LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC NGHIÊN CỨU ĐỘT BIẾN VÀ ĐA HÌNH DI TRUYỀN TRÊN GEN MÃ HÓA YẾU TỐ IX Ở BỆNH NHÂN HEMOPHILIA B

HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VŨ THỊ BÍCH HƯỜNG NGHIÊN CỨU ĐỘT BIẾN VÀ ĐA HÌNH DI TRUYỀN TRÊN GEN MÃ HĨA YẾU TỐ IX Ở BỆNH NHÂN HEMOPHILIA B LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Hà Nội, 2022 - VŨ THỊ BÍCH HƯỜNG NGHIÊN CỨU ĐỘT BIẾN VÀ ĐA HÌNH DI TRUYỀN TRÊN GEN MÃ HĨA YẾU TỐ IX Ở BỆNH NHÂN HEMOPHILIA B Chuyên ngành : Di truyền học Mã số : 42 01 21 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS DƯƠNG QUỐC CHÍNH Viện Huyết học – Truyền máu TW PGS.TS.ĐỒNG VĂN QUYỀN Viện Công nghệ sinh học NGHIÊN CỨU ĐỘT BIẾN VÀ ĐA HÌNH DI TRUYỀN TRÊN GEN MÃ HÓA YẾU TỐ IX Ở BỆNH NHÂN HEMOPHILIA B LỜI CAM ĐOAN Tôi Vũ Thị Bích Hường, nghiên cứu sinh khóa II, năm 2016, chun ngành Di truyền học, xin cam đoan: Đây luận án thân trực tiếp thực hướng dẫn hai thầy TS Dương Quốc Chính PGS.TS Đồng Văn Quyền Cơng trình không trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thơng tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Người viết cam đoan BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM NCS Vũ Thị Bích Hường NGHIÊN CỨU ĐỘT BIẾN VÀ ĐA HÌNH DI TRUYỀN TRÊN GEN MÃ HÓA YẾU TỐ IX Ở BỆNH NHÂN HEMOPHILIA B LỜI CẢM ƠN Trước hết, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến Đảng Ủy, Ban Lãnh đạo Viện Huyết học – Truyền máu TW cho phép dự tuyển, tham gia khóa đào tạo Tiến sĩ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc đến TS Dương Quốc Chính, Phó trưởng môn Huyết học – Truyền máu, Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội; Trưởng khoa Di truyền & Sinh học phân tử, Viện Huyết học - Truyền máu TW, người Thầy định hướng nghiên cứu, trực tiếp hướng dẫn thực nghiên cứu; hỗ trợ tơi suốt q trình học tập tạo điều kiện tốt sở vật chất để tơi thực hồn thành luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc đến PGS.TS Đồng Văn Quyền, Phó Viện trưởng Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn Lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, người Thầy tận tình hướng dẫn, bảo, truyền đạt cho tơi kiến thức kinh nghiệm quý báu trình học tập nghiên cứu khoa học tạo điều kiện thuận lợi giúp tơi hồn thành luận án Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Nguyễn Thị Mai, Giám đốc Trung tâm hemophilia; bác sỹ, điều dưỡng Trung tâm hemophilia, Viện Huyết học – Truyền máu TW; tập thể cán khoa Tiếp nhận máu hợp tác hỗ trợ tơi q trình thu thập mẫu nghiên cứu Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến bệnh nhân hemophilia B, người nhà bệnh nhân người hiến máu giúp đỡ để tơi có số liệu luận án Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: - Ban giám đốc, Phòng đào tạo Học viện Khoa học Công