Tối ưu hóa điều kiện trích ly polyphenol tổng và khả năng kháng oxy hóa ở rau diếp cá (houttuynia cordata thunb) ứng dụng

IăH CăQU C GIA TP.HCM TR NG IăH CăBỄCHăKHOA NGUY N H NH TÂM T Iă UăHịAă I U KI N TRÍCH LY POLYPHENOL T NG VÀ KH N NGăKHỄNGăOXYăHịAă RAU DI P CÁ (HOUTTUYNIA CORDATA THUNB) & NG D NG Chuyên ngành: Công ngh th c ph m Mã s : 8540101 LU NăV NăTH CăS TP H CHÍ MINH, tháng 07 n mă2022 CÔNGăTRỊNHă TR Cán b h NGă C HOÀN THÀNH T I I H C BÁCH KHOA ậ HQGă-HCM ng d n khoa h c:ăGS.TS.ă ng Th Anhă àoă ……………………………………………………………………………………… Cán b ch m nh n xét 1: PGS.TS Mai Hu nh Cang ……………………………………………………………………………………… Cán b ch m nh n xét 2: TS Nguy n Qu căC ng …………………………………………………………………………………… Lu năv năth căs ăđ c b o v t iăTr ngă i h căBáchăKhoa,ă HQGăTp.ăHCM ngày 12 tháng 07 n mă2022 Thành ph n H iăđ ngăđánhăgiáălu năv năth căs ăg m: CT: PGS.TS Tr n Th Thu Trà PB1: PGS.TS Mai Hu nh Cang PB2: TS Nguy n Qu căC UV: GS.TS ng ng Th Anhă UVTK: TS Nguy n L Hà Xác nh n c a Ch t ch H iăđ ngăđánhăgiáăLVăvàăTr ngành sau lu năv năđưăđ CH T CH H Iă (H tên ch ký) NG ng Khoa qu n lý chuyên c s a ch a (n u có) TR NG KHOA K THU T HÓA H C (H tên ch ký) I H C QU C GIA TP.HCM TR NGă C NG HÒA Xà H I CH NGH AăVI T NAM I H C BÁCH KHOA c l p - T - H nh phúc NHI M V LU NăV NăTH CăS H tên h c viên: NGUY N H NH TÂM MSHV: 1970571 Ngày,ătháng,ăn măsinh:ă08/12/1995 N iăsinh:ăTi n Giang Chuyên ngành: Công ngh Th c ph m Mã s : 8540101 I TểNă T Iă Uă HĨAă I U KI N TRÍCH LY POLYPHENOL T NG VÀ KH TÀI: N NGă KHỄNGă OXYă HÓAă THUNB) & II RAU DI P CÁ (HOUTTUYNIA CORDATA NG D NG NHI M V VÀ N I DUNG: - T ng quan tài li u v nguyên li u rau di p cá - Thi t l p quy trình cơng ngh thu nh n d c trích rau di p cá - Kh o sát y u t t iă uăhóaăq trình trích ly nhăh l ngăđ n hàm ng polyphenol t ng kh n ngăkhángăoxyăhóaă d ch chi t rau di p cá III NGÀY GIAO NHI M V : 06/09/2021 IV NGÀY HOÀN THÀNH NHI M V : 06/06/2022 V CÁN B H NG D N: GS.TS.ă ng Th Anhă Tp HCM, ngày 29 tháng 06 n mă2022 CÁN B H NG D N CH NHI M B (H tên ch ký) TR MÔNă ÀOăT O (H tên ch ký) NG KHOA K THU T HÓA H C (H tên ch ký) L I C Mă N  Trong su t kho ng th i gian h n n mă đ thànhăđ tài lu năv năth căs ăt i Tr ng c h c t p nghiên c u hoàn i h c Bách Khoa – HQGăthành ph H Chí Minh khơng ph i m t kho ng th i gian dài, nh ng đ y ý ngh aăvàălàmătơiăđ mìnhăsauăkhiăraătr Tơi xin đ nuôi d c g i nh l i m t th i xuân đ c h c t p, vui ch i h t ngăđiălàmăvàăt t b t v i cu c s ng c chân thành g i l i c m n đ n Cha M , ng i đư sinh thành, ng, d y d , t o m i u ki n ng h su t ch ng đ ng v a qua, đ bây gi tơi có th hồn thành t t đ tài lu n v n c a Tơi xin g i l i c mă nă chână thànhă vàă sâuă s că đ n Cô Gs.ă Tsă h ng Th Anhă ng i tr c ti p ng d n lu năv n.ăCôăđưădànhăchoătôi nhi u th i gian, tâm s c, ý ki n, nh n xét, ch nh s a cho nh ng chi ti t nh lu năv n,ăgiúpălu năv năc a tơi đ c hồn thi năh năc v m t n i dung hình th c.