Bài viết Phân lập và tuyển chọn chủng vi khuẩn lactic chịu nhiệt từ nguồn lên men tự nhiên được nghiên cứu với mục tiêu tuyển chọn được chủng vi khuẩn lactic có khả năng chịu nhiệt tốt, nghiên cứu đã phân lập được 6 chủng vi khuẩn lactic từ nguồn lên men chua tự nhiên.
TNU Journal of Science and Technology 227(10): 268 - 275 STUDY ON ISOLATION AND SELECTION OF HEAT-RESISTANT LACTIC BACTERIA FROM THE NATURAL FERMENTED RESOURCES Tran Van Chi*, Luu Hong Son, Pham Thi Tuyet Mai, Dinh Thi Kim Hoa, Tran Lam Oanh TNU - University of Agriculture and Forestry ARTICLE INFO ABSTRACT Received: 13/6/2022 The study aims to isolate and select lactic acid bacteria strains with good thermotolerant capacity The study isolated six strains of lactic acid bacteria from natural fermented resources Among these bacterial strains, one strain of lactic acid bacteria with the highest lactic acid fermentation activity and the best heat resistance was selected Specifically, the selected bacterial strain after being fermented in MRS medium for 36 hours at 47oC produced the lactic acid concentration of 1.75 mg/ml Besides, the selected bacterial strain is also capable of growing at 51oC The identification of selected bacteria based on the comparison results of 16Sr RNA gene sequence produced the similarity rate with Lactiplantibacillus pentosus species of 100% Research results also show that if cultured in an MRS medium, the growth curve of Lactiplantibacillus pentosus strain is divided into phases: starting phase (0-3) hours, growing phase [327) hours, equilibration phase from [27-33] hours, the decline phase after 33 hours of culture Revised: 20/7/2022 Published: 20/7/2022 KEYWORDS Bacteria Lictic Fermentation Isolation Select PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN CHỦNG VI KHUẨN LACTIC CHỊU NHIỆT TỪ NGUỒN LÊN MEN TỰ NHIÊN Trần Văn Chí*, Lưu Hồng Sơn, Phạm Thị Tuyết Mai, Đinh Thị Kim Hoa, Trần Lâm Oanh Trường Đại học Nông Lâm – ĐH Thái Nguyên THÔNG TIN BÀI BÁO Ngày nhận bài: 13/6/2022 Ngày hồn thiện: 20/7/2022 Ngày đăng: 20/7/2022 TỪ KHĨA Vi khuẩn Acid Lactic Lên men Phân lập Tuyển chọn TÓM TẮT Với mục tiêu tuyển chọn chủng vi khuẩn lactic có khả chịu nhiệt tốt, nghiên cứu phân lập chủng vi khuẩn lactic từ nguồn lên men chua tự nhiên Từ tuyển chọn chủng có hoạt tính lên men sinh axít lactic cao nhất, đồng thời có khả chịu nhiệt độ tốt Theo đó, chủng vi khuẩn tuyển chọn sau lên men môi trường MRS 36 47oC cho hàm lượng axít lactic sinh 1,75 mg/ml Bên cạnh đó, chủng tuyển chọn cịn có khả phát triển 51oC Đã định danh đến loài chủng vi khuẩn tuyển chọn dựa vào kết so sánh trình tự gen 16Sr RNA, tỷ lệ tương đồng với loài Lactiplantibacillus pentosus 100% Kết nghiên cứu nuôi cấy mơi trường MRS đường cong sinh trưởng chủng Lactiplantibacillus pentosus chia thành pha: Pha bắt đầu (0-3) giờ, pha sinh trưởng [3-27) giờ, pha cân từ [27-33] giờ, pha suy vong sau 33 nuôi Kết nghiên cứu sở khoa học quan trọng góp phần đa dạng hóa nguồn giống tốt phục vụ sản xuất axít lactic sản xuất thực phẩm lên men DOI: https://doi.org/10.34238/tnu-jst.6160 * Corresponding author Email: tranvanchi@tuaf.edu.vn