nghệ; Khoa Công nghệ sinh học, Viện Công nghệ sinh học tạo điều kiện thuận lợi, hỗ trợ giúp đỡ suốt trình học tập thực luận án - Các thầy cô tham gia giảng dạy chuyên ngành Di truyền học, truyền đạt kiến thức q báu cho tơi q trình học tập NGHIÊN CỨU ĐỘT BIẾN VÀ ĐA HÌNH DI TRUYỀN TRÊN GEN MÃ HÓA YẾU TỐ IX Ở BỆNH NHÂN HEMOPHILIA B - ThS Bùi Thị Hải Hà, chuyên viên phụ trách đào tạo, Viện Công nghệ sinh học tận tình hướng dẫn tơi để hồn thành thủ tục hành suốt q trình học tập Học viện Tôi xin chân thành cảm ơn bạn bè, đồng nghiệp yêu quý Khoa Di truyền & Sinh học phân tử, Viện Huyết học – Truyền máu TW sẵn sàng hỗ trợ, chia sẻ với suốt q trình thực hiên nghiên cứu Cuối cùng, tơi xin chân thành biết ơn gia đình ln bên tôi, cổ vũ, động viên chỗ dựa vững để yên tâm học tập thực luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Người viết cam đoan NCS Vũ Thị Bích Hường NGHIÊN CỨU ĐỘT BIẾN VÀ ĐA HÌNH DI TRUYỀN TRÊN GEN MÃ HĨA YẾU TỐ IX Ở BỆNH NHÂN HEMOPHILIA B MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ii iii v viii ix x DANH MỤC BẢNG ix MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan bệnh hemophilia B 1.1.1 Một số dấu mốc lịch sử phát nghiên cứu bệnh hemophilia B 1.1.2 Khái quát bệnh hemophilia B 1.2 Cấu trúc chức yếu tố IX q trình đơng máu 10 1.2.1 Các yếu tố đơng máu 10 1.2.2 Vai trị yếu tố IX q trình đơng máu 11 1.2.3 Cấu trúc yếu tố IX trình hoạt hóa yếu tố IX 13 1.2.4 Mối tương tác yếu tố IX với nhân tố hoạt hóa đồng yếu tố 15 1.3 Phân tích di truyền bệnh hemophilia B 18 1.3.1 Vai trị phân tích di truyền bệnh hemophilia B 18 1.3.2 Đặc điểm đột biến gen F9 19 1.3.3 Đặc điểm đa hình nucleotide liên kết với gen F9 27 1.4 Các kỹ thuật phân tích di truyền bệnh hemophilia B 30 1.4.1 Kỹ thuật phân tích đột biến 31 1.4.2 Kỹ thuật phân tích liên kết 36 1.5 Tình hình nghiên cứu biến đổi di truyền gen F9 38 1.5.1 Tình hình nghiên cứu giới 38 1.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 42 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 45 NGHIÊN CỨU ĐỘT BIẾN VÀ ĐA HÌNH DI TRUYỀN TRÊN GEN MÃ HÓA YẾU TỐ IX Ở BỆNH NHÂN HEMOPHILIA B 2.1 Đối tượng nghiên cứu 45 2.2 Phương pháp nghiên cứu 46 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 2.2.2 Công thức tính cỡ mẫu nghiên cứu đa hình nucleotide 46 46 2.2.3 Các bước nghiên cứu 46 2.3 Hóa chất thiết bị nghiên cứu 50 2.3.1 Hóa chất 50 2.3.2 Vật tư – Trang thiết bị 51 2.4.1 Thu thập mẫu nghiên cứu 52 2.4.2 Tách chiết ADN 52 2.4.3 Thiết kế trình tự mồi để khuếch đại gen tổng hợp yếu tố IX 52 2.4.4 Khuếch đại phân đoạn a1-a8 kỹ thuật Longrange PCR 53 2.4.5 Tinh sản phẩm Longrange PCR khuếch đại vùng gen F9 54 2.4.7 Khẳng định kết giải trình tự gen F9 NGS 55 2.4.8 Khẳng định đoạn/lặp đoạn gen F9 kỹ thuật MLPA 56 2.4.9 Phân tích đột biến gen từ liệu giải trình tự 