PROTEIN
Phương pháp Kjeldahl – Xác định hàm lượng N tổng
Khi đốt nóng mẫu vật với H2SO4 đậm đặc, các hợp chất hữu cơ sẽ bị oxy hóa, dẫn đến sự hình thành CO2 và H2O từ carbon và hydro Nitơ được giải phóng dưới dạng NH3, sau đó kết hợp với H2SO4 để tạo thành (NH4)2SO4 tan trong dung dịch.
NH 3 khỏi dung dịch bằng dung dịch NaOH, đồng thời cất và thu NH 3 bằng một lượng dư
H 2 SO 4 0.1N Định lượng H 2 SO 4 0.1N dư bằng dung dịch NaOH 0.1N chuẩn, qua đó ta tính được lượng nitơ có trong mẫu nguyên liệu cần phân tích.
Quá trình phân tích protein được thực hiện trong tủ Hotte, với mẫu được đưa vào bình Kjeldahl Tùy thuộc vào loại nguyên liệu, lượng mẫu cần cân sẽ khác nhau: đối với mẫu rắn, cân từ 0.2 đến 0.5g; đối với mẫu lỏng, lấy từ 2 đến 5ml (chẳng hạn như 2mL nước mắm hoặc 5mL sữa) Sau đó, thêm từ từ 10mL dung dịch cần thiết.
H2SO4 đậm đặc (tỉ trọng 1.84) cần có chất xúc tác để tăng tốc quá trình vơ cơ hóa Có thể sử dụng 0.05g Se kim loại hoặc 0.5g hỗn hợp CuSO4:K2SO4 (1:3) để tăng nhiệt độ sôi và vận tốc phản ứng Acid perchloric HClO4 cũng có thể được dùng làm xúc tác, giúp giải phóng oxy cho phản ứng oxy hóa Sau khi thêm các chất xúc tác, cần đun nhẹ hỗn hợp để tránh hiện tượng sôi trào.
Để đảm bảo quá trình vô cơ hóa đạt hiệu quả cao, cần đun nóng bình Kjendahl trên bếp điện cho đến khi hỗn hợp chuyển hoàn toàn sang dung dịch Trong suốt quá trình này, hãy thường xuyên lắc nhẹ và tráng bình để không còn vết đen nào của mẫu nguyên liệu thí nghiệm chưa bị phân hủy Đun cho đến khi dung dịch trong bình trở nên hoàn toàn trắng.
Hướng dẫn sử dụng bộ vô cơ hóa mẫu
- Bật công tắc (1) và gia nhiệt trước khoảng 5 phút.
- Mang găng tay bảo hộ và nhẹ nhàng lắp bộ giữ (2) chứa các bình vô cơ hóa mẫu (4) vào.
- Cho dung dịch mẫu và chất oxy hóa (H 2 SO 4 ) vào bình vô cơ hóa mẫu.
- Đóng chặt hệ thống bằng bộ Gaskets.
- Điều chỉnh núm (2) để tăng/giảm nhiệt độ đun.
Sau khi vô cơ hóa mẫu hoàn toàn, dung dịch trở nên trong suốt.Cần làm nguội trước khi lắp vào hệ thống chưng cất BUCHI Distillation Unit 4
Để chuẩn bị máy cất đạm, trước tiên cần cắm điện và bật máy, sau đó mở vòi nước làm lạnh Khi màn hình hiển thị, máy đã sẵn sàng hoạt động Tiếp theo, lấy 10ml dung dịch H2SO4 vào erlen và lắp vào máy, chú ý nhúng ống vào dịch lỏng Cuối cùng, cài đặt chương trình cho máy với tỷ lệ sục hơi 50%, thể tích NaOH 40% từ 5 – 10ml và thời gian cất từ 15 – 30 phút.
Sau khi hoàn thành quá trình vô cơ hóa, chuyển toàn bộ dung dịch mẫu từ bình Kjeldahl vào bình định mức 100ml và thêm nước cho đến vạch định mức Cần lưu ý rằng acid H2SO4 đậm đặc rất háo nước và tỏa nhiệt mạnh khi tiếp xúc với nước, điều này có thể dẫn đến việc bay hơi một phần dung dịch Do đó, cần làm nguội và điều chỉnh lại mức nước để tránh sai số, sau đó đổ dung dịch ra erlen.
Lấy vào ống phản ứng 10mL dung dịch thí nghiệm từ bình định mức.Lắp vào hệ thống, chú ý không lắp lệch, khí sẽ thoát ra ngoài, mất mẫu.
Tiến hành cất đạm trên máy cho đến khi NH 3 được giải phóng hoàn toàn khỏi bình
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com Định phân
Lấy erlen ra khỏi máy sau khi đã tráng nước cất để lấy hết mẫu bám trên ống.Cho 10 giọt phenolphtalein vào bình và định phân bằng NaOH 0.1N.
Để xác định hệ số hiệu chỉnh K cho các chất dễ thay đổi thành phần ở dạng rắn, cần pha dung dịch có nồng độ gần đúng Sau đó, tiến hành hiệu chỉnh nồng độ dung dịch thông qua phản ứng với một dung dịch chuẩn phù hợp Quy trình hiệu chỉnh này đảm bảo nồng độ dung dịch chính xác hơn.
- Gọi K là tỷ số giữa nồng độ thực tế (Ct) và nồng độ cần pha (Cp) của NaOH.
- Lấy 10mL H 2 SO 4 0.1N (chuẩn) vào erlen, định phân bằng V (mL) NaOH 0.1N đã pha sẵn.Thêm 3 giọt chỉ thị phenolphtalein.Từ thể tích định phân (V) suy ra được Ct và K.
Hàm lượng phần trăm Nitơ tổng có trong mẫu:
Hàm lượng Nitơ (N) được tính bằng phần trăm khối lượng dựa trên các yếu tố sau: số mL dung dịch chuẩn H2SO4 0.1N (a) dùng để hấp thụ NH3, số mL dung dịch NaOH 0.1N (b) sử dụng trong quá trình chuẩn độ, và khối lượng mẫu đem vô cơ hóa (m) tính bằng gram.
V – tổng thể tích định mức dung dịch vô cơ hóa (100mL) v – thể tích dung dịch vô cơ hóa dùng chưng cất (10 mL) 0.0014 – lượng Nitơ (gam) ứng với 1mL H 2 SO 4 0.1N
K – hệ số hiệu chỉnh nồng độ NaOH 0.1N
% Protein = % Nitrogen × 6,25(Phần lớp Protein chứa 16% N => hệ số 6,25
(100/16=6,25)) Ưu điểm của phương pháp
• Ứng dụng cho tất cả các loại thực phẩm
• Đơn giản, chi phí thấp
• Chính xác, phương pháp chuẩn để phân tích hàm lượng protein thô (AOAC 945.01)
Nhược điểm của phương pháp
• Không phải tất cả N là protein, ngoài ra có thể xác định cả: Purine, Pyrimidine DNA, RNA, Urea, Nhiều tế bào thực vật có > 50% N phi protein, Melamine (6N/phân tử).
• Chỉ xác định được hàm lượng N tổng, không xác định được chính xác hàm lượng N protein
• Sử dụng hóa chất độc hại, thời gian tiến hành tương đối lâu.
Phương pháp biuret
Biuret và peptide phản ứng với ion Cu 2+ để tạo ra một phức hợp màu tím, hấp thụ ánh sáng ở bước sóng 540nm Biuret là hợp chất hình thành từ sự ngưng tụ của urea khi bị đốt nóng Cường độ màu hấp thụ tỷ lệ thuận với nồng độ protein trong mẫu.
Cách pha thuốc thử Biuret
Thuốc thử biuret được pha từ 3 dung dịch thuốc thử là dung dịch A, B và C Các dung dịch này được chuẩn bị như sau:
- Dung dịch A: 05g CuSO 4 5H 2 O hòa tan trong 495 mL nước ( dung dịch CuSO4 5H 2 O 1%)
- Dung dịch B: 10g NaKC 4 H 4 O 6 4 H 2 O hòa tan trong 490 mL nước ( dung dịch
- Dung dịch C: 20,5g Na 2 CO 3 và 4g NaOH hòa tan và định mức thành 1 lít dung dịch (dung dịch Na 2 CO 3 2% trong NaOH 0,1N).
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Thuốc thử biuret = 1 mL dung dịch A + 1 mL dung dịch B + 98 mL dung dịch C
Hình 1: phương trình phản ứng giữa thuốc thử Biuret với NH 3
Amino acid đơn và dipeptide không phản ứng
Vùng nồng độ tuyến tính là 1-5 mg/ml
Sử dụng đường chuẩn độ với BSA (bovine serum albumin).
Pha 5 dung dịch protein chuẩn từ huyết thanh bò ứng với 5 nồng độ khác nhau 2, 4, 6,
Để tiến hành thí nghiệm, lấy 1 mL dung dịch protein chuẩn với nồng độ 8 và 10 mg protein/mL, sau đó thêm 5 mL thuốc thử biuret vào ống nghiệm Hỗn hợp này được lắc đều trong 15 phút ở nhiệt độ phòng Cuối cùng, tiến hành đo độ hấp thu của hỗn hợp ở bước sóng 540 nm.
Vẽ đường chuẩn: trục hoành là nồng độ protein, trục tung là độ hấp thu.
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Hình 2: Phương trình đường chuẩn Xác định độ hấp thu mẫu thực phẩm
- Trích ly protein (nếu mẫu là mẫu rắn) Sau đó, ta tiến hành pha loãng mẫu sao cho nồng độ protein trong mẫu nằm trong khoảng 0 – 10 mg/mL.
Lấy 1 mL dịch trích cùng với 5 mL thuốc thử biuret cho vào ống nghiệm, sau đó lắc đảo trong 15 phút ở nhiệt độ phòng Tiếp theo, hỗn hợp này được sử dụng để xác định độ hấp thu tại bước sóng thích hợp.
- Giá trị nồng độ protein trong mẫu được xác định dựa vào phương trình đường chuẩn. Ưu điểm
Phương pháp Biuret là một kỹ thuật nhanh chóng (khoảng 30 phút) và đơn giản để xác định protein, với màu sắc ít biến đổi hơn so với các phương pháp Lowry và UV Phương pháp này có ưu điểm là ít bị ảnh hưởng bởi các hợp chất phi protein, đồng thời không phát hiện nitơ từ nguồn không phải peptide hoặc protein.
• Không sử dụng hó chất độc hại.
• Không nhạy bằng phương pháp Lowry.
• Cần 2 – 4 mg protein cho một lần đo.
• Các muối ammoni nồng độ cao có thể gây ảnh hưởng.
Phương pháp lowry
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Cu²⁺ in alkaline environments forms complexes with proteins It catalyzes the oxidation of phenolic groups in tyrosine and tryptophan using the Folin-Ciocalteau reagent (phosphomolybdic-phosphotungstic acid), resulting in a colored mixture.
Hình 3: sơ đồ phản ứng phân tích protein bằng phương pháp lowry
Pha loãng mẫu (20 – 100 microgam protein)
Cho mẫu phản ứng với KNa tartate- Na 2 CO 3 10 phút ở nhiệt độ phòng.
Phản ứng với CuSO 4 - KNa tartate-NaOH 10 ở nhiệt độ phòng.
