TỔNG HỢP VÀ THỬ NGHIỆM HOẠT TÍNH SINH HỌC MỘT SỐ DẪN XUẤT MỚI CỦA SULFONAMIDE VÀ SULFONYLUREA TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC

1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - THẠCH THỊ DÂN TỔNG HỢP VÀ THỬ NGHIỆM HOẠT TÍNH SINH HỌC MỘT SỐ DẪN XUẤT MỚI CỦA SULFONAMIDE VÀ SULFONYLUREA Chuyên ngành: Hóa Hữu Mã số: 44 0114 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC TP HỒ CHÍ MINH - 2022 Cơng trình hồn thành tại: Học viện Khoa học Công nghệ Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Đặng Chí Hiền TS Đặng Văn Sử Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án Tiến sĩ, họp Viện Công nghệ Hóa học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam vào hồi … giờ, ngày … tháng … năm 2022 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Học viện Khoa học Công nghệ - Thư viện Quốc gia Việt Nam MỞ ĐẦU Tính cấp thiết luận án Kháng thuốc kháng sinh xảy loại vi sinh vật tiến hóa để đề kháng mạnh hoàn toàn với kháng sinh mà trước có thể dùng để điều trị Sulfonamide đặc biệt coi tiền chất thiết yếu để phát triển loại thuốc ngành Dược Các Sulfonamide thường hoạt tính sinh học kháng khuẩn, kháng nấm, kháng viêm, gây độc tế bào ung thư… Trong tế bào vi khuẩn, sulfonamide chất ức chế cạnh tranh enzyme dihydropteroate synthase tham gia vào trình tổng hợp folate Một số loại thuốc sulfonamide phát triển từ hợp chất thơm có cấu trúc dị vòng (heterocyclic) thiazole, triazole, imidazole, oxazole, pyrole pyrazole sử dụng điều trị kháng khuẩn Sulfonamide sulfamethoxazole loại thuốc trị liệu kháng khuẩn đơn giản thường sử dụng điều trị vi khuẩn gram dương gram âm điều trị nấm nhiễm trùng động vật nguyên sinh Các sulfonamide gây độc cách chọn lọc vi khuẩn thông qua việc ngăn chặn tổng hợp acid folic Bên cạnh đó, số thuốc chống viêm ức chế hoạt động enzyme COX-2 chọn lọc Celecoxib, Rofecoxib Valdecoxib gọi chung Coxib, chúng có khả giảm tác dụng phụ hệ thống tiêu hóa so với thuốc NSAIDs thông thường Cấu trúc chung Coxib bao gồm lõi có cấu trúc dị vòng (heterocyclic) thiazole, triazole, imidazole, oxazole, pyrole pyrazole Những nghiên cứu gần cho thấy dẫn xuất vòng pyrazole có hoạt tính tốt khả kháng viêm yếu tố định độ chọn lọc COX-2 hiệu thuốc thể Ngoài ra, hợp chất sulfonylurea có hoạt tính sinh học chống ung thư, lợi tiểu, chống viêm, chống sốt rét chống nhiễm trùng Trong đó, hợp chất chứa dị vòng pyrazole nhận quan tâm nhiều nhà nghiên cứu hoạt tính sinh học đa dạng chúng Một số dẫn xuất chứa dị vòng pyrazole có tác dụng điều trị hen suyễn, viêm khớp, tăng hoạt tính số enzyme… số dẫn xuất khác có khả kháng khuẩn, kháng nấm, ức chế khối u Chính hoạt tính sinh học ưu việt hợp chất sulfonamide sulfonylurea nên chọn đề tài luận án là: "Tổng hợp thử nghiệm hoạt tính sinh học số dẫn xuất sulfonamide sulfonylurea" nhằm tổng hợp dẫn xuất sulfonamide sulfonylurea định