Luận án tiến sĩ sinh học nghiên cứu đột biến và đa hình di truyền trên gen mã hóa yếu tố ix ở bệnh nhân hemophilia b

ii LỜI CAM ĐOAN Tơi Vũ Thị Bích Hường, nghiên cứu sinh khóa II, năm 2016, chuyên ngành Di truyền học, xin cam đoan: Đây luận án thân trực tiếp thực hướng dẫn hai thầy TS Dương Quốc Chính PGS.TS Đồng Văn Quyền Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thơng tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Người viết cam đoan NCS Vũ Thị Bích Hường iii LỜI CẢM ƠN Trước hết, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Đảng Ủy, Ban Lãnh đạo Viện Huyết học – Truyền máu TW cho phép tơi dự tuyển, tham gia khóa đào tạo Tiến sĩ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc đến TS Dương Quốc Chính, Phó trưởng môn Huyết học – Truyền máu, Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội; Trưởng khoa Di truyền & Sinh học phân tử, Viện Huyết học - Truyền máu TW, người Thầy định hướng nghiên cứu, trực tiếp hướng dẫn thực nghiên cứu; hỗ trợ tơi suốt q trình học tập tạo điều kiện tốt sở vật chất để tơi thực hồn thành luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc đến PGS.TS Đồng Văn Quyền, Phó Viện trưởng Viện Cơng nghệ sinh học, Viện Hàn Lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, người Thầy tận tình hướng dẫn, bảo, truyền đạt cho kiến thức kinh nghiệm quý báu trình học tập nghiên cứu khoa học tạo điều kiện thuận lợi giúp tơi hồn thành luận án Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Nguyễn Thị Mai, Giám đốc Trung tâm hemophilia; bác sỹ, điều dưỡng Trung tâm hemophilia, Viện Huyết học – Truyền máu TW; tập thể cán khoa Tiếp nhận máu hợp tác hỗ trợ tơi q trình thu thập mẫu nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến bệnh nhân hemophilia B, người nhà bệnh nhân người hiến máu giúp đỡ để tơi có số liệu luận án Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: - Ban giám đốc, Phịng đào tạo Học viện Khoa học Cơng nghệ; Khoa Công nghệ sinh học, Viện Công nghệ sinh học tạo điều kiện thuận lợi, hỗ trợ giúp đỡ tơi suốt q trình học tập thực luận án - Các thầy cô tham gia giảng dạy chuyên ngành Di truyền học, truyền đạt kiến thức q báu cho tơi q trình học tập iv - ThS Bùi Thị Hải Hà, chuyên viên phụ trách đào tạo, Viện Công nghệ sinh học tận tình hướng dẫn tơi để hồn thành thủ tục hành suốt q trình học tập Học viện Tôi xin chân thành cảm ơn bạn bè, đồng nghiệp yêu quý Khoa Di truyền & Sinh học phân tử, Viện Huyết học – Truyền máu TW sẵn sàng hỗ trợ, chia sẻ với tơi suốt q trình thực hiên nghiên cứu Cuối cùng, tơi xin chân thành biết ơn gia đình bên tôi, cổ vũ, động viên chỗ dựa vững để yên tâm học tập thực luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Người viết cam đoan NCS Vũ Thị Bích Hường v MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN ii LỜI CẢM ƠN iii MỤC LỤC v DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT viii DANH MỤC BẢNG ix DANH MỤC HÌNH x DANH MỤC BẢNG ix MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan bệnh hemophilia B 1.1.1 Một số dấu mốc lịch sử phát nghiên cứu bệnh hemophilia B 1.1.2 Khái quát bệnh hemophilia B 1.2 Cấu trúc chức yếu tố IX q trình đơng máu 10 1.2.1 Các yếu tố đông máu 10 1.2.2 Vai trị yếu tố IX q trình đông máu 11 1.2.3 Cấu trúc yếu tố IX q trình hoạt hóa yếu tố IX 13 1.2.4 Mối tương tác yếu tố IX với nhân tố hoạt hóa đồng yếu tố 15 1.3 Phân tích di truyền bệnh hemophilia B 18 1.3.1 Vai trò phân tích di truyền bệnh hemophilia B 18 1.3.2 Đặc điểm đột biến gen F9 19 1.3.3 Đặc điểm đa hình nucleotide liên kết với gen F9 27 1.4 Các kỹ thuật phân tích di truyền bệnh hemophilia B 30 1.4.1 Kỹ thuật phân tích đột biến 31 1.4.2 Kỹ thuật phân tích liên kết 36 1.5 Tình hình nghiên cứu biến đổi di truyền gen F9 38 1.5.1 Tình hình nghiên cứu giới 38 1.