Tiếp đó cho phản ứng với Folin 10 phút ở 50 0 C. Đo độ hấp thu ở bước sóng 600 nm. Ưu điểm:
• Tính chuyên biệt cao, nhanh và đơn giản (~1.5 giờ).
• Rất nhạy: 20-100 àg.– 50-100 x so với Biuret, 10-20 x so với UV 280 nm
• Rất nhạy cảm với thay đổi pH.
• Màu dễ bị biến đổi bởi các loại protein khác nhau (nhiều hơn so với Biuret).
• Có nhiều hợp chất gây ảnh hưởng: sucrose, lipid, đường khử, hexoamine, amino sulfate…
Phương pháp Dumas
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Mẫu được đem đốt cháy ở 700- 1000 0 C sau đó được phản ứng với đồng ở 600 0 C, xác định hàm lượng protein bằng phương pháp sắc kí khí.
Mẫu được đưa vào thiết bị và đốt cháy bằng oxy tinh khiết, khiến toàn bộ nitơ trong mẫu chuyển thành N2 và NxOy Sau đó, sản phẩm này được dẫn qua ống chứa đồng (Cu), nơi NxOy sẽ phản ứng với Cu để tạo ra các hợp chất mới.
N 2 Khí sinh ra chỉ còn N 2 Dẫn vào cột sắc ki khí để xác định hàm lượng Nito. Ưu điểm:
• Không sử dụng hóa chất độc hại.
• Có thể xác định lượng protein trong mẫu trong vòng 3 phút, có thể tiến hành một lúc 150 mẫu.
Phương pháp nhuộm màu
Mẫu protein được trộn với một lượng chất nhuộm dư đã biết Ở pH thấp, các nhóm bazơ của protein mang điện tích dương và liên kết với điện tích âm của chất nhuộm, tạo ra kết tủa Số lượng chất nhuộm thừa sẽ được xác định thông qua việc đo màu.
• Trộn protein, chất nhuộm, đệm pH 2
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
• Đo độ hấp thụ của dung dịch lọc ở 470 nm
Mật độ quang của chất nhuộm gắn kết protein ≈ nồng độ chất nhuộm ban đầu – nồng độ chất nhuộm trong dịch lọc.
Hình 4: Sơ đồ sự hấp thụ protein tại bước sóng 470nm
Các yếu tố ảnh hưởng đến nhuộm màu ion âm:
=> Phân tích protein trong sữa, bột mì, sản phẩm từ đậu nành, thịt….
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
PHÂN TÍCH CACBONHYDRATE
Định lượng đường khử bằng phương pháp Bertrand
Trong môi trường kiềm các đường khử (glucoza, fructoza, mantoza ) khử oxit đồng
Để định lượng đường khử, người ta sử dụng thuốc thử Fehling, bao gồm dung dịch sunfat đồng (Fehling I) và dung dịch muối xecnhet (Fehling II), với tỷ lệ 1:1 Khi trộn Fehling I và Fehling II, phản ứng đầu tiên tạo ra Cu(OH)2 có màu xanh da trời, từ đó cho phép xác định sự hiện diện của đường khử.
Muối xecnhet giữ cho ion Cu+ trong môi trường kiềm không bị kết tủa thành Cu(OH)2 Tuy nhiên, muối phức này không bền, do đó các hợp chất chứa nhóm andehit hoặc xeton có khả năng khử Cu+2 thành Cu+, dẫn đến sự hình thành kết tủa oxit đồng (Cu2O) có màu đỏ.
Để xác định lượng oxit đồng I, trước tiên cần oxi hóa nó bằng sunfat sắt III hoặc sunfat kép sắt amoni trong môi trường axit sunfuric Trong quá trình này, Cu+ sẽ được oxi hóa thành Cu+2, trong khi đó Fe+3 sẽ bị khử thành Fe+2.
Cu 2 O + Fe 2 (SO 4 ) 3 + 2H 2 SO 4 = 2 CuSO 4 + FeSO 4 + H 2 O
Tiếp đó lượng Fe +2 tạo thành được xác định bằng cách oxi hóa nó bằng dung dịch KMnO 4 chuẩn độ trong môi trường axit.
10FeSO 4 + 2 KMnO 4 + 8H 2 SO 4 = 5Fe 2 (SO 4 ) 3 + 2MnSO 4 + K 2 SO 4 + H 2 O
Dựa vào lượng KMnO 4 tiêu tốn người ta lập bảng tỉ lệ giữa lượng KMnO 4 1/30N và lượng đường khử (bảng 1) để dễ sử dụng.
+Fehling II: 200g muối xecnhet + 150g NaOH/ 1 lít
Dung dịch Fe 2 (SO4) 3 trong axit sunfuric: 50g Fe 2 (SO4) 3 + 200ml H 2 SO 4 đậm đặc (d = 1,4)/lit Hoặc dung dịch sunfat kép sắt amoni
86g (NH 4 ) 2 SO 4 Fe 2 (SO4) 3 24H 2 O + 200g (108,7ml) H 4 SO4 d = 1,84/l
KMnO 4 1/30N; 1,06g KMnO 4 /1 lít nước cất đun sôi Nồng độ KMnO 4 được xác định bằng oxalat amoni hoặc axit oxalic một ngày sau khi pha.
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Tùy thuộc vào đối tượng nghiên cứu như hạt hoặc quả, cách chuẩn bị dung dịch để định lượng đường có thể thay đổi, nhưng nguyên tắc chung là nếu nguyên liệu không chứa quá nhiều tinh bột hoặc inulin, quy trình sẽ được điều chỉnh cho phù hợp.
Có thể chiết đường từ nguyên liệu bằng nước bằng cách cân 1g nguyên liệu hạt hoặc mẫu thực vật khô đã nghiền nhỏ và sấy khô đến khối lượng không đổi Đối với nguyên liệu tươi như hoa hoặc quả tươi, cần cân 5g để tiến hành chiết xuất.
Nghiền 10 g nguyên liệu cẩn thận với bột thủy tinh hoặc cát sạch, sau đó thêm 30ml nước cất nóng ở nhiệt độ 70 - 80°C Chuyển toàn bộ hỗn hợp vào bình định mức có dung tích 1 lít và thực hiện quá trình đun cách thủy ở nhiệt độ 70 - 80°C.
35 – 40 phút, kết tủa protein và các tạp chất bằng dung dịch chì axetat [Pb(C 2 H 2 O 2 )
2.3H 2 O)] hoặc chì nitrat [Pb(NO 3 ) 2 ] 10%.Tránh dùng quá dư chì axetat (dùng 2 - 5ml chì axetat).Sau đó loại bỏ lượng chì axetat dư bằng dung dịch Na 2 SO 4 bão hòa, để yên hỗn
Tải TIEU LUAN MOI tại skknchat123@gmail.com trong vòng 10 phút Sau đó, thêm nước cất đến vạch mức và lọc qua giấy lọc vào cốc hoặc bình khô Nước lọc này sẽ được sử dụng làm dung dịch cho thí nghiệm Nếu nguyên liệu chứa quá nhiều tinh bột, hãy điều chỉnh quy trình cho phù hợp.
Để chiết đường từ mẫu chứa nhiều protein, cần sử dụng rượu với nồng độ 70 - 80°C và đun hỗn hợp bằng phương pháp cách thủy trong bình có ống làm lạnh không khí Trong trường hợp này, không cần phải kết tủa protein bằng chì axetat do lượng protein chuyển vào dung dịch là không đáng kể.
Kết tủa protein và tạp chất bằng dung dịch tricloacetic 10%, sau đó trung hòa bằng dung dịch NaOH 5% có chỉ thị metyl đỏ (màu đỏ chuyển sang màu vàng) Thêm nước cất đến vạch định mức và lọc qua giấy lọc Nước lọc thu được là dung dịch đường khử cần định lượng Trong trường hợp nguyên liệu chứa nhiều axit hữu cơ, cần lưu ý điều chỉnh quy trình phù hợp.
Cần chú ý trong quá trình đun khi chiết, đường saccarose có thể bị thủy phân một phần.
Cần xác định riêng đường khử và đường saccarose Trước khi tiến hành đun cách thủy hỗn hợp, cần trung hòa axit bằng dung dịch Na2CO3 bão hòa để đạt pH từ 6,4 đến 7,0.
Dung dịch mẫu sau khi chuẩn bị được lấy 10 ml (0,8 – 40mg đường) cho vào bình tam giác 100ml, thêm 5ml Fehling I và 5ml Fehling II, sau đó đun sôi trong 3 phút từ khi xuất hiện bọt khí đầu tiên Nếu dung dịch vẫn giữ màu xanh biếc, lượng Fehling đủ; nếu mất màu, cần làm lại thí nghiệm hoặc điều chỉnh lượng Fehling hoặc mẫu Sau khi để yên, lọc dung dịch qua phễu lọc G-4 vào bình lọc chân không benzen và rửa bằng nước cất nóng 3-4 lần, giữ oxit đồng I trong bình tam giác và phủ lớp nước nóng để tránh oxi hóa Hòa tan kết tủa oxit đồng I bằng dung dịch sunfat sắt 3 trong môi trường H2SO4, sau đó lọc và rửa bình và phễu lọc Định phân dung dịch bằng KMnO4 1/30N cho đến khi xuất hiện màu hồng nhạt không mất trong 20-30 giây, từ đó xác định lượng đường trong dung dịch thí nghiệm Thực hiện thí nghiệm kiểm chứng song song bằng nước cất.
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Hàm lượng đường khửtính theo phần trăm (%):
Trong đó: a: sốmg glucoza tra bảng ứng với sốml KMnO 4 1/30N trừ đi sốml KMnO 4 1/30N của mẫu kiểm chứng;
V: dung tích bình định mức;
V1: lượng dung dịch mẫu thí nghiệm lấy để xác định đường khử (trong ví dụ trên 10ml) m:lượng mẫu (g) nguyên liệu thực phẩm;
1000: hệ số chuyển đổi sang mg
Định lượng đường khử theo phương pháp vi lượng của Rodzevich
Phương pháp xác định đường khử trong môi trường kiềm cho phép chuyển đổi đồng (II) thành oxit đồng (I) dưới dạng kết tủa màu đỏ Quá trình này diễn ra khi các loại đường khử như glucose, fructose và maltose tương tác với ion đồng (Cu²⁺) Lượng đường khử có thể được tính toán thông qua lượng CuSO₄ dư không tham gia phản ứng Cơ chế của quá trình này bao gồm nhiều giai đoạn khác nhau.
Khi kết hợp hai dung dịch Fehling I và Fehling II, phản ứng diễn ra qua hai giai đoạn, bắt đầu bằng việc hình thành kết tủa đông hidroxit có màu xanh da trời.
CuSO 4 +2NaOH = Cu(OH) 2 + Na 2 SO 4
Sau đó Cu(OH) 2 tác dụng với muối Seignett tạo thành muối hòa tan có dung dịch màu xanh thẫm:
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Muối trên là hợp chất không bền, do đó các đường khử chứa nhóm andehit hoặc xeton có khả năng dễ dàng khử đồng (II) oxit, dẫn đến sự hình thành kết tủa đồng (I) oxit màu đỏ Trong quá trình này, bản thân các đường khử cũng bị oxi hóa khi phản ứng với dung dịch Fehling.
Lượng CuSO 4 dư (không tham gia phản ứng) cho tác dụng với KI trong môi trường
H 2 SO 4 sẽ giải phóng ra iot tự do.