hướng có hoạt tính sinh học, góp phần mở rộng hướng nghiên cứu tìm thuốc có tác dụng điều trị số bệnh nấm, khuẩn gây bệnh, kháng sinh thuốc có tác dụng gây ức chế hoạt động tế bào ung thư Mục tiêu đề tài Tổng hợp số dẫn xuất sulfonamide sulfonylurea chứa khung pyrazole, khung thiazolidine-4-one định hướng thử nghiệm số hoạt tính sinh học dẫn xuất tổng hợp Nội dung luận án Tổng hợp dẫn xuất sulfonamide chứa khung pyrazole từ sulfanilamide qua trung gian chalcone 4-hydrazinylbenzenesulfonamide Tổng hợp dẫn xuất sulfonamide chứa khung thiazolidine-4-one từ sulfanilamide qua trung gian phenylhydrazone 4-hydrazinylbenzene sulfonamide Tổng hợp sulfonylurea từ dẫn xuất sulfonamide chứa khung pyrazole dẫn xuất aryl isocyante Thử nghiệm hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn, kháng viêm, độc tính tế bào Những đóng góp luận án Tổng hợp 85 hợp chất đó có 32 dẫn xuất mới, đó có 25 dẫn xuất sulfonamide chứa khung pyrazole từ 4-hydrazinylbenzene sulfonamide dẫn xuất chalcone, dẫn xuất sulfonamide chứa khung 4-thiazolidinone từ dẫn xuất phenylhydrazone mercapto acetic acid, dẫn xuất sulfonylurea từ dẫn xuất sulfonamide chứa khung pyrazole dẫn xuất isocyante - Đã ứng dụng thành công kỹ thuật vi sóng điều chế dẫn xuất phenylhydrazone, phản ứng đóng vòng tạo dị vòng khung pyrazole, phản ứng đóng vòng tạo dị vòng khung thiazolidine-4-one, phản ứng tổng hợp sulfonylurea từ dẫn xuất sulfonamide chứa khung pyrazole góp phần cải tiến hiệu suất rút ngắn thời gian phản ứng - Kết thử nghiệm hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn, kháng viêm, độc tính tế bào dẫn xuất sulfonamide, đặc biệt kết thử nghiệm cho thấy tiềm kháng viêm tốt dẫn xuất sulfonamide chứa khung pyrazole CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN Phần trình bày tổng quan sulfonamide, sulfonylurea, chalcone, pyrazole, ứng dụng vi sóng tổng hợp hữu cơ, tình hình nghiên cứu ngồi nước tổng hợp, hoạt tính sinh học dẫn xuất sulfonamide chứa khung pyrazole thiazolidine-4-one sulfonylurea CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.1 Hóa chất ngun liệu Các loại dung mơi hóa chất sử dụng thực nghiệm trình bày mục 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.2.1 Tổng hợp dẫn xuất sulfonamide khung pyrazole Để tổng hợp dẫn xuất sulfonamide chứa khung pyrazole, chọn nguyên liệu đầu sulfanilamide, dẫn xuất benzaldehyde (hoặc dẫn xuất cinnamaldehyde) dẫn xuất acetophenone Trước hết, tạo muối diazonium từ sulfanilamide chuyển hóa thành 4-hydrazinylbenzene sulfonamide (D1) Tiếp theo tổng hợp dẫn xuất chalcone (D1a-D35a) từ dẫn xuất benzaldehyde (hoặc dẫn xuất cinnamaldehyde) dẫn xuất acetophenone Phản ứng đóng vòng (2+3) tạo dẫn xuất sulfonamide chứa khung pyrazole (D1bD35b) thực 4-hydrazinylbenzene sulfonamide với dẫn xuất chalcone (D1a-D35a) Các giai đoạn phản ứng mơ tả trình bày qua sơ đồ 2.1 2.2.2 Tổng