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 42 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 45 2.1 Đối tượng nghiên cứu 45 2.2 Phương pháp nghiên cứu 46 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 46 vi 2.2.2 Cơng thức tính cỡ mẫu nghiên cứu đa hình nucleotide 46 2.2.3 Các bước nghiên cứu 46 2.3 Hóa chất thiết bị nghiên cứu 50 2.3.1 Hóa chất 50 2.3.2 Vật tư – Trang thiết bị 51 2.4.1 Thu thập mẫu nghiên cứu 52 2.4.2 Tách chiết ADN 52 2.4.3 Thiết kế trình tự mồi để khuếch đại gen tổng hợp yếu tố IX 52 2.4.4 Khuếch đại phân đoạn a1-a8 kỹ thuật Longrange PCR 53 2.4.5 Tinh sản phẩm Longrange PCR khuếch đại vùng gen F9 54 2.4.7 Khẳng định kết giải trình tự gen F9 NGS 55 2.4.8 Khẳng định đoạn/lặp đoạn gen F9 kỹ thuật MLPA 56 2.4.9 Phân tích đột biến gen từ liệu giải trình tự 56 2.4.10 Phân tích đa hình nucleotide gen F9 từ liệu giải trình tự 58 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 60 3.1 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu 60 3.1.2 Chuẩn bị vật liệu nghiên cứu 61 3.2 Xây dựng quy trình giải trình tự gen mã hóa yếu tố IX 62 3.2.1 Thiết kế mồi khuếch đại toàn gen F9 62 3.2.2 Tối ưu quy trình LR- PCR khuếch đại vùng gen F9 63 3.2.3 Chuẩn bị thư viện ADN 67 3.2.4 Giải trình tự với quy trình NGS tối ưu 68 3.2.5 Khẳng định kết giải trình tự NGS 70 3.3 Giải trình tự gen F9 mẫu nghiên cứu 73 3.4 Phân tích đột biến gen 100 bệnh nhân nghiên cứu 76 3.5.1 Kiểu đột biến gen 80 3.5.2 Tác động đột biến đến cấu trúc, hoạt động gen 80 3.5.3 Đánh giá mức độ lặp lại đột biến bệnh nhân nghiên cứu 81 3.6 Tương quan kiểu đột biến gen mức độ bệnh 82 3.7 Lập đồ đột biến gen F9 bệnh nhân hemophilia B Việt Nam 83 3.7.1 Phân bố đột biến gen F9 83 3.7.2 Phân bố đột biến domain phân tử FIX 84 vii 3.7.3 Bản đồ đột biến gen F9 bệnh nhân hemophilia B Việt Nam 84 3.8 Phân tích đa hình nucleotide gen F9 3.8.1 Khảo sát đa hình nucleotide gen mã hoá yếu tố IX 3.8.2 Tần suất alen đa hình quần thể người bình thường 3.8.3 Phân tích liên kết đa hình nucleotide 3.8.4 Lựa chọn đa hình có giá trị thơng tin cao 3.8.5 Xác nhận hiệu đa hình gia đình người bệnh CHƯƠNG BÀN LUẬN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 4.1 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu 4.2 Xây dựng quy trình NGS giải trình tự gen mã hóa yếu tố IX 11 4.2.1 Thiết kế mồi khuếch đại gen F9 11 4.2.2 Tối ưu quy trình LR-PCR khuếch đại vùng gen F9 12 4.2.3 Chuẩn bị thư viện ADN 14 4.2.4 Giải trình tự gen F9 với quy trình tối ưu 14 4.2.5 Đánh giá kết giải trình tự NGS 15 4.3 Giải trình tự gen F9 mẫu nghiên cứu 15 4.4 Phân tích đột biến gen 100 bệnh nhân nghiên cứu 16 4.5 Đặc điểm kiểu đột biến gen gặp nghiên cứu 20 4.6 Mối tương quan kiểu đột biến gen mức độ bệnh 21 4.7 Bản đồ đột biến gen F9 bệnh nhân hemophilia B Việt Nam 22 4.7.1 Phân bố đột biến gen F9 22 4.7.2 Phân bố đột biến phân tử protein yếu tố IX 23 4.8 Đa hình di truyền gen F9 26 4.8.1 Khảo sát đa hình nucleotide gen F9 26 4.8.2 Tần suất alen đa hình nghiên cứu 28 4.8.3 Phân tích mối liên kết di truyền đa hình nucleotide 30 4.8.4 Lựa chọn đa hình có giá trị thơng tin cao 31 4.8.5 Khẳng định hiệu đa hình 32 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ ĐÃ CƠNG BỐ 37 CĨ LIÊN QUAN ĐẾN ĐỀ TÀI 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 viii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Tên đầy đủ Chữ viết tắt FIX Factor IX Chú thích Yếu tố IX Hemophilia B Bệnh lý rối loạn đông máu thiếu hụt FIX F9 Gen mã hóa yếu tố IX DNA Deoxyribonucleic Acid Phân tử ADN PCR Polymerase Chain Reaction Phản ứng tổng hợp chuỗi LD-PCR Long Distance PCR Phản ứng tổng hợp chuỗi dài NGS Next Generation Sequencing Giải trình tự hệ Restriction Fragment Length Đa hình chiều dài đoạn cắt giới Polymorphism hạn MLPA Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification Phương pháp multiplex PCR phát số lượng bất thường Kb Kilo base Đơn vị đo chiều dài ADN SNP Single nucleotide polymorphism Đa hình đơn nucleotide VNTR Variable Number Tandem Repeat Các trình tự ADN lặp lại ngắn 5’UTR 5′ Untranslated Region Vùng khơng mã hóa đầu 5’ 3’UTR 3′ Untranslated Region Vùng khơng mã hóa đầu 3’ WHO World Health Organization Tổ chức Y tế giới European Association for Haemophilia and Allied Disorders Hiệp hội bệnh hemophilia rối loạn đông máu Châu Âu United Kingdom Haemophilia Centre Doctors’ Organisation Tổ chức bác sỹ thuộc Trung tâm hemophilia Vương quốc Anh CDC The Centers for Disease Control and Prevention Trung tâm kiểm sốt phịng chống bệnh dịch HGVS Human Genome Variation Society Hiệp hội biến đổi gen người PolyPhen-2 Polymorphism Phenotyping v2 RFLP EAHDA UKHCDO SIFT Phần mềm dự đoán tác động biến đổi axit amin đến cấu trúc chức Sorting Intolerant From Tolerant phân tử protein ix DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Kích thước exon intron gen F9 người 14 Bảng 1.2 Tần suất alen số đa hình quần thể khác 30 Bảng 2.1: Trình tự mồi giải trình tự gen F9 phương pháp Sanger 51 Bảng 3.1 Đặc điểm bệnh nhân nghiên cứu 60 Bảng 3.2 Kết nồng độ độ tinh số mẫu ADN 61 Bảng 3.3 Phân đoạn ADN