Khảo sát tính chất lý hóa của endo-β-1.4-glucanase từ Trichoderma asperellum SH16

Bài viết trình bày khảo sát tính chất lý hóa của endo-β-1.4-glucanase từ Trichoderma asperellum SH16. Kết quả phân tích cho thấy endo-β-1.4-glucanase từ chủng SH16 được tổng hợp mạnh nhất sau 96 giờ nuôi cấy trong môi trường có 1% carboxymethyl cellulose, với hoạt độ chung là 0,102 u/mL và hoạt độ riêng là 2,694 u/mg protein.

ISSN 1859-1531 - TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG, SỐ 9(82).2014 71 KHẢO SÁT TÍNH CHẤT LÝ HÓA CỦA ENDO-β-1.4-GLUCANASE TỪ TRICHODERMA ASPERELLUM SH16 CHARACTERISTICS OF ENDO-β-GLUCANASE FROM TRICHODERMA ASPERELLUM SH16 Hoàng Tấn Quảng1, Nguyễn Hồng Vân2, Lê Mỹ Tiểu Ngọc1, Nguyễn Hữu Nhân3, Cao Đăng Ngun2, Nguyễn Hồng Lộc2 Viện Cơng nghệ sinh học, Đại học Huế; Email: htquang@hueuni.edu.vn Trường Đại học Khoa học, Đại học Huế; Email: nhloc@hueuni.edu.vn Trường Cao đẳng Lương thực-Thực phẩm, Đà Nẵng; Email: huunhan_t3k@yahoo.com Tóm tắt - Chúng tơi khảo sát tính chất lý hóa endo-β1.4-glucanase (EG) từ chủng Trichoderma asperellum SH16 Kết phân tích cho thấy endo-β-1.4-glucanase từ chủng SH16 tổng hợp mạnh sau 96 nuôi cấy mơi trường có 1% carboxymethyl cellulose, với hoạt độ chung 0,102 u/mL hoạt độ riêng 2,694 u/mg protein Enzyme có nhiệt độ pH hoạt động tối thích 55oC 3,5, độ bền nhiệt thấp (dưới 30oC) hoạt động vùng pH acid (3,0-5,0) Nồng độ 10 mM Mn2+ Co2+ có tác dụng tăng hoạt tính enzyme lên 158 166% enzyme bị ức chế mạnh EDTA, urea Triton X-100, hoạt tính xử lý 1% SDS Trong số nguồn chất nghiên cứu, bột lõi ngơ chất thích hợp cho hoạt động enzyme Kết phân tích điện di SDS cho thấy EG T asperellum SH16 gồm enzyme có khối lượng phân tử khoảng 25, 27, 37, 45 66 kDa Abstract - Characteristics of endo-β-1.4-glucanase (EG) from Trichoderma asperellum SH16 were investigated Maximum activity of extracellular EG from T asperellum SH16 was observed after 96hrs mycelial inoculation in 1% carboxymethyl cellulose medium with total activity of 0.102 u/mL and specific activity of 2,694 u/mg protein The optimum temperature and pH of the enzyme were at 55oC and 3.5, respectively The enzyme was stable over the range of pH 3.0-5.0 and 10-30oC for 30 mins The presence of 10 mM Mn2+, and Co2+ ions increased the enzyme activity up to 158, and 166%, respectively The enzyme was inactivated completely by 1% SDS and partially by EDTA, urea, and Triton X-100 Corn coin powder was the most suitable subtrate for cellulase activity SDS-PAGE and native PAGE showed that EG of T asperellum SH include enzymes and their masses were 25, 27, 37, 45, and 66 kDa, respectively Từ khóa - cellulose; CMCase; endo-β-1,4-glucanase; Trichoderma asperellum; hoạt độ EG Key words - cellulose; CMCase; Trichoderma asperellum; EG activity Mở đầu Phân hủy