56 2.4.10 Phân tích đa hình nucleotide gen F9 từ liệu giải trình tự 58 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 60 3.1 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu 60 3.1.2 Chuẩn bị vật liệu nghiên cứu 61 3.2 Xây dựng quy trình giải trình tự gen mã hóa yếu tố IX 62 3.2.1 Thiết kế mồi khuếch đại toàn gen F9 62 3.2.2 Tối ưu quy trình LR- PCR khuếch đại vùng gen F9 63 3.2.3 Chuẩn bị thư viện ADN 67 3.2.4 Giải trình tự với quy trình NGS tối ưu 68 3.2.5 Khẳng định kết giải trình tự NGS 70 3.3 Giải trình tự gen F9 mẫu nghiên cứu 73 3.4 Phân tích đột biến gen 100 bệnh nhân nghiên cứu 76 3.5.1 Kiểu đột biến gen 80 3.5.2 Tác động đột biến đến cấu trúc, hoạt động gen 80 NGHIÊN CỨU ĐỘT BIẾN VÀ ĐA HÌNH DI TRUYỀN TRÊN GEN MÃ HĨA YẾU TỐ IX Ở BỆNH NHÂN HEMOPHILIA B 3.5.3 Đánh giá mức độ lặp lại đột biến bệnh nhân nghiên cứu 81 3.6 Tương quan kiểu đột biến gen mức độ bệnh 82 3.7 Lập đồ đột biến gen F9 bệnh nhân hemophilia B Việt Nam 83 3.7.1 Phân bố đột biến gen F9 83 3.7.2 Phân bố đột biến domain phân tử FIX 84 3.7.3 Bản đồ đột biến gen F9 bệnh nhân hemophilia B Việt Nam 84 3.8 Phân tích đa hình nucleotide gen F9 3.8.1 Khảo sát đa hình nucleotide gen mã hoá yếu tố IX 3.8.2 Tần suất alen đa hình quần thể người bình thường 3.8.3 Phân tích liên kết đa hình nucleotide 3.8.4 Lựa chọn đa hình có giá trị thông tin cao 3.8.5 Xác nhận hiệu đa hình gia đình người bệnh CHƯƠNG BÀN LUẬN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 4.1 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu 4.2 Xây dựng quy trình NGS giải trình tự gen mã hóa yếu tố IX 11 4.2.1 Thiết kế mồi khuếch đại gen F9 11 4.2.2 Tối ưu quy trình LR-PCR khuếch đại vùng gen F9 12 4.2.3 Chuẩn bị thư viện ADN 14 4.2.4 Giải trình tự gen F9 với quy trình tối ưu 14 4.2.5 Đánh giá kết giải trình tự NGS 15 4.3 Giải trình tự gen F9 mẫu nghiên cứu 15 4.4 Phân tích đột biến gen 100 bệnh nhân nghiên cứu 16 4.5 Đặc điểm kiểu đột biến gen gặp nghiên cứu 20 4.6 Mối tương quan kiểu đột biến gen mức độ bệnh 21 4.7 Bản đồ đột biến gen F9 bệnh nhân hemophilia B Việt Nam 22 4.7.1 Phân bố đột biến gen F9 22 4.7.2 Phân bố đột biến phân tử protein yếu tố IX 23 4.8 Đa hình di truyền gen F9 26 4.8.1 Khảo sát đa hình nucleotide gen F9 26 4.8.2 Tần suất alen đa hình nghiên cứu 28 NGHIÊN CỨU ĐỘT BIẾN VÀ ĐA HÌNH DI TRUYỀN TRÊN GEN MÃ HÓA YẾU TỐ IX Ở BỆNH NHÂN HEMOPHILIA B 4.8.3 Phân tích mối liên kết di truyền đa hình nucleotide 30 4.8.4 Lựa chọn đa hình có giá trị thơng tin cao 31 4.8.5 Khẳng định hiệu đa hình 32 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ ĐÃ CƠNG BỐ 37 CĨ LIÊN QUAN ĐẾN ĐỀ TÀI 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 NGHIÊN CỨU ĐỘT BIẾN VÀ ĐA HÌNH DI TRUYỀN TRÊN GEN MÃ HÓA YẾU TỐ IX Ở BỆNH NHÂN HEMOPHILIA B DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt FIX Hemophilia B F9 DNA PCR LD-PCR NGS RFLP MLPA Kb SNP VNTR 5’UTR 3’UTR WHO EAHDA UKHCDO Tên đầy đủ Factor IX Deoxyribonucleic Acid Polymerase Chain Reaction Long Distance PCR Next Generation Sequencing Restriction Fragment Length Polymorphism Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification Kilo base Single nucleotide polymorphism Variable Number Tandem Repeat 5′ Untranslated Region 3′ Untranslated Region World Health Organization European Association for Haemophilia and Allied Disorders United Kingdom Haemophilia Centre Doctors’ Organisation CDC The Centers for Disease Control and Prevention HGVS Human Genome Variation Society Polymorphism Phenotyping v2 PolyPhen-2 Chú thích Yếu tố IX Bệnh lý rối loạn đông máu thiếu hụt FIX Gen mã hóa yếu tố IX Phân tử ADN Phản ứng tổng hợp chuỗi Phản ứng tổng hợp chuỗi dài Giải trình tự hệ Đa hình chiều dài đoạn cắt giới hạn Phương pháp multiplex PCR phát số lượng bất thường Đơn vị đo chiều dài ADN Đa hình đơn nucleotide Các trình tự ADN lặp lại ngắn Vùng khơng mã hóa đầu 5’ Vùng khơng mã hóa đầu 3’ Tổ chức Y tế giới Hiệp hội bệnh hemophilia rối loạn đông máu Châu Âu Tổ chức bác sỹ thuộc Trung tâm hemophilia Vương quốc Anh Trung tâm kiểm sốt phịng chống bệnh dịch Hiệp hội biến đổi gen người Phần mềm dự đoán tác động 11 HB11 12 HB12 13 HB13 ST T Mã BN 1995 Na m 1988 Na m 1984 Na m Nă Giớ m i % 0.1 Nặng khơng 0.1 Nặng khơng 0.1 Nặng khơng Mức Có c.1213G> A c.127C>T p.Asp405Asn p.Arg43Trp c.1213G> p.Asp405Asn A Biến đổi nucleotide Biến đổi missense exon missense exon missense exon Loại Vị trí S P PRO S P Domai n sin h 14 HB14 15 HB15 16 HB16 17 HB17 18 HB18 19 HB19 20 HB20 21 HB21 22 HB22 23 HB23 24 HB24 25 HB25 201 199 198 201 197 195 198 196 201 198 198 200 tính Na m Na m Na m Na m Na m Na m Nữ Na m Na m Na m Na m Na m FI X độ bệnh 0.4 Nặng 0.1 Nặng 0.2 Nặng 3.2 0.2 Trung bình Nặng 0,3 Nặng 2.1 0.4 Trung bình Trung bình Nặng 0.1 Nặng 0.1 Nặng 0,4 Nặng ức chế khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g (HGVS cDNA) axit amin del_exon (HGVS protein) - c.677G>A p.Arg226Gln c.433T>C p.Cys145Arg c.881G>A p.Arg294Gln c.470G>T p.Cys157Phe c.1135C>T p.Arg379* c.881G>A (Đồng hợp tử) c.881G>A p.Arg294Gln c.874C>T p.Gln292* c.1243C>A p.His415Asn c.344A>G p.Tyr115Cys c.956T>C p.Leu319Pro p.Arg294Gln đột biến large del missens e missens e missens e missens e nonsens e missens e missens e nonsens e missens e missens e missens e exon exon exon exon exon exon exon exon exon exon exon exon EGF2 AP EGF2 SP EGF2 SP SP SP SP SP EGF1 SP 26 HB26 27 HB27 28 HB28 29 HB29 30 HB30 ST T Mã BN 199 198 198 201 201 Nă m Na m Na m Na m Na m Na m Giớ i 0,1 Nặng 0,5 Nặng 0,2 Nặng 0.1 Nặng 0.5 Nặng % Mức khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g C ó c.952delC c.253-1G>C