hợp dẫn xuất sulfonamide khung thiazolidine-4-one Trước hết, 4-hydrazinylbenzene sulfonamide (D1) (tạo thành từ sulfanilamide) phản ứng với dẫn xuất benzaldehyde tạo thành imine dạng phenylhydrazone (D1c-D5c) Tiếp đó thực phản ứng đóng vòng base Schiff thành sulfonamide khung thiazolidine-4-one (D1d-D5d) diện mercaptoacetic acid Các giai đoạn phản ứng trình bày qua sơ đồ 2.1 theo phương pháp hồi lưu thông thường phương pháp chiếu xạ vi sóng 2.2.3 Tổng hợp dẫn xuất sulfonylurea Phản ứng tổng hợp dẫn xuất sulfonylurea thực cách đun hồi lưu hỗn hợp dẫn xuất sulfonamide với isocyanate, xúc tác K 2CO3 dung môi acetone khan với tổng thời gian > 24 hồi lưu điều kiện chống ẩm tốt Chúng chọn thực phản ứng điều kiện vi sóng (450W), nhằm cải tiến hiệu suất rút ngắn thời gian phản ứng, thể qua sơ đồ 2.1 O R2 MeOH, NaOH 25oC, 5h R3 R2 O H H R1 O O O R2 R3 (D29a-D35a) R1 (D1a-D28a) SO2NH2 H2N Sulfanilamide NaNO2, SnCl2/HCl 0oC N N MeOH, reflux 6h or MW, 45 H2N MeOH, NH R2 reflux 6h or MW, 45 R2 N R3 N R1 (D1) (D29b-D35b) R1 SO2NH2 CHO MeOH reflux, 240 min; or MW, 1h H CH N N R1 (D1b-D28b) SO2NH2 SO2NH2 K2CO3/acetone (dry) Aryl isocyanates, reflux, 12h or MW, 1h HCl, pH SO2NH2 (D1c-D5c) HSCH2COOH R1 reflux, 120 min; or MW, 10-12 R1 HN HN S N O S O O N N R2 R4 NH (D3e, D10e, D21e, D24e, D26e) O (D1d-D5d) SO2NH2 Sơ đồ 2.1 Tổng hợp dẫn xuất sulfonamide khung pyrazole, khung thiazolidine-4one dẫn xuất sulfonylurea từ sulfanilamide 2.3 Các phương pháp phân lập, xác định tính chất vật lý cấu trúc dẫn xuất sulfonamide sulfonylurea Mục trình bày phương pháp phân lập hợp chất tinh khiết: sắc ký lớp mỏng (TLC), rửa nhiều lần dung môi, kết tinh sắc ký cột Các phương pháp xác định tính chất vật lý cấu trúc: điểm nóng chảy, phổ hồng ngoại biến đổi Fourier (FTIR), phổ khối lượng phun mù điện phân giải cao lần (HR-ESI-MS) cộng hưởng từ hạt nhân chiều ( 1H-NMR 13C-NMR) hai chiều (HSQC HMBC) 2.4 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính sinh học Nguyên tắc xác định, cách tiến hành đánh giá kết xác định hoạt tính kháng VSV, gây độc tế bào kháng viêm dẫn xuất tổng hợp trình bày nội dung CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Tổng hợp dẫn xuất sulfonamide khung pyrazole (D1b-D35b) R2 R1 O R1 N R2 H2N HN (D1a-D28a) R1 H2NO2S SO2NH2 N (D1b-D28b) R3 MeOH, MW, 40 O R3 (D29a-D35a) D1b R1 = H, R2 = H D2b R1 = H, R2 = 4-Me D3b R1 = H, R2 = 2-OH D4b R1 = H, R2 = 3-OH D5b R1 = H, R2 = 2-OMe D6b R1 = H, R2 = 4-OMe D7b R1 = H, R2 = 2-Cl D8b R1 = H, R2 = 3-NO2 D9b R1 = 4-Me, R2 = H D10b R1 = 4-Me, R2 = 4-Me D11b R1 = 4-Me, R2 = 3-OH D12b R1 = 4-Me, R2 = 2-OMe D13b R1 = 4-Me, R2 = 4-Cl D14b R1 = 4-Me, R2 = 3-NO2 R1 N D15b R1 = 4-OMe, R2= H D16b R1 = 4-OMe, R2= 4-Me D17b R1 = 4-OMe, R2= 4-OMe D18b R1 = 4-OMe, R2= 2,3-di-OMe D19b R1 = 4-OMe, R2= 2-Cl D20b R1 = 4-OMe, R2= 3-NO2 D21b R1 = 4-Cl, R2= H D22b R1 = 4-Cl, R2= 