PHƯƠNG PHAP DỊNH LOẠI NẤM SỢI

PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LOẠI NẤM SỢI I Yêu cầu: - Có chủng nấm sợi thật khiết (khơng lẫn tạp nấm vi sinh vật khác) - Các chủng cần định loại phải nuôi cấy môi trường, nhiệt độ, thời gian nuôi cấy theo quy định khoá phân loại đối vối chi nấm mốc II Quy trình định loại chủng nấm sợi: Quan sát đặc điểm phân loại chủng nấm sợi cần định loại 1.1 Quan sát đặc điểm khuẩn lạc thạch - Hình dáng - Kích thước (đường kính, chiều dày) - Dạng mặt (nhung mượt, mịn, len xốp, dạng hạt, lồi lõm, có khía hay khơng…) - Màu sắc khuẩn lạc mặt mặt - Dạng mép khuẩn lạc (mỏng, dày, phẳng, nhăn nheo…) - Giọt tiết có (nhiều, ít, màu sắc) - Mùi khuẩn lạc (có, khơng mùi) - Sắc tố hồ tan (màu mơi trường xung quanh khuẩn lạc) có - Các cấu trúc khác: bó sợi, bó giá (Synnematous or sporodochial conidiomata) cấu trúc mang bào tử trần (Fruit body - conidiomata) đĩa giá (acervuli) túi giá (Pycnidia), đệm nấm (Stroma), hạch nấm (sclerotia) vv 1.2 Quan sát đặc điểm vi học - Sợi nấm: (hyphae) có vách ngăn, khơng có vách ngăn, có mấu - Bào tử trần(conidia): kiểu phát sinh bào tử trần (ở nấm bất tồn), hình dạng, kích thước, màu sắc, bề mặt (nhẵn, có gai, gồ ghề) cách xếp đơn độc chuỗi gốc non (basipetal) chuỗi gốc già (acropetal) khối cầu vv… - Bộ máy mang bào tử (spore apparatus): nang bào tử nang bào tử nhỏ (nếu có) (Sporangia & Sporangiola) hình dáng, kích thước, màu sắc, bề mặt nang, cuống nang, khơng có nhánh (nhánh mọc vịng, mọc cách, hợp trục vv…); bào tử nang ( hình dạng, kích thước, bề mặt, …) nấm tiếp hợp - Bộ máy mang bào tử trần (conidiogenous apparatus): giá bào tử trần (conidiophore) - kích thước, đường kính, chiều dài, bề mặt (nhẵn, có gai, có nốt sần, vv…) màu sắc, có vách ngang khơng, có khơng có cấu trúc đặc biệt tế bào chân (foot cell) sợi cứng (setae) tăng trưởng gốc có khơng có dạng hình thái đặc biệt bó giá, đệm giá Các nhánh (của bào tử trần) số lượng nhánh, kích thước bề mặt, màu sắc, cách xếp (đối xứng, không đối xứng sát tẽ rộng, vị trí dọc giá bào tử trần tập trung giá)vv… - Tế bào sinh bào tử trần (conidiogenous cell) Kiểu tế bào sinh bào tử trần (thể bình, dạng có khun đỉnh, dạng sinh bào tử trần đồng thời, dạng (dạng bình- phialo type; dạng phân đốt, Annello type) Dạng sinh bào tử trần không đồng thời (Aleurio- type), bào tử đính kiểu nảy chồi (Blasto - type), dạng sinh bào tử trần qua lỗ để lại sẹo (Poro - type) vv hình dạng, kích thước, màu sắc, cách xếp (đơn dộc thành cụm, thành vịng), vị trí (trên sợi nấm, dọc theo giá bào tử trần, nhánh đính giá) vv… - Thể túi (ascocarp) cleistothecium, cần khảo sát vị trí, số lượng, hình