cellulose trình phức tạp với tham gia nhiều enzyme ngoại bào, enzyme cellulase giữ vai trò chủ đạo Hiện nay, cellulase phân thành ba loại endoglucanase (EC 3.2.1.4), exoglucanase (EC 3.2.1.91) glucosidase (EC 3.2.1.21) Trong đời sống sản xuất, cellulase ứng dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực công nghiệp dệt, công nghiệp giấy bột giấy, chế biến thức ăn gia súc, chế biến bia, rượu, nước trái sản xuất bánh kẹo Trong nông nghiệp, enzyme cịn dùng để kiểm sốt dịch hại nhờ khả phân hủy vách tế bào nấm bệnh từ ức chế phát triển chúng Ngồi ra, cellulase cịn ứng dụng tạo tế bào trần nấm hay thực vật, làm phối tử tinh protein [10] Ở Việt Nam, enzyme thủy phân cellulose đươc phân lập đánh giá từ nhiều nguồn khác loại nấm Trichoderma [11], nấm A niger [8], Penicillium [9] hay từ loại vi khuẩn xạ khuẩn [3, 6, 15]… Ứng dụng enzyme xử lý rác thải chứa cellulose sản xuất phân hữu [6, 11] Trên giới, phân lập xác định tính chất lý hóa loại enzyme cellulase từ nấm Trichoderma nhiều tác giả nghiên cứu cellulase từ T reesei [13, 17, 18], T viride [7, 16], T harzianum [14] hay từ T lignorum [1]… Endoglucanase (EG), gọi endo-β-1,4glucanase hay carboxymethyl cellulase (CMCase), enzyme tham gia phân cắt ngẫu nhiên liên kết β-1,4 glucoside từ bên phân tử cellulose số loại polysaccharide tương tự khác tạo thành oligosaccharide Endo-β-1,4-glucanase tổng hợp từ nhiều nguồn khác tự nhiên, chủ yếu có nguồn gốc từ vi sinh vật [7, 12] Trong báo này, chúng tơi trình bày kết tách chiết xác định tính chất lý hóa endoglucanase từ Trichoderma asperellum SH16 phân lập Thừa Thiên Huế endo-β-1,4-glucanase; Vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Vật liệu Chủng nấm T asperellum SH16 phân lập từ đất đống rơm Quảng Điền, Thừa Thiên Huế [5] 2.2 Phương pháp 2.2.1 Thu nhận EG ngoại bào Nuôi cấy chủng nấm T asperellum SH16 đĩa Petri chứa môi trường Czapeck-Dox nhiệt độ 28oC 48 để thu bào tử Bào tử nấm thu nước cất vô trùng, pha lỗng mẫu đến 107 bào tử/mL, sau cấy mL dịch bào tử vào 100 mL môi trường lỏng Czapeck-Dox Mẫu nuôi 28oC 72 với tốc độ lắc 180 vòng/phút Sợi nấm rửa MgCl2 nuôi môi trường lỏng Czapeck-Dox, glucose thay 1% (w/v) carboxymethyl cellulose (CMC) để cảm ứng sinh tổng hợp EG, điều kiện nuôi cấy 28oC 96 với tốc độ lắc 150 rpm Dịch nuôi cấy ly tâm 10.000 rpm, 10 phút, 4oC, loại bỏ sinh khối nấm, enzyme thô thu bảo quản 4oC cho thí nghiệm [5] 2.2.2 Xác định hoạt độ EG Hoạt độ EG xác định dựa theo Iqbal et al (2011) [7] với CMC làm chất Hỗn hợp phản ứng gồm 300 µL CMC 1% (trong đệm sodium acetate 0,05 M; pH Hoàng Tấn Quảng, Nguyễn Hồng Vân, Lê Mỹ Tiểu Ngọc, Nguyễn Hữu Nhân, Cao Đăng Nguyên, Nguyễn Hoàng Lộc tiến hành 4oC giờ, sau ủ đệm citrate 20 mM 50oC qua đêm có bổ sung 1% (v/v) Triton X-100 để loại SDS Sau gel nhuộm thuốc nhuộm Lugol 