ăCơăc ngăđưălnăquanătâm,ăđ ng viên, nh c nh k p th iăđ có th hồn thành lu năv năđúngăti năđ Tơi c ng xin phép đ c g i l i c m n đ n BGH, Th y cô giáo Tr ngă i h c Bách Khoaă HQGăthànhăph H ChíăMinhăđ c bi t Th y cô B môn công ngh th c ph m – Khoa k thu t hóa h c đư truy n đ t nh ng ki n th c, t o m i u ki n thu n l i su t trình h c t p nghiên c u đ tơi hồn thành lu n v n th i h n L i c m n cu i xin dành t ng đ n t t c anh/ch , b n emăđưăh tr ,ăgiúpăđ s nh nh ng ng ng i em làm vi c h tr i anh/ch , ng i b n nh ng phịng thí nghi m B10 Trong q trình nghiên c u, đư c g ng nh ng không th tránh kh i nh ng sai sót Kính mong Th y có th đ a góp ý đ lu n v n hoàn thi n h n Cu i cùng, xin chân thành c m n c u chúc nh ng u t t đ p nh t đ n v i t t c m i ng i Thành ph H Chí Minh, tháng 07 n m 2022 H c viên Nguy n H nh Tâm TÓM T T LU NăV N Di p cá (Houttuynia cordata Thunb) m t thu c quan tr ng phân b ôngăỄ,ălàăm t lo i th oăd r ng rãi căđ c s d ng r ng r iăvàăđ cădùngănh ă m t lo i rau t t cho s c kh e Trong nhi u th p k qua, thành ph n quan tr ng đưăđ căxácăđ nh bao g m tinh d u, flavonoid polyphenol khác, axit béo ancaloit Trong nghiên c u tơi đưă trình bày k t qu t iă u hóaă u ki n trích ly hàmăl ng polyphenol t ng kh n ngăkhángăoxyăhóaă rau di p cá (Houttuynia cordata Thunb) C b n y u t : nhi tăđ (0C), th i gian (phút), t l NL/DM (g/ml), hàmăl ngăethanolă(%)ăđ u nhăh ngăđ năhàmăl ng polyphenol t ng kh n ngă kháng oxy hóa t d ch chi t rau di p cá B ng vi c áp d ngăph ngăphápăđápă ng b m t (Response Surface Methodology) b trí 27 thí nghi m theo thi t k c u trúc có tâm (Central Composite Design) v i l n l p l i t i giá tr trung tâm, tơi xây d ngă đ c mơ hình mơ t vi c tách chi t h p ch t polyphenol kh n ngă kháng oxy hoá v i hàm m c tiêu kh n ngăkháng oxy hóa c a d ch chi t (Y1), hàmă l ng polyphenol t ng (Y2) y u t nhă h th i gain trích ly (X2), t l DM/NLă(X3),ăhàmăl ng nhi đ trích ly (X1), ngăethanolă(X4)ănh ăsau: Y1 = 1379.10323 + 13.67204 X1 + 26.72504 X2 + 49.24271 X3 + 12.12348 X4 + 0.015575 X1X2 + 0.15337 X1X3 – 0.018487 X1X4 – 0.313125 X2X3 – 0.011687 X2X4 – 0.046687 X3X4 – 0.082496 X12 – 0.279646 X22 – 4.75240 X32 –X42 Y2 = 1.20897 + 1.367204 X1 + 0.267250 X2 + 0.492427 X3 + 0.121235 X4 + 0.000156 X1X2 + 0.001534 X1X3 – 0.000185 X1X4 – 0.003131 X2X3 – 0.000117 X2X4 – 0.000467 X3X4 – 0.000825 X12 – 0.002796 X22 – 0.47524 X32 – 0.001037X42 Mơăhìnhăthuăđ căt ngăthíchăcaoăv i k t qu thuăđ c th c nghi m Theoămơăhình,ăđi u ki n t iă uăhóaăchoăd ch chi t có hàmăl ng polyphenol (R2= 0.9417) t ng kh n ngăch ng oxi hóa cao nh t nhi tăđ 750C, th i gian 62 phút, t l NL/DM 1:4ă (g/ml)ă vàă hàmă l chi tăthuăđ căcóăhàmăl ng ethanol 59 (% v/v).ă Trongă u ki n này, d ch ng polyphenol t ng kh n ngăkhángăoxyăhóaăl năl 17.155 mgGAE/g ch t khô NL 215.452 mol TEAC/ g ch t khô NL t ABSTRACT Lettuce (Houttuynia cordata Thunb) is an important vegetable distributed widely in Southeast Asia This is used as a good herbal tree with many benefits for human’să health.