http://jst.tnu.edu.vn 268 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(10): 268 - 275 Đặt vấn đề Đã từ lâu, axít lactic ứng dụng nhiều lĩnh vực khác bảo quản chế biến thực phẩm, y học, môi trường [1], [2] Quá trình lên men axít lactic mang lại hiệu tốt tổng hợp công nghiệp Trong tự nhiên, lên men axít lactic q trình tái tạo lượng kỵ khí thơng dụng thực vi khuẩn lactic [3],[4],[5] Vi khuẩn lactic thường tồn môi trường sống giàu chất dinh dưỡng thịt, sữa, phơ mai, đồ uống Chúng phân lập từ nguyên liệu tự nhiên rau, hoa quả, loại thực phẩm lên men chua… [3] Ở Việt Nam, vi khuẩn lactic xuất chủ yếu sản phẩm lên men truyền thống dưa cải muối, sữa chua, cơm mẻ…[6], Trong số vi sinh vật ứng dụng vào sản xuất thực phẩm, hệ vi khuẩn lactic nghiên cứu nhiều [7] Ngày nay, việc lên men sản xuất axít lactic áp dụng phổ biến quy mô công nghiệp với hệ thống lên men lớn thường gặp phải trở ngại đầu tư thiết bị ổn nhiệt nhằm ổn định nhiệt độ vi sinh vật sinh hơ hấp từ thiết bị lên men tỏa [8] Nếu có chủng vi khuẩn lactic chịu nhiệt ứng dụng sản xuất làm giảm chi phí lượng tiêu tốn Tuy nhiên, đến số lượng nghiên cứu chủng vi khuẩn lactic chịu nhiệt độ cao hạn chế Do vậy, việc tuyển chọn chủng vi khuẩn lactic chịu nhiệt có tiềm lớn lên men sản xuất axít lactic quy mơ cơng nghiệp Vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Vật liệu nghiên cứu: Các chủng vi khuẩn lactic phân lập từ nguồn lên men chua tự nhiên như: dưa cải, dưa hành, nước đậu chua 2.2 Môi trường MRS: (De Man, Rogosa and Sharpe) gồm: peptone (10,0 g/L), cao thịt (8,0 g/L), cao nấm men (4,0 g/L), D-glucose (20,0 g/L), K2HPO4 (2,0 g/L), Tween 80 (1,0 g/L), diammonium citrate (2,0 g/L), Natri acetate (5,0 g/L), MgSO4 (0,2 g/L) MnSO4 (0,04 g/L) [9] 2.3 Phương pháp nghiên cứu - Phương pháp phân lập: Dịch mẫu thu pha loãng đến 10-4 với nước cất vô trùng cấy trải môi trường MRS thạch đĩa, ủ lật úp đĩa 48 37oC Sau 48 giờ, chọn khuẩn lạc tiêu biểu để cấy chuyền nhiều lần đến tất khuẩn lạc mọc đĩa giống nhau, sau quan sát kính hiển vi quang học tế bào vi khuẩn có hình thái đồng kết luận chủng đạt mức độ - Phương pháp cấy truyền giữ giống thực theo Trần Vân Khánh (2007) [10] - Phương pháp quan sát hình thái tế bào kính hiển vi theo Trần Linh Thước (2007) [9] - Tuyển chọn chủng dựa vào khả chịu nhiệt độ cao lên men vi khuẩn mức nhiệt độ 32, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53oC Sau 48 lên men môi trường MRS với mức nhiệt độ trên, tiến hành đánh giá mọc lên tế bào vi khuẩn kiểm định môi trường thạch đĩa xác định khả sinh axít lactic theo phương pháp Đào Thị Lương cộng (2010) [11] - Định lượng tế bào vi khuẩn phương pháp đo độ hấp thụ quang học máy quang phổ UV-Vis bước sóng 620 nm [11] - Định danh đến lồi vi khuẩn sinh học phân tử, thơng qua tách chiết DNA tổng số [11], điện di gel agarose [12], sản phẩm PCR sau khuếch tinh gửi giải trình tự công ty 1st BASE Selangor, Malaysia Phương pháp giải trình tự tự động theo ngun lí Sanger Trình tự gene 16S rRNA mẫu nghiên cứu sau giải trình tự so sánh với trình tự trình tự 16S rRNA công bố ngân hàng gen trang web NCBI Eztaxon - Xử lý số liệu phần mềm SPSS20 