CuSO 4 + 4KI + H 2 SO 4 I 2 + CuI 2 + 2K 2 SO 4
Chuẩn độ lượng iot tạo thành bằng natri thiosunfat (Na 2 S 2 O 3 ) chuẩn, qua đó tính được lượng đường khử có trong dung dịch.
Dung dịch Fehling I: 34,64 g CuSO 4 5H 2 O trong 500ml H 2 O
Dung dịch Fehling II: 173g Seignett + 50g NaOH trong 500ml H 2 O
Dung dịch KI 30%, dung dịch H 2 SO 4 25% , dung dịch Na 2 S 2 O 3 0,1N.
Cách thực hiện tương tự phương pháp Bertrand
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Bước 1: Cho vào bình nón dung tích 50ml: 1ml dung dịch đường, 2ml nước cất, 1ml dung dịch Fehling I và 1ml dung dịch Fehling II
Đun sôi dung dịch trong 2 phút từ khi bắt đầu xuất hiện bọt sôi Nếu dung dịch vẫn giữ màu xanh đặc trưng và có lớp kết tủa đồng I oxit màu đỏ gạch ở dưới, thì quá trình oxi hóa đường đã thành công Ngược lại, nếu dung dịch mất màu hoàn toàn, điều này cho thấy lượng dung dịch Fehling chưa đủ để oxi hóa hết đường trong mẫu, cần lặp lại thí nghiệm với dung dịch đường ít hơn hoặc pha loãng Nếu không có lớp kết tủa đồng I oxit, cần tăng lượng dung dịch đường và giảm nước cất, nhưng vẫn đảm bảo tổng thể tích là 5ml.
Bước 3: Làm nguội, cho thêm vào hỗn hợp 1ml H 2 SO 4 25% và 1ml KI 30%, lắc đều và giữ trong 20 phút.
Bước 4: Chuẩn độ I 2 tạo thành bằng Na 2 S 2 O 3 0,1N Song song làm thí nghiệm đối chứng bằng cách thay dung dịch đường bằng nước cất
Hàm lượng đường khử được tính theo công thức sau:
Trong đó: a: số ml Na 2 S 2 O 3 0,1N dùng chuẩn độ đối chứng, b: hệ số Na 2 S 2 O 3 0,1N chuẩn độ mẫu thí nghiệm, f:hệ số chỉnh nồng độ của Na 2 S 2 O 3 0,1N
3,3: hệ số chuyển thành đường
V: tổng thể tích dịch chiết từng gam nguyên liệu (ml)
V1: thể tích thí nghiệm (ml)
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Định lượng đường saccarose theo phương pháp thủy phân bằng acid
Nhiều loại rau, củ, quả chứa một lượng lớn saccarose và đường khử Saccarose không có tính khử, do đó không thể xác định trực tiếp bằng phương pháp Bertrand Để xác định saccarose bằng phương pháp này, cần phải thủy phân nó thành các đường khử như glucozo và fructozo.
Khi thủy phân dung dịch saccarose bằng axit, ta thu được hỗn hợp gồm hai loại đường khử là glucose và fructose Việc định lượng các đường khử này cho phép tính toán lượng saccarose có trong mẫu thí nghiệm.
Dung dịch NaOH 5% hoặc dung dịch Na2CO3 bão hòa được sử dụng cùng với metyl đỏ 0,02% (bao gồm 0,02g metyl đỏ hòa trong 60ml rượu etylic và 40ml nước cất) là các thuốc thử cần thiết để xác định đường khử theo phương pháp Bertrand.
• Lấy 10ml dung dịch mẫu thí nghiệm (đã loại bỏ protein và chuẩn bị cho xác định đường khử cho vào bình nón 250ml)
• Cho thêm 5ml dung dịch HCl 5%
• Đun cách thủy hỗn hợp có ống làm lạnh bằng không khí trong 30 – 40 phút, làm nguội nhanh.
• Trung hòa hỗn hợp bằng dung dịch Na 2 CO 3 bão hòa đến pH 6,5 – 7,0 với chỉ thị metyl đỏ(3 giọt)
• Thêm từng giọt kiềm cho đến khi dung dịch chuyển từ đỏ sang vàng
Xác định lượng đường bằng phương pháp Bertrand
Khi xác định saccarose, cần lưu ý rằng việc sử dụng dịch chiết bằng nước có thể dẫn đến kết quả không chính xác, do sự hiện diện của các polysacarit cao phân tử khác cũng hòa tan trong dịch chiết.
Tải xuống TIEU LUAN MOI tại địa chỉ skknchat123@gmail.com Trong quá trình thủy phân, các chất này tạo ra monosacarit, cho phép chiết xuất đường bằng cồn với nồng độ 75 – 80% trong dung dịch.
Hàm lượng saccarose của mẫu thí nghiệm được tính theo công thức:
X: hàm lượng saccarose tính theo % a: hàm lượng đường khử theo glucose của dịch đường sau khi thủy phân bằng axit (%) b:hàm lượng đường khửcủa dung dịch đường (trước khi thủy phân)
(%) 0,95: hệ số chuyển từ glucose sang saccarose.
Phương pháp định lượng saccarose
Để đảm bảo độ chính xác trong quá trình đo, cần làm trong dung dịch trước khi phân cực nhằm loại bỏ ảnh hưởng của các chất có góc quay cực khác và các chất màu Các chất làm trong thường được sử dụng bao gồm axetat chì trung tính Pb(CH₃COO)₂.3H₂O và axetat chì kiềm tính 2Pb(CH₃COO)₂.Pb(OH)₂, có thể ở dạng bột hoặc dung dịch Axetat chì có khả năng lắng hàng loạt các chất như axit oxalic, oxit axit protein, saponin, các chất màu, chất pectin và melanoidin, giúp cải thiện độ chính xác của kết quả đo.
Khi sử dụng axetat chì, cần lưu ý không dùng quá liều vì một số kết tủa như protein có thể hòa tan khi dư axetat chì Nitrat chì, một chất làm trong mạnh hơn, được tạo thành từ hỗn hợp Pb(NO3)2 và NaOH với tỷ lệ 340 g Pb(NO3)2 và 32 g NaOH cho mỗi lít dung dịch, sử dụng lượng bằng nhau (5-10 ml) Quy trình sử dụng nitrat chì trước và NaOH sau Để loại bỏ lượng chì dư trong dung dịch, có thể sử dụng dung dịch NaH2PO4 hoặc thêm một giọt axit axetic đậm đặc Đo độ đường theo quy định, thước đo độ đường trong kế chỉ 100°S khi hòa tan 26g đường saccaroza tinh khiết trong 100 ml nước cất và phân cực trong ống 200 mm ở 20°C.
26 gram được xác định là lượng cân tiêu chuẩn, trong khi 200 mm là kích thước ống phân cực tiêu chuẩn Khi thực hiện cân mẫu với lượng cân chuẩn và sử dụng phân cực kế với ống tiêu chuẩn, chỉ số hiển thị trên thước đo sẽ cho biết tỷ lệ phần trăm (%).
Tải TIEU LUAN MOI tại địa chỉ skknchat123@gmail.com Trong quá trình phân tích, chúng ta có thể sử dụng bội số hoặc ước số của các thành phần Chẳng hạn, nếu lấy 13g đường hòa trong 100ml dung dịch phân cực trong ống 200 mm, thành phần đường sẽ được tính là P×2.
Trong đó: P – số đọc trên máy Hoặc pha 26g trong mẫu 100 ml phân cực bằng ống
100 mm thì thành phần đường cũng bằng P×2.
Để chuẩn bị dung dịch axetat chì trung tính, cần hòa tan 250g Pb(CH₃COO)₂.3H₂O trong 50ml nước cất, khuấy đều và lọc Sau đó, trung hòa nước lọc bằng axit yếu và pha thêm nước cất đến 1 lít Đối với dung dịch axetat chì kiềm tính, trộn 100g oxit chì (PbO) với 230g axetat chì trung tính và 50ml nước cất, sau đó đun sôi trong 30 phút để thủy phân oxit Cuối cùng, để nguội, lọc và pha loãng bằng nước cất đến 1 lít (54Bx).
Dung dịch nitrat chì: 340 g Pb(NO 3 ) 2 trong 1 lit; 32g NaOH trong 1 lit
HCl 24,85 Bx: 510,57 ml HCl đậm đặc trong 1 lít
Than hoạt tính 5g/100ml, axit axetic đậm đặc, Ete etylic, bột kẽm,
4.2 Tiến hành: Xác định hàm lượng saccaroza trong đường kính
Cân 26 g đường bằng cân phân tích vào 1 cốc khô có miệng rót (đã cân trọng lượng cốc) Hòa tan đường trong cốc bằng khoảng 40 – 50 ml nước cất đã đun nóng dùng đũa thủy tinh khuấy cho đường tan hết.
Chuyển toàn bộ dung dịch đường vào bình định mức, sau đó rửa sạch cốc, que thủy tinh và phễu bằng một lượng nước cất, rồi cho tất cả vào bình định mức.
Thêm nước cất đến gần vạch định mức, để yên khoảng15-20 phút cho nhiệt độ dung dịch đường gần bằng nhiệt độ trong phòng.
Thêm nước cất đến vạch định mức và đậy nút bình lắc đều, sau đó để yên trong 1-2 phút trước khi lọc Khi tiến hành lọc, cần đậy phễu và sử dụng kính thủy tinh để tránh bay hơi nước, làm thay đổi nồng độ Đổ đi mẻ lọc đầu tiên và đảm bảo nước lọc phải trong suốt Cuối cùng, rót dung dịch vào ống phân cự 200 mm, nhớ tráng ống bằng dung dịch nước lọc 1-2 lần và rót nhẹ nhàng để tránh tạo bọt.
Để tải xuống tài liệu TIEU LUAN MOI, vui lòng gửi email đến skknchat123@gmail.com Đậy nắp ống phân cực bằng nắp thủy tinh bằng cách nhẹ nhàng đẩy nắp lên miệng ống, sau đó giữ yên và vặn nút cao su vào miệng ống để đảm bảo kín.
Lau khô hai đầu ống bằng giấy lọc và quan sát ống dưới ánh sáng để đảm bảo ống trong suốt, không có bọt khí; nếu có bọt, cần làm lại Sau đó, đặt ống phân cực vào máy, bật điện và tiến hành đo Ghi lại kết quả và nhiệt độ t.
Hàm lượng đường saccaroza tính theo %; X
Pt : hàm lượng đường đọc được trên máy ; t : nhiệt độ
Định lượng fructose trong dung dịch có lẫn đường khử khác
Để xác định hàm lượng riêng của glucose và fructose, cần phải đo lượng fructose trước Nếu các đường khử khác không đáng kể, hàm lượng glucose sẽ bằng tổng hàm lượng đường khử trừ đi hàm lượng fructose Quy trình bắt đầu bằng việc xác định tổng lượng đường khử, sau đó tiến hành đo lượng fructose.
5.1Nguyên tắc Đầu tiên oxi hóa glucose và các đường khử khác bằng dung dịch kiềm của iôt
CH 2 OH(CHOH) 4 CHO+ I 2 + 3NaOH = CH 2 OH(CHOH) 4 COONa + 2NaI + H 2 O
Trong điều kiện này, fructose không bị oxi hóa Sau đó xác định fructose bằng phương pháp Bertrand hoặc phương pháp vi lượng.
