthocyanin thu t d ch trích Giá tr OD c sóng(nm) L n1 L n2 L n3 470 0,334 0,313 0,397 480 0,497 0,479 0,480 490 0,567 0,535 0,566 500 0,601 0,596 0,647 510 0,695 0,643 0,702 520 0,747 0,697 0,725 530 0,648 0,652 0,662 540 0,577 0,581 0,553 550 0,409 0,448 0,406 560 0,247 0,308 0,251 570 0,174 0,182 0,152 [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] Page vi Báo cáo khoá lu n t t nghi p B ng 1.2 : Xác đ nh b c sóng h p th c c đ i c a d ch trích t đ u đen Dung môi B GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu Giá tr OD c sóng 470 0,348g 480 0,485e 490 0,556d 500 0,615c 510 0,68b 520 0,723a 530 0,654bc 540 0,570d 550 0,421f 560 0,269h 570 0,169i Trong m t c t s có ch s không khác bi t [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] m c ý ngh a 5% qua phép th Duncan Page vii Báo cáo khoá lu n t t nghi p Thí nghi m: Kh o sát nh h GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu ng c a h dung mơi đ n kh n ng trích ly Anthocyanin a.Kh o sát s ph n tr m acid citric 0.5% 1% 1.5% nh h ng c a dung d ch acid đ n q trình trích ly B ng 2.1: K t qu kh o sát c a acid citric acid acetic đ n trích ly B pH 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 c sóng (nm) 520 0,725 0,080 0,695 0,080 0,716 0,105 0,778 0,097 0,713 0,075 0,818 0,144 0,836 0,098 0,873 0,13 0,868 0,173 ph n tr m 700 Hàm acid l ng acetic 0,015 0,017 0,011 0,008 0.5% 0,013 0,010 0,017 0,027 0,010 0,016 0,021 0,011 0,004 1% 0,005 0,011 0,007 0,018 0,011 0,016 0,021 0,012 0,025 1.5% 0,022 0,012 0,008 0,014 0,012 [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] B pH 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 c sóng (nm) 520 700 0,732 0,065 0,789 0,083 0,746 0,075 0,819 0,096 0,814 0,103 0,858 0,124 0,864 0,096 0,813 0,075 0,855 0,080 0,005 0,01 0,008 0,015 0,011 0,021 0,019 0,025 0,01 0,019 0,021 0,032 0,011 0,018 0,014 0,025 0,008 0,013 Hàm l ng 0,011 0,012 0,011 0,012 0,012 0,012 0,013 0,012 0,013 Page viii Báo cáo khoá lu n t t nghi p GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu B ng 2.2: K t qu kh o sát c a acid HCl n Ph n tr m acid pH 4,5 HCl 0,5% 4,5 4,5 4,5 HCl 1% 4,5 4,5 K t qu x lỦ th B c sóng (nm) 520 700 0,993 0,038 0,113 0,064 0,993 0,014 0,076 0,028 0,955 0,008 0,082 0,014 1,152 0,030 0,185 0,046 1,065 0,037 0,115 0,058 1,129 0,019 0,196 0,025 ng kê s li u c c đ n trích ly B c sóng Hàm pH (nm) l ng 520 700 (g) 1,109 0,010 0,014 4,5 0,153 0,031 0,016 1,048 0,013 HCl 0,015 1,5% 4,5 0,145 0,020 0,015 1,283 0,025 0,014 4,5 0,173 0,022 0,018 0,681 0,001 0,016 4,5 0,071 0,005 0,010 0,666 0,012 N c 4,5 0,078 0,014 0,010 0,016 0,685 0,011 0,016 4,5 0,156 0,015 0,009 a thí nghi m b ng ph n m m Statgraphic plus 3.0 Hàm l ng (g) ph n tr m acid ANOVA Table for giatri by mau Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0.000141367 0.0000157074 39.27 0.0000 Within groups 0.000008 20 4.E-7 Total (Corr.) 0.000149367 29 Method: 95.0 percent Duncan mau Count Mean Homogeneous Groups -nuoc 0.00966667 X citric 0.5 0.0103333 XX citric 0.011 XX acetic 0.5 0.0113333 XX acetic 0.012 XX citric 1.5 0.012 XX acetic 1.5 0.0126667 X HCl 0.5 0.0143333 X HCl 0.016 X HCl1.5 0.0163333 X [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] Page ix Báo cáo khoá lu n t t nghi p b Kh o sát nh h GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu ng c a n ng đ đ n q trình trích ly B ng 2.3: K t qu kh o sát nh h c n1%HCL 30 40 50 b pH 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 c sóng (nm) 520 700 1,080 0,124 1,120 0,156 