Kết thảo luận http://jst.tnu.edu.vn 269 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(10): 268 - 275 3.1 Phân lập chủng vi khuẩn lactic từ nguồn lên men tự nhiên Từ mẫu nước dưa bắp cải, mẫu nước dưa hành, mẫu nước chua làm đậu phụ mẫu nước dưa cải bẹ thu thập địa bàn thành phố Thái Nguyên, tiến hành pha loãng, cấy trải môi trường thạch đĩa MRS, ủ 48 30oC Khi xuất khuẩn lạc có vịng phân giải CaCO3 tiếp tục cách tách riêng rẽ cấy lại nhiều lần môi trường thạch đĩa MRS khuẩn lạc mọc lên đồng [15] Với 16 mẫu dịch lên men chua ban đầu phân lập chủng vi khuẩn nghi vi khuẩn lactic Kết thể bảng Bảng Kết phân lập vi khuẩn lactic từ nguồn lên men tự nhiên STT Nguồn mẫu Nước dưa bắp cải Nước dưa hành Nước đậu chua Nước dưa cải bẹ Kí hiệu chủng L1 L2 L3 L4 L5 L6 Hình dạng khuẩn lạc Trịn nổi, trắng sữa, trơn bóng, khơng ria Trịn nổi, trắng ngà, trơn bóng, khơng ria Trịn dẹt giữa, trắng sữa, bóng, mép phẳng Trịn dẹt, trắng sữa, trơn, mép cưa Trịn nổi, trắng sữa, trơn bóng, có ria Trịn nổi, trắng đục, mép cưa Hình thái tế bào Hình que ngắn Hình cầu xếp Hình cầu Hình que ngắn Hình cầu xếp Hình que ngắn Kết bảng cho thấy, số 16 mẫu nước lên men chua tự nhiên có loại mẫu nước qua trình phân lập thu dạng khuẩn lạc hình thái tế bào có nhiều đặc điểm vi khuẩn lactic Đó khuẩn lạc hình trịn nồi, màu trắng sữa đục, nhẵn bóng, mép có cưa khơng, có vịng phân giải CaCO3 xung quanh Các tế bào hình cầu xếp cụm hình que ngắn, hình cầu Trên hình 1a – hình thái khuẩn lạc chủng L1 1b – hình thái tế bào chủng L1 đại diện dạng khuẩn lạc hình thái tế bào chủng phân lập Hình a Hình thái khuẩn lạc chủng L1 Hình b Hình thái tế bào chủng L1 Những khuẩn lạc nghi ngờ vi khuẩn lactic giữ giống ống thạch nghiêng chứa môi trường MRS sau nuôi tủ ấm nhiệt độ 30oC sau 48 giờ, giữ tủ lạnh – 5oC định kỳ cấy chuyển tuần/lần để sử dụng cho nội dung nghiên cứu 3.2 Tuyển chọn chủng vi khuẩn lactic sinh axít lactic cao chịu nhiệt tốt 3.2.1 Đánh giá khả lên men nhiệt độ cao chủng phân lập Như trình bày phần trên, điều kiện lên men quy mô lớn hệ thống lên men gặp nhiều trở ngại chủ yếu nhiệt lượng sinh làm tăng nhiệt độ lên men, gây ức chế vi sinh vật, đặc biệt vi khuẩn lactic nhiệt độ tối ưu cho phát triển sinh sản vi khuẩn lactic thường khơng cao 40oC Do đó, nhà máy sản xuất tốn nhiều chi phí xây dựng hệ thống làm mát, việc mang lại hiệu hạn chế tốn nhiều lượng Nhằm đáp ứng mục tiêu nghiên cứu này, chủng vi khuẩn phân lập khảo sát khả lên men lactic điều kiện nhiệt độ khác nhau, bước đầu sàng lọc chủng có khả chịu nhiệt tốt Kết đánh giá khả lên men nhiệt độ cao chủng phân lập thể bảng http://jst.tnu.edu.vn 270 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(10): 268 - 275 Bảng Kết đánh giá khả chịu nhiệt chủng vi khuẩn lactic Chủng 37 + + + + + + L1 L2 L3 L4 L5 L6 39 + + + + + + 41 + + + + + + Nhiệt độ (oC) 43 45 47 + + + + + − + + + − − − + + − + + + 49 + − + − − − 51 + − − − − − 53 − − − − − − Chú thích: (+): phát triển khuẩn lạc; (−): không phát triển khuẩn lạc Bảng cho thấy tất chủng vi khuẩn phát triển nhiệt độ 37oC đến 41oC Có 5/6 chủng phát triển nhiệt độ 43oC 45oC Theo Jenkins (2005), vi khuẩn chịu