ă Ină recentă decades, many crucial compounds were determined in component of this herbal, include essential oil, flavonoid and other polyphenols, lipid acid and ankaloid In this research, I presented the initial results in optimization of extraction condition for total polyphenol concentration and anti-oxidization ability of lettuce (Houttuynia cordata Thunb) Four factors: temperature (0C), time (minute), ratio of material/solvent (g/ml), ethanol concentration (%) are both affect directly to total polyphenol concentration and anti-oxidization ability of solution extracted from lettuce By using response surface methodology, design 27 experiments follow central composite design with repeatation at central value, I built the model to describe extraction process of polyphenol compounds and their anti-oxidization ability In this model, anti-oxidization ability of extracted solution (Y1), total polyphenol concentration (Y2) are assigned as objective functions and four factors affect to them are extraction temperature (X1), extraction time (X2), rate DM/NL (X3), ethanol concentration (X4): Y1 = 1379.10323 + 13.67204 X1 + 26.72504 X2 + 49.24271 X3 + 12.12348 X4 + 0.015575 X1X2 + 0.15337 X1X3 – 0.018487 X1X4 – 0.313125 X2X3 – 0.011687 X2X4 – 0.046687 X3X4 – 0.082496 X12 – 0.279646 X22 – 4.75240 X32 –X42 Y2 = 1.20897 + 1.367204 X1 + 0.267250 X2 + 0.492427 X3 + 0.121235 X4 + 0.000156 X1X2 + 0.001534 X1X3 – 0.000185 X1X4 – 0.003131 X2X3 – 0.000117 X2X4 – 0.000467 X3X4 – 0.000825 X12 – 0.002796 X22 – 0.47524 X32 – 0.001037X42 Model obtained the results that is high capatiple with experiment results (R2= 0.9417) Base on the model, the optimal conditions to extract maximum total polyphenol concentration with highest anti-oxidization ability are: 750C, 62 minutes, ratio of material/solvent 1:4 (g/ml) and ethanol concentration 59% In this condition, solution obtained has the result: 17.155 mgGAE/g dry matter (total polyphenol concentration) and 215.452 mol TEAC/ g dry matter (anti-oxidization ability) L IăCAMă OAN Lu năv nănàyălàăcơngătrìnhănghiênăc u c aăcáănhânătơi,ăđ s h ng d n c aăGS.TS.ă nghiên c uăđ c th c hi năd i ng Th Anhă ào.ăCácăkh o sát, s li u, nh ng k t lu n c trình bày lu năv năhồnătồnătrungăth c Tơi xin hồn tồn ch u trách nhi m v l iăcamăđoanănày H c viên Nguy n H nh Tâm M CL C CH NGă1:ăM U 1.1 M c tiêu ậ n i dung nghiên c u: 1.2 Ph m vi nghiên c u: CH NGă2:ăT NG QUAN 2.1 Tình hình nghiên c u: 2.1.1 Tình hình nghiên c uătrongăn c: 2.1.2 Tình hình nghiên c uăngoỢiăn c: 2.2 T ng quan - đ căđi m rau di p cá: 2.3 Phân b : .5 2.4 Thành ph n hóa h c rau di p cá: 2.4.1 Các h p ch t flavonoid: 2.4.2 Tinh d u: 2.4.3 Alcaloid: .8 2.5.ăHo tătínhăsinhăh cărauădi păcá: 2.5.1ăTáẾăế ngăỆhángăvirus: 2.5.2ăTáẾăế ngăẾh ngăungăth ămáu: 2.5.3ăTáẾăế ngăẾh ngăoồỔăhóa: 2.5.4ăTáẾăế ngăỆhángăỆhu n: 2.5.5 Tác d ngăế c lí: 2.6 T ng quan v polyphenol: 12 2.6.1 Khái ni m v polyphenol: .12 2.6.2 Phân lo i polyphenol: 12 2.7 T ng quan s y phun: 15 2.7.1 Quá trình vi bao: 15 2.7.2 Công ngh s y phun: 16 CH NGă3:ăNGUYểNăLI UăVÀăPH NGăPHỄPăNGHIểNăC U 18 3.1 Nguyên li u nghiên c u: 18 3.2 D ng c thi t b - hóa ch t dùng cho nghiên c u: 18 3.2.1 D ng c , thi t b : 18 3.2.2 Hóa ch t: 19 3.3ăPh ngăphápănghiênăc u: 20 3.3.1ăS ăđ nghiên c u: 20 3.3.2 Quy trình cơng ngh x lý rau di p cá: 21 3.4 B trí thí nghi m: 23 3.5ăPh ngăphápăphơnătích: 27 3.6ăPh ngăphápăx lý s li u: .27 CH NGă4:ăK T QU VÀ BÀN LU N 28 4.1 K t qu đoăm t s thành ph n nguyên li u rau di p cá: 28 4.2ăSoăsánhăl