Nghiên cứu thu nhận cao chiết từ nấm linh chi bằng kỹ thuật co2 siêu tới hạn và thử nghiệm hoạt tính sinh học

IăH CăQU CăGIAăTP.HCM TR NGă IăH CăBỄCHăKHOA -o0o - TR Nă ă T NGHIểNăC UăTHUăNH NăCAOăCHI TăT ăN MăLINHăCHIă B NGăK ăTHU TăCO2 SIểUăT IăH Nă VÀăTH ăNGHI MăHO TăTệNHăSINHăH C OBTAINING EXTRACTS FROM GANODERMA LUCIDUM BY SUPERCRITICAL CO2 TECHNIQUE AND BIOACTIVITY EVALUATION Chuyên ngành: K THU T HÓA H C Mã s : 8520301 LU NăV NăTH CăS TP.ăH ăCHệăMINH,ăthángă02ăn mă2022 Cơng trình đ Cán b h c hoàn thành t iμ Tr ngă iăH căBáchăKhoaă- HQGăTP.HCM ng d n khoa h cμ TS Hoàng Minh Nam PGS.ăTSăNguy năH uăHi u Cán b ch m nh n xét 1μ TS.ăHu nhăNg căOanh Cán b ch m nh n xét 2μ TS.ăNguy năQu căTh ng Lu n v n th c s đ c b o v t i Tr ng i H c Bách Khoa - HQG TP.HCM, tháng 02 n m 2022 Thành ph n H i đ ng đánh giá lu n v n th c s g mμ PGS.TS Nguy n Tr ng S n - Ch t ch TS Hu nh Ng c Oanh - y viên ph n bi n TS Nguy n Qu c Th ng - y viên ph n bi n PGS TS Ph m Nguy n Kim Tuy n- y viên TS Ph m Tr ng Liêm Châu - Th kỦ Xác nh n c a Ch t ch H i đ ng đánh giá LV Tr sau lu n v n đư đ c s a ch a (n u có) CH ăT CHăH Iă NGă TR (H tên ch kỦ) NGUY NăTR ng Khoa qu n lỦ chuyên ngành NGăKHOAăK ăTHU TăHịAăH C (H tên ch kỦ) NGăS N i IăH CăQU CăGIAăTP.HCM TR NGă IăH CăBỄCHăKHOA C NGăHọAăXẩăH IăCH ăNGH AăVI TăNAM căl păậ T ădoăậ H nhăphúc NHI M V LU NăV NăTH CăS H tên h c viênμ Tr n t MSHV: 2070165 Ngày, tháng, n m sinhμ 10/12/1997 N i sinhμ B n Tre Chuyên ngànhμ K thu t Hóa h c Mư s μ 8520301 I TÊN TÀI Tên ti ng Vi t: Nghiên c u thu nh n cao chi t t n m linh chi b ng k thu t CO2 siêu t i h n th nghi m ho t tính sinh h c Tên ti ng Anh: Obtaining extracts from Ganoderma lucidum by supercritical CO2 technique and bioactivity evaluation II NHI M V VÀ N I DUNG: 2.1 T ngăquan: N m linh chi, triterpenoid, ho t tính c a n m linh chi, k thu t CO2 siêu t i h n, ph ng pháp đ nh l ng, ph ng pháp th nghi m ho t tính sinh h c c a cao chi t quy ho ch th c nghi m 2.2 Th cănghi m  Trích ly triterpenoid t n m linh chi b ng k thu t CO2 siêu t i h n  Kh o sát nh h ng c a t ng u ki n trích ly đ n hàm l ng triterpenoid bao g mμ Áp su t, t l etanol:nguyên li u, nhi t đ th i gian  Kh o sát nh h ng đ ng th i ba u ki n áp su t, th i gian nhi t đ đ n hàm l ng triterpenoid b ng quy ho ch th c nghi m theo mơ hình Box-Behnken  Th nghi m ho t tính kháng oxy hoá, c ch t bào ung th kháng khu n III NGÀY GIAO NHI M V : 9/2021 IV NGÀY HOÀN THÀNH NHI M V : 2/2022 V CÁN B H NG D N: TS HOÀNG MINH NAM PGS TS NGUY N H U HI U TP HCM, ngày tháng n m 2022 CỄNăB ăH TR NGăD N Tr ngăPTNăT ă HQGăTP.HCM CNHH & DK NGăKHOAăK ăTHU TăHịAăH C ii L I C Mă N hoàn thành lu n v n này, đ u tiên tác gi xin trân tr ng c m n đ n ng i thân gia đình đư ln quan tâm, đ ng viên t o m i u ki n thu n l i cho tác gi su t th i gian th c hi n lu n v n Tác gi xin chân thành c m n th y TS Hoàng Minh Nam th y PGS.TS Nguy n H u Hi u đư t n tình h ng d n, t o u ki n thu n l i cho tác gi su t trình h c t p th c hi n lu n v n Tác gi xin g i l i c m n đ n h c viên, nghiên c u viên b n sinh viên Phịng thí