nhiệt (Thermophilic) có khả sống 45oC, vi khuẩn lactic ưa nhiệt trung bình (Mesophilic) sống dải nhiệt độ từ 20-45oC [13] Như vậy, L2, L4 L5 xếp vào nhóm vi khuẩn ưa nhiệt trung bình; chủng L1, L3 L6 phát triển 47oC trở lên nên xếp vào nhóm chịu nhiệt tốt (ưa nhiệt) Trong đó, chủng L1 L3 chủng vi khuẩn chịu nhiệt sống phát triển nhiệt độ đến 49oC Riêng chủng L1 chủng có khả chịu nhiệt độ mức 51oC, cao so với chủng lại cao chủng chịu nhiệt công bố Ngô Thị Phương Dung công (2017) [6] 3.2.2 Đánh giá khả sinh axít lactic chủng phân lập Mục tiêu nghiên cứu tuyển chọn chủng vi khuẩn lactic khả sinh acid lactic cao chịu nhiệt tốt Do vậy, chủng vi khuẩn sàng lọc sơ khả lên men chịu nhiệt tiến hành khảo sát khả sinh axít lactic theo thời gian lên men để tuyển chọn chủng tốt cách nuôi cấy chủng qua sàng lọc môi trường lỏng MRS nhiệt độ 47oC Kết xác định khả sinh axít lactic chủng qua sàng lọc sơ thể bảng Bảng Kết đo hàm lượng axít lactic sinh chủng vi khuẩn Chủng vi khuẩn L1 L3 L6 Hàm lượng axít lactic sinh theo thời gian lên men (mg/ml) 24 36 48 0,923a 1,750a 1,560a c c 0,675 1,000 1,070c b b 0,778 1,430 1,440b Ghi chú: Trên cột giá trị mang chữ số mũ khác khơng có ý nghĩa mức α = 0,05 Kết bảng cho thấy chủng vi khuẩn qua sàng lọc có khả sinh axít lactic Sau 48 lên men, L1 chủng có khả sinh axít lactic cao (1,56 mg/ml) L3 chủng có khả sinh axít lactic thấp (1,14 mg/ml) Bên cạnh đó, theo thời gian lên men, hàm lượng acid lactic đo đạt giá trị cao khác với chủng khác Các chủng L1 cho khả sinh axít lactic lớn sau 36 lên men, chủng L3 L6 48 Hàm lượng acid lactic chủng tổng hợp sau 24 thấp nhiều so với xác định 36 lên men, sau 48 có thay đổi nhỏ Nguyên nhân sau 24 giờ, mật độ tế bào vi khuẩn môi trường lên men chưa đạt giá trị tối đa, khoảng thời gian sau 24 -36 nuôi cấy khoảng thời gian mà mật độ tế bào vi khuẩn nằm pha cân bằng, hiệu chuyển hóa đường thành acid lactic cao Và giai đoạn sau 36-48 lên men hệ ni cấy vi khuẩn nằm pha suy vong, hiệu chuyển hóa thành axít lactic thấp Điều phù hợp với ghi nhận Nguyễn Lân Dũng cộng (1972) [13]: “Yếu tố thời gian nuôi cấy có ảnh hưởng đến việc tăng số lượng tế bào vi khuẩn Để http://jst.tnu.edu.vn 271 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(10): 268 - 275 chuyển hoá hết nguồn dinh dưỡng thành acid lactic, vi khuẩn cần phải có khoảng thời gian định” Theo kết trình bày trên, chủng khuẩn lactic L1 tốt nhất, đạt giá trị yêu cầu mục tiêu đề Do đó, chủng L1 chọn cho nghiên cứu 3.2.3 Đánh giá động thái sinh trưởng chủng tuyển chọn 3.2.3.1 Xây dựng đường chuẩn mật độ tế bào vi khuẩn tương quan với độ hấp thụ ánh sáng Sau nuôi cấy tăng sinh dịch huyền phù chứa vi sinh vật pha loãng đo độ hấp thụ quang học (OD) Đồng thời độ pha loãng tiến hành cấy trải môi trường thạch đĩa để xác định số lượng tế bào ứng với độ pha lỗng Kết xây dựng phương trình đường chuẩn mối tương quan giá trị OD mật độ tế bào thể hình Số lượng tế bào dịch (CFU/ml) Giá trị OD 619 0,009 1000 0,014 10358 100082 0,023 0,056 1004501 0,186 10001063 1,984 2,5 y = 2E-07x + 0,0111 R² = 0,9996 Giá trị OD 1,5 0,5 0 5000000 10000000 15000000 Số lượng tế bào dịch CFU/ml Hình