ng polyphenol t ng gi a rau di păcáăt iăvƠărauădi p cá ch n:28 4.3 nhăh ng nhi t đ th i gian ch năđ năhƠmăl ng polyphenol t ng d ch chi t rau di p cá: .29 4.4 nhăh ng thơng s tríchălyăđ năhƠmăl ng polyphenol t ng kh n ngăkhángăoxyăhóaă d ch chi t rau di p cá: 31 4.4.1 nhăh ng th i gian trích ly: .31 4.4.2 nhăh ng nhi tăđ trích ly: 33 4.4.3 nhăh ng t l dung môi nguyên li u: 35 4.4.4 nhăh ngăhỢmăệ ng ethanol: 36 4.4.5 T iă uăhóaăth c nghi m: .37 4.4.5.1 nhăh ng nhân t chi tăđ năhỢmăệ ng polyphenol t ng kh n ngăỆhángăoồỔăhóa: 38 4.4.5.2 T iă uăhóaăđi u ki n chi t: .41 4.5 ng d ng: 44 CH NGă5:ăK T LU N VÀ KI N NGH 46 5.1 K t lu n: .46 5.2 Ki n ngh : 46 CH NGăVI:ăTÀIăLI U THAM KH O 47 CH NGăVII:ăPH L C .50 DANH M C B NG B ng 1: Phân lo i rau di p cá B ng 2 Thành ph n rau di p cá B ng 3.1 D ng c - thi t b dùng cho nghiên c u 18 B ng 3.2 Các hóa ch t dùng nghiên c u 19 B ng 3.3 B trí thí nghi m kh oăsátăl oxy hóa gi a rau di păcáăt B ngă4.ă1ăHàmăl ng polyphenol t ng ho t tính ch ng iăvàărauădi p cá ch n 23 ng polyphenol t ng gi a rau di păcáăt iăvàărauădi p cá ch n 288 B ng Ma tr n b trí thí nghi m mã hóa 388 B ng K t qu b trí thí nghi m 38 47 CH NGăVI:ăTÀI LI U THAM KH O J H Wang, S Bose, N R Shin, Y W Chin, Y H Choi, and H Kim, “Pharmaceutical impact of houttuynia cordata and metformin combination on high-fat-diet-induced metabolic disorders: Link to intestinal microbiota and metabolic endotoxemia,”ă Front.ă Endocrinol.ă (Lausanne).,ă vol.ă 9,ă no.ă OCT, 2018, doi: 10.3389/fendo.2018.00620 ăT tăL i,ă“Nh ngăẾợỔăthu ẾăvỢăv ăthu ẾăVi tăNam”.ăNXBăkhoaăh căvàăk ă thu t,ăHàăN i,ă2006 L uă Anh,ă “Di p cá - D Ếă i n Vi t Nam.”ă Availableă from:ă https://duocdienvietnam.com/diep-ca/ Gail Lorenz miller, Use of DinitrosaIicyIic Acid Reagent for Determination Of Reducing Sugar 1959.1959 J.ă Fu,ă L.ă Dai,ă Z.ă Lin,ă andă H.ă Lu,ă “Houttuynia cordata Thunb: A Review of Phytochemistry and Pharmacology and Quality Control,”ă Chin.ă Med.,ă vol.ă 04, no 03, pp 101–123, 2013, doi: 10.4236/cm.2013.43015 Hayashi, Kyoko, Kamiya, Mioko, Toshimitsu, 1995, “Virucidal Effects of the Steam Distillate from Houttuynia cordata and its Components on HSV-1, Influenza Virus, and HIV, Planta Med”, 61(03), pp 237-241 Chang Jung-San, Chiang Lien-Chai, Chen Chi-Chain, Liu Li-The, Wang Kuo-Chih, Lin Chun-Ching,ă2001.ă“Antileukemic activity of Bidens pilosa L var Minor (Blume) Sherff and Houttuynia cordata Thunb”, The American journal of Chinese medicine, 29(2), pp 303-312 Hoàngă Thanhă H ng,ă Tr n Qu nh Hoa, Hà Vi t B o, Nguy n Danh Th c, 2002,ă“Góp ph n nghiên c u thành ph n flavonoid chi t xu t t Di p cá Houttuynia cordata Thunb c a Vi t Nam”,ăT păchíăD c h c, Nxb B y t , Hà N i, 9, tr.13-15 Huyă Bích,ă Bùiă Xuână Ch Dong,ă ng,ă ng Quang Chung, Nguy nă Th ng Trungă àm,ăPh măV năHi n,ăV ăNg c L , Ph m Duy Mai, Ph m Kim Mãn, Nguy n T p, Tr nă Toàn,ă oànă Th Nhu, 2004, “Cây thu c đ ng v t làm thu c Vi t Nam t p 1”, Nxb Khoa h c K thu t 48 10 T t L i, 2000, “Nh ng thu c v thu c Vi t Nam”, Nhà xu t b n Y H că&Tr ngă i h căD c Hà N i, 2002, Bài gi ngăd c li u, Nxb Y h c, Hà N i 11 S.ă A.