nghi m Tr ng m HQG-HCM Cơng ngh Hóa h c & D u khí (Key CEPP Lab), Tr ng i H c Bách Khoa - HQG TP.HCM đư h tr tác gi su t trình h c t p nghiên c u Tác gi Tr nă iii ă t TÓM T T Trong lu n v n này, triterpenoid đ CO2 siêu t i h n Hàm l c trích ly t n m linh chi Vi t Nam b ng k thu t ng triterpenoid cao chi t đ c xác đ nh b ng ph ng pháp s c ký l ng hi u n ng cao nh h ng c a t ng u ki n trích ly nh áp su t, th i gian, nhi t đ th i gian đ n hàm l ng triterpenoid đ c kh o sát b ng ph ng pháp luân phiên t ng bi n đ tìm kho ng bi n thiên phù h p Sau đó, ti n hành kh o sát đ ng th i b ng quy ho ch thí nghi m v i ba u ki n áp su t, th i gian nhi t đ s d ng mơ hình BoxBehnken S li u đ ly cho hàm l b ng n c x lý b ng ph n m m Design Expert 11.0 đ tìm u ki n trích ng triterpenoid cao nh t 2,713 mg/g c nóng siêu âm c ng đ ng th i ph ng pháp trích ly c th c hi n đ đ i ch ng ng th i, nhóm ch c đ c tr ng c a cao chi t, hình thái c u trúc b m t n m thành ph n cao chi t đ c kh o sát b ng ph h ng ngo i chuy n hóa Fourier (Fourier – transform infrared spectroscopy – FTIR) kính hi n vi n t quét (scan electron microscopy – SEM) Cao chi t t i u ki n t i u đ kháng oxy hóa s d ng ph c kh o sát ho t tính sinh h c thơng qua kh n ng ng pháp b t g c t 1,1–diphenyl–1–picrylhydrazyl (DPPH) n ng l c kh s t v i đ i ch ng d ng axit ascorbic; c ch t bào ung th b n dòng t bào ung th dòng t bào ung th bi u mô (KB), ung th ph i (Lu1), ung th gan (Hep-G2) ung th vú (MCF-7) b ng ph kháng khu n c a cao chi t đ ng pháp tetrazolium; kh n ng c th nghi m vi khu n Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Lactobacillus fermentum, Salmonella enterica, Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa b ng ph ng pháp xác đ nh IC50 iv ABSTRACT In this thesis, triterpenoid was extracted from Vietnamese red Ganoderma by supercritical CO2 technique Triterpenoid content in the extract was determined by highperformance liquid chromatography The effects of each extraction factors including pressure, ethanol concentration, temperature, and time on ursolic acid content were investigated by the single-factor experiment o choose the impact range After that, three factors were simultaneously investigated: pressure, time, and temperature using Box-Behnken model Data were analyzed by Design Expert 11.0 software to find optimal extraction conditions for the highest triterpenoid content (2.173 mg/g mg/g dry weight of material) At the same time, hot water extraction and ultrasonic extraction were also carried out for the control samples At the same time, the characteristic functional groups of the extract, the morphology of the surface structure of the fungus and the high composition of the extract were investigated by Fourier transform infrared spectroscopy (Fourier transform infrared spectroscopy – FTIR) and scanning electron microscopy (scan electron microscopy – SEM) The as-prepared extract with optimal route condition was investigated the biological activity via the Radical Scavenging capacity with 1,1–diphenyl–1–picrylhydrazyl (DPPH) and ferric