Dung dịch iot 0,2N trong KI, dung dịch NaOH 0,2N, dung dịch NaOH 5%, dung dịch
H 2 SO 4 5%, dung dịch Na 2 SO 3 5%, dung dịch methyl 0,02% (0,02g metyl đỏ(C 15 H 15 N 3 O 2 )
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Các thuốc thử dùng để xác định đường khử
Cho 20ml dung dịch thí nghiệm chứa tối đa 20mg glucose vào bình nón 250ml, sau đó trung hòa pH đến 6,5 – 7,0 Tiếp theo, thêm 5ml dung dịch iot 0,2N và 2,5ml dung dịch NaOH 0,2N từng giọt Cuối cùng, giữ hỗn hợp ở nhiệt độ phòng trong 15 phút.
Axit hóa dung dịch bằng 2ml H 2 SO 4 5% và loại iot dư bằng dung dịch Na 2 SO 3 5% (nhỏ từng giọt cho đến khi dung dịch mất màu vàng rơm).
Thêm vài giọt metyl đỏ vào hỗn hợp và trung hòa bằng dung dịch NaOH 5% Thể tích dung dịch thu được là Vđo, chỉ chứa fructose Phân tích fructose có thể thực hiện theo phương pháp Bertrand hoặc phương pháp vi lượng.
Nếu fructose được xác định theo phương pháp vi lượng thì hàm lượng đường được xác định theo công thức sau:
Trong đó: a- số ml Na 2 S 2 O 3 0,1N dùng chuẩn đội đối chứng, b - hệ số Na 2 S 2 O 3 0,1N chuẩn độ mẫu thí nghiệm, f - hệ số chỉnh nồng độ của Na 2 S 2 O 3 0,1N
3,3 - hệ số chuyển thành đường
V – tổng thể tích dịch chiết từm gam nguyên liệu (ml)
20 – lượng dung dịch thí nghiệm loại các đường khử khác (trừ fructose) V1– thể tích thí nghiệm (ml)
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Định lượng tinh bột theo phương pháp thủy phân bằng acid
Dưới tác động của acid, tinh bột sẽ được thủy phân thành glucose Để xác định hàm lượng tinh bột, ta cần đo lượng glucose tạo thành và nhân với hệ số 0,9.
Dung dịch HCl 5%, dung dịch NaOH 5%, dung dịch Pbb(CH 3 COO) 2 10% hoặc Pb(NO 3 ) 2 10%, dung dịch Na 2 SO 4 hoặc NaHPO 4 bão hòa.
Các thuốc thử dùng để xác định đường khử
Cân 200-250g tinh bột đã nghiền nhỏ và cho vào bình cầu 100ml Thêm 50ml nước cất vào bình, lắc đều và để yên trong 30-45 phút Sau đó, lọc hỗn hợp và loại bỏ nước lọc để tách bỏ đường tan.
Rửa tinh bột bằng nước cất từ 2-3 lần, sau đó chọc thủng giấy lọc và chuyển tinh bột vào bình cầu chứa 25ml dung dịch HCl 5% Đậy kín bình bằng nút cao su có nắp ống làm lạnh hồi lưu và đun cách thủy hỗn hợp trong 3-5 giờ Để kiểm tra sự thủy phân hoàn toàn của tinh bột, sử dụng dung dịch iot Cuối cùng, làm nguội và trung hòa hỗn hợp bằng dung dịch NaOH 5% đến pH 5,6-6,0, lưu ý không bỏ trực tiếp mẫu giấy quỳ vào bình.
Chuyển hỗn hợp vào bình định mức 100ml và kết tủa protein bằng dung dịch chì axetat 10% Sau đó, loại bỏ chì axetat bằng dung dịch Na2SO4 hoặc NaHPO4 bão hòa Tiếp theo, thêm nước cất đến vạch mức, lắc đều và lọc Cuối cùng, định lượng đường glucose trong dung dịch (lấy 5ml hoặc 10ml) bằng phương pháp Bertrand để tính hàm lượng tinh bột.
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Hàm lượng tinh bột được tính theo công thức sau:
Hàm lượng tinh bột (X) được tính bằng tỷ lệ phần trăm, trong đó a là số mg glucose được xác định từ bảng tính, tương ứng với thể tích KMnO4 đã sử dụng để chuẩn độ mẫu thí nghiệm, sau khi đã trừ đi thể tích KMnO4 dùng cho mẫu đối chứng.
V1– thể tích dung dịch đường (sau khi thủy phân) lấy để xác định đường glucose (ml)
V – dung tích bình định mức
W – khối lượng mẫu thí nghiệm (mg)
0,9 – hệ số quy chuyển glucozo thành tinh bột
Định lượng đường khử bằng phương pháp quang phổ so màu với thuốc thử
Phương pháp xác định hàm lượng đường khử dựa trên phản ứng tạo màu giữa đường khử và thuốc thử dinitrosalicylic acid (DNS) Cường độ màu của hỗn hợp phản ứng tỉ lệ thuận với nồng độ đường khử trong một khoảng nhất định Bằng cách sử dụng phương trình đường chuẩn, chúng ta có thể xác định chính xác hàm lượng đường khử trong mẫu thí nghiệm.
Quy trình xử lý mẫu:
Tương tự như phương pháp Bertand
Tiến hành phản ứng và dựng đường chuẩn glucose
Sử dụng dung dịch glucose chuẩn 0.1%, mẫu và thuốc thử để chuẩn bị dãy ống nghiệm sau:
Chuẩn bị dãy ống nghiệm chuẩn và mẫu, sau đó đun sôi cách thủy trong 5 phút và làm nguội nhanh đến nhiệt độ phòng Tiến hành đo mật độ quang ở bước sóng 540nm cho các mẫu chuẩn và mẫu trắng bằng máy quang phổ so màu.
Để xác định hàm lượng đường khử trong mẫu, lấy 1mL dịch trong cho vào ống nghiệm và sử dụng phương pháp so màu Tùy thuộc vào nồng độ đường khử trong mẫu, cần pha loãng hoặc chuẩn hóa theo tỷ lệ phù hợp Viết phương trình đường chuẩn A = f(C) để xác định hệ số tương quang R.
Dựa vào độ hấp thu tại bước sóng 540nm, chúng ta có thể xác định hàm lượng đường khử trong 1mL mẫu Từ đó, hàm lượng đường khử trong nguyên liệu ban đầu (G, %w/w) có thể được tính toán theo công thức.
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
X - nồng độ đường khử (theo glucose) trong dung dịch mẫu (mg/mL)
F - hệ số pha loãng từ bình định mức
Vđm - thể tích định mức dung dịch thí nghiệm m - khối lượng mẫu (g)
8 Xác định đường khử bằng phương pháp chuẩn độ oxi hóa khử với KALIFERRYCYANURE
Khi ferricyanure K3Fe(CN)6 phản ứng với đường khử, sản phẩm tạo thành là ferrocyanure, từ đó cho phép xác định lượng đường khử có trong dung dịch Quá trình chuẩn độ diễn ra trong môi trường kiềm NaOH và được đun nóng cùng với chỉ thị xanh metylen.
Phương pháp này dễ thực hiện hơn so với phương pháp sử dụng dung dịch kiềm của sulfat đồng, vì không tạo ra tủa và có phản ứng kết thúc rõ ràng Kết quả tính toán không dựa vào lý thuyết mà sử dụng công thức thực nghiệm Độ chính xác của kết quả chịu ảnh hưởng từ nhiều yếu tố, nhưng trình tự thực hiện và thao tác là yếu tố quan trọng nhất.
Quy trình xử lý mẫu : tương tự như phương pháp Bertrand
Chuẩn độ xác định hàm lượng đường khử
Từ mẫu ban đầu 1 gam (hoặc 1 mL nếu là mẫu lỏng), chúng ta tiến hành trích ly đường khử và pha loãng thành 100 mL để tạo ra dung dịch chứa đường khử thô Sau đó, cho dung dịch mẫu đã được lọc tách tạp chất vào burette để tiếp tục quá trình phân tích.
Cho 10mL dung dịch K3Fe(CN)6 1% và 2,5mL dung dịch NaOH 2,5N vào erlen Đun sôi và tiến hành chuẩn độ ngay trên bếp bằng dung dịch đường khử hoặc đường tổng từ burette, nhỏ từng giọt một và lắc mạnh Dung dịch ban đầu có màu vàng chanh của ferrycyanure Điểm dừng chuẩn độ được xác định khi màu vàng chanh biến mất, tạo ra dung dịch trong suốt không màu.
TIEU LUAN MOI tải về từ skknchat123@gmail.com trong khoảng 30 giây sẽ chuyển sang màu vàng rơm nhạt của ferrocyanure Nếu khó nhận biết điểm chuyển màu, có thể sử dụng một giọt chỉ thị methylen blue; nếu giọt đường thừa đầu tiên làm mất màu xanh, điều này cho thấy phản ứng đã kết thúc.
Kết quả của lần chuẩn độ đầu tiên chỉ mang tính chất tham khảo cho lần chuẩn độ thứ hai Trong lần này, sau khi đun sôi dung dịch ferrycyanure, cần xả nhanh lượng đường theo kết quả lần chuẩn độ trước, chỉ giữ lại khoảng dưới 1mL để tiếp tục chuẩn độ và xác định chính xác điểm cuối.
• Kết quả tính toán chỉ sử dụng từ lần chuẩn độ thứ hai trở đi.
• Thí nghiệm tương tự đối với dung dịch đường chuẩn là dung dịch glucose 0,5%.
Trong thí nghiệm, sử dụng Vk mL dung dịch mẫu và Vg mL dung dịch glucose 0,5% để phản ứng với dung dịch ferrycyanure ở nồng độ xác định Số lượng glucose trong dung dịch được tính là (0,5 x Vg)/100 g glucose tương ứng với Vk mL dung dịch mẫu.
Lượng đường khử được tính bằng công thức:
Xk– lượng đường khử, g/100g hay g/100mL
Vg– thể tích dung dịch glucose 0,5% cho chuẩn độ, mL
Vk– thể tích dung dịch đường khử cho chuẩn độ, mL
V – thể tích bình định mức, mL (100 mL) m – lượng mẫu thí nghiệm, g hoặc Ml
8 Xác định đường khử bằng phương pháp chuẩn độ oxi hóa khử với KALIFERRYCYANURE
Lipid là các dẫn xuất của acid béo cao phân tử và alcohol, bao gồm dầu thực vật và mỡ động vật Ở động vật, lipid chủ yếu tập trung trong mô mỡ, não và sữa, trong khi ở thực vật, lipid thường có mặt nhiều trong hạt như đậu nành, đậu phộng, oliu, hướng dương và cám.
Chất béo có thể hoà tan trong ether, chloroform, hoặc các dung môi hữu cơ khác, không hòa tan trong nước.
Các phương pháp định lượng lipid:
1 Định lượng lipid tổng trong mẫu rắn bằng phương pháp
Sử dụng dung môi kỵ nước để trích ly lipid từ nguyên liệu nghiền nhỏ, quá trình này cũng thu hồi một số thành phần hòa tan trong chất béo như sắc tố, vitamin tan trong chất béo và các chất mùi, mặc dù hàm lượng của chúng tương đối thấp Kết quả trích ly thường chứa tạp chất, vì vậy sản phẩm thu được được gọi là lipid tổng hay dầu thô.