Đường chuẩn tương quan giá trị OD mật độ tế bào Kết hình cho thấy, sau 36 ni cấy, mật độ tế bào vi khuẩn đạt khoảng 107 tế bào/ml Đồng thời, phương trình thể mối tương quan độ hấp thụ quang học mật độ tế bào có giá trị hồi quy R2 = 0,9996, đạt yêu cầu (≥0,95) có độ tin cậy cao để tiếp tục tiến hành nghiên cứu xây dựng đường cong tăng sinh chủng L1 3.2.3.2.Xây dựng đường cong sinh trưởng chủng vi khuẩn Một chủng vi sinh vật ni cấy hệ kín phát triển theo giai đoạn (bắt đầu, phát triển, cân động suy vong) [14], [16] Việc xác định động thái sinh trưởng chủng vi khuẩn có vai trị quan trọng góp phần xác định thời gian kết thúc giai đoạn tăng sinh để bước vào giai đoạn sản xuất Do vậy, xây dựng động thái sinh trưởng chủng L1 để có thơng tin hữu ích bổ sung vào sở liệu chủng hướng đến ứng dụng sản xuất Kết nghiên cứu động thái sinh trưởng chủng L1 thể bảng Bảng Động thái sinh trưởng chủng L1 http://jst.tnu.edu.vn Mật độ tế bào 13500 603500 2378500 6143500 7443500 7998500 8568500 9373500 9658500 9753500 10168500 9798500 9713500 Đường cong sinh trưởng 12000000 Mật độ (tế bào/ml) Thời gian nuôi cấy 12 15 18 21 24 27 30 33 36 10000000 8000000 6000000 4000000 2000000 0 272 10 20 30 Thời gian nuôi (giờ) 40 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(10): 268 - 275 Kết thí nghiệm thể bảng cho thấy mật độ tế bào chủng L1 tăng theo thời gian nuôi cấy Mật độ tế bào vi sinh vật phát triển mạnh khoảng – 24 tiệm cận pha cân động khoảng 27 - 33 nuôi, đáng ý thời điểm 30 giờ, mật độ tế bào đạt giá trị lớn khoảng 107, sau mật độ tế bào có khuynh hướng giảm Căn vào đồ thị trên, thấy rõ động thái sinh trưởng chủng L1 chia giai đoạn đường cong sinh trưởng theo thời gian sau: Giai đoạn (0-3) giờ, giai đoạn phát triển từ (3-24) giờ, giai đoạn cân động từ sau (24 – 33) giờ, giai đoạn suy vọng sau 33 nuôi cấy 3.3 Định danh đến loài chủng vi khuẩn tuyển chọn 3.3.1 Kết tách DNA tổng số Điều quan tâm hàng đầu kỹ thuật tách chiết acid nucleic thu nhận phân tử trạng thái nguyên vẹn không bị phân hủy tác nhân học bị đứt gãy, điều kiện định cho thành cơng q trình nghiên cứu Kết tách chiết DNA tổng số chủng vi khuẩn lactic thể hình Hình Kết tách chiết DNA tổng số mẫu vi khuẩn lactic L1 Từ kết cho thấy mẫu DNA tổng số thu có chất lượng tương đối tốt: DNA bị đứt gãy, band sáng Tuy nhiên, độ tinh DNA thấp, nhiều sản phẩm phụ 3.3.2 Kết PCR PCR trình nhân đoạn DNA lặp lặp lại Sức mạnh PCR khả nhân trình tự DNA xác định từ số lượng nhỏ ban đầu lên số lượng lớn thời gian ngắn Sản phẩm phản ứng PCR nguyên liệu cho trình giải trình tự gen định danh nên cần đảm bảo tinh sạch, không lẫn sản phẩm phụ, kích thước tương đồng với trình tự gen dự kiến Kết PCR đoạn gen 16S rDNA chủng L1 thể qua hình Hình Kết điện di sản phẩm PCR với trình tự gen 16S rRNA Hình Kết điện di sản phẩm PCR sau tinh Từ kết cho thấy gen 16S rDNA dùng việc định danh khuếch đại thành công Sản phẩm PCR cho băng nhất, không xuất sản phẩm phụ Đối chiếu với http://jst.tnu.edu.vn 273 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(10): 268 - 275 DNA chuẩn, sản phẩm khuếch đại có kích thước dự kiến: khoảng 1600bp Như vậy, sản phẩm PCR đủ điều