reducing ability with ascorbic acid as a positive control; cytotoxicity with KB, Lu1, Hep-G2, and MCF-7 cell line by MTT assay; Antibacterial performance was studied against Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Lactobacillus fermentum, Salmonella enterica, Escherichia coli, and Pseudomonas aeruginosa by IC50 v L IăCAMă OANă Tác gi xin cam đoan lu n v n cơng trình nghiên c u th c s c a cá nhân tác gi đ c th c hi n d is h ng d n c a hai th y TS Hoàng Minh Nam PGS TS Nguy n H u Hi u, Phịng thí nghi m Tr ng m HQG HCM Cơng ngh Hóa h c D u khí (Key CEPP Lab), Tr ng i h c Bách Khoa - HQG TP HCM Các s li u, k t qu nghiên c u lu n v n hoàn toàn trung th c, ch a t ng đ c công b b t c m t công trình khác tr hồn thành lu n v n đ u đư đ đ u đư đ c M i s giúp đ cho vi c c c m n, thơng tin trích d n lu n v n c ch rõ ngu n g c Tác gi xin ch u trách nhi m v nghiên c u c a Tác gi Tr nă vi ă t M CL C L I C Mă N iii TÓM T T iv ABSTRACT v L IăCAMă OAN vi M C L C vii DANH M C HÌNH ix DANH M C B NG xi DANH M C CÁC T T V Nă CH VI T T T xii NGă1:ăT NG QUAN 1.1 T ng quan v n m linh chi 1.1.1 Gi i thi u chung 1.1.2 Thành ph n hóa h c 1.2 Ho t tính sinh h c c a triterpenoid 1.2.1 Kháng oxy hóa 1.2.2 c ch t bào ung th 10 1.2.3 Kháng khu n 10 1.3.ăCácăph ngăphápătríchăho t ch t n m linh chi 11 1.3.1 Ph ng pháp trích ly b ng l u ch t siêu t i h n 13 1.4 Tình hình nghiên c uătrongăvƠăngoƠiăn c 19 1.4.1 Tình hình nghiên c u n c 19 1.4.2 Tình hình nghiên c u n c 21 1.5 Tính c p thi t, m c tiêu, n iădung,ăph ngăphápănghiênăc u 23 1.5.1 Tính c p thi t 23 1.5.2 M c tiêu 24 1.5.3 N i dung nghiên c u 24 1.5.4 Ph ng pháp nghiên c u 24 1.6 Tính m i 30 1.7.ă óngăgópăc a lu năv n 30 CH NGă2:ăTH C NGHI M 31 2.1 Nguyên li u,ăhoáăch t,ăd ng c , thi t b vƠăđ aăđi m th c hi n 31 2.1.1 Nguyên li u 31 vii 2.1.2 Hóa ch t 31 2.1.3 Thi t b 32 2.1.4 a m th c hi n 33 2.2 Thí nghi m 33 2.2.1 Kh o sát nh h ng c a y u t đ n hàm l ng triterpenoid 33 2.2.2 Phân tích c u trúc nguyên li u tr c sau trích ly nhóm ch c đ c tr ng có cao chi t 38 2.2.3 Th nghi m ho t tính sinh h c c a cao chi t 38 CH NGă3:ăK T QU VÀ BÀN LU N 41 3.1 nhăh ng c aăđi u ki nătríchălyăđ n hàm lu ng triterpenoid 41 3.1.1 nh h ng c a t ng u ki n 41 3.1.2 nh h ng đ ng th i c a y u t 44 3.2 C u trúc nguyên li uătr c sau trích ly nhóm ch căđ cătr ngă cao chi t 52 3.3 Ho t tính sinh h c c a cao chi t 54 3.3.1 Ho t tính kháng oxy hoá 54 3.3.2 Ho t tính c ch t bào ung th 56 3.3.3 Ho t tính kháng khu n 56 CH NGă4:ăK T LU N 58 CƠNG TRÌNH CƠNG B 59 TÀI LI U THAM KH O 118 PH L C 58 viii DANH M C HÌNH Hình 1.1: N m linh chi Hình 1.2: C u trúc -glucan phân l p t n m linh chi [20] Hình 1.3: nh h ng c a H2O2 Fe2+ đ n ADN 10 Hình 1.4μ C ch kháng oxy hóa b ng cách cho n t 10 Hình 1.5: C ch c ch t bào ung th t h p ch t t nhiên có ho t tính sinh h c [72] 11 Hình 1.6: C ch kháng khu n c a h p ch t có ho t tính sinh h c 11 Hình 1.7: H th ng trích Soxhlet 13 Hình 1.8: Thi t b siêu âm 14 Hình 1.9: M t s lo i enzym thơng d ng 15 Hình 1.10: Gi n đ pha c a CO2 17 Hình 1.11: S chuy n pha siêu t i