3-OH D23b R1 = 4-Cl, R2= 2-OMe D24b R1 = 4-Cl, R2= 3,4-di-OMe D25b R1 = 4-Cl, R2= 3-NO2 D26b R1 = 4-F, R2= 4-Me D27b R1 = 4-F, R2= 4-OMe D28b R1 = 4-F, R2= 3-NO2 N (D29b-D35b) H2NO2S D29b R1 = H, R3= H D30b R1 = 4-Me, R3= H D31b R1 = 4-OMe, R3= H D32b R1 = 2,5-di-OMe, R3= H D33b R1 = 4-Cl, R3 = H D34b R1 = 4-F, R3 = H D35b R1 = 3-NO2, R3 = H Sơ đồ 3.3 Tổng hợp 1,3,5-triarylpyrazole sulfonamide (D1b-D35b) Phản ứng diễn theo chế cộng nucleophile (AN) vào nhóm carbonyl với tác nhân đôi electron tự nguyên tử nitơ hợp chất 4-hyrazinylbenzene sulfonamide (Sơ đồ 3.4) + O :O : H NH HN H+ H N H2N H O H OH H -H2O N N N N N H : O: NH H Sơ đồ 3.4 Cơ chế đóng vòng pyrazole Xác định cấu trúc dẫn xuất sulfonamide khung pyrazole (D1b-D35b) Cấu trúc hợp chất triarylpyrazole D1b-D35b kiểm tra phương pháp phổ (FT-IR, 1H, 13C-NMR, HR-MS) (Phụ lục 3) Trên phổ IR D1b-D35b, có vân phổ hấp thụ 3387 3272 cm-1 đặc trưng cho dao dộng liên kết -NH tương ứng Ngoài ra, dãy dao động bất đối xứng đối xứng cho liên kết SO2 có thể thấy quanh vị trí 1335 1145 cm-1 Trên phổ 1H-NMR, xuất tín hiệu proton (có độ dịch chuyển hóa học  3,22, 3,97 5,83 ppm) gán cho Ha (1H, -CH2), Hb (1H, -CH2) Hx (1H, NCHCH2) pyrazole Các tín hiệu proton NH2 có thể thấy vị trí  6,22 ppm sử dụng dung môi acetone-d6,  4,6 ppm sử dụng dung môi CDCl3 hay  7,03 ppm sử dụng dung môi DMSO-d6 Các sulfonamide chứa khung triarylpyrazole mang nhóm styryl D29b-D35b có diện hai proton δ 6,71 ppm (d, J = 16,0 Hz) 6,31 ppm (dd, J = 16,0; 7,5 Hz) cho thấy nối đôi liên hợp nhóm styryl tồn dạng cấu hình trans- Sự tạo thành vòng pyrazole chứng minh xuất tín hiệu phổ 13C-NMR vị trí 57,6, 41,9 154,1 ppm (gán cho C5, C4 C3 tương ứng) Trên khối phổ HR-MS (ESI) cho giá trị [M+H]+ D1b-D35b, phù hợp với khối lượng phân tử (M) dẫn xuất dihydro-1H-pyrazol-1-ylbenzene sulfonamide Theo tài liệu tra cứu Chemical Abstract hệ thống liệu Scifinder cập nhật 2020, có 25 hợp chất sulfonamide khung triarylpyrazole gồm D4b-D6b, D8b, D11b-D14b, D18b-D20b, D22b-D35b tổng hợp qua bước từ sulfanilamide ban đầu Hiệu suất tổng hợp điểm chảy dẫn xuất sulfonamide chứa khung pyrazole phụ thuộc vào vị trí loại nhóm trình bày bảng 3.9 bảng 3.10 Bảng 3.9 Hiệu suất tổng hợp dẫn xuất sulfonamide chứa khung pyrazole phụ thuộc vào vị trí loại nhóm Hiệu suất cao (78-81%) Hiệu suất trung bình (< 60%) R1 R2 R3 %H Chất R1 R2 R3 %H Chất H o-OMe 80 D5b H p-Me 57 D2b H o-Cl 79 D7b H p-OMe 55 D6b p-Me p-Me 80 D10b p-OMe H 57 D15b p-Me m-OH 80 D11b p-OMe p-Me 54 D16b p-Me o-OMe 78 D12b p-OMe 2,3-diOMe 56 D18b p-Cl o-OMe 78 D23b p-OMe m-NO2 57 D20b p-Cl 3,4-diOMe 80 D24b p-Cl m-NO2 56 D25b H Cinnamal 78 D29b p-F p-Me 53 D26b p-F Cinnamal 81 D34b p-F m-NO2 54 D28b 10 Nhận xét Kết bảng 3.10 cho thấy, sử dụng benzaldehyde có nhóm vị trí ortho-, khơng có nhóm dùng cinnamaldehyde, tạo dẫn xuất sulfonamide khung pyrazole