kiện để giải trình tự 3.3.3 Kết giải trình tự Chuỗi trình tự nucleotide chủng L1 giải trình tự vùng gen 16S rRNA đạt 1441 nucleotide ATGCAAGTCGAACGAACTCTGGTATTGATTGGTGCTTGCATCATGATTTACATTTGAG TGAGTGGCGAACTGGTGAGTAACACGTGGGAAACCTGCCCAGAAGCGGGGGATAAC ACCTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAACAACTTGGACCGCATGGTCCGAGTTTGA AAGATGGCTTCGGCTATCACTTTTGGATGGTCCCGCGGCGTATTAGCTAGATGGTGG GGTAACGGCTCACCATGGCAATGATACGTAGCCGACCTGAGAGGGTAATCGGCCAC ATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCC ACAATGGACGAAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCT CGTAAAACTCTGTTGTTAAAGAAGAACATATCTGAGAGTAACTGTTCAGGTATTGAC GGTATTTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTA GGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTTTTAA GTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGAAGAAGTGCATCGGAAACTGGGAAACTT GAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAT GGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCG AAAGTATGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATACCGTAAACGATG AATGCTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCAT TCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCG CACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCTACGCGAAGAACCTTACCAGGTC TTGACATACTATGCAAATCTAAGAGATTAGACGTTCCCTTCGGGGACATGGATACAG GTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACG AGCGCAACCCTTATTATCAGTTGCCAGCATTAAGTTGGGCACTCTGGTGAGACTGCC GGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACC TGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAACGAGTTGCGAACTCGCGAGAGTA AGCTAATCTCTTAAAGCCATTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGA AGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCC TTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCAAAGTCGGTGGGGTA ACCTTTTAGGAACCAGCCGCCTAAG Trình tự so sánh với liệu công bố Eztaxon, kết so sánh thể hình Hình Kết so sánh trình tự gen chủng L1 với liệu Eztaxon http://jst.tnu.edu.vn 274 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(10): 268 - 275 Kết so sánh cho thấy, đoạn gen 16S rRNA chủng vi khuẩn L1 có độ tương đồng 100% với chủng Lactiplantibacillus pentosus Từ kết cho thấy, thị phân loại vùng gene 16S rDNA có tính bảo thủ cao, chứng tỏ vùng gen bảo thủ chủng Lactiplantibacillus pentosus biển đổi Điều biểu qua khả lên men môi trường khắc nghiệt thể đặc tính chịu nhiệt, chịu acid cao chủng Kết luận Từ 16 mẫu nước lên men chua tự nhiên phân lập chủng vi khuẩn lactic, chủng có khả lên men nhiệt độ từ 47oC Tuyển chọn chủng L1 có khả lên men từ 47-51oC, khảo sát lên men 47oC hàm lượng axít lactic thu 1,75 mg/ml, đường cong sinh trưởng chủng chia thành pha: Pha bắt đầu (0-3) giờ, pha sinh trưởng [3-27) giờ, pha cân từ [27-33] giờ, pha suy vong sau 33 nuôi Đã giải trình tự 16SrRNA so sánh trình tự Eztaxon, mức độ tương đồng với chủng Lactiplantibacillus pentosus TÀI LIỆU THAM KHẢO/ REFERENCES [1] S P Chahal, Lactic acid Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry Widnes: Croda Colloids Ltd, 2000 [2] J D De Man, M Rogosa, and M E Sharpe, “A Medium for the Cultivation of Lactobacilli,” The Journal of Applied Bacteriology, vol 23, pp 