ă Makanjuola,ă “Influence of particle size and extraction solvent on antioxidant properties of extracts of tea, ginger, and tea-ginger blend”,ăFood Sci Nutr, vol 5, no 6, pp 1179-1185, Nov 2017 12 C V.-P Marlene Jimenez-Del-Rio,ă “Aệổheimer’să Disease,ă Drosophiệaă melanogaster and Polyphenols” Natural Compounds as Therapeutic Agents for Amyloidogenic Diseases, 21–53 10.1007/978-3-319-18365-7_2,”ă vol.ă 863, 2015, pp 21–53 13 Rambaran, T F (2020) “Nanopolyphenols: a review of their encapsulation and anti-diabetic effects” SN Applied Sciences, 2(8) doi:10.1007/s42452020-3110-8 14 S.ă Ding,ă H.ă Jiang,ă andă J.ă Fang,ă “Regulationă ofă immuneă functionă byă polyphenols,”ăJ.ăImmunol Res., vol 2018, 2018, doi: 10.1155/2018/1264074 & C Manach, A Scalbert, C Morand, C Rémésy, and L Jiménez, “Polyphenols: Food sources and bioavailability,”ă Americană Journală ofă Clinical Nutrition, vol 79, no American Society for Nutrition, pp 727– 747, 2004, doi: 10.1093/ajcn/79.5.727 15 C V.-P Marlene Jimenez-Del-Rio,ă “Aệổheimer’să Disease,ă Drosophiệaă melanogaster and Polyphenols” Natural Compounds as Therapeutic Agents for Amyloidogenic Diseases, 21–53 | 10.1007/978-3-319-18365-7_2,”ă vol.ă 863, 2015, pp 21–53 16 Kumar N, Goel N “Phenolic acids: Natural versatile molecules with promising therapeutic applications” Biotechnol Rep 2019; 24: e00370 doi:10.1016/j.btre.2019.e00370 17 Erica L Santos, Beatriz Helena L.N Sales Maia, Aurea P Ferriani and Sirlei Diasă Teixeiraă “Flavonoids: Classification, Biosynthesis and Chemical Ecology.” 49 18 Gut Microbial Metabolism of Plant Lignans:ăInfluenceăonăHumanăHealth,”ăină Diet-Microbe Interactions in the Gut: Effects on Human Health and Disease, Elsevier Inc., 2015, pp 103–117 19 C.ăThies,ă“Microencapsulation:ămethodsăandăindustrialăapplications,”ăBenita (ed.), 1996 20 S K F Gibbs Inteaz Alli,ăCatherineă N.ă Mulligan,ă Bernard,ă “Encapsulationă ină theă foodă industry:ă aă review,”ă Int J Food Sci Nutr., vol 50, no 3, pp 213–224, 1999 21 A G Gaonkar, N Vasisht, A R Khare, and R Sobel, Microencapsulation in the Food Industry A Practical Implementation Guide, vol 53 2014 22 A S Mujumdar, Handbook of industrial drying CRC press, 2014 23 Ehnert,ă “Method,”ă Contributionsă toă Managementă Science.ă pp.ă 183–198, 2009, doi: 10.1007/978-3-7908-2188-8_6 24 W Brand-Williams,ă M.ă E.ă Cuvelier,ă andă C.ă Berset,ă “Use of a free radical method to evaluate antioxidant activity,”ă LWTă - Food Science and Technology, vol 28, no pp 25–30, 1995, doi: 10.1016/S00236438(95)80008-5 25 S.ă S.ă Nielsen,ă “Determination of Moisture Content.”ă pp.ă 13–22, 2003, doi: 10.1007/978-1-4757-5250-2_3 26 Eun-Ho Lee, in Innovative Food Processing Technologies, 2021 27 P.J Fellows, in Food Processing Technology (Third Edition), 2009 28 H.ăZheng,ăW.ăHwang,ăandăS.ăChung,ă“Enhancing polyphenol extraction from unripe apples by,”ăMethods,ăvol.ă10,ăno.ă12.ăpp.ă912–919, 2009 29 Z Zhu, S Li, J He, R Thirumdas, D Montesano, and F J Barba, “Enzymeassisted extraction of polyphenol from edible lotus (Nelumbo nucifera) rhizome knot: Ultra-filtration performance and HPLC-MS2 profile,”ă Foodă Res.ă Int.,ă vol.