có điểm chảy cao 220oC, vị trí nhóm loại nhóm hút hay đẩy electron dẫn xuất acetophenone Các benzaldehyde có nhóm vị trí para-, meta- cho nhóm dẫn xuất có điểm chảy 160oC với vị trí nhóm para- dẫn xuất acetophenone (ngoại trừ benzaldehyde nhóm m-NO2 kết hợp với dẫn xuất acetophenone có nhóm pCl có điểm chảy 220oC) 3.2 Tổng hợp dẫn xuất sulfonamide khung thiazolidine-4-one (D1d-D5d) R1 SO2NH2 HSCH2COOH R1 S N CH N NH (D1c-D5c) Reflux, 120min (MW, 10 min.) NH O (D1d-D5d) SO2NH2 D1d: R1= H; D2d: R1 = 4-Me; D3d: R1 = 4-OMe; D4d: R1 = 2-OH; D5d: R1 = 4-Cl Sơ đồ 3.7 Tổng hợp dẫn xuất sulfonamide chứa khung thiazolidine-4-one từ dẫn xuất phenylhydrazone (D1d-D5d) Trong phản ứng đóng vịng, đơi electron tự nhóm HS-CH2COOH tác kích vào nhóm carbonyl dẫn xuất phenylhydrazone, lúc phân tử nước tách tạo thành dẫn xuất sulfonamide khung thiazolidine-4-one 11 Xác định cấu trúc sulfonamide khung thiazolidine-4-one (D1dD5d) Trên phổ IR D1d-D5d, có vân phổ hấp thụ 3265 1690 cm-1 đặc trưng cho dao dộng liên kết -NH >C=O tương ứng Ngoài ra, dãy dao động bất đối xứng đối xứng cho liên kết SO2 có thể thấy quanh vị trí 1330 1155 cm-1 Trên phổ 1H-NMR, xuất tín hiệu proton có độ dịch chuyển hóa học  3,80, 3,90 5,90 ppm gán cho Ha (1H, -CH2), Hb (1H, -CH2) Hx (1H, S-CH) 4-thiazolidinone góp phần xác nhận cấu trúc hợp chất Các tín hiệu proton amine thấy rõ quanh vị trí  8,6-8,70 ppm sử dụng dung mơi DMSO-d6 Sự tạo thành vịng thiazolidinone cịn chứng minh xuất tín hiệu phổ 13C-NMR vị trí 29, 60 169 ppm (gán cho C-5, C-2 CO tương ứng) Trên khối phổ HR-MS (ESI) cho giá trị [M+H]+ D1d-D5d, phù hợp với khối lượng phân tử (M) dẫn xuất sulfonamide chứa khung thiazolidine-4-one Theo tài liệu tra cứu Chemical Abstract hệ thống liệu Scifinder cập nhật 2019, có hai hợp chất sulfonamide chứa khung thiazolidine-4-one D3d, D4d tổng hợp từ phenylhydrazone mercaptoacetic acid Cấu trúc hợp chất D1d-D5d trình bày Phụ lục 3.3 Tổng hợp dẫn xuất sulfonylurea Đã tổng hợp thành công 05 dẫn xuất sulfonylurea (Tra cứu Scifinder 11-2020) qua bước tính từ sulfanilamide với hiệu suất tồn phần 21-49% Phổ FT-IR có vân phổ hấp thụ 3352 1691 cm-1 đặc trưng cho dao dộng liên kết -NH >C=O tương ứng Dãy dao động bất đối xứng đối xứng cho liên kết SO2 có thể thấy quanh vị trí 1336 1147 cm-1 12 Trên phổ 1H-NMR hợp chất D3e độ dịch chuyển hoá học  3,16 ppm 3,16 (dd, J = 17,5, 5,5 Hz, 1H), 3,96 ppm 3,96 (dd, J = 17,5, 12,0 Hz, 1H) 5,74 ppm 5,74 (dd, J = 12,0, 5,0 Hz, 1H) gán cho H (1H, -CH2), H (1H, -CH2) Hx (1H, NCHCH2) khung pyrazole,  2,10 ppm (s, 3H) gán cho nhóm -CH3 vịng thơm vị trí ortho-, tín hiệu proton mũi đơn  9,93 ppm (s, 1H) gán cho nhóm (-OH) vịng thơm vị trí ortho-, vị trí góp phần xác nhận cấu trúc hợp chất (D3e) Tín hiệu proton nhóm -NH thấy rõ vị trí  7,99 ppm (s, 1H) sử dụng dung môi DMSO-d6 Phổ 13C-NMR vị trí 17,4, 154,2 ppm gán cho C nhóm -CH3 