dạng, kích thước, màu sắc, bề mặt thể quả, quan sát túi bào tử (ascus) bào tử túi (ascospore) hình dạng, kích thước bề mặt III Tiến hành định loại Căn vào kết quan sát đầy đủ, xác đặc điểm khuẩn lạc đặc điểm vi học tiến hành xác định tên loài (hoặc thứ có) chủng nấm mốc sau: - Dùng khố phân loại nhóm phân loại bậc cao (ngành, ngành phụ, lớp, bộ, họ, chi) để xác định xem nấm mốc thuộc chi nấm mốc Tiếp theo dùng khố phân loại chi để xác định đến loài (thứ) cách so sánh tất đặc điểm quan sát chủng nấm mốc với đặc điểm tương ứng lồi khố phân loại Nếu đặc điểm so sánh phù hợp với đặc điểm lồi mơ tả khố, ta xác định tên lồi chủng nấm mốc cần định loại - Nếu có chủng nấm mẫu lồi (hoặc thứ) vừa xác định tiến hành so sánh đặc điểm hình thái khuẩn lạc, đặc điểm vi học chủng mẫu với đặc điểm tương ứng chủng cần định loại Nếu đặc điểm chủng phù hợp với khẳng định chắn lồi (hoặc thứ) chủng nấm mốc cần định loại - Nếu có chủng nấm mẫu loài (hoặc thứ) vừa xác định tiến hành so sánh đặc điểm hình thái khuẩn lạc, đặc điểm vi học chủng mẫu với đặc điểm tương ứng chủng cần định loại Nếu đặc điểm chủng phù hợp với khẳng định chắn lồi (hoặc thứ) chủng nấm mốc cần định loại KHOÁ PHÂN LOẠI ĐẾN LỚP( Robert A samson, 1984) 1a Khuẩn lạc gồm tế bào nảy chồi, khơng có hệ sợi ( YEAST) NẤM MEN 1b Khuẩn lạc với hệ sợi sinh dưỡng phát triển, bào tử trần bào tử sinh bào tử đặc biệt 2a Bào tử sinh túi bào tử NẤM TÚI (ASCOMYCETES) 2b Bào tử bào tử trần không sinh túi bào tử 3a Hệ sợi khơng có có vách ngăn, thường rộng; bào tử kín sinh nang bào tử kín NẤM TIẾP HỢP (ZYGOMYCETES) 3b Sợi nấm thường có vách ngăn, bào tử trần khơng sinh nang bào tử kín NẤM BẤT TỒN (DEUTEROMYCETES) I LỚP NẤM TIẾP HỢP (ZYGOMYCETES) Đối với nấm mốc thuộc lớp nấm tiếp hợp dụng chuyên luận phân loại sau: - Kerry L.Odonnell, 1979 – Zygomycetes in culture Department of Botany, University of Georgia - M.A.A Schipper, 1973 – A study on variability in Mucorhemalis and related spicies Studies in Mycology, No - M.A.A Schipper, 1978 – On certain species of Mucor with a key to all accepter species Studies in Mycology, No 17 - M.A.A Schipper, 1984 – A revision of the genus Rhizopus – Studies Mycology, No 25 II LỚP NẤM BẤT TOÀN (DEUTEROMYCETES Nấm bất tồn gì: - Nấm bất tồn giai đoạn vơ tính ( Anamorph) nấm túi nấm đảm Đặc điểm đặc trưng: Gồm loài nấm mốc gây nhiễm thực phẩm, có nhiều lồi sinh độc tố (mycotoxin), chi, loài lớp nấm phân loại theo giai đoạn sinh sản vô tính (anamorph) số lồi người ta phát thấy có giai đoạn sinh sản hữu tính (Teleomorph- bào tử túi bào tử đảm) Theo hệ thống phân loại vào đặc điểm phát sinh bào tử trần Hughes (1953) Lớp nấm bất tồn chia thành nhóm: - Nhóm Hyphomycetes: Gồm nấm bất tồn khơng có túi giá đĩa giá (giá sinh bào tử trần sợi nấm sợi nấm kết lại thành bó sợi, bó giá) - Nhóm Coelomycetes: Gồm nấm bất tồn có túi giá đĩa giá, giá bào tử trần thể (Fruit - body) gọi conidiomata - Nhóm Agonomycetes: Gồm nấm bất tồn khơng có bào tử trần Ở chúng tơi giới thiệu khoá phân loại đến chi lớp nấm bất toàn Phân lớp nấm bất toàn: 2.1 Hyphomycetes (1700 chi, 11000 loài) - Các dạng hệ sợi nấm mang bào tử sợi riêng rẽ cụm sợi nấm (như đệm nấm, bó giá), không conidiomata (fruit body) riêng biệt 2.2 Coelomycetes (700 chi, 9000 spp) riêng rẽ - Bào tử trần sinh túi giá, đĩa giá, túi giá dạng cốc đệm giá 1 Bào tử trần, Tế bào sinh bào tử trần, Cuống sinh bào tử trần, Sợi nấm Cơ quan sinh sản vơ tính chi Penicillium Những phận sinh sản vơ tính 3.1 Hypha (sợi nấm) số nhiều Hyphae - Một sợi hệ nấm tản sợi nấm Các tản khác biệt với phần sợi sinh dưỡng hấp phụ chất dinh dưỡng 3.2 Bào tử trần: - Một loại bào tử vơ tính, khơng chuyển động (Zoospose) đặc biệt Một loại phát tán 3.3 Tế bào sinh bào tử trần: - Một tế bào mà từ bào tử sinh trực tiếp 3.3.1 Các kiểu phát sinh bào tử trần a Tản: - Tản toàn - Tản bên b Nảy mầm: - Nảy mầm toàn thể - Nảy mầm từ a-b Dạng tản a- Tạo chuỗi b- Đơn độc a-f Dạng phát sinh kiểu nảy chồi (blastic) a Nảy chồi đơn độc, b Tạo thành chuỗi, c Các Bào tử tạo thành lúc, d Các bào tử có đáy hẹp, e Đáy bằng, f Các bào tử chui qua lỗ 3.3.2 Các kiểu phát triển bào tử trần phát sinh bào tử dạng nảy chồi (blastic),(Theo Katsuhiko Ando, 2002) * Sự phát sinh bào tử phân cắt hồn tồn (ngoại sinh) a Kiểu bào tử đính (Aleurio - type) - Một điểm tế bào sinh bào tử trần, bào tử đơn độc b Kiểu nảy chồi (Blasto - type) - Cấu trúc màng đỉnh vị trí tế bào sinh bào tử trần chuỗi bào tử với vị trí để tạo thành mộ chuỗi liên tiếp không phân nhánh (chuỗi gốc già) * Phát sinh bào tử nội sinh c Dạng bình (Phialo - type) - Các chuỗi bào tử khỏi tế bào sinh bào tử trần vị trí, đơi chuỗi rời tế bào có thay đổi d Dạng phân đốt (Annello - type) - Các chuỗi bào tử khỏi tế bào sinh bào tử trần vị trí cao hơn, chuỗi rời, tế bào có thay đổi 3.4 Vị trí sinh bào tử trần tế bào sinh bào tử trần: a Một vị trí - Bào tử trần phát triển vị trí tế bào sinh bào tử trần b Nhiều vị trí - Bào tử trần phát triển vị trí khác tế bào sinh bào tử trần 3.5 Sự phát triển tế bào sinh bào tử trần: a ổn định - Kích thước tế bào sinh bào tử trần ổn định b Kéo dài - Tế bào sinh bào tử trần phát triển với sản sinh bào tử trần c Giảm dần - Độ dài tế bào sinh bào tử trần giảm bào tử trần sinh 3.6 Cuống sinh bào tử trần: - Một sợi nấm