h n c a CO2 17 Hình 1.12: H th ng CO2 siêu t i h n 18 Hình 1.13: H th ng làm l nh 18 Hình 1.14μ B m đ ng dung môi 19 Hình 1.15μ Màn hình u n 19 Hình 2.1: Qu th n m Linh chi a) tr c xay b) sau xay 31 Hình 2.2μ S đ quy trình trích ly triterpenoid t n m linh chi b ng k thu t CO2 siêu t i h n 34 Hình 2.3: Máy TECAN 45 Hình 3.1: nh h ng c a áp su t 41 Hình 3.2: nh h ng c a t l etanol:nguyên li u 42 Hình 3.3: nh h ng c a th i gian 43 Hình 3.4: nh h ng c a nhi t đ 44 Hình 3.5μ Hàm l ng triterpenoid t s li u th c nghi m d đoán 47 Hình 3.6: nh h ng đ ng th i c a th i gian áp su t 48 Hình 3.7: nh h ng đ ng th i c a nhi t đ áp su t 49 Hình 3.8: nh h ng đ ng th i c a nhi t đ th i gian 50 Hình 3.9: Hàm l ng triterpenoid c a m u t i u m u đ i ch ng 52 Hình 3.10: nh SEM c a n m linh chi (a, b) tr ix c (c, d) sau trích ly 53 [27] F Yin, A E Giuliano, A J V Herle, "Signal pathways involved in apigenin inhibition of growth and induction of apoptosis of human anaplastic thyroid cancer cells (ARO)," Anticancer Research, vol 19, pp 4297-4303, 1999 [28] I K Wang, S Y Lin-Shiau, and J K Lin, "Induction of apoptosis by apigenin and related flavonoids through cytochrome c release and activation of caspase-9 and caspase-3 in leukaemia HL-60 cells," European Journal of Cancer, vol 35, pp 1517-1525, 1999 [29] M Mutoh, M Takahashi, K Fukuda, H Komatsu, T Enya, Y MatsushimaHibiya, H Mutoh, T Sugimura, and K Wakabayashi, "Suppression by flavonoids of cyclooxygenase-2 promoter-dependent transcriptionalactivity in colon cancer cells Structure-activity relationship," Japanese journal of cancer research, vol 91, no 7, pp 686-691, 2000 [30] X Wang, Y Shen, K Thakur, J Han, J G Zhang, F Hu, and Z J Wei, "Antibacterial activity and mechanism of ginger essential oil against Escherichia coli and Staphylococcus aureus," Molecules, vol 25, no 17, pp 3955, 2020 [31] S F Shen, L F Zhu, Z Wu, G Wang, Z Ahmad, and M W Chang, "Extraction of triterpenoid compounds from Ganoderma lucidum spore powder through a dual-mode sonication process," Drug Development and Industrial Pharmacy, vol 46, no 6, pp 963-974, 2020 [32] L S Chua, "A review on plant-based rutin extraction methods and its pharmacological activities," Journal of ethnopharmacology, vol 150, no 3, pp 805-817, 2013 [33] P T Huan and P T K Khanh, "Supercritical carbon dioxide extraction of Gac oil," The Journal of Supercritical Fluids, vol 95, pp 567-571, 2014 [34] P B Truong, N M Thuy, "T i u hóa q trình trích ly polysaccharide tannin n m linh chi đ (Ganoderma lucidum)," T p chí Khoa h c Tr ng ih c C n Th , vol 36, pp 21-28, 2015 [35] D T Ha, L T Loan, T M Hung, L V N Han, N M Khoi, L V Dung, B S Min, and N P D Nguyen, "An improved HPLC-DAD method for quantitative 121 comparisons of triterpenes in Ganoderma lucidum and its five related species originating from Vietnam," Molecules, vol 20, no 1, pp 1059-1077, 2015 [36] N X Nghien, N T B Thuy, N T Luyen, N T Thu, N D Quan, "Morphological Characteristics, Yield Performance, and Medicinal Value of Some Lingzhi Mushroom (Ganoderma lucidum) Strains