trình tự mồi thiết kế 62 Bảng 3.4 Thành phần phản ứng LR-PCR khuếch đại đoạn a1-a8 66 Bảng 3.5 Chu trình nhiệt phản ứng LR-PCR cho đoạn a1, a2, a5, a6, a7 67 Bảng 3.6 Chu trình nhiệt phản ứng LR-PCR cho đoạn a3 a4 67 Bảng 3.7 Chu trình nhiệt độ phản ứng LR-PCR cho đoạn a8 67 Bảng 3.8 Danh sách 16 đột biến 77 Bảng 3.9 Danh sách 58 đột biến phát nghiên cứu 77 Bảng 3.10 Đặc điểm kiểu đột biến gen gặp nghiên cứu 77 Bảng 3.11 Tác động đột biến đến cấu trúc, hoạt động gen 80 Bảng 3.12 Mức độ lặp lại đột biến bệnh nhân nghiên cứu 82 Bảng 3.13 Tương quan kiểu đột biến gen mức độ bệnh 82 Bảng 3.14 Danh sách 12 SNP phát từ liệu giải trình tự 86 Bảng 3.15 Tần suất alen đa hình gặp nghiên cứu 87 Bảng 3.16 : Thống kê đồng biểu đa hình nucleotide 88 Bảng 3.17 Phân nhóm SNP theo mức độ liên kết 92 Bảng 3.18 Bộ SNP có giá trị thơng tin 92 Bảng 4.1 Tỷ lệ đột biến số nghiên cứu giới 105 Bảng 4.2 Tần suất alen đa hình số quần thể khác 114 Bảng 4.3 Tần suất alen đa hình MseI quần thể giới 115 Bảng 4.4 Tần suất dị hợp tử số đa hình liên kết với gen F9 quần thể 119 x DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Sơ đồ di truyền bệnh hemophilia B Hình 1.2 Sơ đồ đường đông máu 12 Hình 1.3 Cấu trúc phân tử yếu tố IX 13 Hình 1.4 Tương tác yếu tố FIXa với phức hợp TF/FVIIa 15 Hình 1.5 Tương tác FIXa với FVIIIa 16 Hình 1.6 Các vị trí đột biến trình tự phân tử FIX 20 Hình 1.7 Kiểu đột biến tỷ lệ đột biến gen F9 24 Hình 1.8: Sơ đồ đột biến điểm vùng promoter gen F9 25 Hình 1.9 Số đột biến công bố hàng năm 27 Hình 1.10 Vị trí đa hình gen F9 29 Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu 49 Hình 2.2: Xác định giá trị D’ phần mềm Haploview 59 Hình 3.1 Kết tách chiết ADN tổng số 61 Hình 3.2 Kết kiểm tra độ bao phủ gen F9 trình tự mồi 63 Hình 3.3 Kết phản ứng LR-PCR tối ưu đoạn a1 a2 63 Hình 3.4 Kết phản ứng LR-PCR tối ưu đoạn a3 a4 64 Hình 3.5 Kết phản ứng LR-PCR tối ưu đoạn a5 a6 64 Hình 3.6 Kết phản ứng LR-PCR tối ưu đoạn a7 a8 64 Hình 3.7 Kết phản ứng LR-PCR tối ưu đoạn a8 65 Hình 3.8 Kết phản ứng LR-PCR tối ưu đoạn a8 66 Hình 3.9 Hình ảnh khuếch đại phân đoạn a1-a8 điều kiện Tm tối ưu 66 Hình 3.10 Kết kiểm tra thư viện ADN hệ thống điện di mao quản 68 xi Hình 3.11 Các số chất lượng hình ảnh kết giải trình tự 69 Hình 3.12 Kết phân tích đột biến với quy trình NGS Sanger 73 Hình 3.13 Kết Longrange PCR mẫu H14, H94, H97 74 Hình 3.14 Kết giải trình tự gen NGS mẫu H14, H94, H97 75 Hình 3.15 Kết phân tích MLPA mẫu H14, H94, H97 76 Hình 3.16 Phân bố đột biến gen F9 83 Hình 3.17 Phân bố đột biến domain phân tử FIX 84 Hình 3.18 Bản đồ đột biến gen F9 bệnh nhân hemophilia B Việt Nam 85 Hình 3.19 Kết phân tích mối liên kết phần mềm Haploview 4.2 91 Hình 3.20 Kết khảo sát hiệu đa hình nucleotide 93 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 Green, P.M., et al., Molecular pathology of haemophilia B Embo j, 1989 8(4): p 1067-72 (EAHAD), E.A.o.H.a.A.D., Coagulation Factor IX Variant Database http://www.factorix.org March 2016 Saad, S., et al., First report on UK database of haemophilia B mutations and pedigrees UK Haemophilia Centres Thromb Haemost, 1994 71(5): p 56370 Liu, J.Z., et al., The human factor IX gene as germline mutagen test: samples from Mainland China have the putatively endogenous pattern of mutation Hum Mutat, 2000 16(1): p 31-6 Ketterling, R.P., et al., Deletions with inversions: report of a mutation and review of the literature Hum Mutat, 1993 2(1): p 53-7 Knobloch, O., et al., Recurrent mutations in the factor IX gene: founder effect or repeat de novo events Investigation of the German haemophilia B population and review of de novo mutations Hum Genet, 1993 92(1): p 408 Nielsen, L.R., et al., Detection of ten new mutations by screening the gene encoding factor IX of Danish hemophilia B patients Thromb Haemost, 1995 73(5): p 774-8 Green, P.M., et al., Haplotype analysis of identical factor IX mutants using PCR Thromb Haemost, 1992 67(1): p 66-9 Bottema, C.D., et al., Missense mutations and evolutionary conservation of amino acids: evidence that many of the amino acids in factor IX function as "spacer" elements Am J Hum Genet, 1991 49(4): p 820-38 Koeberl, D.D., et al., Mutations causing hemophilia B: direct estimate of the underlying rates of spontaneous germ-line transitions, transversions, and deletions in a human gene Am J Hum Genet, 1990 47(2): p 202-17 Driscoll, M.C., E Bouhassira, and L.M Aledort, A codon 