Hàm lượng lipid tổng có thể được xác định bằng cách cân trực tiếp lượng dầu sau khi chưng cất và loại bỏ hoàn toàn dung môi, hoặc tính gián tiếp từ khối lượng bã còn lại sau khi đã trích ly hoàn toàn lipid bằng dung môi.
Để tiến hành quá trình trích ly, trước tiên cần sấy khô nguyên liệu đến khi đạt khối lượng không đổi Cân khoảng 5g nguyên liệu đã được nghiền nhỏ và cho vào túi giấy chuyên dụng cho bộ Soxhlet đã được sấy khô và xác định khối lượng Tiếp theo, đặt túi giấy vào trụ chiết và lắp cốc chứa dung môi vào vị trí cố định trên thiết bị Mở van để cho nước lạnh vào ống sinh hàn, bật công tắc bộ gia nhiệt và điều chỉnh nhiệt độ trích ly Quá trình trích ly sẽ được thực hiện qua hai giai đoạn.
- Giai đoạn 1: nhúng toàn bộ trụ chiết chứa nguyên liệu vào cốc chứa dung môi, thời gian tiến hành là 2 – 3 giờ.
- Giai đoạn 2: kéo trụ chiết lên khỏi cốc dung môi và tiếp tục trích ly bằng dung môi đã hoàn lưu.
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
LIPID (CHẤT BÉO)
Định lượng lipid tổng trong mẫu rắn bằng phương pháp Soxhlet
Sử dụng dung môi kỵ nước để trích ly lipid từ nguyên liệu nghiền nhỏ, quá trình này cũng thu hồi một số thành phần hòa tan trong chất béo như sắc tố, vitamin tan trong chất béo và các chất mùi, mặc dù hàm lượng của chúng khá thấp Do sự hiện diện của tạp chất, sản phẩm thu được được gọi là lipid tổng hay dầu thô.
Hàm lượng lipid tổng có thể được xác định bằng hai phương pháp: một là cân trực tiếp lượng dầu sau khi đã chưng cất và loại bỏ hoàn toàn dung môi, hai là tính toán gián tiếp thông qua khối lượng bã còn lại sau khi lipid được trích ly hoàn toàn bằng dung môi.
Sấy khô nguyên liệu đến khối lượng không đổi và cân khoảng 5g nguyên liệu đã nghiền nhỏ, sau đó cho vào túi giấy chuyên dụng cho bộ Soxhlet đã được sấy khô Đặt túi giấy vào trụ chiết, lắp cốc chứa dung môi vào vị trí cố định trên thiết bị, mở van để nước lạnh vào ống sinh hàn, và bật công tắc bộ gia nhiệt để điều chỉnh nhiệt độ trích ly Quá trình trích ly có thể được thực hiện qua hai giai đoạn.
- Giai đoạn 1: nhúng toàn bộ trụ chiết chứa nguyên liệu vào cốc chứa dung môi, thời gian tiến hành là 2 – 3 giờ.
- Giai đoạn 2: kéo trụ chiết lên khỏi cốc dung môi và tiếp tục trích ly bằng dung môi đã hoàn lưu.
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Hình 5: Thiết bị chiết Soxhlet
Hàm lượng phần trăm chất béo tính theo công thức:
M1 là khối lượng túi giấy và mẫu ban đầu, g M2: khối lượng túi giấy và mẫu sau khi trích lipid và sấy khô, g M: khối lượng mẫu ban đầu, g
2 Định lượng lipid tổng trong mẫu lỏng bằng phương pháp Adam Rose-Gottlieb 2.1Nguyên tắc
Chất béo trong mẫu sữa được trích ly bằng cách sử dụng bốn dung môi khác nhau: amoniac, cồn, diethyl ether và petroleum ether Amoniac và cồn được áp dụng để kết tủa và loại bỏ protein khỏi các hạt cầu béo Diethyl ether được sử dụng để trích ly chất béo và các thành phần hòa tan trong béo, trong khi petroleum ether được bổ sung nhằm trích ly chất béo và một lượng nhỏ các thành phần hòa tan trong béo, do có tính chọn lọc cao hơn so với diethyl ether.
Sau khi bổ sung dung môi và khuấy đảo, hỗn hợp sẽ tách thành hai pha: pha nhẹ ở trên chứa dung môi và béo, trong khi pha nặng ở dưới bao gồm nước và các chất hòa tan Chúng ta thu được pha nhẹ gồm dung môi và béo, và sau khi làm bay hơi dung môi, ta sẽ thu được tổng lượng béo có trong mẫu sữa.
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Lấy 10mL dịch sữa cho vào bình Erlen 250mL, sau đó thêm 1.5mL dung dịch NH3 và 10mL cồn Lắc đều hỗn hợp trong 1 phút Tiếp theo, bổ sung từ từ 25mL diethy ether và lắc đều trong 10 phút Cuối cùng, thêm 25mL diethy ether nữa và tiếp tục lắc đều hỗn hợp trong 10 phút.
Chuyển hỗn hợp sữa và dung môi vào phễu chiết, sau đó tráng erlen bằng petroleum ether để trích ly béo còn sót lại Để quá trình tách lớp diễn ra tự nhiên trong 30 phút, hỗn hợp sẽ tách thành hai pha: pha nhẹ chứa dung môi diethy ether, petroleum ether và béo, pha nặng gồm protein kết tủa, cồn, NH3 và các thành phần khác Thu pha nhẹ vào đĩa petri và đặt trong tủ hút cho đến khi dung môi bay hơi gần hết, sau đó sấy đĩa petri ở 102 ± 1 0 C cho đến khi đạt khối lượng không đổi (khoảng 1 giờ) Cuối cùng, làm nguội đĩa petri chứa béo về nhiệt độ phòng và tiến hành cân định lượng.
Hàm lượng chất béo có trong 100mL dịch sữa được tính theo công thức sau:
Hàm lượng tổng chất béo (TF) trong sữa được tính bằng gam trên mỗi 100mL dịch sữa (g/100mL) Để xác định TF, cần biết khối lượng đĩa petri cùng với chất béo sau khi sấy, khối lượng đĩa petri ban đầu, và thể tích sữa được phân tích, thường là 10mL.
Phương pháp Chloroform- Methanol
Sử dụng methanol và chloroform để hòa tan chất béo trong mẫu thực phẩm, tạo ra một hỗn hợp sẽ tách thành hai lớp Sau đó, tách lấy lớp chất béo, sấy khô đến khi đạt khối lượng không đổi và tiến hành cân định lượng.
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
• Trộn 1g mẫu và 10ml Methanol và đồng hóa bằng cấy đảo trộn trong 1 phút.
• Bổ sung 20ml Chloroform và đồng hóa trong 2 phút.
• Lọc hỗn hợp qua giấy lọc ( dung môi hòa tan chất béo hoặc xác chất rắn )
• Bổ sung dịch lọc với 30ml hỗn hợp Chloroform-Methanol với tỷ lệ 2:1 và lọc lần hai với giấy lọc.
• Xác định thể tích dịch lọc và bổ sung dung dịch KCL 0.88 % vào dịch lọc với thể tích bằng 25% thể tích dịch lọc.
• Lúc này, hỗn hợp tách làm hai lớp: lớp dưới là dung môi hòa tan béo,lớp trên chứa KCL.Ta thu nhận lớp dung môi hòa tan béo.
• Xác định thể tích dịch trích và bổ sung nước với thể tích bằng 25% thể tích dịch trích.
Để loại bỏ nước trong hỗn hợp, bổ sung Na2SO4 và lọc qua giấy lọc Sau đó, rửa natri sunfat trên giấy lọc bằng chloroform Tiếp theo, đặt hỗn hợp chloroform - lipid vào bình đáy tròn và sử dụng thiết bị bay hơi quay để loại bỏ chloroform ở nhiệt độ nước dưới 50°C, từ đó thu được lượng lipid trong mẫu.
Phương pháp Babcook
Sử dụng H2SO4 để kết tủa protein không chỉ tạo ra nhiệt mà còn giải phóng chất béo, dẫn đến sự tách biệt thành hai lớp: lớp trên chứa chất béo và lớp dưới là các chất hòa tan Đo thể tích lớp trên giúp xác định tỷ lệ phần trăm chất béo trong hỗn hợp.
Để thực hiện quy trình, bạn cho mẫu vào chai Badcook và thêm acid vào Acid sẽ từ từ chảy xuống cổ chai, giúp protein kết tủa, sinh nhiệt và giải phóng chất béo Cuối cùng, hãy ly tâm hỗn hợp bằng cách lắc mạnh trong 5 phút.
• Bổ sung nước vào chai để đẩy chất béo lên trên cổ chai.Thắt chặt các nút và kết hợp lắc trong 4 phút.
• Đặt chai trong cốc nước 60-63°C trong 5 phút rồi xác định thể tích chất béo bằng vạch đo trên cổ chai.
Xác định hàm lượng chất béo bằng phương pháp Lolch
Dung dịch KCl 0,37M (27,58g//); Cồn tuyệt đối 99".
Cân 1 g mẫu phân tích đã nghiền nhỏ (nếu mẫu phán tích là chất rắn) hoặc lấy 2,5-3ml (nếu mẫu phân tích là chất lỏng) vào cốc của máy li tâm (cốc có nút đậy).
Thêm vào đó 20ml hổn hợp CHCl 3 /CH 3 OH với li lệ 2:1 theo thể tích, lắc mạnh trong
Trộn 1 phỳt mẫu bằng máy khuấy từ hoặc máy đồng nhất, sau đó thêm 80ml HCl 6N và để yên ít nhất 2 giờ Tiếp theo, thêm 4,2ml dung dịch KCl 0,37M, lắc mạnh và cho vào máy li tâm quay khoảng 10 phút Cuối cùng, dùng pipet để loại bỏ phần trên, giữ lại phần dưới để sử dụng.
Pha 10 ml dung dịch H2O/CH3OH/CHCl3 theo tỉ lệ 47/48/3, sau đó lắc mạnh và ly tâm Loại bỏ phần dung dịch phía trên và giữ lại phần dưới, thêm vào 10 ml dung dịch.
H 2 O/CH 3 OH/CHCl 3 rồi lặp lại như trên lần 2.
Sau khi loại bỏ phần trên, phần còn lại được cho vào phễu chiết Tiếp theo, thêm một ít CHCl3 và nước cất, sau đó lắc mạnh để lắng Cuối cùng, thu hồi phần dưới vào một bình cầu đã chuẩn bị sẵn.
Để thực hiện quá trình chiết xuất, trước tiên cần cân trọng lượng mẫu và chuẩn bị dung môi CHCl3 cùng với nước Sau đó, cho thêm CHCl3 và nước vào phần còn lại trong phễu chiết, lắc đều để thu hồi hoàn toàn chất béo còn lại ở phần trên.
Sau khi thu hồi phần dưới vào bình cầu, lắp bình cầu vào bộ cất chân không để loại bỏ CHCl3 Tiếp theo, thêm một ít cồn tuyệt đối vào bình cầu và tiến hành cất để làm khô Phần còn lại trong bình cầu là chất béo Đặt bình cầu vào bình hút ẩm và cân Nếu thấy bình cầu đục hoặc có cặn, thêm một ít CHCl3, lọc qua lớp bột amiăng, cát và bông thủy tinh, sau đó cất để tách hết CHCl3.