nhân tolyl C nhóm C=O tương ứng Kết phân tích phổ 1D-NMR sulfonylurea cịn kiểm tra xác nhận lại qua mối tương quan proton carbon phổ 2D-NMR (HMBC HSQC) 3.4 Kết thử nghiệm hoạt tính sinh học Kết thử nghiệm hoạt tính kháng vi sinh vật (Bảng 3.23): 33 dẫn xuất triarylpyrazole sulfonamide dẫn xuất thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn hai vi khuẩn Gram âm (E coli P aeruginosa), hai vi khuẩn Gram dương (B subtillis S aureus), hai loại nấm (A Niger F Oxysporum) hai loại nấm men (C albicans S cerevisiae) Các giá trị MIC xác định từ ba nồng độ thử nghiệm hợp chất tương ứng (25, 50 100μg/mL) Hầu hết hợp chất tổng hợp hoạt tính kháng nấm ngoại trừ D3b, D4b, D11b D22b có giá trị MIC 100 50μg/mL chống lại A niger F oxysporum tương ứng Ngoài ra, tất triarylpyrazole sulfonamide mang vòng styryl (D29bD35b) khung thiazolidinone (D1d-D5d) không ức chế chủng vi sinh vật Đặc biệt, số sulfonamide tổng hợp, hợp chất (D4b, D12b 13 D22b) có nhóm 3-OH thể hoạt tính kháng khuẩn cao hai loại vi khuẩn Gram dương loại nấm men C albicans Tương ứng với nghiên cứu trước đó khẳng định sulfonamide chứa nhóm 2-OH có hoạt tính cao chống lại chủng vi sinh vật kiểm định Các hợp chất khác D14b D21b mang nhóm 4-Cl vịng benzen có hoạt tính cao chủng Nhìn chung, nhóm hydroxylbenzen 4-chlorobenzene gắn vào vòng pyrazole quan trọng, làm tăng cường hoạt tính kháng khuẩn Từ kết có thể nhận định rằng, sulfonamide thuốc kháng khuẩn có phổ tác dụng rộng, có hiệu chống lại vi khuẩn Gram (+) số vi khuẩn gram (-), vi khuẩn đường ruột E coli, Klebsiella, Salmonella, Shigella Enterobacter Kết thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào (Bảng 3.24): hoạt tính chống tăng sinh in vitro tất triarylpyrazole sulfonamide tổng hợp thử nghiệm hai dòng tế bào ung thư biểu mô phổi (A549) ung thư biểu mô cổ tử cung (HEP-2C) người theo phương pháp sulphorhodamine B (SRB) (Bảng 3.24) Kết dược lý 10 hợp chất gồm D5b, D11b, D13b, D14b, D16b, D18b, D19b, D21b-D23b cho thấy có giá trị sống sót tế bào thấp 50% hai dòng tế bào ung thư, D19b ức chế Hep-2C với tỷ lệ sống sót tế bào 46,90  2,21% Trong đó, 05 hợp chất D5b, D13b, D21b-D23b cho ức chế hoàn toàn (100%) hai dòng tế bào nồng độ thử nghiệm 10μg/mL Trong đó, triarylpyrazole sulfonamide mang vòng styryl D29b-D35b khơng thể hoạt tính chống tăng sinh tế bào ung thư thử nghiệm Chứng tỏ cấu trúc aryl aldehyde ban đầu có vai trò đặc biệt quan trọng để tăng cường độc tính triarylpyrazole sulfonamide Nói chung, hầu hết triarylpyrazole sulfonamide mang nhóm hai vòng benzene 14 -Me, -OMe, -Cl thể độc tính chống lại hai dòng tế bào ung thư cao so với hợp chất không mang nhóm mang nhóm khác -H, -F, -NO2 Đặc biệt, nghiên cứu sâu hợp chất cho thấy nhiều hợp chất số chúng có tác dụng gây độc thấp tế bào động vật có vú Có 06 hợp chất D11b, D16b, D18b-D20b, D22b có giá trị CS tế bào vero 70% nồng