338 nonsense mutation in the factor IX gene in unrelated hemophilia B patients: factor IX338 New York Blood, 1989 74(2): p 737-42 Huang, M.N., et al., Molecular defect in factor IXHilo, a hemophilia Bm variant: Arg Gln at the carboxyterminal cleavage site of the activation peptide Blood, 1989 73(3): p 718-21 Thompson, A.R., et al., Factor IX mutations: rapid, direct screening methods for 20 new families with hemophilia B Thromb Res, 1992 65(2): p 289-95 Taylor, S.A., et al., A mutation adjacent to the beta cleavage site of factor IX (valine 182 to leucine) results in mild haemophilia Bm Br J Haematol, 1990 75(2): p 217-21 Tartary, M., et al., Detection of a molecular defect in 40 of 44 patients with haemophilia B by PCR and denaturing gradient gel electrophoresis Br J Haematol, 1993 84(4): p 662-9 Chen, S.H., et al., Three point mutations in the factor IX genes of five hemophilia B patients Identification strategy using localization by altered epitopes in their hemophilic proteins J Clin Invest, 1989 84(1): p 113-8 Odom, M.W., et al., Five novel point mutations: two causing haemophilia B and three causing factor X deficiency Mol Cell Probes, 1994 8(1): p 63-5 Potapov, V and J.L Ong, Examining Sources of Error in PCR by SingleMolecule Sequencing PLoS One, 2017 12(1): p e0169774 43 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 Yohe, S., et al., Clinical validation of targeted next-generation sequencing for inherited disorders 2015 139(2): p 204-210 Rehm, H.L., et al., ACMG clinical laboratory standards for next-generation sequencing Genet Med, 2013 15(9): p 733-47 Hartman, P., et al., Next generation sequencing for clinical diagnostics: Five year experience of an academic laboratory Mol Genet Metab Rep, 2019 19: p 100464 Zahari, M., et al., Mutational Profiles of F8 and F9 in a Cohort of Haemophilia A and Haemophilia B Patients in the Multi-ethnic Malaysian Population Mediterr J Hematol Infect Dis, 2018 10(1): p e2018056 Bottema, C.D., et al., The pattern of spontaneous germ-line mutation: relative rates of mutation at or near CpG dinucleotides in the factor IX gene Hum Genet, 1993 91(5): p 496-503 Green, P., et al., Haemophilia B mutations in a complete Swedish population sample: a test of new strategy for the genetic counselling of diseases with high mutational heterogeneity 1991 78(3): p 390-397 Gao, W., et al., Characterization of missense mutations in the signal peptide and propeptide of FIX in hemophilia B by a cell-based assay Blood Adv, 2020 4(15): p 3659-3667 Bentley, A., et al., Defective propeptide processing of blood clotting factor IX caused by mutation of arginine to glutamine at position− 1986 45(3): p 343-348 Ware, J., et al., Factor IX San Dimas: Substitution of glutamine for arg− in the propeptide leads to incomplete γ-carboxylation and altered phospholipid binding properties 1989 264(19): p 11401-11406 Lodish, H and S.L.J.B.M.B.E Zipursky, Molecular cell biology 2001 29: p 126-133 Kojima, T., et al., Possible absence of common polymorphisms in coagulation factor IX gene in Japanese subjects 1987 Graham, J., et al., The varying frequencies of five DNA polymorphisms of Xlinked coagulant factor IX in eight ethnic groups 1991 49(3): p 537 Driscoll, M.C., et al., A second BamHI DNA polymorphism and haplotype association in the factor IX gene 1988 Winship, P and I.J.B.J.H Peake, A clinically useful RFLP in the 5'flanking region of the factor IX gene 1992 80: p 26a Machado, F.B., et al., Informativeness of a novel multiallelic marker-set comprising an F8 intron 21 and three tightly linked loci for haemophilia A carriership analysis Haemophilia, 2011 17(2): p 257-66 Ljung, R.C.J.B.s.c.h., Prenatal diagnosis of haemophilia 1996 9(2): p 243-257 Shetty, S., et al., Factor VIII and IX gene polymorphisms and carrier analysis in Indian population 1997 54(4): p 271-275 44 PHỤ LỤC Phụ lục 01: KẾT QUẢ KIỂM TRA NỒNG ĐỘ VÀ ĐỘ TINH SẠCH CỦA CÁC MẪU ADN TT Tên mẫu Nồng độ Đơn vị A260 A280 260/280 260/230 Loại mẫu HB1 108.8 ng/µl 2.176 1.146 1.9 2.52 DNA HB2 94 ng/µl 1.88 0.983 1.91 2.51 DNA HB3 150.1 ng/µl 3.002 1.569 1.91 2.51 DNA HB4 108.1 ng/µl 2.162 1.137 1.9 2.5 DNA HB5 93 ng/µl 1.859 0.974 1.91 2.49 DNA HB6 225.6 ng/µl 4.513 2.399 1.88 2.48 DNA HB7 100.3 ng/µl 2.006 1.059 1.89 2.46 DNA HB8 183 ng/µl 3.66 1.936 1.89 2.46 DNA HB9 188.7 ng/µl 3.774 1.986 1.9 2.45 DNA 10 HB10 138.5 ng/µl 2.77 1.474 1.88 2.44 