Hàm lượng chất béo theo % tính bằng công thức sau:
G1: trọng lượng bình cầu chứa chất béo (g)
G: trọng lượng mẫu phân tích (g)
PHÂN TÍCH VITAMIN
Caroten: Xác định caroten bằng phương pháp cột
Phương pháp sắc ký cột được sử dụng để tách caroten ra khỏi lương thực và thực phẩm bằng cách cho một lượng nhỏ chất phân tích vào đầu cột, sau đó cho pha động chạy qua cột Các cấu tử sẽ được giữ lại khác nhau tùy thuộc vào ái lực của chúng với pha tĩnh; chất có ái lực mạnh sẽ bị giữ lại lâu hơn, trong khi chất có ái lực yếu sẽ được cuốn ra với tốc độ khác nhau Cuối cùng, các cấu tử đã được tách ra sẽ được so sánh với mẫu chuẩn để xác định độ chính xác.
Cát tinh chế được thực hiện bằng cách đổ cát qua rây có lỗ đường kính 4 - 5mm Sau đó, rửa cát bằng nước máy và thêm HCl với tỷ lệ 1/1 vào cát, khuấy đều và ngâm qua đêm Tiếp theo, rửa cát cho đến khi hết axit, sau đó rửa lại bằng nước cất và sấy khô.
• Chất hấp phụ: nhôm oxit (Al 2 O 3 )
• Dung dịch azobenzen tiêu chuẩn
Để thực hiện quá trình nghiền mẫu lương thực và thực phẩm khô, đầu tiên, cân 5g mẫu và cho vào cối sứ cùng với 5g cát sạch, sau đó nghiền kỹ trong 30 phút Để đảm bảo độ khô, thêm vào cối 10g Na2SO4 khan và tiếp tục nghiền hỗn hợp trong 30 phút nữa.
Để chuẩn bị cột sắc ký, đầu tiên cho 5g cát sạch vào dưới cột và để khô trong 30 phút Tiếp theo, thêm một lớp bông thấm nước để làm khô kỹ hơn Sau đó, nhồi khoảng 2/3 cột bằng nhôm oxyt và dùng đũa thủy tinh nén chặt nhôm oxyt Cuối cùng, đặt một lớp bông dày 1cm lên trên cùng của cột.
Bột khô từ cối được đưa vào phần trên của cột sắc ký Tiếp theo, cho benzen vào cột cho đến khi lớp bột không còn thấm benzen Sử dụng bơm hút nhẹ để rửa lớp bột bằng benzen chậm rãi cho đến khi không còn giọt màu vàng chảy ra từ cột vào bình hứng Cần lưu ý phủ ngập lớp bột bằng benzen vì caroten rất dễ bị oxy hóa bởi không khí.
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Chuyển toàn bộ caroten từ bình hứng vào bình định mức 50ml hoặc 100ml, tùy thuộc vào thể tích nước hứng được, và thêm benzen đến vạch mức rồi lắc nhẹ Dung dịch caroten này sẽ được so màu với dung dịch azobenzen tiêu chuẩn đã pha loãng 10 lần Trong 1ml dung dịch có màu giống dung dịch azobenzen tiêu chuẩn chứa 0,00235 mg caroten.
Xác định vitamin A bằng phương pháp so màu
Vitamin A là một alcohol cao cấp chưa no, có công thức hóa học đặc trưng và thường kết hợp với axit béo như palmitic và stearic để tạo thành este phức tạp Để xác định vitamin A, cần thực hiện quá trình xà phòng hóa các sản phẩm, sau đó xác định vitamin A trong phần không xà phòng hóa Vitamin A được tách ra từ dung dịch không xà phòng hóa bằng chloroform khan, và khi phản ứng với antimony (III) clorua, nó tạo ra sản phẩm màu xanh, cho phép so màu với dung dịch tiêu chuẩn.
Cần 10 đến 20g mẫu cho vào bình nóng dung tích 250ml thêm 20ml dung dịch kali hydroxit 20% trong rượu etylic Đậy bình bằng nút bất có gắn ống làm lạnh và đun hồi lưu trên nồi cách thủy ở nhiệt đọ 85-90 o C trong 2 giờ để xà phòng hóa Dung dịch đã xà phòng hóa được pha loãng bằng 20ml nước cất rồi chuyển vào phễu chiết thêm vào phễu chiết 50ml ete etylic và lắc kĩ ( để tránh huyền phù cần chiết dịch lúc nguội và lắc mạnh ) chiết phần không xà phòng hóa ra, tiếp tục lắc và chiết lấy lớp trên vào phễu chiết thứ 2. Rửa dịch chiết bằng nước cất trong 3-4 lần mỗi lần 20ml nước cất cho đến khi nước rửa có phản ứng trung tính ( thử bằng giấy quỳ) Làm khô nước chiết đã rửa bằng 6gam natrisunfat khan trong 30 phút Chuyển cả dung dịch vào cốc, sau đó đun đuổi este trên nồi cách thủy.
Hòa tan cặn không xà phòng hóa bằng cloroform sau khi đã loại bỏ hoàn toàn este, sau đó chuyển dung dịch vào bình định mức 25ml Tiếp theo, thêm cloroform cho đến vạch định mức và lắc nhẹ để hòa trộn.
Cho 0,2ml dung dịch vào ống nghiệm khô, sạch, cùng màu và kích thước với ống chứa dung dịch tiêu chuẩn Thêm 1-3 giọt anhydric axetic và 2ml dung dịch SbCl3 bão hòa, lắc nhanh và đo màu trong vòng 20 giây với ống tiêu chuẩn, không để quá 10 giây sau khi lắc.
Xác định vitamin C
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Vitamin C (axit ascorbic) là một chất dinh dưỡng quan trọng có mặt trong cả cơ thể động vật và thực vật Phân tử ascorbic chứa nhóm dienol (-COH=COH-) với tính khử mạnh, khiến vitamin C dễ dàng bị oxy hóa thành axit dehydroascorbic, trong một phản ứng có tính thuận nghịch.
Acid ascorbic, với tính khử mạnh, đã dẫn đến việc phát triển nhiều phương pháp hóa học để định lượng Trong số đó, phương pháp cho acid ascorbic khử muối natri của 2,6-diclophenolindophenol được coi là chính xác và phổ biến nhất.
Vitamin C được xác định bằng cách chiết xuất từ thực phẩm sử dụng acid acetic hoặc acid clohydric Sau đó, nước chiết được chuẩn độ trong môi trường axit với pH từ 3 đến 4 bằng 2,6 diclophenolindophenol, từ đó tính toán được lượng vitamin C có trong mẫu.
• Lượng cân sản phẩm lấy tùy thuộc vào hàm lượng vitamin C của nó.
• Có thể dùng acid oxalic 1% để tráng cối và thêm đến vạch mức, hoặc dùng acetat chì 5%(5ml) để kết tủa protein, loại trừ chất khử và sắc tố.
Sử dụng pipet, hút 5ml dịch lọc chứa vitamin C vào bình nón hoặc cốc nhỏ, sau đó thêm 5ml dung dịch oxalat amoni bão hòa và 10ml nước cất Tiến hành định phân bằng dung dịch 2,6 diclophenolindophenol 0,001N từ microburet cho đến khi xuất hiện màu hồng bền, không bị mất màu trong 1 phút.
Xác định vitamin B1 bằng phương pháp so màu huỳnh quang
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Vitamin B1 (thiamin) có công thức cấu
Vitamin B1, hay thiamin, có khả năng bền vững trong môi trường axit, không bị phân hủy khi đun nóng ở pH = 3 tới 120 độ C Thiamin dễ dàng tan trong nước, rượu etylic loãng, rượu metylic và axit axetic, nhưng không tan trong cloroform, rượu butylic, isobutylic, isoamylic, ete petro và ete sunfuric.
Thiamin rất nhạy cảm với oxy hóa và khử, và khi bị oxy hóa, nó chuyển thành thiocrom, một chất có màu huỳnh quang xanh dưới tác dụng của tia cực tím Phản ứng oxy hóa này là cơ sở để xác định vitamin B1, với tỷ lệ đương lượng là một phân tử thiamin tạo thành một phân tử thiocrom Để phản ứng này diễn ra, thiamin cần được giải phóng khỏi mẫu bằng cách sử dụng chế phẩm men.
Rượu butylic, isobutylic và isoamylic cần phải không có tính phát huỳnh quang Để loại bỏ chất phát huỳnh quang, có thể sử dụng than hoạt tính với tỷ lệ 15 gram than cho mỗi 1 ml rượu Hỗn hợp rượu và than nên được lắc trong 30 phút trên máy lắc, sau đó làm khan bằng CaCl2 và tiến hành chưng cất ở nhiệt độ thích hợp.
Chế phẩm men từ vi khuẩn ti penicillum được sản xuất bằng cách sấy khô ở nhiệt độ dưới 40°C Sau đó, men được chiết xuất bằng phương pháp nghiền vi khuẩn ti với dung dịch natri axetat.
• Dung dịch vitamin B1 tiêu chuẩn.
Cân 5-10g mẫu, nghiền kỹ trong cối sứ với 10-15ml H 2 SO 4 0,1N Chuyển cả vào bình định mức, thêm H 2 SO 4 đến 75ml.Đặt bình vào cách thủy sôi trong 45 phút, lắc đều.Để nguội bình và cho chế phẩm men vào.Đặt bình vào máy điều nhiệt ở 40 0 C trong 12 giờ.Sau đó lấy bình ra, thêm nước cất đến vạch mức, lắc kỹ, lọc.
Hút lấy 10ml nước lọc cho vào phễu chiết, thêm vào 20ml rượu butylic, lắc mạnh 1-2
Để thực hiện quá trình chiết tách lớp rượu, đầu tiên thêm 1ml dung dịch K 3 Fe(CN) 6 1% và 3ml dung dịch NaOH 15% vào hỗn hợp, sau đó lắc nhanh Tiếp theo, thêm 10ml rượu butylic và lắc đều một lần nữa Cuối cùng, tách bỏ lớp nước và lọc lớp rượu qua giấy lọc chứa Na 2 SO 4 khan.
Chuyển dung dịch vào ống nghiệm có kích thước và dung tích tương đương với dãy ống tiêu chuẩn Tiến hành đo cường độ huỳnh quang của mẫu thử so với dãy tiêu chuẩn bằng máy huỳnh quang Đo cường độ huỳnh quang dưới ánh sáng tử ngoại từ đèn thạch anh thủy ngân, sử dụng kính lọc màu đen.
Bảng 3: Một số Vitamin và các phương pháp phân tích
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
KHOÁNG
Phương pháp định lượng Canxi (trong mẫu sữa)
Oxalate omonium sẽ làm trầm hiện hoàn toàn ion Ca có sẵn trong dung dịch nào đó nếu dung dịch thỏa mãn những điều kiện sau đây:
Dung dịch (COONH 4 ) 2 phải bão hòa sôi và được đổ vào một lần.
Làm lạnh ngay hỗn hợp sau khi nấu sôi 1 phút.