p.Leu318Phefs *8 splice site c.755G>C p.Cys252Ser c.1069G>C p.Gly357Arg c.223C>T p.Arg75* Biến đổi nucleotide Biến đổi frameshi ft splice site missens e missens e nonsens e Loại exon intron exon exon exon Vị trí SP SP SP GLA Doma in 31 HB31 32 HB32 33 HB3 HB3 HB3 HB36 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 HB3 HB3 HB3 HB4 HB4 HB4 HB4 sin h tính 198 199 198 195 197 201 200 200 200 200 198 201 198 Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m FI X độ bệnh 0.2 Nặng 0.3 Nặng 0.1 Nặng 0.3 Nặng 0.5 Nặng 0.4 Nặng 0.5 Nặng 0.9 Nặng 0.4 Nặng 0.7 Nặng 0.3 Nặng 0.2 Nặng 0.5 Nặng ức chế (HGVS cDNA) axit amin khôn g khôn g không c.1213G>A (HGVS protein) p.Asp405Asn c.1369A>T p.Lys457* c.422G>A p.Cys141Tyr khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g c.383G>A p.Cys128Tyr c.1243C>A p.His415Asn c.1213G>A p.Asp405Asn c.206G>A p.Cys69Tyr c.88G>T p.Val30Phe c.761G>A p.Gly254Asp c.1136G>A p.Arg379Gln c.1135C>T p.Arg379* c.127C>T p.Arg43Trp c.206G>A p.Cys69Tyr đột biến missens e nonsens e missens e missens e missens e missens e missens e missens e missens e missens e nonsens e missens e missens e exon exon exon exon exon exon exon exon exon exon exon exon exon SP SP EGF2 EGF1 SP SP GLA PRO SP SP SP PRO GLA 44 45 46 HB4 HB4 HB4 199 199 201 Na m Na m Na m 0.3 Nặng 0.2 Nặng 0.5 Nặng khôn g khôn g khôn g c.278-3A>G Splice site c.127C>T p.Arg43Trp c.1331A>G p.Tyr444Cys Splice site missens e missens e intron exon exon PRO SP ST T Mã BN 47 HB47 48 HB48 49 HB49 50 HB50 51 HB51 52 HB52 53 HB53 54 HB54 55 HB55 56 HB56 57 HB57 Nă m si nh 197 198 197 198 201 200 199 199 201 200 197 Gi ới tí n h Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na % Mứ c độ bệnh C ó ức chế 0.4 Trung bình Nặng 0.9 Nặng 0.5 Nặng 0.7 Nặng 0.3 Nặng 1.3 0.5 Trung bình Nặng 0.1 Nặng Trung bình Nặng khơn g khơn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn F I X 2.2 0.2 Biến đổi nucleotide (HGVS cDNA) Biến đổi axit amin (HGVS protein) c.881G>A p.Arg294Gln c.223C>T p.Arg75* c.947T>C p.Ile316Thr c.1220G>C p.Cys407Ser c.127C>T p.Arg43Trp c348349insGA c.881G>A pGlu116Glufs* 15 p.Arg294Gln c.838+1G>A splice site c.1220G>A p.Cys407Tyr c.128G>A p.Arg43Gln c.470G>T p.Cys157Phe Loạ i đột biến missens e nonsens e missens e missens e missens e framesh ift missens e splice site missens e missens e missens Vị trí Domai n exon SP exon GLA exon SP exon SP exon PRO exon EGF1 exon SP intron exon SP exon PRO exon EGF2 58 HB58 59 HB59 60 HB60 61 HB61 62 HB62 63 HB63 64 HB64 200 201 198 201 199 199 201 m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m 4.4 0.3 1.5 2.8 0.9 2.3 Trung bình Nặng Trung bình Trung bình Trung bình Nặng Trung bình g khơn g khơn g khơn g khơn g khôn g khôn g khôn g c.881G>A p.Arg294Gln c.1024A>C p.Thr342Pro c.881G>A p.Arg294Gln c.127C>T