Cultivated in Tam Dao, Vietnam," Vietnam Journal of Agricultural Sciences, vol 2, no 1, pp 321-331, 2019 [37] P T Huan, G Brunner, "Extraction of oil and minor compounds from oil palm fruit with supercritical carbon dioxide," Processes, vol 7, no 2, pp 107, 2019 [38] Y J Fu, W Liu, Y G Zu, X G Shi, Z G Liu, G Schwarz, T Efferth, "Breaking the spores of the fungus Ganoderma lucidum by supercritical CO2," Food chemistry, vol 112, no 1, pp 71-76, 2009 [39] J Li, X Zhang, and Y Liu, "Supercritical carbon dioxide extraction of Ganoderma lucidum spore lipids," LWT, vol 70, pp 16-23, 2016 [40] P Li, Z H Liang, Z Jiang, Z Qiu, B Du, Y B Liu, and L H Tan, "Supercritical fluid extraction effectively removes phthalate plasticizers in spores of Ganoderma lucidum," Food science and biotechnology, vol 27, no 6, pp 1857-1864, 2018 [41] S F Shen, L F Zhu, Z Wu, G Wang, Z Ahmad, and M W Chang, "Production of triterpenoid compounds from Ganoderma lucidum spore powder using ultrasound-assisted extraction," Preparative biochemistry & biotechnology, vol 50, no 3, pp 302-315, 2020 [42] D Zhou, F Zhou, J Ma, and F Ge, "Microcapsulation of Ganoderma lucidum spores oil: Evaluation of its fatty acids composition and enhancement of oxidative stability," Industrial Crops and Products, vol 131, pp 1-7, 2019 [43] Y L Wu, F Han, S S Luan, R Ai, P Zhang, H Li, and L X Chen, "Triterpenoids from Ganoderma lucidum and their potential anti-inflammatory effects," Journal of agricultural and food chemistry, vol 67, no 18, pp 51475158, 2019 [44] S F Shen, L F Zhu, Z Wu, G Wang, Z Ahmad, and M W Chang, "Extraction of triterpenoid compounds from Ganoderma lucidum spore powder through a 122 dual-mode sonication process," Drug Development and Industrial Pharmacy, vol 46, no 6, pp 963-974, 2020 [45] A Floegel, D O Kim, S J Chung, S I Koo, O K Chun, "Comparison of ABTS/DPPH assays to measure antioxidant capacity in popular antioxidant-rich US foods," Journal of food composition and analysis, vol 24, no 7, pp 10431048, 2011 [46] V H Thanh, P L T My, T D Dat, N D Viet, N C M Phuc, N H Thao, H M Nam, M T Phong, and N H Hieu, "Integrating of Aqueous Enzymolysis with Ethanolic Ultrasonication to Ameliorate Cordycepin Content from Vietnamese Cordyceps militaris and Biological Analysis of Extracts," ChemistrySelect, vol 6, no 1, pp 16-31, 2021 [47] P L T My, H T K My, N T X Phuong, T D Dat, V H Thanh, H M Nam, M T Phong, and N H Hieu, "Optimization of enzyme-assisted extraction of ginsenoside Rb1 from Vietnamese Panax notoginseng (BURK.) FH Chen roots and anticancer activity examination of the extract," Separation Science and Technology, pp 1-12, 2020 [48] M F Ahmad, F A Ahmad, M I Khan, A A Alsayegh, S Wahab, M I Alam, and F Ahmed, F, "Ganoderma lucidum: A potential source to surmount viral infections through -glucans immunomodulatory and triterpenoids antiviral properties," International Journal of Biological Macromolecules, vol 187, pp 769-779, 2021 [49] A Mehmood, M Ishaq, L Zhao, S Yaqoob, B Safdar, M Nadeem, M Munir, and C Wang, "Impact