1,121 0,130 1,286 0,174 1,364 0,219 1,520 0,266 1,533 0,158 1,415 0,200 1,441 0,260 0,012 0,022 0,019 0,024 0,030 0,046 0,011 0,024 0,032 0,048 0,048 0,063 0,030 0,032 0,029 0,043 0,044 0,056 Hàm l ng (g) ng c a n ng đ đ n q trình trích ly c n1%HCL 0,016 0,016 60 0,017 0,018 0,018 0,020 b pH 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 c sóng (nm) 520.000 700.000 1,152 0,158 1,229 0,190 1,272 0,198 1,152 0,185 1,065 0,115 1,129 0,196 0,030 0,040 0,026 0,045 0,017 0,041 0,030 0,046 0,037 0,058 0,019 0,025 Hàm l ng (g) 0,017 0,018 0,018 0,016 0,016 0,016 0,023 0,020 0,020 Multiple Range Tests for giatri by mau -Method: 95.0 percent Duncan mau Count Mean Homogeneous Groups -0 0.016 X 30 0.0163333 X 60 0.0176667 XX 40 0.0186667 X 50 0.021 X ANOVA Table for giatri by mau Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0.0000489333 0.0000122333 12.23 0.0007 Within groups 0.00001 10 0.000001 Total (Corr.) 0.0000589333 14 [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] Page x Báo cáo khoá lu n t t nghi p Thí nghi m: Kh o sát nh h GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu ng c a t l dung môi vƠ nguyên li u đ n kh n ng trích ly Anthocyanin B ng 2.4: K t qu T l nguyên li u: dung môi (g:ml) 3:60 3:90 3:120 nh h B pH ng t l dung môi nguyên li u đ n trích ly Anthocyanin c sóng (nm) 520 700 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 2,432 0,483 2,459 0,489 2,511 0,482 1,293 0,249 1,317 0,256 1,745 0,31 1,887 0,319 1,863 0,334 1,416 0,102 0,139 0,126 0,162 0,085 0,141 0,051 0,076 0,057 0,07 0,047 0,082 0,052 0,083 0,053 0,089 0,039 4,5 0,241 0,054 Hàm l ng(g) T l nguyên li u: dung môi (g:ml) 0,018 0,018 3: 150 0,019 0,021 0,021 3:180 0,021 0,023 0,022 0,023 3:210 B pH c sóng (nm) 520 700 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 1,197 0,191 1,11 0,192 1,177 0,208 1,028 0,182 1,022 0,144 1,019 0,154 0,693 0,203 0,903 0,166 0,985 0,023 0,04 0,039 0,052 0,041 0,066 0,026 0,053 0,018 0,035 0,021 0,035 0,014 0,032 0,027 0,039 0,033 4,5 0,209 0,069 K t qu x lỦ th ng kê s li u c a thí nghi m kh o sát nh h 0,025 0,023 0,025 0,026 0,027 0,026 0,021 0,019 0,02 ng c a h dung mơi đ n kh n ng trích ly Anthocyanin b ng ph n m m Statgraphic plus 3.0 [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] Hàm l ng(g) Page xi Báo cáo khoá lu n t t nghi p GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu ANOVA Table for giatri by mau Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0.000155778 0.0000311556 50.98 0.0000 Within groups 0.00000733333 12 6.11111E-7 Total (Corr.) 0.000163111 17 Multiple Range Tests for giatri by mau -Method: 95.0 percent Duncan mau Count Mean Homogeneous Groups -20 0.0183333 X 30 0.021 X 40 0.0226667 X 50 0.0243333 X 60 0.0263333 X 80 0.0266667 X [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] Page xii Báo cáo khoá lu n t t nghi p 4.Thí nghi m: Kh o sát nh h B ng 2.5: K t qu Nhi t đ (oC) 30 40 50 nh h GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu ng c a nhi t đ đ n kh n ng trích ly Anthocyanin ng c a nhi t đ đ n kh n ng trích ly Anthocyanin B pH 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 c sóng Nhi t Hàm (nm) đ l ng(g) (oC) 520 700 1,008 0,026 0,026 0,182 0,053 1,042 0,018 0,028 60 0,144 0,035 1,029 0,021 0,027 0,154 0,035 1,078 0,005 0,028 0,17 0,032 1,151 0,01 0,03 70 0,152 0,026 1,023 0,018 0,027 0,119 0,025 1,214 0,029 0,031 0,215 0,05 1,269 0,037 0,032 0,208 0,053 1,237 0,022 0,031 0,232 0,049 B pH 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 