Đ I H C THÁI NGUYÊN TR NG ĐẠI H C S PHẠM - TR N THANH HUYỀN NGHIÊN C U MỌI TR NG NHÂN GI NG IN VITRO LAN HOÀNG TH O (DENDROBIUM SONIA) VÀ GIỄ THỂ Đ A CÂY RA NGOÀI T NHIÊN LU N VĂN THẠC SĨ SINH H C THÁI NGUYÊN, NĂM 2012 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Đ I H C THÁI NGUYÊN TR NG ĐẠI H C S PHẠM - TR N THANH HUYỀN NGHIÊN C U MỌI TR NG NHÂN GI NG IN VITRO LAN HOÀNG TH O (DENDROBIUM SONIA) VÀ GIỄ THỂ Đ A CÂY RA NGOÀI T NHIÊN Chuyên ngƠnh: Sinh h c th c nghi m Mã s : 60.42.30 LU N VĂN THẠC SĨ SINH H C Ng ih ng d n khoa h c: PGS TS NGUY N TH TÂM THỄI NGUYÊN, NĂM 2012 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn i L IC M N Trong trình thực luận văn, tơi nhận quan tâm, giúp đỡ c a nhiều ca nhân quan đơn vị Nay luận văn hoàn thành, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành, sâu sắc tới: PGS TS Nguyễn Thị Tâm, người tận tình hướng dẫn tạo điều kiện, giúp đỡ nghiên c u thực đề tài Các thầy giáo, cô giáo thuộc Khoa Sinh - KTNN, Khoa Sau đại học, trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên nhiệt tình giảng dạy tạo điều kiện cho tơi hồn thành khóa học Các cán bộ, kỹ thuật viên ph̀ng Công nghệ tế bào thực vật –Trường Đại học Sư phạm – Đại học Thai Nguyên đã nhiệt tinh hương dẫn , giúp đỡ tạo mọ i điêu kiện cho thực hiện luận văn Ph̀ng Công nghệ tế bào thực vật - Viện Di truyên Nông nghiệp Việt Nam cung cấp mẫu vật nghiên c u Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn người thân gia đình bạn vứ giúp đỡ động viên suốt thời gian học tập Thái Nguyên, tháng năm 2012 H c viên Trần Thanh Huyền Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ii M CL C M CH Đ U NG T NG QUAN TÀI LI U 1.1 VƠi ńt v̀ phơn lọi vƠ đ̣c đỉm c a phong lan 1.1.1 Đ̣c đỉm tḥc ṿt h c c̉a h lan 1.1.2 Đ̣c đỉm tḥc ṿt h c c̉a chi lan HoàngTh o (Dendrobium) 1.1.3 Đ̣c dỉm tḥc ṿt h c c̉a lan Dendrobium Sonia 1.2 ng d ng c a k̃ thu t nuôi c y mô t́ bƠo th c v t công t́c nhơn giông cơy trông 1.2.1 Ćc h ́ng nghiên ću ́ng ḍng 1.2.2 u thê của nhân giông in vitro 1.2.3 Ćc ph ơng th́c nhân gíng in vitro 1.2.4 Quy trinh nhân giông in vitro 1.3 Một sô nghiên c u nhơn giông lan b ng k̃ thu t nuôi c y in vitro 1.3.1 Ćc nghiên ću n ́c 1.3.2 Ćc nghiên ću c̉a n ́c 11 CH NG V T LI U VÀ PH NG PHỄP NGHIÊN C U 13 2.1 Vợt liệu 13 2.2 Ph ng phap nghiên c u 14 2.2.1 Ph ơng ph́p pha môi tr 2.2.2 Nghiên ću môi tr ng nuôi cấy 15 ng nuôi cấy 16 2.2.3 Ph ơng ph́p 17 2.2.4 Ph ơng ph́p tính tón kết qu 18 CH NG KẾT QU VÀ TH O LU N 19 3.1 So śnh nh h ng c a môi tr ng nuôi c y MS vƠ Phytamax t i s ph́t sinh ch i vƠ ṭo protocorm lan HoƠng Th o (Dendrobium Sonia) 19 3.2 t i s nh h ng c a ćc ch t kích thích sinh tr ng thu c nhóm cytokinin ph́t sinh ch i vƠ ṭo protocorm lan HoƠng Th o (Dendrobium Sonia) 20 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iii 