ă 111,ă pp.ă 291–298, Sep 2018, doi: 10.1016/j.foodres.2018.05.047 50 CH 7.1 Ph ngăphápăphơnătích: 7.1.1 Xácăđ nhăđ m: m c a m uăđ că xácăđ nh d aătrênătínhătốnăl m u sau trình b căh iăn đ nhăđ NGăVII:ăPH L C c M uă đ c s yă đ n kh iăl ngăn c kh i ngăkhơngăđ i xác m b ng thi t b cân s y m h ng ngo i D ng c , thi t b - aănhôm Thi t b s y m h ng ngo i Cách ti n hành - Nh n ON m n p thi t b s y m h ng ngo i - Càiăđ t nhi tăđ s y: 1350C - tăđ aănhômăs ch khơ vào v trí Nh nănútăTAREăđ tr kh iăl ngăđưiănhơm, cho kho ng - g m uălênăđưi,ă đóngăn p thi t b nh nănútăSTARTăđ ti n hành s y ghi nh n l iăđ mc am u hi n th hình sau có tín hi u báo k t thúc trình s y 7.1.2 Xácăđ nhăhƠmăl ng polyphenol t ng: Hóa ch t: - Thu c th Folin – Ciocalteu 10 % (v/v): dùng pipet chuy n 10 ml thu c th Folin – Ciocalteuăvàoăbìnhăđ nh m că100ăml.ăPhaăloưngăđ n v ch b ngăn c c t tr n - Dung d chănatriăcacbonată7,5ă%ă(w/v):ăcână7,5găNa2CO3ăkhanăvàoăbìnhăđ nh m că100mlă.ăThêmăn c vào n a bình L c đ hòaătanăNa2CO3ăvàăđ nh m căđ n v ch 100 ml - Dung d ch chu n g căacidăgalică100ă g/ml:ăcână0,01găacidăgalicăchoăvàoăbìnhă đ nh m că100ml.ăHòaătanătrongăn - c c t,ăphaăloưngăđ n v ch tr n Dung d ch acid galic chu n có n ngăđ : 10, 20, 30, 40, 50 ( mol/ml) 51 B ng N ngăđ dung d ch acid galic N ngăđ dung Th tích dung Th tích d ch acid galic d ch g c acid n ( mol/ml) galic (ml) (ml) 10 20 30 40 50 5 cc t Cách ti n hành: D ngăđ ng chu n - Cho 0,5 ml dung d ch acid gallic vào ng nghi m (2 ng nghi m) - Cho 2,5 ml dung d ch thu c th Folin-Ciocalteu 10% vào, l căđ u - Sau phút, cho thêm 2ml dung d ch Na2CO3 7,5%, l căđ u - yên ng nghi m oăđ h p thu - D ngăđ b nhi tăđ phòng 90 phút, tránh ánh sáng c sóng 760 nm ng chu n c a n ngăđ acid galic chu nă( g/ml)ătheoăđ h p thu Phân tích m u: - Pha lỗng m u theo t l thích h p (10 - 100 l n)ăsaoăchoăđ h p thu n m trongăđ - ng chu n Cácă b c ti p theo th c hi nă t ngă t nh ă cáchă xâyă d ngă đ ng chu n nh ngăthayădungăd ch chu n acid gallic b ng m u d ch trích pha loãng - M u tr ngăđ c th c hi năt ngăt nh ngăthayăm u d chătríchăđưăphaăloưngă b ng dung mơi trích ly B ng Giá tr OD ng v i n ngăđ acid galic N ngăđ acid galic ( mol/ml) 10 OD 0.210 20 30 40 0.350 0.483 0.612 50 0.740 52 Hình Hàmăl th đ ng chu n acid galic ng TPC có gram ngun li uăkhơăđ cătínhănh ăsau: TPC= A x V x n x 10-3/ m x (100% - W%) Trongăđó: - A: hàmăl ng trolox xácăđ nh t đ - V: t ng th tích d ch chi t (ml) - n: h s pha loãng - Kh iăl - W:ăhàmăl ng chu n ( g/ml) ng m u (g) ng m c a ngu en li u (%) 7.1.3 Xácăđ nh ho t tính ch ng oxy hoá theo DPPH (W Brand-Williams and e al): Nguyên t c: V nguyên t c, ch t kháng oxy hóa s ă trungă hịaă g c DPPH (1,1diphenyl-2-picrylhydrazyl) b ng cách cho hydrogen, làm gi măđ h p thu t iăb c sóng c căđ i màu c a dung d ch ph n ng nh t d n, chuy n t màuătímăđ m sang màu tím nh t Ho t tính ch ngăoxyăhóaăđ căđánhăgiáăthơngăquaăđ h p thu b c sóng 517nm Giá tr m tăđ quang OD th p kh n ngăb t g c t DPPH cao D ngăđ - ng chu n trolox: Pha dung d ch thu c th DPPH 40 (mg/L): Cân xác 0,04g DPPH, hịa tan DPPH b ng methanol chuy năvàoăbìnhăđ nh m c 1L r iăđ nh m căđ n v ch b ng methanol 