of ultrasound and conventional extraction techniques on bioactive compounds and biological activities of blue butterfly pea flower (Clitoria ternatea L.).," Ultrasonics sonochemistry, vol 51, pp 12-19, 2019 [50] C M Bubalo, S Vidovi´c, I R Redovnikovi´c, and S Joki´c, "New perspective in extraction of plant biologically active compounds by green solvents," Food and Bioproducts Processing, vol 109, pp 52-73, 2018 [51] N R Putra, L N Yian, H M Nasir, Z B Idham, and M A C Yunus, "Effects of process parameters on peanut skins extract and CO2 diffusivity by supercritical 123 fluid extraction," IOP Conference Series: Materials Science and Engineering, vol 334, pp 1-10, 2018 [52] K S Duba, and L Fiori, "Supercritical CO2 extraction of grape seed oil: Effect of process parameters on the extraction kinetics," The Journal of Supercritical Fluids, vol 98, pp 33-43, 2015 [53] P A Uwineza and A Wa kiewicz, "Recent Advances in Supercritical Fluid Extraction of Natural Bioactive Compounds from Natural Plant Materials," Molecules, vol 25, no 17, p 3847, 2020 [54] S M Pourmortazavi and S S Hajimirsadeghi, "Supercritical fluid extraction in plant essential and volatile oil analysis," Journal of chromatography A , vol 1163, pp 2-24, 2007 [55] A Natolino, and C D Porto, "Supercritical carbon dioxide extraction of pomegranate (Punica granatum L.) seed oil: Kinetic modelling and solubility evaluation," The Journal of Supercritical Fluids , vol 151, pp 30-39, 2019 [56] L Xue-gui, J Fu-yu, G Pin-yi and Z Zhen-xue, "Optimization of Extraction Conditions for Flavonoids of Physalis alkekengi var franchetii Stems by Response Surface Methodology and Inhibition of Acetylcholinesterase Activity," Journal of the Mexican Chemical Society, vol 59, no 1, pp 59-66, 2015 [57] N Sultana, "Clinically useful anticancer, antitumor, and antiwrinkle agent, ursolic acid and related derivatives as medicinally important natural product," Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry, vol 26, no 5, pp 616-642, 2011 [58] M D Esclapez, J V García-Pérez, A Mulet, and J A Cárcel, "Ultrasoundassisted extraction of natural products," Food Engineering Reviews, vol 3, no 2, pp 108, 2011 [59] I Ishak, N Hussain, R Coorey, M A Ghani, "Optimization and characterization of chia seed (Salvia hispanica L.) oil extraction using supercritical carbon dioxide," Journal of CO2 Utilization, vol 45, pp 101430, 2021 [60] A L B Dias, C S A Sergio, P Santos, G F Barbero, C A Rezende, J Martínez, "Effect of ultrasound on the supercritical CO2 extraction of bioactive compounds 124 from dedo de moỗa pepper (Capsicum baccatum L var pendulum)," Ultrasonics Sonochemistry, vol 31, pp 284-294, 2016 [61] Z S Elumba, F G Teves, M R S B Madamba, "DNA-binding and cytotoxic activities of supercritical-CO2 extracts of Ganoderma lucidum collected from the wild of Bukidnon Province, Philippines," International Research journal of Biological Sciences, vol 2, no 3, pp 62-68, 2013 [62] J Lin, J Huang, J Chen, Z Lin, Y Ou, L Yao, X Zhang, Q Kang, Y Pan, "Low Cytotoxic D-mannitol