Lấy 3 chén nung trên đó đã được đánh số trước.Cân đúng trong mỗi chén nung một lượng sữa bột từ 0.5 đến 0.6 g Nung khô nhẹ cho đến khi hết bốc khói, để vào lò vô cơ hóa 1 phút. Để nguội dần.Thêm 5ml nước cất và 5 giọt HCl đậm đặc khuấy đều.Để sang một cốc thủy tinh 250ml (đã đánh số trước) và rửa với lượng tối thiểu nước Thêm vào 2 hay 3 giọt rouge dimethyl và trung hòa HCl bởi NH 4 OH 1/10.Thêm acetic acid loãng để đem pH về từ đến 5,2 (màu hồng cam). Đun sôi Trong khi khuấy dung dịch cho vào đó một lần từ 2 tới 3 ml (COONH 4 ) 2 bão hòa Đun sôi tiếp trong nửa phút (khuấy đều).Làm lạnh tức khắc bằng cách nhúng cốc thủy tinh vào một chậu nước lạnh.Để yên trong 20 đến 30 phút.
Lọc, tráng sạch cốc thủy tinh.Rửa trầm hiện bằng nước cất tới khi hết ion (COO)2 thử bằng CaCl2.
Bỏ cả giấy lọc và trầm hiện trở vào trong cốc thủy tinh ban đâu thêm 20 ml H2SO4
N Đun đến chừng 70 0 Dịnh phân (COOH)2 sinh ra bằng KMnO4 N/50
Tính ra gram lượng Ca chứa trong 100 g sữa bột.
Phương pháp phân tích mangan
• Dùng phương pháp so màu chuẩn độ bằng dung dịch kali pemanganat 0.01 N.
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Để phân tích mangan, cần lấy mẫu không nhỏ hơn 250ml Mẫu cần được cố định bằng cách thêm 3ml acid nitric hoặc 5ml acid clohidric với tỷ lệ 1.1 trong 1000ml nước cho đến khi đạt pH=2 Mẫu đã được cố định có thể sử dụng trong vòng một tháng.
Kali pesunfat và ion Ag+ được sử dụng làm chất xúc tác trong môi trường acid để oxy hóa Mn2+ thành MnO4- Kết quả của quá trình này được xác định thông qua máy đo màu hoặc so màu chuẩn độ bằng dung dịch kali pemanganat 0.01 N.
NƯỚC
Nhiệt độ
Để xác định nhiệt độ của nước, người ta thường dùng nhiệt kế thủy ngân có chia độ từ 0-50o
C).Muốn xác định nhiệt độ của nước ở tầng mặt, ta đặc bầu thủy ngân của nhiệt kế vào trong nước ở độ sâu 15-20 cm, cho đến khi nhiệt độ trong nhiệt kế không đổi (khoảng 5 phút), sau đó nghiêng nhiệt kế và đọc nhiệt độ của nước xong mới lấy nhiệt kế lên khỏi mặt nước.
Để xác định nhiệt độ nước ở tầng giữa hoặc tầng đáy của thủy vực, bạn cần cắm nhiệt kế vào nắp bình thu mẫu nước Sau đó, thả bình xuống đúng vị trí cần đo, đổ đầy nước vào bình và để yên trong 5 phút Cuối cùng, kéo bình lên và đọc ngay nhiệt độ nước tại tầng đó.
Chúng ta cũng có thể đo nhiệt độ bằng máy, hiện nay một số máy đo pH hay máy đo
DO được chế tạo có thể đo được cả chỉ tiêu nhiệt độ.
Độ pH
Giấy chỉ thị pH được tẩm dung dịch màu, sau khi sấy khô sẽ được đóng gói Khi giấy tiếp xúc với nước, nó sẽ chuyển màu tùy thuộc vào pH của nước đó Để xác định pH, bạn chỉ cần so màu của giấy với bảng màu tiêu chuẩn có sẵn trên nắp hộp.
2.2 Phương pháp điện thế - máy đo pH
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Ion H+ hoạt động (pH) được xác định trực tiếp bằng phép đo điện thế Sức điện động
Điện thế của tế bào Galvanic liên quan chặt chẽ đến hoạt động của ion H+ trong dung dịch, theo phương trình Nernst Điện thế sinh ra từ tế bào tỷ lệ thuận với nồng độ ion H+ trong mẫu nước, và giá trị điện thế này được đo bằng điện thế kế, sau đó được chuyển đổi thành trị số pH hiển thị trên màn hình của thiết bị.
Tế bào Galvanic được cấu tạo từ một điện cực thủy tinh và một điện cực Calomel, trong đó điện cực Calomel tiếp xúc với mẫu nước thông qua một tia Amiăng ở đầu điện cực Khi điện cực Calomel tiếp xúc với mẫu nước, sẽ xảy ra phản ứng hóa học.
Điện cực thủy tinh bao gồm một điện cực Ag - AgCl được ngâm trong dung dịch HCl 0,1M, có khả năng nhạy cảm cao với ion H+ Phản ứng điện hóa diễn ra theo phương trình H g2Cl + 2e - ⇔ 2Hg + 2Cl - Màng thủy tinh bảo vệ điện cực, giúp tăng độ chính xác trong việc đo lường nồng độ ion H+.
Khi ion H+ được màng thủy tinh hấp thụ, điện thế của điện cực sẽ xuất hiện Quá trình hấp thụ 1 ion H+ trên màng thủy tinh sẽ dẫn đến việc phóng thích 1 ion Li+ từ màng thủy tinh vào dung dịch điện cực.
Theo Peters (1975) thì tế bào Galvanic đối với việc xác định pH có thể được viết như sau:
Ag / AgCl, HCl (0.1M) / màng thủy tinh / mẫu nước / Hg2Cl2, KCl / Hg
Trong tế bào Galvanic, tất cả các điện thế đều giữ nguyên, ngoại trừ điện thế giữa màng thủy tinh và mẫu nước, cũng như giữa mẫu nước và dung dịch KCl trong điện cực Calomel.
Độ trong (Transparency), độ đục (Turbidity)
Có nhiều phương pháp để xác định độ trong và độ đục của nước, trong đó kỹ thuật phổ biến nhất trong nuôi thủy sản là sử dụng đĩa secchi Độ đục có thể được đo chính xác bằng máy đo độ đục theo phương pháp Nephelometric Bên cạnh đó, lượng vật chất lơ lửng trong nước cũng có thể được xác định thông qua tổng lượng chất rắn hòa tan (TDS) và tổng lượng chất rắn lơ lửng (TSS).
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
3.1 Đo độ trong bằng đĩa Secchi Đĩa secchi dạng hình tròn làm bằng vật liệu không thấm nước (inox, thiếc, tole ) chia đĩa làm 4 phần đều nhau, sơn hai màu đen và trắng xen kẽ nhau Đĩa được treo trên một que hay trên một sợi dây có đánh dấu khoảng cách mỗi khoảng chia là 5 hoặc 10cm.
Khi đo độ trong của nước ao bằng đĩa Secchi, đầu tiên thả đĩa từ từ xuống nước cho đến khi không còn phân biệt được hai màu đen trắng trên mặt đĩa, sau đó ghi nhận khoảng cách lần 1 Tiếp theo, thả đĩa sâu hơn và kéo lên cho đến khi vừa phân biệt được hai màu, ghi nhận khoảng cách lần 2 Độ trong của nước được tính bằng trung bình của hai lần ghi nhận khoảng cách này.
3.2 Đo độ đục bằng phương pháp Nephelometric
Thiết bị đo độ đục có các bộ phận dò ánh sáng được đặt ở vị trí vuông góc (90o
) so với chùm tia tới được gọi là máy đo ánh sáng khuếch tán.
Phương pháp đo độ đục dựa trên việc so sánh cường độ ánh sáng tán sắc của mẫu với cường độ ánh sáng khuếch tán của mẫu chuẩn trong điều kiện tương tự Độ đục càng cao tương ứng với cường độ ánh sáng khuếch tán càng lớn Formazin polymer được sử dụng làm chất lơ lững trong mẫu chuẩn, với độ đục có thể xác định lên đến 4000 NTU Một số thiết bị, như Model QWC-22A-TOA từ Nhật Bản, cho phép đo độ đục theo đơn vị mg/L Chất lơ lững tiêu chuẩn cho dung dịch đối chứng là Kaolin tinh chế, theo tiêu chuẩn công nghiệp Nhật Bản (JIS) Việc đo độ đục trở nên dễ dàng với các máy đo này.
Tổng chất rắn hòa tan (TDS) và tổng chất rắn lơ lửng (TSS)
Chất rắn trong nước bao gồm hai loại: vật chất hòa tan và không hòa tan Để xác định tổng lượng chất rắn hòa tan (TDS), mẫu nước cần được lọc để loại bỏ vật chất không hòa tan Sau đó, nước đã lọc sẽ được bốc hơi, và phần còn lại sẽ được cân để tính hàm lượng chất rắn hòa tan, được biểu thị bằng mg/L Tổng lượng chất rắn hòa tan bao gồm cả vật chất hữu cơ và vô cơ hòa tan.
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Tổng lượng chất rắn lơ lửng (TSS) được xác định bằng cách cân trọng lượng chất còn lại trên giấy lọc sau khi lọc nước để phân tích chất rắn hòa tan TSS thể hiện lượng vật chất không hòa tan lơ lửng trong nước, được đo bằng mg/L Để phân tích tổng chất rắn hòa tan và tổng chất rắn lơ lửng, cần sử dụng các vật liệu và dụng cụ như giấy lọc sợi thủy tinh và tủ nung ở nhiệt độ 550oC.
C, bình làm nguội hút ẩm, hệ thống lọc chân không cân phân tích.
4.1 Tổng chất rắn hòa tan TDS (Total dissolved Solid)
Thu mẫu vào bình 1 lít và đậy kín Bảo quản lạnh 4o
C Ngâm giấy lọc thủy tinh trong
24 giờ, sau đó sấy khô
Nung cốc sứ (đĩa sành) ở nhiệt độ 550o
C trong 30 phút, sau đó làm nguội trong bình hút ẩm và cân khối lượng của cốc sứ (W1)
Hệ thống lọc chân không được sử dụng để lọc nước, sau đó lấy 100mL nước đã lọc cho vào cốc sứ đã chuẩn bị sẵn Tiếp theo, cốc sứ này được đặt vào tủ sấy ở nhiệt độ 95 độ C để đảm bảo quá trình xử lý hiệu quả.
C.Sau đó gia tăng nhiệt độ lên 105o
Làm nguội đĩa và cân trọng lượng 2 (W2)
Tổng lượng chất rắn hòa tan được tính theo công thức sau:
Trong đó: W 2 – Trọng lượng đĩa lần 2 (mg)
W 1 – Trọng lượng đĩa lần 1 (mg)
4.2 Tổng chất rắn lơ lửng TSS (Total Suspended Solid)
Thu mẫu vào bình 1 lít và đậy kín Bảo quản lạnh 4o
C Lọc mẫu bằng giấy lọc có cấu tạo bằng chất liệu sợi thủy tinh đường kính 47 mm, cỡ
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com lọc 0,22 - 0,45 àm. Đánh số mẫu trên giấy lọc.
C trong 2-3 giờ.Cân và ghi khối lượng giấy lọc (Wo) Lắc đều mẫu nước trước khi lọc.
Lọc mẫu nước, ghi thể tích mẫu nước đã lọc (V mL)
C trong 2-3 giờ, hút ẩm 30 phút trong bình hút ẩm, cân khối lượng (W1).