c sóng Hàm (nm) l ng(g) 520 700 1,204 0,036 0,028 0,269 0,058 1,256 0,04 0,03 0,29 0,077 1,225 0,032 0,029 0,266 0,061 1,134 0,061 0,024 0,372 0,105 1,149 0,059 0,023 0,42 0,109 1,152 0,067 0,024 0,382 0,108 Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0.0000957333 0.0000239333 23.93 0.0000 Within groups 0.00001 10 0.000001 Total (Corr.) 0.000105733 14 [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] Page xiii Báo cáo khoá lu n t t nghi p GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu Multiple Range Tests for giatri by mau -Method: 95.0 percent Duncan mau Count Mean Homogeneous Groups -70 0.0236667 X 30 0.027 X 40 0.0283333 XX 60 0.029 X 50 0.0313333 X Thí nghi m: Kh o sát nh h ng c a th i gian đ n kh n ng trích ly Anthocyanin B ng 2.6 : K t qu Th i gian (gi ) B pH 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 nh h c sóng (nm) 520 700 0,995 0,035 0,225 0,062 0,969 0,028 0,167 0,037 0,902 0,04 0,159 0,043 0,986 0,036 0,186 0,05 1,021 0,039 0,193 0,058 1,118 0,04 0,237 0,063 1,266 0,032 0,242 0,055 1,172 0,027 0,229 0,049 1,232 0,049 0,22 0,059 ng c a th i gian đ n kh n ng trích ly Anthocyanin Hàm l ng (g) Th i gian (gi ) 0,024 0,024 0,022 0,024 0,025 0,027 B pH 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 c sóng (nm) 520 700 1,122 0,028 0,23 0,054 1,117 0,038 0,228 0,054 1,097 0,029 0,24 0,054 1,078 0,032 0,224 0,054 1,12 0,038 0,242 0,058 1,037 0,036 0,219 0,054 Hàm l ng(g) 0,027 0,027 0,026 0,026 0,027 0,025 0,031 0,029 0,031 [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] Page xiv Báo cáo khoá lu n t t nghi p GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu K t qu x lỦ th ng kê s li u b ng ph n m m Statgraphic plus 3.0 Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0.0000786667 0.0000196667 15.53 0.0003 Within groups 0.0000126667 100.00000126667 Total (Corr.) 0.0000913333 14 Method: 95.0 percent Duncan mau Count Mean Homogeneous Groups -1 0.0233333 X 0.0253333 XX 0.026 X 0.0266667 X 3 0.0303333 X Ph l c 4: K t qu kh o sát ho t tính sinh h c c a Anthocyanin Ph ng pháp th ho t tính c ch g c t DPPH Nguyên t c DPPH m t g c t b n, dung d ch có màu tím, b c sóng h p th c c đ i t i 517nm Các ch t có kh n ng kháng oxi hố s trung hồ g c DPPH b ng cách cho hydrogen, làm gi m đ h p th t i b c sóng c c đ i màu c a dung d ch s nh t d n, chuy n t tím sang vàng nh t Hình 1.1: S thay đ i màu c a DPPH Tính tốn k t qu : ho t tính kháng oxy hố đ [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] c tính theo cơng th c sau: Page xv Báo cáo khoá lu n t t nghi p % GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu c ch DPPH = (A0 – A)/A0 x 100 Trong đó: A0 đ h p th c a DPPH (m u tr ng ) A đ h p th c a d ch ph n ng B ng 1.1 : K t qu đo OD c a m u Anthocynin thô N ng đ (mg/ml) 0,025 0,05 0,1 0,2 i ch ng N ng đ (mg/ml) 0,025 0,05 0,1 0,2 i ch ng OD Ph n tr m kháng oxy hoá(%) 32,67 54,21 73,27 83,91 OD2 Ph n tr m kháng oxy hoá(%) 34,20 54,87 73,87 84,32 OD3 Ph n tr m kháng oxy hoá(%) 35,68 55,58 76,21 84,71 0,272 0,277 0,265 0,185 0,190 0,183 0,108 0,110 0,098 0,065 0,066 0,063 0,404 0,421 0,412 B ng 1.2: K t qu đo OD c a m u Vitamin C OD 0,184 0,068 0,055 0,051 1,364 Ph n tr m kháng oxy hoá(%) 86,51 95,01 95,97 96,26 OD2 0,195 0,065 0,053 0,050 1,364 [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] Ph n tr m kháng oxy hoá(%) 85,70 95,23 96,11 96,33 OD3 0,207 0,080 0,067 0,062 1,431 Trung bình 34,19 54,89 74,45 84,31 Ph n tr m kháng oxy hoá(%) 85,53 94,41 95,32 95,69 tb 