DNA 11 HB11 164.9 ng/µl 3.298 1.717 1.92 2.44 DNA 12 HB12 103 ng/µl 2.059 1.082 1.9 2.43 DNA 13 HB13 113.6 ng/µl 2.273 1.22 1.86 2.43 DNA 14 HB14 83.6 ng/µl 1.672 0.881 1.9 2.42 DNA 15 HB15 125.8 ng/µl 2.517 1.337 1.88 2.42 DNA 16 HB16 113.4 ng/µl 2.267 1.171 1.94 2.41 DNA 17 HB17 175.9 ng/µl 3.517 1.861 1.89 2.41 DNA 18 HB18 178.7 ng/µl 3.574 1.898 1.88 2.41 DNA 19 HB19 94 ng/µl 1.881 1.004 1.87 2.4 DNA 20 HB20 116.3 ng/µl 2.325 1.23 1.89 2.4 DNA 21 HB21 144.1 ng/µl 2.881 1.531 1.88 2.4 DNA 22 HB22 187.8 ng/µl 3.757 1.953 1.92 2.4 DNA 23 HB23 188.9 ng/µl 3.777 2.01 1.88 2.4 DNA 24 HB24 190.8 ng/µl 3.816 1.997 1.91 2.4 DNA 25 HB25 104.4 ng/µl 2.087 1.102 1.89 2.39 DNA 26 HB26 138.6 ng/µl 2.773 1.454 1.91 2.39 DNA 27 HB27 157.8 ng/µl 3.155 1.671 1.89 2.39 DNA 28 HB28 194.5 ng/µl 3.889 2.043 1.9 2.39 DNA 29 HB29 85.1 ng/µl 1.703 0.872 1.95 2.38 DNA 30 HB30 149.8 ng/µl 2.995 1.594 1.88 2.38 DNA 31 HB31 169.7 ng/µl 3.395 1.78 1.91 2.38 DNA 45 TT Tên mẫu Nồng độ Đơn vị A260 A280 260/280 260/230 Loại mẫu 32 HB32 175.5 ng/µl 3.51 1.824 1.92 2.38 DNA 33 HB33 216.8 ng/µl 4.336 2.28 1.9 2.38 DNA 34 HB34 258.3 ng/µl 5.167 2.744 1.88 2.38 DNA 35 HB35 178.4 ng/µl 3.569 1.859 1.92 2.37 DNA 36 HB36 121 ng/µl 2.42 1.267 1.91 2.36 DNA 37 HB37 132 ng/µl 2.639 1.402 1.88 2.36 DNA 38 HB38 184.3 ng/µl 3.685 1.942 1.9 2.36 DNA 39 HB39 329.6 ng/µl 6.592 3.486 1.89 2.36 DNA 40 HB40 82.4 ng/µl 1.647 0.847 1.94 2.35 DNA 41 HB41 120 ng/µl 2.4 1.27 1.89 2.35 DNA 42 HB42 149 ng/µl 2.979 1.516 1.96 2.35 DNA 43 HB43 165.5 ng/µl 3.309 1.734 1.91 2.35 DNA 44 HB44 169.4 ng/µl 3.389 1.784 1.9 2.35 DNA 45 HB45 87 ng/µl 1.739 0.888 1.96 2.34 DNA 46 HB46 92.6 ng/µl 1.852 0.984 1.88 2.34 DNA 47 HB47 124.3 ng/µl 2.487 1.314 1.89 2.34 DNA 48 HB48 169.5 ng/µl 3.39 1.799 1.88 2.34 DNA 49 HB49 182.1 ng/µl 3.642 1.921 1.9 2.34 DNA 50 HB50 215.3 ng/µl 4.306 2.248 1.91 2.34 DNA 51 HB51 252.2 ng/µl 5.045 2.646 1.91 2.34 DNA 52 HB52 260.1 ng/µl 5.202 2.719 1.91 2.34 DNA 53 HB53 267 ng/µl 5.34 2.816 1.9 2.34 DNA 54 HB54 299.8 ng/µl 5.995 3.177 1.89 2.34 DNA 55 HB55 453.6 ng/µl 9.072 4.77 1.9 2.34 DNA 56 HB56 89.4 ng/µl 1.787 0.953 1.88 2.33 DNA 57 HB57 93.3 ng/µl 1.867 0.989 1.89 2.33 DNA 58 HB58 124.8 ng/µl 2.496 1.276 1.96 2.33 DNA 59 HB59 177.1 ng/µl 3.541 1.83 1.93 2.33 DNA 60 HB60 206.6 ng/µl 4.132 2.161 1.91 2.33 DNA 61 HB61 227.3 ng/µl 4.546 2.397 1.9 2.33 DNA 62 HB62 747.1 ng/µl 14.942 7.939 1.88 2.33 DNA 63 HB63 93.2 ng/µl 1.864 0.994 1.88 2.32 DNA 64 HB64 125.2 ng/µl 2.504 1.33 1.88 2.32 DNA 65 HB65 159.7 ng/µl 3.193 1.7 1.88 2.32 DNA 66 HB66 291.9 ng/µl 5.839 3.084 1.89 2.32 DNA 46 TT Tên mẫu Nồng độ Đơn vị A260 A280 260/280 260/230 Loại mẫu 67 HB67 297.4 ng/µl 5.948 3.146 1.89 2.32 DNA 68 HB68 467.4 ng/µl 9.349 4.945 1.89 2.32 DNA 69 HB69 138.5 ng/µl 2.77 1.456 1.9 2.31 DNA 70 HB70 175 ng/µl 3.501 1.845 1.9 2.31 DNA 71 HB71 214 ng/µl 4.28 2.261 1.89 2.31 DNA 72 HB72 221.9 ng/µl 4.438 2.337 1.9 2.31 DNA 73 HB73 244.1 ng/µl 4.881 2.506 1.95 2.31 DNA 74 HB74 258.1 ng/µl 5.161 2.697 1.91 2.31 DNA 75 HB75 268.2 ng/µl 5.363 2.81 1.91 2.31 DNA 76 HB76 275.6 ng/µl 5.512 2.891 1.91 2.31 DNA 77 HB77 334.8 ng/µl 6.697 3.526 1.9 2.31 DNA 78 HB78 408.6 ng/µl 8.173 4.259 1.92 2.31 DNA 79 HB79 506.1 ng/µl 10.122 5.324 1.9 2.31 DNA 80 HB80 600.5 ng/µl 12.011 6.334 1.9 2.31 DNA 81 HB81 742.4 ng/µl 14.848 7.862 1.89 2.31 DNA 82 HB82 93.5 ng/µl 1.87 0.986 1.9 2.3 DNA 83 HB83 100.4 ng/µl 2.008 1.062 1.89 2.3 DNA 84 HB84 118.6 ng/µl 2.372 1.231 1.93 2.3 DNA 85 HB85 119.8 ng/µl 2.396 1.278 1.87 2.3 DNA 86 HB86 130.8 ng/µl 2.617 1.394 1.88 2.3 DNA 87 HB87 142.2 ng/µl 2.844 1.506 1.89 2.3 DNA 88 HB88 151.6 ng/µl 3.032 1.567 1.93 2.3 DNA 89 HB89 172.4 ng/µl 3.447 1.819 1.9 2.3 DNA 90 HB90 185.2 ng/µl 4.688 2.456 1.91 2.29 DNA 91 HB91 189.8 ng/µl 3.797 1.99 1.91 2.3 DNA 92 HB92 200.4 ng/µl 4.009 2.108 1.9 2.3 DNA 93 HB93 220.1 ng/µl 4.403 2.342 1.88 2.3 DNA 94 HB94 242.3 ng/µl 4.846 2.556 1.9 2.3 DNA 95 HB95 246.3 ng/µl 4.926 2.606 1.89 2.3 DNA 96 HB96 360.6 ng/µl 7.212 3.767 1.91 2.3 DNA 97 HB97 409 ng/µl 8.18 4.299 1.9 2.3 DNA 98 HB98 517.7 ng/µl 10.355 5.506 1.88 2.3 DNA 99 HB99 747.9 ng/µl 14.958 7.953 1.88 2.3 DNA 100 HB100 1084.2 ng/µl 21.683 11.429 1.9 2.3 DNA 101 NK1 90 ng/µl 1.95 2.29 DNA 1.8 0.923 47 TT Tên mẫu Nồng độ Đơn vị A260 A280 260/280 260/230 Loại mẫu 102 NK2 93.6 ng/µl 3.388 1.75 1.94 2.29 DNA 103 NK3 111.7 ng/µl 2.235 1.177 1.9 2.29 DNA 104 NK4 119 ng/µl 