GIẢI TRÌNH TỰ DNA Biên soạn CN Trần Anh Minh BM Sinh học, khoa Khoa học cơ bản, ĐH Y Dược TP HCM Có hai phương pháp chính để giải trình tự DNA, và nguyên tắc chung là dựa vào PCR (với mồi được đánh dấ.
GIẢI TRÌNH TỰ DNA Biên soạn: CN Trần Anh Minh BM Sinh học, khoa Khoa học bản, ĐH Y Dược TP HCM - Có hai phương pháp để giải trình tự DNA, nguyên tắc chung dựa vào PCR (với mồi đánh dấu phóng xạ) điện di - Điện di gel có độ phân giải cao (có thể phân biệt đoạn DNA nucleotide) gel polyacrylamide điện di mao quản - Hai phương pháp là: o PP Hóa học, Maxam & Gilbert phát minh Ngày dùng sử dụng primer (mồi) có phóng xạ o PP Enzyme hay PP Dideoxynucleotide, Sanger phát minh, ứng dụng máy giải trình tự tự động ngày PHƯƠNG PHÁP HÓA HỌC (MAXAM – GILBERT) - Giả sử ta có gen, cần giải trình tự DNA gen (…GATCGGAC…) - Ta chuẩn bị cặp mồi (xi ngược, biết trình tự, chắn khơng gắn vào vị trí khác gen) nằm hai bên đoạn DNA cần giải trình tự - Trong cặp mồi nói trên, mồi có nucleotide mang phóng xạ 32P, mồi dùng để đánh dấu mạch, ta giải trình tự đoạn polynucleotide kéo dài từ mồi Sau giải trình tự xong mạch này, ta suy trình tự mạch theo nguyên tắc bổ sung AT, G-C o Mồi xuôi: 5’*GTAC 3’ (*G Guanin có phóng xạ 32P) o Mồi ngược: 3’ GCTT 5’ - Đầu chu kỳ PCR, mồi bắt vào mạch bổ sung (Mồi có vịng trịn đỏ màu cam (GTAC) mồi có phóng xạ 32P.) - Để bớt rườm rà, tơi vẽ mạch có mồi phóng xạ gắn Sau PCR, ta có sản phẩm đoạn gen mục tiêu - Tất nhiên ta chưa biết trình tự sau mồi gì, hình ghi rõ trình tự để bạn dễ hình dung - Vậy sau PCR, ta có lượng lớn đoạn gen mục tiêu Lúc này, ta đem hỗn hợp chia làm phần, đưa vào ống nghiệm riêng biệt - Mỗi ống nghiệm ta cho thêm hóa chất có khả làm biến đổi nucleotide sau: o Ống 1: Dimethyl sulphat o Ống 2: acid (pH