Isolated from the Industrial Wastewater of Agaricus bisporus," Journal of Food and Nutrition Research, vol 4, no 9, pp 610-614, 2016 [63] L Feng, L Bing, Z Wei, L Peng, W Long, F Yee, Z Xia, B Ping, L Ping, and H Bin, "Comprehensive comparison of polysaccharides from Ganoderma lucidum and G sinense: chemical, antitumor, immunomodulating and gut-microbiota modulatory properties," Scientific Reports, vol 8, no 1, 2018 [64] Y Zhu, and L Tan, "Chemometric Feature Selection and Classification of Ganoderma lucidum Spores and Fruiting Body Using ATR-FTIR Spectroscopy," American Journal of Analytical Chemistry, vol 6, 2015 [65] Y Zhu, and Tan, "Discrimination of Wild-Grown and Transform Infrared Spectroscopy and Transform Infrared Spectroscopy and Chemometric Methods," American Journal of Analytical Chemistry, vol 6, pp 480-491, 2015 [66] T X Trang, L H B Ngoc, and V T T Anh, "Kh o sát ho t tính kháng khu n kháng oxy hóa c a cao methanol hà th ô tr ng (Streptocaulon juventas MERR.)," T p chí Khoa h c Tr ng i h c C n Th , pp 1-6, 2015 [67] N T Hang, N T T Tam, and M H Phuong, "Kh n ng b t g c t DPPH n ng l c kh c a nam sâm bò C n Gi , TP H Chí Minh," T p chí Khoa h c ảSP TPảCM, vol 12, no 90, pp 112-122, 2016 [68] Y Kan, T Chen , Y Wu , J Wu, and W Jinzhong, "Antioxidant activity of polysaccharide extracted from Ganoderma lucidum using response surface methodology," International Journal of Biological Macromolecules, vol 72, p 151-157, 2015 125 [69] F He, Y Yang , G Yang, and Y Longjiang, "Studies on antibacterial activity and antibacterial mechanism of a novel polysaccharide from Streptomyces virginia H03," Food Control, vol 21, pp 1257-1262, 2010 [70] C Liang, D Tian, Y Liu, H Li, J Zhu, and M Li, "Review of the molecular mechanisms of Ganoderma lucidum triterpenoids: Ganoderic acids A, C2, D, F, DM, X and Y," European journal of medicinal chemistry, vol 174, pp 130-141, 2019 126 PH L C 127 Ph l c 1: S li u kh oăsátăđi u ki n trích ly PL1.1 Kh o sát nh h PL1.1.1 nh h ng t ng u ki n ng c a áp su t B ng 1.1.1 S li u kh o sát nh h Kh i l ng cân Áp su t Di n Di n Di n tích tích tích pick pick pick ng c a áp su t Trung bình mg/L Vdm Hàm Sai l s ng 5,0004 25 802,4 803 802,38 802,59 10,25 25 0,064 0,35 5,0203 30 893,7 895 893,69 894,13 61,36 25 0,381 0,75 5,0291 35 924,94 925 923,98 924,64 78,40 25 0,486 0,56 5,0014 40 1078,9 1076 1075,81 1076,90 163,43 25 1,021 1,72 5,0032 45 803 804 801,96 802,98 10,47 25 0,065 1,01 5,0062 50 785 784 784,26 784,42 0,10 25 0,0006 0,51 PL1.1.2 nh h ng c a t l etanol:nguyên li u B ng 1.1.2 S li u kh o sát nh h T l Di n Kh i EtOH: tích l nguyên pick li u 5,0204 790,1 789,5 5,0243 10 1079 5,1291 15 5,0084 20 ng cân Di n Di n tích tích pick pick Trung bình 789,6 789,7 ng c a t l etanol mg/L Vdm Hàm l ng Sai s 3,07 25 0,02 0,32 1074,7 1073,6 1075,9 162,9 25 1,01 3,10 1270 1268 1269,8 1269,2 270,8 25 1,64 1,10 1248 1249 1248,4 1248,4 259,2 25 1,62 0,50 128 5,0932 25 821 821,2 821,96 821,39 20,75 25 0,13 0,51 5,0082 30 800,3 803,4 801,6 801,77 9,79 25 0,06 1,56 PL1.1.3 nh h ng c a th