3.2.1 nh h ng c̉a BAP t́i ṣ ph́t sinh chồi t o protocorm lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 20 3.2.2 nh h ng c̉a kinetin lên ṣ ph́t sinh chồi t o protocorm lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 23 3.3 nh h ng c a ćc ch t kích thích sinh tr ng thu c nhóm auxin t i s ph́t sinh r lan HoƠng Th o (Dendrobium Sonia) 26 3.3.1 nh h ng c̉a chất kích thích sinh tr ng α-NAA đến ṣ ph́t sinh rễ c̉a lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 26 3.3.2 nh h ng c̉a chất kích thích sinh tr ng IAA đến ṣ ph́t sinh rễ c̉a lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 28 3.3.3 nh h ng c̉a chất kích thích sinh tr ng IBA đến ṣ h̀nh thành rễ của lan Hoang thảo (Dendrobium Sonia) 29 3.4 nh h ng c a t h p ćc ch t kích thích sinh tr cytokinin vƠ auxin đ́n s sinh tr ng thu c nhóm ng c a lan HoƠng Th o (Dendrobium Sonia) 33 3.4.1 nh h đến ṣ sinh tr 3.4.2 nh h ṣ sinh tr 3.4.4 ng của lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 33 ng c̉a tổ hợp chất kích thích sinh tr ng c̉a tổ hợp chất kích thích sinh tr nh h nh h đến ṣ sinh tr 3.4.6 nh h đến ṣ sinh tr 3.5 nh h ng BAP IAA đến ng BAP IBA đến ng của lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 36 ng c̉a tổ hợp chất kích thích sinh tr NAA đến ṣ sinh tr 3.4.5 ng BAP α-NAA ng của lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 34 3.4.3 nh h ṣ sinh tr ng c̉a tổ hợp chất kích thích sinh tr ng kinetin α- ng của lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 38 ng c̉a tổ hợp chất kích thích sinh tr ng kinetin IAA ng của lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 40 ng c̉a tổ hợp chất kích thích sinh tr ng kinetin IBA ng của lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 41 ng c a gí th̉ đ́n s sinh tr ng c a lan HoƠng Th o (Dendrobium Sonia) 44 KẾT LU N VÀ KIẾN NGH 46 TÀI LI U THAM KH O 47 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iv DANH M C CỄC B NG B ng 2.1 Thành phần b n c̉a môi tr ng MS 13 B ng 2.2 Thành phần b n c̉a môi tr ng Phytamax 14 B ng 3.1 So śnh nh h ng MS Phytamax t́i ṣ ph́t sinh chồi ng c̉a môi tr t o protocorm lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 19 B ng 3.2 ng c̉a BAP t́i ṣ ph́t sinh chồi t o protocorm nh h lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 22 B ng 3.3 nh h ng c̉a kinetin t́i ṣ ph́t sinh chồi t o protocorm lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 25 B ng 3.4 nh h ng c̉a α-NAA t́i ṣ ph́t sinh rễ lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 27 B ng 3.5 nh h ng c̉a IAA t́i ṣ ph́t sinh rễ lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 29 B ng 3.6 nh h ng c̉a IBA t́i ṣ ph́t sinh rễ lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 31 B ng 3.7 sinh tr ng BAP α-NAA t́i ṣ nh h ng c̉a tổ hợp chất kích thích sinh tr ng