2.2.7 Xử lý thống kê Tính trung bình mẫu sai số chuẩn lần lặp lại hoạt tính EG chương trình Microsoft Excel Kết thảo luận 3.1 Xác định thời gian thu nhận enzyme bào Kết trình bày Hình cho thấy enzyme EG ngoại bào tạo nhiều sau ngày nuôi cấy, với hoạt độ chung (HĐC) 0,102 u/mL hoạt độ riêng (HĐR) 2,694 u/mg protein Lượng enzyme sản xuất ngày khơng có thay đổi nhiều so với điểm ngày, chúng tơi chọn thời điểm ngày để thu enzyme nhằm tiết kiệm chi phí 0.12 3.5 3.0 0.09 2.5 2.0 0.06 1.5 Hoạt độ chung 0.03 1.0 Hoạt độ riêng Hoạt độ riêng (u/mg protein) 5,0) với 150 µL dịch enzyme thơ ủ 50oC 30 phút Ngừng phản ứng cách bổ sung 600 µL DNS 1%, hỗn hợp đun sơi phút để tạo màu Đo độ hấp phụ quang sản phẩm tạo thành bước sóng 540 nm Một đơn vị hoạt độ enzyme định nghĩa lượng enzyme có khả xúc tác chuyển hóa µmol glucose phút điều kiện thí nghiệm [18] Hàm lượng glucose tính tốn theo phương trình đường chuẩn y = 0,562x (R2 = 0,962), y nồng độ glucose x OD540nm Hàm lượng protein tổng số dịch chiết xác định theo phương pháp Bradford (1976) [2] dựa vào đường chuẩn albumin huyết bò (BSA) Hoạt độ riêng enzyme EG tính tỷ số hoạt độ chung (unit/mL) protein tổng số (mg/mL) 2.2.3 Ảnh hưởng nhiệt độ pH lên hoạt độ enzyme Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính enzyme khảo sát khoảng từ 10-90oC Độ bền nhiệt khảo sát sau ủ dịch chiết enzyme từ 10-90oC 30 phút [5] Ảnh hưởng pH đến hoạt tính enzyme khảo sát khoảng pH từ 3-8 Đệm sử dụng cho tối ưu pH đệm citrate 20 mM (pH 3-5) đệm phosphate 20 mM (pH 6-8) Dịch enzyme thô kết tủa (NH4)2SO4 70% bão hòa 4oC giờ, sau hịa tan trở lại đệm có pH khác hoạt tính thủy phân CMC xác định nhiệt độ tối ưu [5] 2.2.4 Ảnh hưởng ion kim loại chất ức chế Ảnh hưởng ion kim loại lên hoạt tính EG khảo sát cách ủ enzyme tinh sơ với Al3+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, Mn2+, Fe3+ Hg2+ nồng độ mM 30 phút nhiệt độ phịng Khảo sát hoạt tính thủy phân CMC với dung dịch đệm có pH tối ưu nhiệt độ tối ưu [5] Ảnh hưởng chất ức chế lên hoạt tính EG khảo sát cách ủ enzyme tinh sơ với SDS 1%, EDTA mM, urea M Triton X-100 1% 30 phút nhiệt độ phịng Hoạt tính thủy phân CMC xác định cách cho phản ứng với chất 30 phút với dung dịch đệm có pH tối ưu nhiệt độ tối ưu [5] 2.2.5 Thăm dò khả phân hủy chất cellulose Khả phân hủy loại có chất cellulose khác EG thực cách sử dụng mL enzyme thô để thủy phân 0,05 g chất điều kiện phản ứng tối ưu Các loại chất bao gồm bột giấy, bột rơm, bột vỏ lạc, bột lõi ngô, bột vỏ chuối [15] Các chất loại bỏ đường tự cách đun sôi 10 phút (2-3 lần), sấy khô nghiền thành bột mịn Khả thủy phân chất enzyme khác định dựa lượng glucose giải phóng q trình phản ứng 2.2.6 Xác định khối lượng phân tử Dịch enzyme thô kết tủa (NH4)2SO4 70% bão hòa 4oC Hòa tan kết tủa đệm citrate 20mM (pH 4,0) Thẩm tích