2.38 1.265 1.88 2.29 DNA 105 NK5 207.5 ng/µl 4.149 2.179 1.9 2.29 DNA 106 NK6 207.5 ng/µl 4.15 2.177 1.91 2.29 DNA 107 NK7 234.4 ng/µl 4.688 2.456 1.91 2.29 DNA 108 NK8 234.9 ng/µl 4.699 2.473 1.9 2.29 DNA 109 NK9 247.2 ng/µl 4.943 2.538 1.95 2.29 DNA 110 NK10 247.5 ng/µl 4.95 2.6 1.9 2.29 DNA 111 NK11 255.6 ng/µl 5.112 2.669 1.92 2.29 DNA 112 NK12 276.5 ng/µl 5.531 2.889 1.91 2.29 DNA 113 NK13 303.1 ng/µl 6.063 3.211 1.89 2.29 DNA 114 NK14 305.7 ng/µl 6.115 3.179 1.92 2.29 DNA 115 NK15 314.5 ng/µl 6.29 3.268 1.92 2.29 DNA 116 NK16 363 ng/µl 7.261 3.762 1.93 2.29 DNA 117 NK17 410.5 ng/µl 8.21 4.274 1.92 2.29 DNA 118 NK18 629.4 ng/µl 12.588 6.687 1.88 2.29 DNA 119 NK19 752.9 ng/µl 15.057 7.955 1.89 2.29 DNA 120 NK20 798.3 ng/µl 15.965 8.403 1.9 2.29 DNA 121 NK21 158.3 ng/µl 3.167 1.683 1.88 2.28 DNA 122 NK22 169.4 ng/µl 3.388 1.75 1.94 2.28 DNA 123 NK23 198.1 ng/µl 3.963 2.095 1.89 2.28 DNA 124 NK24 268.5 ng/µl 5.371 2.854 1.88 2.28 DNA 125 NK25 280.7 ng/µl 5.613 2.956 1.9 2.28 DNA 126 NK26 290.8 ng/µl 5.816 3.082 1.89 2.28 DNA 127 NK27 324.1 ng/µl 6.482 3.417 1.9 2.28 DNA 128 NK28 382.4 ng/µl 7.648 4.048 1.89 2.28 DNA 129 NK29 426.7 ng/µl 8.534 4.552 1.87 2.28 DNA 130 NK30 451.1 ng/µl 9.021 4.751 1.9 2.28 DNA 131 NK31 474.3 ng/µl 9.486 4.96 1.91 2.28 DNA 132 NK32 479.1 ng/µl 9.582 5.041 1.9 2.28 DNA 133 NK33 99.8 ng/µl 1.997 1.056 1.89 2.27 DNA 134 NK34 121.8 ng/µl 2.436 1.29 1.89 2.27 DNA 135 NK35 170.8 ng/µl 3.415 1.805 1.89 2.27 DNA 136 NK36 336.6 ng/µl 6.731 3.502 1.92 2.27 DNA 48 TT Tên mẫu Nồng độ Đơn vị A260 A280 260/280 260/230 Loại mẫu 137 NK37 438.1 ng/µl 8.763 4.513 1.94 2.27 DNA 138 NK38 453.2 ng/µl 9.064 4.778 1.9 2.27 DNA 139 NK39 474.9 ng/µl 9.498 4.875 1.95 2.27 DNA 140 NK40 627.1 ng/µl 12.542 6.706 1.87 2.27 DNA 141 NK41 898.4 ng/µl 17.969 9.575 1.88 2.27 DNA 142 NK42 1395.1 ng/µl 27.902 14.846 1.88 2.27 DNA 143 NK43 84.5 ng/µl 1.691 0.889 1.9 2.26 DNA 144 NK44 90.4 ng/µl 1.809 0.949 1.91 2.26 DNA 145 NK45 96.4 ng/µl 1.929 0.992 1.94 2.26 DNA 146 NK46 143.1 ng/µl 2.861 1.512 1.89 2.26 DNA 147 NK47 159.6 ng/µl 3.192 1.666 1.92 2.26 DNA 148 NK48 186.9 ng/µl 3.739 1.963 1.9 2.26 DNA 149 NK49 240 ng/µl 4.801 2.491 1.93 2.26 DNA 150 NK50 321 ng/µl 6.419 3.393 1.89 2.26 DNA 151 NK51 365.7 ng/µl 7.314 3.844 1.9 2.26 DNA 152 NK52 586.6 ng/µl 11.732 6.18 1.9 2.26 DNA 153 NK53 138.9 ng/µl 2.777 1.48 1.88 2.25 DNA 154 NK54 140.4 ng/µl 2.809 1.499 1.87 2.25 DNA 155 NK55 152.3 ng/µl 3.046 1.62 1.88 2.25 DNA 156 NK56 155.1 ng/µl 3.103 1.633 1.9 2.25 DNA 157 NK57 217.7 ng/µl 4.354 2.291 1.9 2.25 DNA 158 NK58 224.6 ng/µl 4.493 2.344 1.92 2.25 DNA 159 NK59 240.4 ng/µl 4.809 2.409 2.25 DNA 160 NK60 269.2 ng/µl 5.384 2.825 1.91 2.25 DNA 161 NK61 317.5 ng/µl 6.35 3.343 1.9 2.25 DNA 162 NK62 355.4 ng/µl 7.109 3.651 1.95 2.25 DNA 163 NK63 1231.5 ng/µl 24.63 12.979 1.9 2.25 DNA 164 NK64 96.2 ng/µl 1.924 1.012 1.9 2.24 DNA 165 NK65 102.4 ng/µl 2.048 1.042 1.97 2.24 DNA 166 NK66 124.4 ng/µl 2.489 1.279 1.95 2.24 DNA 167 NK67 154.8 ng/µl 3.095 1.607 1.93 2.24 DNA 168 NK68 166.4 ng/µl 3.329 1.655 2.24 DNA 169 NK69 172.7 ng/µl 3.455 1.827 1.89 2.24 DNA 170 NK70 224.8 ng/µl 4.495 2.409 1.87 2.24 DNA 171 NK71 270.5 ng/µl 5.411 2.839 1.91 2.24 DNA 49 TT Tên mẫu Nồng độ Đơn vị A260 A280 260/280 260/230 Loại mẫu 172 NK72 271.8 ng/µl 5.435 2.889 1.88 2.24 DNA 173 NK73 409.6 ng/µl 8.192 4.313 1.9 2.24 DNA 174 NK74 497.1 ng/µl 9.942 5.265 1.89 2.24 DNA 175 NK75 642.6 ng/µl 12.853 6.788 1.89 2.24 DNA 176 NK76 737.1 ng/µl 14.741 7.973 1.85 2.24 DNA 177 NK77 185.9 ng/µl 3.717 1.937 1.92 2.23 DNA 178 NK78 364.1 ng/µl 7.281 3.836 1.9 2.23 DNA 179 NK79 365.2 ng/µl 7.304 3.878 1.88 2.23 DNA 180 NK80 619.2 ng/µl 12.383 6.414 1.93 2.23 DNA 181 NK81 921.8 ng/µl 18.435 9.887 1.86 2.23 DNA 182 NK82 113.2 ng/µl 2.264 1.194 1.9 2.22 DNA 183 NK83 364 ng/µl 7.279 3.763 1.93 2.22 DNA 184 NK84 364.4 ng/µl 7.288 3.82 1.91 2.22 DNA 185 NK85 114.5 ng/µl 2.29 1.196 1.92 2.21 DNA 186 NK86 156.3 ng/µl 3.126 1.651 1.89 2.21 DNA 187 NK87 157.4 ng/µl 3.148 1.674 1.88 2.21 DNA 188 NK88 176.1 ng/µl 3.523 1.882 1.87 2.21 DNA 189 NK89 331.8 ng/µl 6.636 3.508 1.89 2.21 DNA 190 NK90 401.1 ng/µl 8.021 4.245 1.89 2.21 DNA 191 NK91 481.2 ng/µl 9.624 5.135 1.87 2.21 DNA 192 NK92 699.6 ng/µl 13.991 7.558 1.85 2.21 DNA 193 NK93 94.1 ng/µl 1.883 0.998 1.89 2.2 DNA 194 NK94 140.2 ng/µl 2.805 1.465 1.91 2.2 DNA 195 NK95 155 ng/µl 3.099 1.616 1.92 2.2 DNA 196 NK96 277.8 ng/µl 