độ thử nghiệm 10 μg/mL ellipticine gây độc tính cao với CS 20,66  1,54% nồng độ thử nghiệm μg/mL Có 02 hợp chất D13b D21b có giá trị IC50 (19,22 23,96) chống lại tế bào vero cao so với thuốc tham chiếu với giá trị IC50 14,34 µM Bên cạnh đó, hợp chất cho thấy cấu hình gây độc tế bào tốt Hep-2C giá trị IC50 22,75  0,19, 17,10  1,42, 17,23  2,38, 16,03  1,63, 20,69  0,56, 16,62  1,38 μM Có 05 hợp chất bao gồm D11b, D16b, D18b, D19b, D22b gây độc tế bào A549 giá trị IC50 20,32  2,31, 20,66  2,09, 19,82  1,75, 18,64  1,02 20,02  2,71 μM Kết 05 hợp chất cho tiềm để làm thuốc chống lại tế bào ung thư khơng có độc tính tế bào động vật có vú Kết thử nghiệm hoạt tính kháng viêm Hoạt tính chống viêm khảo sát thử nghiệm nitric oxide (NO), số quan trọng tình trạng viêm đại thực bào, tế bào nội mô tế bào thần kinh tạo theo nhiều trình sinh lý khác Do lượng NO dư thừa có thể liên quan đến tình trạng viêm, việc ức chế sản xuất NO yếu tố để sàng lọc loại thuốc chống viêm mạnh Trong nghiên cứu này, dòng tế bào đại thực bào chuột, Raw 264.7 xử lý lipopolysaccharide (LPS) sử dụng làm mơi trường điều hịa tạo NO Giá trị IC50 tính tốn từ thử nghiệm nồng độ khác 15 độc tính hợp chất tổng hợp chống lại tế bào RAW 264,7 đo theo thử nghiệm SRB 20μg/mL hợp chất.(Bảng 3.25) Khả ức chế sản sinh NO mẫu nghiên cứu thể bảng 3.24 Kết cho thấy, mẫu D4b, D5b, D8b, D20b, D21b, D22b thể hoạt tính ức chế sinh NO với giá trị IC50 từ 5,81 - 64,08 µg/mL Các hợp chất thể hoạt tính cao so với hợp chất tham chiếu Các mẫu lại D1b-D4b, D6b-D9b, D11b, D14b, D16b, D23b-D33b chưa thể hoạt tính nồng độ nghiên cứu Mẫu đối chứng dương L-NMMA hoạt động ổn định thí nghiệm Giá trị IC50 chất thử nghiệm khoảng (14,78 ± 2,44) - (28,36 ± 3,55) μM Từ đó có thể nhận định rằng, hoạt tính kháng viêm triarylpyrazole sulfonamide phụ thuộc vào nhóm vòng benzene acetophenone Các hợp chất có nhóm 4-Cl 4-F gắn vào vòng acetophenone tạo triarylpyrazole sulfonamide D22b, D23b, D25b, D27b, có thể ngăn chặn sản xuất NO cách ức chế hoạt động enzym iNOS Trong vòng benzene chứa nhóm -CH3 -OCH3 khơng thể hoạt động kháng viêm Đáng ý triarylpyrazole sulfonamides D29b-D35b mang vòng styryl khơng có hoạt tính kháng viêm Dựa kết xét nghiệm NO in vitro, 05 hợp chất D4b, D5b, D8b, D23b D25b có độc tính thấp tế bào đại thực bào với giá trị CS 30% nồng độ 20μg/mL có thể mang lại hiệu điều trị viêm Vì chúng chọn để khảo sát hoạt tính chống viêm in vivo phương pháp gây phù tai chuột Khả ức chế D4b, D5b, D8b, D23b D25b đánh giá cách đo độ dày tai phần trăm ức chế tính tốn cách so sánh độ dày tai chuột xử lý hợp chất đối chứng thời điểm khác 15, 30 60 phút [Sharma, J., A Al-Omran, 2007; Banez, M.J., 2020; Yun, K.