làm dịch chiết enzyme đệm citrate 10m M (pH 4,0) Khối lượng phân tử EG xác định phương pháp điện di dịch enzyme gel polyacrylamide 12% có bổ sung chất CMC nồng độ 0,2% Quá trình điện di Hoạt độ chung (u/mL) 72 0.5 0.00 0.0 Thời gian ni cấy (ngày) Hình Sản xuất EG ngoại bào theo thời gian nuôi cấy Theo số tác giả, thời gian để EG tiết môi trường ngoại bào đạt cao tùy thuộc vào chủng nấm Trichoderma cụ thể Nghiên cứu Li et al (2009) [12] cho thấy enzyme EG từ T viride sản xuất nhiều sau 60 ni cấy hệ lên men Trong đó, Baig (2005) [1] thu enzyme EG từ T lignorum có HĐC cao 0,25 u/mL sau ngày ni mơi trường có nguồn carbon CMC 3.2 Ảnh hưởng nhiệt độ Kết khảo sát khoảng nhiệt độ tối thích cho hoạt động enzyme cho thấy enzyme EG có hoạt tính cao 55oC với HĐC 0,151 u/mL HĐR 2,729 u/mg protein Hoạt độ enzyme thể mạnh khoảng 5060oC, sau 60oC hoạt độ giảm mạnh, enzyme bắt đầu bị bất hoạt (Hình 2) Một số tác giả khảo sát nhiệt độ tối thích cellulase từ chủng Trichoderma nhận thấy 55oC nhiệt độ thích hợp cho enzyme phản ứng, chẳng hạn EG III từ T reesei QM 9414 [13], cellulase từ T viride [7] hay EG từ T reesei NRRL 3652 [18] Một số nghiên cứu khác lại thu nhiệt độ tối ưu cho phản ứng thấp nghiên cứu chúng tơi EG từ Trichoderma sp có nhiệt độ tối thích 45oC [4], cellulase III từ T viride 50oC [16] hay EG từ T reesei T harzianum 30oC [14, 17] ISSN 1859-1531 - TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG, SỐ 9(82).2014 110 pH tối thích 2.4 100 Độ bền pH 90 1.6 80 Hoạt độ lại (%) Hoạt độ riêng (u/mg protein) 3.2 0.8 70 60 pH Hình Ảnh hưởng pH lên hoạt độ EG Một số công bố trước cho thấy cellulase hoạt động mạnh môi trường acid EG III từ T reesei QM 9414 4-5 [13], EG từ T reesei NRRL 3652 [18], cellulase III từ T viride 4,5-5 [16], thấp EG từ T reesei [17] Một số enzyme có pH hoạt động tối thích cao nghiên cứu chúng tơi, vùng trung tính 6,5 EG từ Trichoderma sp [4] cellulase từ T viride [7], 6,0 EG từ T harzianum [14], vùng kiềm 8,0 cellulase từ T viride [7] Cellulase có độ bền pH nằm khoảng 3-5, kết tương 180 150 120 90 60 30 1% SDS Hình Ảnh hưởng nhiệt độ lên hoạt độ EG Trong thí nghiệm khảo sát độ bền nhiệt độ enzyme EG, enzyme trì 90% hoạt độ xử lý nhiệt độ 30oC, trì khoảng 80% hoạt độ khoảng nhiệt độ từ 30-50oC giảm nhanh xử lý nhiệt độ 60oC (Hình 2) Kết tương tự kết khảo sát nhiệt độ tối thích enzyme, nhiệt độ 60oC khơng cịn phù hợp cho enzyme Một số enzyme khác có độ bền nhiệt cao EG EG từ T reesei NRRL 3652 bền 50oC đến 160 phút [18] hay endoglucanase III từ T reesei QM 9414 chịu nhiệt độ 65oC 30 phút [13] 3.3 Ảnh hưởng pH Sau khảo sát hoạt tính enzyme khoảng pH từ 3-8 cho thấy enzyme hoạt động mạnh khoảng pH 3-4,5, mạnh pH 3,5, hoạt tính enzyme giảm mạnh pH lớn Đây enzyme có khoảng pH hoạt động hẹp hoạt động môi trường acid Khảo sát