53 Chu n b dung d ch chu nă troloxă 1000 M:ă Cână chínhă xácă 0,025gă trolox,ă - chuy năvàoăbìnhăđ nh m că100mlăvàăđ nh m călênăđ n v ch b ng ethanol 99,5% Ti n hành d ngă đ - ng chu n: Pha n ngă đ trolox 0; 200; 400; 600; 800; 1000ă( mol) B ng Th tích ch t xây d ngăđ ng chu n trolox N ngăđ Trolox chu n ( mol) 200 400 600 800 1000 Th tích Trolox (ml) 10 N c c t (ml) 10 T ng th tích) 10 10 10 10 10 10 Ti năhànhăđo:ăă Chu n b ng nghi m, hút 0,1ml dung d chătroloxăđưăđ c pha loãng n ngă đ khác nhau; ti pă đ n cho vào m i ng 3,9ml dung d ch DPPH chu n, l c đ u t i kho ng 20 phút Cu iăcùngăđoăđ h p th b c sóng 517nm B ng Gía tr OD ng v i n ngăđ trolox N ngăđ Trolox ( mol) OD 200 400 600 800 1000 0.773 0.667 0.548 0.436 0.341 0.236 Hình Ho tătínhăDPPHăđ th đ ng chu n trolox c tính 1g ngun li uăkhơănh ăsau: Ho t tính DPPH= B x V x n x 10-3/ m x (100% - W%) Trongăđó: - B:ăhàmăl ngăacidăgalicăxácăđ nh t đ ng chu n ( g/ml) 54 - V: t ng th tích d ch chi t (ml) - n: h s pha loãng - Kh iăl - W:ăhàmăl ng m u (g) ng m c a ngu en li u (%) 7.2 K t qu phân tích: 7.2.1 nhăh ng nhi tăđ ch năđ năhƠmăl ng polyphenol: Method: 95.0 percent LSD B ng 7.5 K t qu phơnătíchăph v iăhƠmăl ngăsaiăANOVAă nhăh ng polyphenol t ng Nghi m th c (0C) Count Mean 80 17.2467 70 16.0237 60 15.2300 90 14.2267 7.2.2 nhăh ng nhi tăđ ch năđ i ng th i gian ch năđ năhƠmăl Grouping A B C D ng polyphenol t ng: Method: 95.0 percent LSD Hình 7.6 K t qu phơnătíchăph ch năđ i v iăhƠmăl Nghi m th c ngăsaiăANOVAă nhăh ng th i gian ng polyphenol t ng Count Mean 60 18.3270 75 16.0273 45 15.8137 30 15.0927 90 14.8067 Grouping (giây) A B C D E 55 7.2.3 nhăh ng nhi tăđ tríchălyăđ năhƠmăl ng polyphenol t ng kh n ngă kháng oxy hóa: B ng 7.7 nh h ng nhi tăđ tríchălyăđ năhƠmăl ng polyphenol t ng kh n ngăkhángăoxyăhóaă d ch chi t rau di p cá DPPH TPC Nhi tăđ (0C) ( molTEAC/gckNL) (mgGAE/gckNL) 35 167.797e±0.191 14.929e±0.0124 45 194.475d±0.331 16.663c±0.0072 55 209.688b±0.331 16.891b±0.0313 65 214.208a±0.191 18.918a±0.0072 75 206.381c±0.0005 15.668d±0.0072  HƠmăl ng polyphenol t ng: Method: 95.0 percent LSD B ng 7.8 K t qu phơnătíchăph đ năhƠmăl ngăsaiăANOVAă nhăh ng nhi tăđ trích ly ng polyphenol t ng Nghi m th c (0C) Count Mean 65 18.918 55 16.891 45 16.663 75 15.668 35 14.929 Grouping A B C D E 56  Kh n ngăkhángăoxyăhóa: Method: 95.0 percent LSD B ng 7.9 K t qu phơnătíchăph ngăsaiăANOVAă nhăh ng nhi tăđ trích ly đ n kh n ng kháng oxy hóa Nghi m th c (0C) Count Mean 65 214.208 55 209.688 45 206.381 75 194.475 35 167.797 7.2.4 nhăh ng th iăgianătríchălyăđ năhƠmăl Grouping A B C D E ng polyphenol t ng kh n ngă kháng oxy hóa: B NG 7.0 NHăH NG TH IăGIANăTRệCHăLYă T NG VÀ KH N NGăKHỄNGăOXYăHịAă NăHÀMăL NG POLYPHENOL D CH CHI T RAU DI P CÁ DPPH TPC Th i gian (phút) ( molTEAC/gckNL) (mgGAE/gckNL) 30 120.939e ±0.702 14.346e ±0.0313 40 150.121d ±0.464 15.564d ±0.0259 50 162.179c ±0.304 16.862b ±0.0313 60 182.546a ±0.304 20.535a ±0.0249 70 170.488b ±0.176 15.717c ±0.0072 57  HƠmăl ng polyphenol t ng: Method: 95.0 percent LSD B ng 7.11 K t qu phơnătíchăph đ n hàm l ngăsaiăANOVAă nhăh ng th i gian trích ly ng polyphenol t ng Nghi m th