-J 2008] Tất 16 hợp chất thử nghiệm cho thấy giảm phù nề tai đáng kể sau 15 phút ức chế viêm tìm thấy khoảng 30% so với chất đối chứng Trong đó, triarylpyrazole sulfonamide D4b D25b cho thấy khả ức chế viêm cao thời gian thử nghiệm Kết thể Hình 3.6 thời gian điều trị khác 15, 30 60 phút Dấu hoa thị cho thấy khác biệt đáng kể p < 0,05 Điều cho thấy hợp chất 4b 25b loại thuốc mạnh để điều trị triệu chứng viêm Hình 3.7 Hình ảnh sau 15 phút thử nghiệm in vivo ức chế phù tai chuột sử dụng D4b (A), D5b (B), D8b (C), D23b (D), D25b (E) mẫu điều khiển (F) Khả ức chế chất sau 15, 30 60 phút (G); Dấu * cho thấy khác biệt có ý nghĩa thống kê so với mẫu điều khiển (p < 0,05) 17 Bảng 3.23 Kết thử nghiệm hoạt tính kháng VSV sulfonamide khung pyrazole (D1b-D33b) sulfonamide khung thiazolidine-4-one (D1d-D5d) Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC, g/mL) TT 10 11 12 13 14 Ký hiệu D1b D2b D3b D4b D5b D9b D11b D12b D13b D14b D15b D21b D22b D26b Vi khuẩn Gr (-) Vi khuẩn Gr (+) Nấm mốc Nấm men E.coli P.aeruginosa B.subtillis S.aureus A.Niger F.oxysporum S.cerevisiae C.albicans (-) 50 (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) 25 (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) 25 12,5 50 (-) (-) 50 100 25 (-) (-) 50 100 25 25 25 12,5 25 (-) 100 50 (-) 50 (-) (-) 50 50 25 25 (-) 12,5 (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) 25 (-) 100 (-) 25 (-) 50 (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) 50 (-) (-) (-) >50 (-) 100 (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) 25 >50 25 (-) (-) 25 (-) 50 (-) (-) 50 50 50 18 Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC, g/mL) TT Ký hiệu Vi khuẩn Gr (-) Vi khuẩn Gr (+) Nấm mốc E.coli B.subtillis A.Niger P.aeruginosa S.aureus Nấm men F.oxysporum 15 D27b (-) (-) 50 25 (-) (-) 16 D28b (-) (-) 100 (-) (-) (-) 17 Tetracycline 5,5 11,0 18 Streptomycin 7,2 11,4 19 Nystatin 23,1 11,6 Bảng 3.24 Hoạt tính chống tăng sinh dẫn xuất sulfonamide khung pyrazole TT Hợp chất D4b D5b D7b D8b D9b D11b D12b D13b D14b S.cerevisiae C.albicans (-) (-) 5,8 (-) (-) 11,6 IC50 (μM) CS (%)a Hep-2C A549 Vero Hep-2C A549 Vero 79,082,16 99,860,09 99,080,68 96,781,51 23,622,80 98,170,48 0 83,543,07 99,570,41 99,890,07 97,190,22 11,543,23 98,741,60 3,252,75 6,990,97 99,780,68 2,441,20 20,140,86 17,422,95 22,750,19 16,560,89 16,261,49 18,160,83 20,322,31 18,472,31 20,872,38 5,99 19,22 12,59 ... pyrazole dẫn xuất aryl isocyante 3 Thử nghiệm hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn, kháng viêm, độc tính tế bào Những đóng góp luận án Tổng hợp 85 hợp chất đó có 32 dẫn xuất mới, đó có 25 dẫn xuất sulfonamide. .. luận án là: "Tổng hợp thử nghiệm hoạt tính sinh học số dẫn xuất sulfonamide sulfonylurea" nhằm tổng hợp dẫn xuất sulfonamide sulfonylurea định hướng có hoạt tính sinh học, góp phần mở rộng hướng... thử nghiệm số hoạt tính sinh học dẫn xuất tổng hợp Nội dung luận án Tổng hợp dẫn xuất sulfonamide chứa khung pyrazole từ sulfanilamide qua trung gian chalcone 4-hydrazinylbenzenesulfonamide Tổng