độ bền pH cho thấy enzyme giữ 80% hoạt tính khoảng pH từ 3-5, mức pH cao hơn, enzyme giữ khoảng 60% hoạt tính (Hình 3) mM EDTA Nhiệt độ (oC) M Urea 90 1% Tritox 1X 80 mM Hg(II) 70 mM Al(III) 60 mM Zn(II) 50 10 mM Co(II) 40 mM Cu(II) 30 mM Co(II) 20 mM Fe(III) 10 mM Ca(II) Độ bền nhiệt độ 10 mM Ca(II) 30 Nhiệt độ tối thích 10 mM Mn(II) ĐC 60 mM Mn(II) 90 đương với EG từ T reesei NRRL 3652 [18] Tuy nhiên, số nghiên cứu cho thấy cellulase khác có độ bền pH cao hơn, chẳng hạn cellulase từ T viride bền pH 4,57,5 [16] hay EG III từ T reesei QM 9414 3-8 [13] 3.4 Ảnh hưởng ion kim loại Khảo sát ảnh hưởng ion kim loại lên hoạt tính EG cho thấy Al3+ Hg2+ có tác dụng ức chế mạnh hoạt động enzyme này, hoạt độ thu lại sau xử lý cịn lại 40% Các ion kim loại có tác dụng tăng cường hoạt tính enzyme đáng kể Ca2+ (113%), Mn2+ (108%) Co2+ (115%) Khi tăng nồng độ ion lên 10 mM, tác động Ca2+ lại khơng tốt (106%), Mn2+ Co2+lại có hoạt tính tăng mạnh (158 166%) Đối với chất ức chế, tất chất nghiên cứu ảnh hưởng đến hoạt độ enzyme, ảnh hưởng nhiều SDS 1% (còn lại 3%) EDTA mM (39%) (Hình 4) Hoạt độ lại (%) 120 Hoạt độ lại (%) Hoạt độ riêng (u/mg protein) 73 Các ion kim loại chất ức chế Hình Ảnh hưởng ion kim loại chất ức chế lên hoạt độ EG Việc sử dụng ion kim loại để tăng cường hoạt tính enzyme nhiều tác giả nghiên cứu, Co2+ Mn2+ tăng cường hoạt độ cellulase từ T viride [7], Ca2+ Co2+ tăng cường hoạt độ EG từ T harzianum lên gần gấp đôi [14] Okada (1976) [16] nhận thấy cellulase III từ T viride bị ức chế Hg2+ khơng bị tác động EDTA, Iqbal et al (2011) [7] công bố Hg2+ SDS, EDTA ức chế hoạt tính cellulase từ T viride, nghiên cứu Nawaz et al (2006) [14] cho thấy Hg2+ ức chế hoạt tính EG từ T harzianum Như vậy, nghiên cứu chúng tơi có kết tương tự nghiên cứu công bố trước 3.5 Khả phân hủy chất cellulose Kết trình bày khả phân hủy chất có nguồn gốc cellulose EG từ T asperellum SH16 trình bày Bảng cho thấy chúng có hoạt tính mạnh nguồn chất lõi ngơ, với lượng glucose giải phóng 1,13 µmol Bảng Khả phân giải chất EG từ T asperellum SH16 Nguồn chất Hàm lượng glucose giải phóng (µmol/mL) Bột giấy 0,18 Bột vỏ lạc 0,64 Bột vỏ chuối 0,62 Bột rơm 0,33 Bột lõi ngơ 1,13 Hồng Tấn Quảng, Nguyễn Hồng Vân, Lê Mỹ Tiểu Ngọc, Nguyễn Hữu Nhân, Cao Đăng Nguyên, Nguyễn Hoàng Lộc 74 Các nguồn chất khác hoạt tính enzyme thấp nhiều Trong đó, nghiên cứu Trần Non Nước nnk (2012) [15] cho thấy cellulase tổng hợp nhiều nguồn có chất bột giấy 3.6 Xác định khối lượng phân tử Kết điện di polyacrylamide gel cho thấy có vùng phân giải chất CMC xuất vị trí khoảng 25, 27, 37, 45 66 kDa (Hình 5) Điều cho thấy EG T asperellum SH16 loại khác với khối lượng phân tử tương ứng với vùng phân giải kDa 97 66 ~ 66 kDa 45 ~ 45 kDa ~ 37 kDa 30 ~ 27 kDa ~ 25 kDa 20,1 M Hình Hình ảnh điện di enzyme EG M: thang