c (phút) Count Mean Grouping 60 20.5348 A 50 16.8615 70 15.7172 40 15.5638 30 14.3864 B C D E  Kh n ngăkhángăoxyăhóa: Method: 95.0 percent LSD B ng 7.12 K t qu phơnătíchăph ng sai ANOVA nhăh ng th i gian trích ly đ n kh n ngăkhángăoxyăhóa Nghi m th c (phút) Count Mean Grouping 60 182.546 A 50 170.488 70 162.179 40 150.121 30 120.939 B C D E 58 7.2.5 nhăh ng t l DM/NLăđ n hƠmăl ng polyphenol t ng kh n ngă kháng oxy hóa: B NG 7.13 Nảăả NG T L DUNG MÔI NGUYÊN LI Uă NăảÀMăL NG POLYPHENOL T NG VÀ KH N NẢăKảÁNẢăOXYăảÓAă RAU DI P CÁ DPPH TPC T l DM/NL (ml/g) ( molTEAC/gckNL) (mgGAE/gckNL) 166.609e±0.279 15.7393e±0.0114 179.737d±0.279 15.9529d±0.0066 200.033a±0.323 18.1073a±0.0238 190.816b±0.161 17.8573b±0.0238 185.323c±0.279 17.3573c±0.0238  HƠmăl ng polyphenol t ng: Method: 95.0 percent LSD B ng 7.14 K t qu phơnătíchăph ngăsaiăANOVAă nhăh ng t l DM/NLăđ n hƠmăl ng polyphenol t ng Nghi m th c (ml/g) Count Mean Grouping 18.1073 A 59 17.8573 17.3573 3 15.9529 15.7393 B C D E  Kh n ngăkhángăoxyăhóa: Method: 95.0 percent LSD B ng 7.15 K t qu phơnătíchăph ngăsaiăANOVAă nhăh ng t l DM/NLăđ n kh n ngăkhángăoxyăhóa Nghi m th c (ml/g) Count Mean Grouping 200.033 A 190.816 185.323 3 179.737 166.609 7.2.6 nhăh ng t l hƠmăl ngăethanolăđ năhƠmăl B C D E ng polyphenol t ng kh n ngăkhángăoxyăhóa: B ng 7.16 nhăh ngăhƠmăl ngăethanolăđ năhƠmăl ng polyphenol t ng kh n ngăkhángăoxyăhóaă rau di p cá DPPH TPC ( molTEAC/gckNL) (mgGAE/gckNL) 30 162.699e±0.279 16.1232c±0.0066 40 165.771d±0.279 16.2949c±0.0066 50 194.261b±0.279 17.5841b±0.0114 60 202.733a±0.161 19.241a±0.419 70 190.909c±0.279 17.220b±0.00 HƠmăl ng ethanol (%) 60  HƠmăl ng polyphenol t ng: Method: 95.0 percent LSD B ng 7.17 K t qu phơnătíchăph ethanolăđ năhƠmăl Nghi m th c (% ngăsai ANOVA nhăh ngăhƠmăl ng ng polyphenol t ng Count Mean Grouping 60 19.241 50 17.5841 B 70 17.220 B 40 16.2949 C 30 16.1232 C v/v) A  Kh n ngăkhángăoxyăhóa: Method: 95.0 percent LSD: B ng 7.18 K t qu phơnătíchăph ngăsaiăANOVAă nhăh ngăhƠmăl ethanolăđ n kh n ngăkhángăoxyăhóa Nghi m th c (% Count Mean 60 202.733 50 194.261 70 190.909 40 165.771 30 162.699 Grouping v/v) A B C D E ng 61 PH N LÝ L CH TRÍCH NGANG H tên: NGUY N H NHăTÂMăăăăăăăăăăăăăăăăăăăăăăăăăăăăăăN iăsinh:ăTi n Giang a ch : păH ng,ăxưăNh Bình, huy n Châu Thành, t nh Ti n Giang Quáătrìnhăđàoăt o: Th i gian Tr ngăđƠo t o Chuyên ngành 2013 - 2017 Tr ngă Công ngh th c ih c Công ngh TP Ơoăt o Chính quy ph m HCM HUTECH 2019- đ n Tr ngă ih c Bách Khoa TP HCM Công ngh th c ph m ( angătheoăh c) ... HÓAă I U KI N TRÍCH LY POLYPHENOL T NG VÀ KH TÀI: N NGă KHỄNGă OXY? ? HÓAă THUNB) & II RAU DI P CÁ (HOUTTUYNIA CORDATA NG D NG NHI M V VÀ N I DUNG: - T ng quan tài li u v nguyên li u rau di p cá. .. nghi m kh oăsátăl oxy hóa gi a rau di p? ?cá? ?t B ngă4.ă1ăHàmăl ng polyphenol t ng ho t tính ch ng i? ?và? ?rau? ?di p cá ch n 23 ng polyphenol t ng gi a rau di p? ?cá? ?t i? ?và? ?rau? ?di p cá ch n 288 B... flavonoid polyphenol khác, axit béo ancaloit Trong nghiên c u đưă trình bày k t qu t iă u hóa? ? u ki n trích ly hàmăl ng polyphenol t ng kh n ng? ?kháng? ?oxy? ?hóa? ? rau di p cá (Houttuynia cordata Thunb)