130-135, 1960 [3] J J Doyle and J L Doyle, “Isolation of plant DNA from fresh tissue,” Focus, vol 12, p 13, 1990 [4] J C Jenkins, The Humanure Handbook: A guide to Composting Human Manure Inc.; 3rd edition, 2005 [5] A Lars and A Siv, Lactic acid bacteria Applied Microbial Systermatics, Springer, Dordrecht, pp 367388, 2000 [6] T P D Ngo, H D L Bui, N P T Hoang, N T Nguyen, and X P Huynh, "Selection of heat-resistant lactic acid bacteria and their application in lactic acid production," Journal of Science and Technology - Vietnamese technology, vol 14, no 3B, pp 58-64, 2017 [7] T T N.Truong, T M T Le, N H Tran, T M T.Nguyen, H A Mai, N T Nguyen, H D L Bui, X P Huynh, “Isolation and selection of lactic acid bacteria and their application in the fermentation of fermented rice straw mushroom (Volvariella volvacea),” TNU Journal of Science and Technology, vol 225, no 01, pp 3-10, 2020 [8] H D L Bui, X P Huynh, N T Nguyen, and T P D Ngo, “Isolation and selection of heat-resistant lactic acid bacteria from agricultural by-products,” Science Journal of Dong Thap University, no 31 pp 91-97, 2018 [9] L T Tran, Microbiological analysis in water, food and cosmetics Education publisher, 2007 [10] V K Tran, Selection of suitable lactic acid bacteria strains for high quality probiotics University of Natural Sciences, Vietnam National University, Ho Chi Minh City, 2007 [11] T L Dao, T A D Nguyen, T K Q Nguyen, T L Q Tran, and V H Duong, “Isolation and selection of lactic acid bacteria used in the processing and preservation of forage and agricultural byproducts for ruminants,” Genetics and Applications – Journal of Biotechnology, no 6, pp 1-6, 2010 [12] V C Duong and H T Nguyen, Textbook of principles of genetic engineering Hanoi Agricultural Publishing House, 2017 [13] L D Nguyen, X L Doan, P T Nguyen, and V T Pham, Some research methods of microbiology, volume Hanoi Science and Technology Publishing House, 1972 [14] D L Nguyen, Microbiological technology, volume – Industrial Microbiology, National University Press, Ho Chi Minh City, Ho Chi Minh, 2014 [15] N T T Le and M N Pham, “Isolation and investigation of factors affecting the ability to produce antibacterial compounds of Lactobacillus plantarum,” Biology Journal, vol 36, no 1, pp 97-106, 2014 [16] T P D Ngo, T Y L Huynh, and X P Huynh, "Isolation and selection of lactic acid bacteria capable of producing antibacterial substances," Journal of Science - Can Tho University, vol 19a, pp 176184, 2011 http://jst.tnu.edu.vn 275 Email: jst@tnu.edu.vn ... khả lên men môi trường khắc nghiệt thể đặc tính chịu nhiệt, chịu acid cao chủng Kết luận Từ 16 mẫu nước lên men chua tự nhiên phân lập chủng vi khuẩn lactic, chủng có khả lên men nhiệt độ từ 47oC... 3.2 Tuyển chọn chủng vi khuẩn lactic sinh axít lactic cao chịu nhiệt tốt 3.2.1 Đánh giá khả lên men nhiệt độ cao chủng phân lập Như trình bày phần trên, điều kiện lên men quy mô lớn hệ thống lên. .. nhiên, đến số lượng nghiên cứu chủng vi khuẩn lactic chịu nhiệt độ cao hạn chế Do vậy, vi? ??c tuyển chọn chủng vi khuẩn lactic chịu nhiệt có tiềm lớn lên men sản xuất axít lactic quy mơ công nghiệp