5.556 2.965 1.87 2.2 DNA 197 NK97 89.9 ng/µl 1.799 0.954 1.89 2.19 DNA 198 NK98 131.1 ng/µl 2.623 1.371 1.91 2.19 DNA 199 NK99 180.1 ng/µl 3.602 1.895 1.9 2.19 DNA 200 NK100 204.2 ng/µl 4.084 2.151 1.9 2.19 DNA 201 MG01 254.5 ng/µl 15.965 8.403 1.9 2.19 DNA 202 MG02 546.8 ng/µl 10.937 5.634 1.94 2.19 DNA 203 MG03 110.7 ng/µl 2.213 1.168 1.9 2.18 DNA 204 MG04 147.3 ng/µl 2.947 1.5 1.96 2.18 DNA 205 MG05 170.4 ng/µl 3.407 1.798 1.89 2.18 DNA 206 MG06 287.9 ng/µl 5.758 3.028 1.9 2.18 DNA 50 TT Tên mẫu Nồng độ Đơn vị A260 A280 260/280 260/230 Loại mẫu 207 MG07 96.6 ng/µl 1.932 1.014 1.91 2.17 DNA 208 MG08 235.7 ng/µl 4.715 2.508 1.88 2.17 DNA 209 MG09 406.4 ng/µl 8.128 4.24 1.92 2.17 DNA 210 MG10 87.1 ng/µl 1.741 0.917 1.9 2.16 DNA 211 MG11 110.7 ng/µl 2.214 1.185 1.87 2.16 DNA 212 MG12 249.5 ng/µl 4.99 2.636 1.89 2.16 DNA 213 MG13 193.7 ng/µl 3.874 2.06 1.88 2.15 DNA 214 MG14 479.6 ng/µl 9.592 5.1 1.88 2.14 DNA 215 MG15 85.8 ng/µl 1.716 0.868 1.98 2.13 DNA 216 MG16 89.8 ng/µl 1.796 0.935 1.92 2.13 DNA 217 MG17 140 ng/µl 2.799 1.508 1.86 2.13 DNA 218 MG18 151.5 ng/µl 3.031 1.558 1.94 2.13 DNA 219 MG19 527.8 ng/µl 10.556 5.558 1.9 2.13 DNA 220 MG20 563.3 ng/µl 11.265 5.998 1.88 2.13 DNA 221 MG21 280.2 ng/µl 5.603 2.924 1.92 2.11 DNA 222 MG22 99 ng/µl 1.981 1.04 1.91 2.07 DNA 223 MG23 127.6 ng/µl 2.552 1.371 1.86 2.07 DNA 51 Phụ lục 02: KẾT QUẢ PHÂN TÍCH TRÌNH TỰ GEN F9 CỦA 100 BỆNH NHÂN HEMOPHILIA B STT Mã BN Năm sinh Giới tính % FIX Mức độ bệnh Có ức chế Biến đổi nucleotide (HGVS cDNA) Biến đổi axit amin (HGVS protein) Loại đột biến Vị trí Domain HB01 1999 Nam Trung bình khơng c.881G>A p.Arg294Gln missense exon SP HB02 1994 Nam 0.1 Nặng không c.1135C>T p.Arg379* nonsense exon SP HB03 2012 Nam 0.6 Nặng không c.1276A>G p.Thr426Ala missense exon SP HB04 2010 Nam 0,6 Nặng không c.128G>A p.Arg43Gln missense exon PRO HB05 2003 Nam C p.Cys128Arg missense exon EGF1 HB06 2009 Nam T p.Arg226Trp missense exon AP HB07 1981 Nam 0.1 Nặng không c.1135C>T p.Arg379* nonsense exon SP HB08 2005 Nam 0.1 Nặng không c.689G>T p.Gly230Val missense exon SP HB09 2013 Nam A p.Ser430Arg missense exon SP 10 HB10 1983 Nam 0.3 Nặng không c.1213G>A p.Asp405Asn missense exon SP 11 HB11 1995 Nam 0.1 Nặng không c.1213G>A p.Asp405Asn missense exon SP 12 HB12 1988 Nam 0.1 Nặng không c.127C>T p.Arg43Trp missense exon PRO 13 HB13 1984 Nam 0.1 Nặng không c.1213G>A p.Asp405Asn missense exon SP STT Mã BN Năm Giới % Mức Có Biến đổi nucleotide Biến đổi Loại Vị trí Domain 52 sinh tính FIX độ bệnh ức chế (HGVS cDNA) axit amin đột biến (HGVS protein) 14 HB14 2012 Nam 0.4 Nặng không del_exon - large del exon EGF2 15 HB15 1991 Nam 0.1 Nặng không c.677G>A p.Arg226Gln missense exon AP 16 HB16 1985 Nam 0.2 Nặng không c.433T>C p.Cys145Arg missense exon EGF2 17 HB17 2015 Nam 3.2 Trung bình khơng c.881G>A p.Arg294Gln missense exon SP 18 HB18 1975 Nam 0.2 Nặng không c.470G>T p.Cys157Phe missense exon EGF2 19 HB19 1953 Nam 0,3 Nặng không c.1135C>T p.Arg379* nonsense exon SP 20 HB20 1988 Nữ 2.1 Trung bình khơng c.881G>A (Đồng hợp tử) p.Arg294Gln missense exon SP 21 HB21 1964 Nam Trung bình khơng c.881G>A p.Arg294Gln missense exon SP 22 HB22 2013 0.4 Nặng không c.874C>T p.Gln292* nonsense exon SP 23 HB23 1984 Nam 0.1 Nặng không c.1243C>A p.His415Asn missense exon SP 24 HB24 1980 Nam 0.1 Nặng không c.344A>G p.Tyr115Cys missense exon EGF1 25 HB25 2000 Nam 0,4 Nặng không c.956T>C p.Leu319Pro missense exon SP 26 HB26 1998 Nam 0,1 Nặng không c.952delC p.Leu318Phefs*8 frameshift exon SP 27 HB27 1981 Nam 0,5 Nặng không c.253-1G>C splice site 28 HB28 1989 Nam 0,2 Nặng không c.755G>C p.Cys252Ser missense exon SP 29 HB29 2012 Nam 0.1 Nặng không c.1069G>C p.Gly357Arg missense exon SP 30 HB30 2013 Nam 0.5 Nặng không c.223C>T p.Arg75* nonsense exon GLA STT Mã BN Năm Giới % Mức Có Biến đổi nucleotide Biến đổi Loại Vị trí Domain Nam splice site intron - 53 sinh tính FIX độ bệnh ức chế (HGVS cDNA) axit amin đột biến (HGVS protein) 31 HB31 1980 Nam 0.2 Nặng không c.1213G>A p.Asp405Asn missense exon SP 32 HB32 1998 Nam 0.3 Nặng không c.1369A>T p.Lys457* nonsense exon SP 33 HB33 1985 Nam 0.1 Nặng không c.422G>A p.Cys141Tyr missense exon EGF2 34 HB34 1955 Nam 0.3 Nặng không c.383G>A p.Cys128Tyr missense exon EGF1 35 HB35 1977 Nam 0.5 Nặng không c.1243C>A p.His415Asn missense exon SP 36 HB36 2015 Nam 0.4 Nặng không c.1213G>A p.Asp405Asn missense exon SP 37 HB37 2006 Nam 0.5 Nặng không c.206G>A