95,91 94,88 95,80 96,07 Page xvi Báo cáo khoá lu n t t nghi p GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu B ng 1.3: K t qu đo OD c a m u BHT Ph n tr m N ng đ kháng oxy OD (mg/ml) hoá(%) 0,025 0,997 10,50 0,05 0,986 11,49 0,1 0,973 12,67 0,2 0,825 25,94 i ch ng 1,114 B ng1.4: K t qu kh o sát ho N ng đ (mg/ml) Ph n tr m kháng oxy hoá(%) 9,76 10,95 13,23 25,46 Ph n tr m kháng oxy hoá(%) 9,44 10,65 12,78 27,04 Trung bình 9,90 11,03 12,89 26,15 OD2 OD3 0,989 0,978 0,976 0,965 0,951 0,942 0,817 0,788 1,096 1,080 t tính kháng oxy hố theo ph ng pháp DPPH Kh n ng kháng oxy hoá (%) Vitamin C BHT 0,025 85,91 9,90 M u 34,19 0,05 94,88 11,03 54,89 0,10 95,80 12,89 74,45 0,20 96,07 26,15 84,31 Kh o sát ho t tính kháng khu n c a Anthocyanin Nguyên t c Xác đ nh kh n ng kháng khu n b ng ph ng pháp khu ch tán th ch Ph ng pháp d a kh n ng đ i kháng gi a vi sinh v t ho c d ch ki m đ nh vi sinh v t ch th [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] Page xvii Báo cáo khoá lu n t t nghi p Pha môi tr GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu ng: NB NA Pepton 6.5g 6.5g Cao n m men 1.5g 1.5g NaCl 5g 5g Agar N 2% cc t Dùng môi tr 24h tr 1000ml 1000ml ng NB ho t hoá gi ng Bacilluss subtilis, Escherichia coli đ c ti n hành c y Dùng môi tr ng NA đ đ a kháng khu n đ th ch nghiêng đ gi gi ng Xác đ nh n ng đ c a vi khu n d a vào ng chu n đ đ c Mc Farland 0.5 i u ch nh đ đ c c a d ch vi khu n cho ngang v i đ đ c c a ng Mc Farland 0.5 b ng cách pha loãng n c mu i sinh lỦ 0.9% cho m t đ vi khu n đ t 108cfu/ml Ki m tra s t o thành vịng vơ khu n o đ ng kính vịng vơ khu n D = D đo- Dl Trong đó: D: đ ng kính vịng kháng khu n (mm) D đo: ng kính ngồi vịng kháng khu n (mm) Dl: ng kính c a l th ch (mm) [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] Page xviii Báo cáo khoá lu n t t nghi p GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu B ng 1.5: K t qu kh n ng kháng khu n c a vi khu n E.coli ng kính l đ c (mm) N ng đ ng kính vịng ng kính kháng khu n (mg/ml) (mm) (mm) 0 0 0 10 0 0 0 15 13 13 15 5 E.coli 20 15 15 16 7 25 16 17 17 8 30 19 18 18 10 10 35 18 19 19 10 11 11 40 19 20 20 11 12 12 45 20 21 21 12 13 13 K t qu x lỦ th ng kê s li u b ng ph n m m Statgraphic plus 3.0 ANOVA Table for Ecoli by nong Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 667.367 74.1519 185.38 0.0000 Within groups 8.0 20 0.4 Total (Corr.) 675.367 29 Method: 95.0 percent Duncan nong Count Mean Homogeneous Groups -10 0.0 X 0.0 X 2.5 0.0 X 15 5.66667 X 20 7.33333 X 25 8.0 X 30 9.66667 X 35 10.6667 XX 40 11.6667 XX 45 12.6667 X [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] Page xix Trung bình 5,67 7,33 8,00 9,67 10,67 11,67 12,67 Báo cáo khoá lu n t t nghi p GVHD: Th.S: Nguy n Th L Thu B ng 1.6: K t qu kháng khu n c a vi khu n B.subtilis N ng đ (mg/ml) 2.5 10 15 Bacilluss 20 25 30 35 40 45 ng kính vịng ngồi (mm) 0 11 12 12 12 14 14 16 15 16 17 16 17 18 17 18 19 18 19 20 21 21 21 22 22 22 23 23 ng kính l đ c (mm) ng kính kháng khu n (mm) 0 4 6 8 9 10 10 11 10 12 12 13 13 13 14 14 14 15 15 tb 3,67 5,67 7,67 8,67 9,67 11,00 12,67 13,67 14,67 ANOVA Table for bacilluss by nong Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 580.533 64.5037 175.92 0.0000 Within groups 7.33333 20 0.366667 Total (Corr.) 587.867 29 Method: 95.0 percent Duncan nong Count Mean Homogeneous Groups -2.5 0.0 X 3.66667 X 10 5.66667 X 15 7.66667 X 20 8.66667 XX 25 9.66667 X 30 11.0 X 35 12.6667 X 40 13.6667 XX 45 14.6667 X [SVTH: Nguy n Th Kim Ngân-1053010478] Page xx