C trong 2-3 giờ, hút ẩm 30 phút trong bình hút ẩm, cân khối lượng (W2)
Các chỉ tiêu về vật chất lơ lửng được tính theo công thức sau:
Trong đó: V – Thể tích mẫu nước đã lọc (mL)
The article discusses key terms related to water quality measurement, including W, which represents weight in milligrams (mg), TSS, indicating total suspended solids, OSS, referring to organic suspended solids, and ISS, denoting inorganic suspended solids Understanding these components is essential for assessing water quality and environmental health.
Độ dẫn điện (EC)
Độ dẫn điện là khả năng dẫn dòng điện của dung dịch, phụ thuộc vào sự hiện diện và tính chất của các ion, bao gồm nồng độ, tính linh động, hóa trị và nhiệt độ Các dung dịch của hầu hết các hợp chất vô cơ thường có độ dẫn điện cao, trong khi các phân tử hữu cơ thường dẫn điện kém Đơn vị đo độ dẫn điện là micromho/cm (àmho/cm) hoặc millisiemens/m (mS/m), với 1 mS/m tương đương 1 àmho/cm và 1 àmho/cm = 1 àS/cm Trong nước ngọt, độ dẫn điện thường dao động từ 50 đến 1.500.
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com àmho/cm (Theo Hiệp hội sức khỏe cộng đồng người Mỹ-APHA, 1989; Arce và Boyd,
Độ dẫn điện trong môi trường nước lợ và mặn cao hơn nhiều so với nước ngọt, và nó có mối liên hệ chặt chẽ với nồng độ muối, khi nồng độ ion tăng thì độ dẫn điện cũng tăng theo Trong nuôi trồng thủy sản, việc đo nồng độ muối thường được ưu tiên hơn so với đo độ dẫn điện Máy đo độ dẫn điện được sử dụng phổ biến để ước tính nhanh mức độ khoáng hóa của nước tự nhiên và xác định mức độ ô nhiễm từ nguồn nước thải công nghiệp.
Nồng độ muối
Nồng độ muối trong nước được định nghĩa là tổng nồng độ các ion hòa tan, thường được đo bằng đơn vị mg/L hoặc phần ngàn (‰) Để xác định chính xác nồng độ muối của nước, cần tính tổng nồng độ của bảy ion quan trọng, trong đó ion natri (Na+) là một yếu tố thiết yếu.
HCO3- và các ion khác thường chiếm hơn 95% tổng số ion hòa tan trong nước Để đo nồng độ muối, tỉ trọng kế có thể được sử dụng, nhưng độ chính xác của nó không cao Trong ngành thủy sản, khúc xạ kế và máy đo nồng độ muối là những thiết bị phổ biến nhất để xác định nồng độ muối.
Oxy hòa tan (DO)
7.1.1 Nguyên tắc: Trong môi trường bazơ mạnh, oxy hòa tan trong nước sẽ oxy hóa ion Mn2+ thành Mn4+ có kết tủa nâu.
MnO2 được hòa tan trong H2SO4 đậm đặc, tạo ra môi trường acid Trong môi trường này, MnO2 hoạt động như một chất oxy hóa mạnh, có khả năng oxy hóa I- thành I2, tương ứng với lượng I2 có trong mẫu nước ban đầu.
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
I2 được giải phóng sẽ hòa tan trong nước và được xác định qua phương pháp chuẩn độ với dung dịch Na2S2O3 Hồ tinh bột được sử dụng làm chất chỉ thị để nhận biết điểm tương đương; khi I2 có mặt, nó sẽ tạo phức chất màu xanh với tinh bột Khi toàn bộ I2 đã được chuẩn độ với Na2S2O3, dung dịch sẽ chuyển sang trạng thái không màu.
Để thu mẫu nước, cho vào lọ nút mài nâu 125 mL, sau đó thêm 1 mL MnSO4 và 1 mL dung dịch KI-NaOH để cố định hóa chất Đậy nắp lọ lại và lắc đều cho đến khi xuất hiện kết tủa Lưu ý không để bọt khí xuất hiện trong chai khi thu mẫu nước và sau khi cố định.
7.1.2 Thuốc thử: o Dung dịch MnSO4: Hòa tan 50 g MnSO4.5H2O hay 41 g MnCl2.4H2O với nước cất thành 100 mL. o Dung dịch KI-NaOH: Hòa tan 50 g NaOH và 15 g KI (hay 14 g NaI) với nước cất thành 100 mL. o H 2 SO 4 đậm đặc (d = 1,84) hay H 3 PO 4 đặc (d = 1,88) o Dung dịch Na2S2O3 tiêu chuẩn 0,1N:Pha một ống Na2S2O3 tiêu chuẩn 0,1N trong 1000mL nước cất. o Dung dịch Na2S2O3 0,01N: Sử dụng công thức N1V1 = N2V2 để pha dung dịch cụ thể như sau: Lấy 50 mL dung dịch Na2S2O3 0,1N pha loãng với nước cất thành 500 mL. o Chỉ thị hồ tinh bột 1%: Hòa tan 0,49g K2S2O3 trong 100 mL nước ấm (từ 80-
) khuấy đều cho đến khi dung dịch màu trong suốt, cho vào 0,5 mL formaline nguyên chất để sử dụng được lâu.
Sau khi sử dụng hóa chất để cố định, cần để cho kết tủa lắng xuống Tiếp theo, lắc đều một lần nữa để đảm bảo kết tủa hoàn toàn, sau đó để yên trong 5 phút đối với nước ngọt và 10 phút đối với mẫu khác.
Cho tiếp 2 mL H2SO4 đđ hay H3PO4 đậm đặc (vẫn không cho bọt khí xuất hiện trong lọ)
Lắc đều dung dịch cho đến khi kết tủa hòa tan hoàn toàn, tạo ra dung dịch có màu vàng nâu Đong 50 mL dung dịch đã được acid hóa, cho vào bình tam giác 100 mL Tiến hành chuẩn độ bằng dung dịch Na2S2O3 0,01N cho đến khi dung dịch chuyển sang màu vàng nhạt Sau đó, thêm 3 giọt chỉ thị hồ tinh bột, lắc đều để dung dịch chuyển sang màu xanh Tiếp tục chuẩn độ cho đến khi dung dịch trở lại không màu, sau đó ghi lại thể tích (V1 mL) dung dịch Na2S2O3 0,01N đã sử dụng trong quá trình chuẩn độ mẫu.
Làm tương tự 2 hoặc 3 lần, ghi thể tích dung dịch Na2S2O3 0,01N đã dùng chuẩn độ.
Tính V trung bình của Na2S2O3 0,01N đã dùng chuẩn độ
Trong đó: V TB – là thể tích trung bình dung dịch Na 2 S 2 O 3 0.01N
N– là nồng độ đương lượng g của dung dịch Na 2 S 2 O 3 đã sử dụng
8 – đương lượng gam của Oxy
V M – thể tích (ml) mẫu nước đem đi chuẩn độ 1000– hệ số chuyển đổi thành lít
7.2 Phương pháp điện cực Oxy hòa tan – máy đo Oxy
Phương pháp này cho phép đo trực tiếp áp suất riêng phần của oxy hòa tan, sau đó chuyển đổi thành nồng độ (mg/L) Máy đo oxy tính toán các giá trị này dựa trên mối quan hệ giữa nhiệt độ, độ hòa tan của oxy và áp suất không khí Đầu dò oxy bao gồm một điện cực dương (anode) làm từ Ag/AgCl và một điện cực âm (cathode) từ các kim loại quý như platinum, vàng, tungsten hoặc rhodium, được ngăn cách với môi trường bên ngoài bằng dung dịch điện cực KCl bảo hòa.
Tải xuống TIEU LUAN MOI tại địa chỉ skknchat123@gmail.com, sử dụng màng cảm ứng polyethylene, teflon, polypropylene hoặc các vật liệu tương tự với độ dày khoảng 25mm hoặc mỏng hơn, cho phép thấm oxy Hệ thống này có các điện cực với hiệu điện thế khoảng 0,7 volts giữa chúng.
Khi oxy trong mẫu nước tiếp xúc với màn cảm ứng, màn có khả năng thấm oxy, và tỷ lệ oxy đi qua màng này phụ thuộc vào áp lực oxy trong mẫu Khi cung cấp tín hiệu điện thế cho đầu dò, oxy phân tử thấm qua màng, phản ứng với cực cathode và bị khử thành hydroxide với tỷ lệ 4 moles.
/mole oxy theo phương trình sau:
Sau đó 1 dòng điện chạy qua cực anode (điện cực bằng bạc) và OH- phản ứng với bạc tạo thành dạng oxit bạc theo phương trình sau:
Sự chênh lệch áp lực oxy giữa bên trong và bên ngoài màng cảm ứng tạo điều kiện cho oxy thẩm thấu qua màng Khi áp lực oxy bên ngoài thấp, dòng điện giữa hai điện cực sẽ giảm so với khi áp lực oxy bên ngoài cao.
Tính thấm của màng cảm ứng chịu ảnh hưởng mạnh mẽ từ nhiệt độ, như đã chỉ ra bởi Mancy và Jaffe (1966) và được trích dẫn bởi Boyd & Tucker (1992) Chẳng hạn, dòng điện có thể tạo ra 10 mg/L oxy hòa tan ở nhiệt độ 10 độ C.
C chỉ bằng 1/ 4 so với việc tạo ra 10 mg/l ở 30o
C.Bên cạnh đó, nhiệt độ còn ảnh hưởng đối với dòng điện giữa 2 điện cực thông qua mối quan hệ về nhiệt độ và áp lực oxy Do đó, hầu hết các máy đo oxy hòa tan trong nước thường được thiết kế có bộ phận hiệu chỉnh nhiệt độ tự động để tránh sai số do sự ảnh hưởng của nhiệt độ lên số liệu đo đạc.
Hàm lượng oxy hòa tan trong nước chịu ảnh hưởng của nồng độ muối và áp suất không khí Khi áp suất không khí giảm và nồng độ muối tăng, hàm lượng oxy hòa tan ở mức bão hòa sẽ giảm Do đó, các máy đo oxy thường được thiết kế với tính năng hiệu chỉnh áp suất và nồng độ muối để đảm bảo độ chính xác trong quá trình đo đạc.
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
Việc xác định độ cứng tổng cộng của nước được thực hiện theo phương pháp chuẩn độ Complexon.
Trong môi trường pH thích hợp, ion Ca2+ và Mg2+ sẽ phản ứng với thuốc thử EDTA (Axit Ethylene Diamine Tetra-acetic) để tạo thành phức chất bền vững không màu, được gọi là Calcium hoặc Magnesium ethylene diamine tetraacetate.
Eriochrome black T (C20H13O7N3SNa) là một chất chỉ thị quan trọng trong quá trình xác định điểm tương đương Chất này có khả năng kết hợp với ion Ca2+ và Mg2+ để tạo thành phức chất màu hồng rượu vang, nhưng không ổn định Khi tiến hành chuẩn độ bằng EDTA, các ion này sẽ được xác định một cách chính xác.
Ca2+ và Mg2+ sẽ kết hợp với EDTA hình thành phức chất bền vững, không màu, và khi có Eriochrome black T tự do, dung dịch có màu xanh lơ
+ M-Eriochrome black T + Na2H2Y = Na2MY + 2H +
(Màu hồng rượu vang) (màu xanh lơ)
Trong quá trình chuẩn độ ion Ca2+ và Mg2+ bằng Na2H2Y luôn giải phóng ra 2 ion