p.Cys69Tyr missense exon GLA 38 HB38 2007 Nam 0.9 Nặng không c.88G>T p.Val30Phe missense exon PRO 39 HB39 2005 Nam 0.4 Nặng không c.761G>A p.Gly254Asp missense exon SP 40 HB40 2005 Nam 0.7 Nặng không c.1136G>A p.Arg379Gln missense exon SP 41 HB41 1980 Nam 0.3 Nặng không c.1135C>T p.Arg379* nonsense exon SP 42 HB42 2015 Nam 0.2 Nặng không c.127C>T p.Arg43Trp missense exon PRO 43 HB43 1980 Nam 0.5 Nặng không c.206G>A p.Cys69Tyr missense exon GLA 44 HB44 1990 Nam 0.3 Nặng không c.278-3A>G Splice site 45 HB45 1992 Nam 0.2 Nặng không c.127C>T p.Arg43Trp missense exon PRO 46 HB46 2010 Nam 0.5 Nặng không c.1331A>G p.Tyr444Cys missense exon SP Splice site intron - 54 STT Mã BN Năm sinh Giới tính % FIX Mức độ bệnh Có ức chế Biến đổi nucleotide (HGVS cDNA) Biến đổi axit amin (HGVS protein) Loại đột biến Vị trí Domain 47 HB47 1976 Nam 2.2 Trung bình khơng c.881G>A p.Arg294Gln missense exon SP 48 HB48 1980 Nam 0.4 Nặng không c.223C>T p.Arg75* nonsense exon GLA 49 HB49 1970 Nam 0.9 Nặng không c.947T>C p.Ile316Thr missense exon SP 50 HB50 1989 Nam 0.5 Nặng không c.1220G>C p.Cys407Ser missense exon SP 51 HB51 2016 Nam 0.7 Nặng không c.127C>T p.Arg43Trp missense exon PRO 52 HB52 2003 Nam 0.3 Nặng không c348-349insGA pGlu116Glufs*15 frameshift exon EGF1 53 HB53 1991 Nam 1.3 Trung bình khơng c.881G>A p.Arg294Gln missense exon SP 54 HB54 1990 Nam 0.5 Nặng không c.838+1G>A splice site splice site intron - 55 HB55 2012 Nam 0.1 Nặng không c.1220G>A p.Cys407Tyr missense exon SP 56 HB56 2009 Nam Trung bình khơng c.128G>A p.Arg43Gln missense exon PRO 57 HB57 1975 Nam 0.2 Nặng không c.470G>T p.Cys157Phe missense exon EGF2 58 HB58 2008 Nam 4.4 Trung bình khơng c.881G>A p.Arg294Gln missense exon SP 59 HB59 2011 Nam 0.3 Nặng không c.1024A>C p.Thr342Pro missense exon SP 60 HB60 1981 Nam Trung bình khơng c.881G>A p.Arg294Gln missense exon SP 61 HB61 2012 Nam 1.5 Trung bình khơng c.127C>T p.Arg43Trp missense exon PRO 62 HB62 1993 Nam 2.8 Trung bình khơng c.881G>A p.Arg294Gln missense exon SP 63 HB63 1993 Nam 0.9 Nặng không c.128G>A p.Arg43Gln missense exon PRO 64 HB64 2012 Nam 2.3 Trung bình khơng c.137G>T p.Arg46Met missense exon PRO 55 STT Mã BN Năm Giới % Mức Có sinh tính FIX độ bệnh ức chế Biến đổi Biến đổi nucleotide axit amin (HGVS cDNA) (HGVS protein) Loại đột biến Vị trí Domain 65 HB65 2007 Nam 0,1 Nặng khơng c.956T>C p.Leu319Pro missense exon SP 66 HB66 1981 Nam 0,2 Nặng không c.1004G>A p.Cys335Tyr missense exon SP 67 HB67 1985 Nam 0,1 Nặng không c.206G>A p.Cys69Tyr missense exon GLA 68 HB68 1950 Nam 1.1 Trung bình khơng c.881G>A p.Arg294Gln missense exon SP 69 HB69 1998 Nam 10 Nhẹ không c.149G>A p.Gly50Asp missense exon GLA 70 HB70 2015 Nam 0,1 Nặng không c.1238G>A p.Gly413Glu missense exon SP 71 HB71 2011 Nam 0.1 Nặng không c.676C>T p.Arg226Trp missense exon AP 72 HB72 2015 Nam 0.2 Nặng không c.1159-1161del p.Lys387del small del exon SP 73 HB73 2012 Nam 0.1 Nặng không c.1213G>A p.Asp405Asn missense exon SP 74 HB74 2014 Nam A p.Arg226Gln missense exon AP 75 HB75 1997 Nam 0.1 Nặng không c.1369A>T p.Lys457* nonsense exon SP 76 HB76 1948 Nam >5 Nhẹ không c.942T>A p.His314.Gln missense exon SP 77 HB77 2000 Nam 3.6 Trung bình khơng c.881G>A p.Arg294Gln missense exon SP 78 HB78 2009 Nam 1.2 Trung bình khơng c.881G>A p.Arg294Gln missense exon SP 79 HB79 1992 Nam 0.3 Nặng không c.1060del A p.Ser354Valfs*14 small del exon SP 80 HB80 1973 Nam 0.1 Nặng không c.914A>G p.Tyr305Cys missense exon SP 81 HB81 2004 Nam 4.5 Trung bình khơng c.-21C>T - - promoter - 56 STT Mã BN Năm sinh Giới tính % FIX Mức độ bệnh Có ức chế Biến đổi nucleotide (HGVS cDNA) Biến đổi axit amin (HGVS protein) Loại đột biến Vị trí Domain 82 HB82 2008 Nam 0.2 Nặng khơng c.215A>G p.Glu72Gly missense exon GLA 83 HB83 1998 Nam Trung bình khơng c.520+13A>G - splice site intron - 84 HB84 2017 Nam 0.2 Nặng không c.1181T>A p.Met394Lys missense exon SP 85 HB85 2012 Nam 0.1 Nặng không c.277+4A>G - splice site intron - 86 HB86 2017 Nam 0.1 Nặng không c.1084A>T P.Lys362* nonsense exon SP 87 HB87 1980 Nam 20.6 Nhẹ không c.149G>A p.Gly50Asp missense exon GLA 88 HB88 2004 Nam 0.3 Nặng không c.349T>A p.Cys117Ser missense exon EGF1 89 HB89 2006 Nam 0.3 Nặng không c.1369A>T p.Lys457* nonsense exon SP 90 HB90 2017 Nam 0.1 Nặng không c.349T>A p.Cys117Ser missense exon EGF1 91 HB91 2006 Nam 0.1 Nặng không c.718T>C p.Trp240Arg missense exon SP 92 HB92 2011 Nam G - splice site intron - 93 HB93 2014 Nam