phân nhánh đơn giản (một sợi nấm sinh sản) mang gồm có tế bào sinh bào tử trần mà từ bào tử trần sinh Đôi dùng mô tả cấu trúc biến đổi tế bào sinh bào tử trần 3.6.1 Cuống sinh bào tử trần khơng có, tế bào sinh bào tử trần gồm tế bào sợi nấm a Cuống sinh bào tử trần khơng có, tế bào sinh bào tử trần nằm sợi nấm b Khơng có cuống sinh bào tử trần khơng rõ c Cuống sinh bào tử trần có khơng có vách ngăn, đơn giản khơng phân nhánh d Cuống sinh bào tử trần kéo dài với việc sinh bào tử trần e Cuống có vách ngăn, phát triển đơn độc phân nhánh f Bó cuống bào tử trần (Synemata) Gồm nhóm cuống sinh bào tử trần bó chặt lỏng mang bào tử trần đỉnh đỉnh bên cạnh cuống 3.7.Bào tử trần (conidia) 3.7.1 Hình dáng bào tử trần a Hình dạng đơn giản: Ví dụ: Cầu, gần cầu, elip, hình thận b Bào tử sợi: - Tỷ lệ chiều dài rộng bào tử = 15:1 c Bào tử vách lưới - Bào tử chia nhỏ vách ngăn chéo d Bào tử xoắn ốc - Trục bào tử uốn cong 1800 e Bào tử dạng chữ thập - Bào tử có nhiều trục, có mấu, có lơng mềm chiếm 1/4 chiều dài bào tử 3.7.2 Số tế bào bào tử trần: a Bào tử không vách: Bào tử khơng có vách ngăn b Bào tử kép (dính đôi): Bào tử vách ngăn c Bào tử vách: Bào tử có hai vách ngăn trở lên 3.7.3 Màu bào tử trần: - Trong suốt có màu (nâu, nâu đen…) 3.7.4 Bề mặt bào tử trần: - Gai, hạt, có mấu, nhẵn 3.7.5 Kích thước bào tử trần: (35-)50-200(-300) x (2,0-)2,5-3,5(-4,5)àm 3.7.6 Các hình dạng khác bào tử 1 Hình cầu, Gần cầu, Hình bánh quy, Hình giọt lệ, Hình trứng, Hình trứng ngược, Quả lê, Quả lê ngược, Elíp, 10 Hình elíp chữ nhật, 11 Hình thoi, 12 Hình thoi méo, 13 Elíp nhọn đầu, 14 Hình thoi trịn đầu, 15 Dạng thuyền, 16 Hình thận, 17 Dạng xúc xích Dạng kim, Dạng quăn, Dạng chữ S, Dạng chỉ, Dạng que, Hình trụ, Hình chữ nhật thn, Hình thùng, HÌnh mũ, 10 Hình có vành, 11 Hình chuỗi, 12 Hình củ có mấu, 13 Hình góc cạnh, 14 Hình dâu, 15 16 Dạng xù xì, 17 Dạng gai Xem tiếp Nấm sợi © http://vietsciences.org http://vietsciences.free.fr http://vietsciences2.free.fr - Nguyễn Liên Hoa, Nguyễn Lân Dũng, Lê Hoàng Yến, Nguyễn Văn Bắc ... bào tử trần, Sợi nấm Cơ quan sinh sản vơ tính chi Penicillium Những phận sinh sản vô tính 3.1 Hypha (sợi nấm) số nhiều Hyphae - Một sợi hệ nấm tản sợi nấm Các tản khác biệt với phần sợi sinh dưỡng... Lớp nấm bất toàn chia thành nhóm: - Nhóm Hyphomycetes: Gồm nấm bất tồn khơng có túi giá đĩa giá (giá sinh bào tử trần sợi nấm sợi nấm kết lại thành bó sợi, bó giá) - Nhóm Coelomycetes: Gồm nấm. .. (hoặc thứ) chủng nấm mốc cần định loại KHOÁ PHÂN LOẠI ĐẾN LỚP( Robert A samson, 1984) 1a Khuẩn lạc gồm tế bào nảy chồi, khơng có hệ sợi ( YEAST) NẤM MEN 1b Khuẩn lạc với hệ sợi sinh dưỡng phát