p.Arg43Trp c.881G>A p.Arg294Gln c.128G>A p.Arg43Gln c.137G>T p.Arg46Met e missens e missens e missens e missens e missens e missens e missens e exon SP exon SP exon SP exon PRO exon SP exon PRO exon PRO ST T Mã BN 65 HB65 66 HB66 67 HB67 68 HB68 69 HB69 70 HB70 71 HB71 72 HB72 73 HB73 74 HB74 Nă Gi % m ới si tí F nh n I 200 198 198 195 199 201 201 201 201 201 h Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Mứ C c độ ó ức bệnh chế X 0,1 Nặng 0,2 Nặng 0,1 Nặng 1.1 10 Trung bình Nhẹ 0,1 Nặng 0.1 Nặng 0.2 Nặng 0.1 Nặng khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g không C p.Leu319Pro c.1004G>A p.Cys335Tyr c.206G>A p.Cys69Tyr c.881G>A p.Arg294Gln c.149G>A p.Gly50Asp c.1238G>A p.Gly413Glu c.676C>T p.Arg226Trp c.11591161del c.1213G>A p.Lys387del p.Asp405Asn c.677G>A p.Arg226Gln Loạ i đột Vị trí Domai n exon SP exon SP exon GLA exon SP exon GLA exon SP exon AP exon SP exon SP exon AP biến missens e missens e missens e missens e missens e missens e missens e small del missens e missens e 75 HB75 76 HB76 77 HB77 78 HB78 79 HB79 80 HB80 81 HB81 199 194 200 200 199 197 200 Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m 0.1 Nặng >5 Nhẹ 3.6 0.3 Trung bình Trung bình Nặng 0.1 Nặng 4.5 Trung bình 1.2 khôn g khôn g khôn g khôn g không khôn g khôn g c.1369A>T p.Lys457* c.942T>A p.His314.Gln c.881G>A p.Arg294Gln c.881G>A p.Arg294Gln c.1060del A c.914A>G p.Ser354Valfs* 14 p.Tyr305Cys c.-21C>T - nonsens e missens e missens e missens e small del missens e - exon SP exon SP exon SP exon SP exon SP exon SP promot er - ST T Mã BN 82 HB82 83 HB83 84 HB84 85 HB85 86 HB86 87 HB87 88 HB88 89 HB89 90 HB90 91 HB91 92 HB92 Nă m si nh 200 199 201 201 201 198 200 200 201 200 201 Gi ới tí n h Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m % F I X 0.2 Mứ c độ bệnh C ó ức chế Nặng khơn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g khôn g 0.2 Trung bình Nặng 0.1 Nặng 0.1 Nặng 20 0.3 Nhẹ Nặng 0.3 Nặng 0.1 Nặng 0.1 Nặng G p.Glu72Gly c.520+13A> G c.1181T>A p.Met394Lys c.277+4A>G - c.1084A>T P.Lys362* c.149G>A p.Gly50Asp c.349T>A p.Cys117Ser c.1369A>T p.Lys457* c.349T>A p.Cys117Ser c.718T>C p.Trp240Arg c.278-3A>G - Loạ i đột biến missens e splice site missens e splice site nonsens e missens e missens e nonsens e missens e missens e splice site Vị trí Domai n exon GLA intron exon SP intron exon SP exon GLA exon EGF1 exon SP exon EGF1 exon SP intron - 93 HB93 94 HB94 95 HB95 96 HB96 97 HB97 98 HB98 99 HB99 10 HB10 201 201 201 200 201 201 201 201 Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m Na m VŨ THỊ BÍCH HƯỜNG VŨ THỊ BÍCH HƯỜNG NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS.ĐỒNG VĂN QUYỀN LỜI CAM ĐOAN Người viết cam đoan LỜI CẢM ƠN Người viết cam đoan MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU MỤC TIÊU