BAP IAA t́i ṣ ng c̉a lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 34 B ng 3.9 sinh tr ng c̉a tổ hợp chất kích thích sinh tr ng c̉a lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 33 B ng 3.8 sinh tr nh h nh h ng c̉a tổ hợp chất kích thích sinh tr ng BAP IBA t́i ṣ ng c̉a lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 37 B ng 3.10 ṣ sinh tr nh h ng c̉a tổ hợp chất kích thích sinh tr ng kinetin α-NAA t́i ng c̉a lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 39 B ng 3.11 nh h ng c̉a tổ hợp chất kích thích sinh tr ng kinetin IAA 40 B ng 3.12 ng c̉a tổ hợp chất kích thích sinh tr ng kinetin IBA t́i ṣ sinh tr nh h ng c̉a lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 42 B ng 3.13 Ṣ ph́t trỉn c̉a lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) ś gí th̉ ngồi mơi tr ng ni cấy 44 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn v DANH M C CỄC HỊNH Hình 1.1 Lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) Hình 3.1 So śnh nh h t o protocorm Hình 3.2 nh h ng c̉a môi tr ng MS Phytamax t́i ṣ ph́t sinh chồi lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 20 ng c̉a BAP t́i ṣ ph́t sinh chồi t o protocorm lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 23 Hình 3.3 nh h ng c̉a kinetin t́i ṣ ph́t sinh chồi t o protocorm lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 26 Hình 3.4 nh h ng c̉a ćc chất kích thích sinh tr ng thuộc nhóm auxin t́i ṣ ph́t sinh rễ c̉a lan Hồng Th o (Dendrobium Sonia) 32 Hình 3.5 nh h ng c̉a tổ hợp ćc chất kích thích sinh tr cytokinin t́i ṣ sinh tr ng thuộc nhóm auxin ng c̉a lan Hồng Th o (Dendrobium Sonia) 43 Hình 3.6 H̀nh nh ṣ sinh tr ng c̉a lan Hoàng Th o ś gí th̉ 45 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn vi DANH M C CỄC CHỮ VIẾT T T α-NAA α-naphthaleneacetic axit ABA Abscisic axit BAP Benzylamino purine IAA Indol axetic axit IBA Indol butyric axit KC Knudson C MS Murashige and Skoog RE Robert Ernst VW Vacin and Went Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn M Đ U Đ̣T V N ĐỀ Công nghệ nuôi cấy mô - tế bào tḥc ṿt đư tr i qua trăm năm h̀nh thành ph́t trỉn, đem l i gí tr to ĺn cho loài ng i Hiện nay, hầu hết ćc s nghiên ću gíng trồng gíi ́p ḍng công nghệ v́i ćc ṃc đích kh́c Việt Nam, kỹ thụt ni cấy mơ tế bào tḥc ṿt đư đ ợc bắt đầu nghiên ću ́ng ḍng từ năm 70 c̉a kỷ XX Những kết qu b ́c đầu nghiên ću ́ng ḍng đư đ t kết qu kh quan đ́i v́i ś đ́i t ợng trồng nh chúi, khoai tây, mía, lúa…, đ̣c biệt phong lan Việt Nam nằm khu ṿc nhiệt đ́i gió mùa, nóng ẩm m a nhiều, điều kiện lý t ng cho ṣ sinh tr ng ph́t trỉn c̉a hoa lan Trong gíi ćc loài hoa, hoa lan đ ợc a chuộng c Hoa lan có đ̣c đỉm cấu h̀nh l , màu sắc đẹp, độ bền hoa cao Ngoài gí tr tinh thần thẩm mỹ, hoa lan cịn có ý nghĩa ĺn kinh tế qúc dân Loài hoa từ lâu đư đ ợc ng i