chuẩn khối lượng phân tử protein (Bio-Rad), 1: protein ngoại bào tổng số, 2: băng enzyme gel có 0,2% CMC sau nhuộm thuốc nhuộm Lugol Hiện nay, chưa có cơng bố liên quan đến enzyme EG T asperellum, nhiên, đối tượng khác thuộc chi Trichoderma, công bố trước cho thấy enzyme có nhiều loại với khối lượng phân tử khác nhau, ví dụ cellulase III từ T viride có khối lượng phân tử 45 kDa [16], endoglucanase III từ T reesei QM 9414 48 kDa [13] cellulase từ T viride 58 kDa [7] Như vậy, ngoại trừ cellulase III từ T viride, enzyme mà thu khác với enzyme công bố Kết luận Endo-β-1.4-glucanase từ chủng SH16 tiết nhiều sau ngày ni cấy mơi trường có 1% CMC, với hoạt độ chung 102 u/mL hoạt độ riêng 2,694 u/mg protein Enzyme có nhiệt độ pH hoạt động tối thích 55oC 3,5, bền nhiệt độ thấp hoạt động vùng pH acid Mn2+ Co2+ có tác dụng tăng cường mạnh hoạt động enzyme Al3+, Hg2+, SDS EDTA ức chế mạnh hoạt động enzyme Trong số nguồn chất nghiên cứu, bột lõi ngơ chất thích hợp cho hoạt động enzyme EG T asperellum SH16 gồm enzyme có khối lượng phân tử khoảng 25, 27, 37, 45 66 kDa Lời cảm ơn: Đề tài thực với nguồn kinh phí đề tài cấp Đại học Huế (2013-2014) TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Baig M M V., "Cellulolytic enzymes of Trichoderma lignorum produced on banana agro-waste: Optimisation of culture medium and conditions" J Sci Ind Res., 64, 2005, 57-60 [2] Bradford M M., "A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principles of proteindye binding" Anal Biochem., 72, 1976, 248-254 [3] Tăng Thị Chính, Lý Kim Bảng Lê Gia Hy, "Nghiên cứu sản xuất cellulase số chủng vi sinh vật ưu nhiệt phân lập từ bể ủ rác thải", Báo cáo khoa học, Hội nghị Cơng nghệ Sinh học tồn quốc, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, 1999, 790-797 [4] Gautam S P., Bundela P S., Pandey A K., Khan J., Awasthi M K and Sarsaiya S., "Optimization for the production of cellulase enzyme from municipal solidwaste residue by two novel cellulolytic fungi", Biotechnol Res Int., 2011 [5] Hung N B., Quang H T., Ha T T T., Thao T N., Chau T T D and Loc N H., "Isolation and characterization of 42 kDa chitinase from Trichoderma asperellum", Vietnamese J Biotechnol., 8(3B), 2010, 1651-1657 [6] Nguyễn Lan Hương Hồng Đình Hịa, "Hệ vi khuẩn có hoạt tính thủy phân tinh bột, protein, cellulose dầu ô lưu trình phân hủy chất thải hữu cơ", Báo cáo khoa học, Hội nghị Cơng nghệ Sinh học tồn quốc, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, 2003, 288-291 [7] Iqbal H M N., Ahmed I., Zia M A and Irfan M., "Purification and characterization of the kinetic parameters of cellulase produced from wheat straw by Trichoderma viride under SSF and its detergent compatibility", Adv Biosci Biotechnol., 2, 2011,149-156 [8] Hồng Quốc Khánh, Ngơ Đức Duy Nguyễn Duy Long, "Khả sinh