i gian B ng 1.1.3 S li u kh o sát nh h Kh i l ng cân Th i gian Di n Di n Di n tích tích pick tích pick pick ng c a th i gian Trung bình mg/L Vdm Hàm l ng Sai s 5,0024 0,5 952 950 949 950,3 92,8 25 0,58 1,53 5,0243 987 985 970 980,7 109,7 25 0,68 9,29 5,0291 1,5 1014,8 1015 1012,2 1014 107,5 25 0,98 1,56 5,0089 1075 1077 1075,8 1075,9 162,9 25 1,02 1,01 5,0972 2,5 820 823 821,9 821,7 20,9 25 0,13 1,52 5,0022 795 800,9 794,2 796,7 7,0 25 0,04 3,64 PL1.1.4 nh h ng c a nhi t đ B ng 1.1.4 S li u kh o sát nh h Kh i l ng cân Nhi t đ Di n Di n Di n tích tích pick tích pick pick ng c a nhi t đ Trung bình mg/L Vdm Hàm l ng Sai s 5,0204 35 900 899 898,3 899,1 64,1 25 0,399 0,876 5,0243 40 909 910 908,4 909,1 69,7 25 0,433 0,811 5,1291 45 1096 1095 1093,9 1095 173,5 25 1,051 1,046 5,0084 50 1376 1374 1375,8 1375,3 330 25 2,058 1,093 129 5,0932 55 1220 1222 1221,1 1221 243,9 25 1,490 1,001 5,0082 60 886,8 885 884,3 885,4 56,5 25 0,352 1,304 PL1.2 Kh o sát nh h ng đ ng th i u ki n Ph l c 2: PL 2.1 Ph FTIR Hình PL 2.1: Ph FTIR c a axit ganoderic A 130 Hình PL 2.2: Ph FTIR c a axit ursolic Hình PL 2.3: Ph FTIR c a cao chi t Ph l c 3: S li u th nghi m ho t tính sinh h c c a cao chi t PL3.1: S li u th nghi m kh n ng b t g c t DPPH PL3.1.1 S li u kh n ng b t g c t DPPH c a axit ascorbic 131 N ngăđ (µg/mL) Ph nătr măb tăg căt ădoăDPPH 2.5 24.38 33.5 10 42.87 15 57.25 20 76.88 25 92.85 PL3.1.2 S li u kh n ng b t g c t DPPH c a cao chi t N ngăđ (µg/mL) Ph nătr măb tăg căt ădoăDPPH 96,5 2,52 193 25,64 289,6 45,83 386,1 70,98 482,6 95,56 PL3.2: S li u th nghi m n ng l c kh s t PL3.2.1 S li u n ng l c kh c a axit ascorbic N ngăđ (µg/mL) ăh păthu 0,05 0,2475 0,1 0,4246 0,2 0,59418 0,3 0,76545 0,4 0,98942 0,5 1,092 132 0,6 1,353 1,574 1,686 PL 3.2.2 S li u n ng l c kh c a cao chi t N ngăđ (µg/mL) ăh păthu 0,9522 0,03949 1,9304 0,13363 2,8056 0,2587 3,8608 0,32781 4,826 0,39951 9,652 0,93241 PL 3.3: K t qu th nghi m ho t tính kháng ung th 133 PL 3.4: K t qu th nghi m ho t tính kháng khu n 134 PH N LÝ L CH TRÍCH NGANG H tên: TR Nă T Ngày, tháng, n m sinhμ 10/12/1λλ7 a ch liên l c: 127 đ ng D5, Ph N i sinhμ B n Tre ng 25, Qu n Bình Th nh, Thành ph H Chí Minh S n tho i: 0388772893 Email: trandodat@hcmut.edu.vn QUỄăTRỊNHă ÀOăT O  09/2015-09/2019: Cơng Ngh K thu t Hóa h c, Tr ng i h c Nông Lâm Tp HCM  07/2020-nay: Khoa K thu t Hóa h c, Tr ng i h c Bách khoa, HQG-HCM Q TRÌNH CƠNG TÁC  2020: Phịng thí nghi m Tr ng m D u khí HQG-HCM Cơng ngh Hóa h c ... tháng, n m sinh? ? 10/12/1997 N i sinh? ? B n Tre Chuyên ngànhμ K thu t Hóa h c Mư s μ 8520301 I TÊN TÀI Tên ti ng Vi t: Nghiên c u thu nh n cao chi t t n m linh chi b ng k thu t CO2 siêu t i h n... CO2 siêu t i h n c l a ch n cho q trình trích ly phân tách thành ph n ho t tính t thu c quý Vì v y, đ tài đ c th c hi n v i tiêu đ ? ?Nghiên c u thu nh n cao chi t t n m linh chi b ng k thu t CO2. .. chi t t n m linh chi b ng k thu t CO2 siêu t i h n th nghi m ho t tính sinh h c” m t h c ut ng đ i m i t i Vi t Nam v a có tính ng d ng hi u qu cao v a thân thi n v i môi tr thu đ ng nghiên ng