hó, s u tầm, nḥp nội, d ỡng ćc gíng ngo i lai t o đ̉ t o hàng ngh̀n gíng có màu sắc h ơng thơm nh ý mún pḥc ṿ nhu cầu c̉a ng i Việt Nam có hàng trăm lồi lan đ ợc trồng rộng rưi khắp đất n ́c Hoa lan nh lo i quan tr ng chuỷn d ch cấu trồng nông nghiệp đô th ven đô Một ś lo i lan nḥp nội đư nhanh chóng khẳng đ nh u c̉a đ ợc ph́t trỉn v́i quy mơ đ́ng k̉, ś ph i k̉ đến lan Hồng Th o lai (Dendrobium hybrids) Lan Hoàng Th o lai hấp dẫn ng i tiêu dùng b i màu sắc độ bền hoa, dễ trồng đ̣c biệt có gí tr kinh tế cao, cho thu nḥp ĺn v́i ngành trồng hoa n ́c Song song v́i việc s u ṭp, nḥp nội ćc gíng lan Hoàng Th o lai (Dendrobium hybrids) th̀ việc nghiên ću, hoàn thiện ćc biện ph́p kỹ thụt đ̉ t o điều kiện nâng cao suất, chất l ợng tḥc ṣ cần thiết Đồng th i cần nhân rộng ćc mô h̀nh trồng lan Hoàng Th o lai (Dendrobium hybrids) t i miền Bắc Việt Nam nhằm pḥc ṿ nhu cầu ngày ĺn c̉a th tr ng Trong nhóm lan Dendrobium Dendrobium Sonia (Dendrobium Gracia Lewis × Dendrobium Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Lady Constance) loài ch̉ ḷc đ̉ trồng nhằm ṃc đích cắt cành Chính v̀ ṿy, đề tài ch n Dendrobium Sonia ṿt liệu nghiên ću Xuất ph́t từ yêu cầu tḥc tế kh́ch quan đ̉ góp phần ph́t trỉn ngành ni trồng lan Hồng Th o có hiệu qu , chúng tơi tiến hành nghiên ću đề tài: “Nghiên cưu môi trường nhân giống in vitro lan Hoàng Thảo (Dendrobium Sonia) giá thể đưa tự nhiên” M C TIÊU NGHIÊN C U - Xác đ nh đ ợc môi tr ng t́i u nhân gíng in vitro lan Hoang Th o Dendrobium Sonia - Xác đ nh đ ợc gí th̉ thich hợp đ̉ đ a lan Hồng Th o Dendrobium Sonia t ơng nghiệm môi tr ơng ṭ nhiên N I DUNG NGHIÊN C U - Nghiên ću nh h tr ng c̉a môi tr ng b n MS Phytamax đến ṣ sinh ng c̉a lan Hoàng Th o - Nghiên c u nh h ng c̉a chất kích thích sinh tr đến ṣ ph́t sinh chồi ṣ sinh tr - Nghiên c u ṣ nh h ng thuộc nhóm cytokinin ng c̉a lan Hồng Th o ng c̉a chất kích thích sinh tr ng thuộc nhóm auxin đến ph́t sinh rễ t o hoàn chỉnh - Nghiên c u ảnh h ởng của tổ hợp cac chât kich thich sinh tr ởn g tḥc nhóm auxin nhóm cytokinin lên s ̣ sinh tr ởng của lan Hoang Thảo - Nghiên ću t̀m lo i gí th̉ thích hợp cho lan Hồng Th o (xơ d a, t o, than củi …) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ... lan Hồng Th o lai (Dendrobium hybrids) t i miền Bắc Việt Nam nhằm pḥc ṿ nhu cầu ngày ĺn c̉a th tr ng Trong nhóm lan Dendrobium Dendrobium Sonia (Dendrobium Gracia Lewis × Dendrobium Số hóa... (Dendrobium Sonia) 25 B ng 3.4 nh h ng c̉a α-NAA t́i ṣ ph́t sinh rễ lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 27 B ng 3.5 nh h ng c̉a IAA t́i ṣ ph́t sinh rễ lan Hoàng Th o (Dendrobium... ph́t sinh chồi t o protocorm lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 20 3.2.2 nh h ng c̉a kinetin lên ṣ ph́t sinh chồi t o protocorm lan Hoàng Th o (Dendrobium Sonia) 23 3.3 nh h ng c a