tổng hợp đặc điểm cellulase Aspergillus niger RNNL-363", Báo cáo khoa học, Hội nghị Cơng nghệ Sinh học tồn quốc, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, 2003, 304-307 [9] Trịnh Đình Khả, Quyền Đình Thi Nguyễn Sỹ Lê Thanh, "Tuyển chọn nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố môi trường lên khả sinh tổng hợp cellulase chủng Penicillium sp.DTQ-HK1", TC Công nghệ Sinh học, 5(3), 2007, 355-362 [10] Kuhad R C., Gupta R and Singh A., "Microbial cellulases and their industrial applications", Enzyme Res., 2011, Doi:10.4061/2011/280696 [11] Trần Thị Lệ, Trần Thị Thu Hà, Nguyễn Thị Thanh Nguyễn Xuân Kỳ, "Tuyển chọn chủng nấm Trichoderma spp phân giải cellulose mạnh để sản xuất phân hữu vi sinh nghiên cứu ảnh hưởng chúng giống đậu xanh 208 vụ xuân 2011 HTX Hương long, thành phố Huế", Tạp chí Khoa học (Đại học Huế), 71(2), 2012, 203-214 [12] Li X., Yang H., Roy B., Park E Y., Jiang L., Wang D and Miao Y., "Enhanced cellulase production of the Trichoderma viride mutated by microwave and ultraviolet", Microbiol Res., 165(3), 2009, 190-198 [13] Macarrón R., Acebal C., Castiilón M P., Domínguez J M and Manta I D L., "Mode of action of endoglucanase III from Trichoderma reesei", Biochem J., 289, 1993, 867-873 [14] Nawaz S., Malana M A., Ikram N., Hafeez S., Ghori M I and Jamil A., "Kinetic study of carboxymethyl cellulase from Trichoderma harzianum", Pak J Life Soc Sci., 4(1-2), 2006, 15-19 [15] Trần Non Nước, Võ Văn Song Toàn, Dương Thị Hương Giang Trần Nhân Dũng, "Tuyển chọn tối ưu hóa vi khuẩn kỵ khí sinh tổng hợp enzyme cellulase chất bột giấy", Tạp chí Khoa học, Trường ĐH Cần Thơ, 22b, 2012, 43-53 [16] Okada G., "Enzymatic studies on a cellulase system of Trichoderma viride", J Biochem., 80, 1976, 913-922 [17] Shafaq A., Malana M A., Ikram N., Ghori M I s., Butt K Y and Ahmed S., "Kinetic study of carboxymethylcellulase from Trichoderma reesei", Pak J Life Soc Sci., 2(1), 2004, 1-4 [18] Zhekova B., Dobrev G., Dobreva V and Hadjikinova M., "Characterization of enzyme with carboxymethyl cellulase activity produced by Trichoderma reesei NRRL 3652", Agri Sci Tech., 4(3), 2012, 311-314 (BBT nhận bài: 19/08/2014, phản biện xong: 23/09/2014) ... hủy chất có nguồn gốc cellulose EG từ T asperellum SH16 trình bày Bảng cho thấy chúng có hoạt tính mạnh nguồn chất lõi ngơ, với lượng glucose giải phóng 1,13 µmol Bảng Khả phân giải chất EG từ. .. khảo sát nhiệt độ tối thích cellulase từ chủng Trichoderma nhận thấy 55oC nhiệt độ thích hợp cho enzyme phản ứng, chẳng hạn EG III từ T reesei QM 9414 [13], cellulase từ T viride [7] hay EG từ. .. nồng độ mM 30 phút nhiệt độ phòng Khảo sát hoạt tính thủy phân CMC với dung dịch đệm có pH tối ưu nhiệt độ tối ưu [5] Ảnh hưởng chất ức chế lên hoạt tính EG khảo sát cách ủ enzyme tinh sơ với SDS