Đang tải... (xem toàn văn)
Trong số hàng trăm loại cây thuộc họ Amaryllidaceae, cụ thể hơn là chi Crinum L, thì ở Việt Nam, chi này có 8 loài. Trong đó, Náng hoa trắng tên khoa học là: Crinum asiaticum L. Họ Thủy Tiên (Amaryllidaceae) đã được sử dụng nhiều trong y học. Cây Náng (hoa trắng) có có nguồn gốc từ vùng nhiệt đới Châu Á. Cây phân bố rải rác từ vùng Ấn Độ, Malaysia, Thái Lan, Campuchia, Lào, Việt Nam,.. Ở Việt Nam, cây mọc phổ biến từ Bắc vào Nam. Cây dễ trồng, dùng làm cảnh và sử dụng lá Náng tươi cho một số trường hợp như bong gân, sai gân, bầm tím, sưng tấy khi ngã. Hoặc dùng xoa bóp khi bị tê thấp, nhức mỏi. Bên cạnh đó, Náng hoa trắng còn sử dụng trong các bài thuốc cho bệnh nhân phì đại tuyến tiền liệt làm giảm kích thước khối phì đại, lợi niệu, giải quyết triệt để các triệu chứng tiểu đêm, tiểu buốt, tiểu không hết, tiểu nhiều lần… Tuy nhiên, trong quá trình sử dụng có sự nhầm lẫn giữa cây Náng hoa trắng và Trinh nữ hoàng cung. Trong thực tế, ta sẽ thấy sự khác biệt ở lá của Náng hoa trắng sẽ to dày và màu xanh đậm hơn lá của cây Trinh nữ hoàng cung. Hơn thế nữa, củ Trinh nữ hoàng cung màu trắng, hình cầu tròn còn củ Náng hoa trắng hình bầu dục có màu hơi đỏ nhạt. Thêm vào đó, cây Náng hoa trắng cũng dễ nhằm lẫn với Náng hoa đỏ, do chúng giống nhau về hình thái. Nhưng chỉ khác nhau mỗi màu hoa, cánh hoa của Náng hoa đỏ có màu ửng hồng hay tím còn hoa Náng hoa trắng có màu trắng sữa, có mùi thơm về chiều. Nhưng ở nước ta vẫn còn khá ít nghiên cứu về loài cây này, vì vậy nghiên cứu về cây Náng hoa trắng đang được trồng ở Việt Nam là một điều hết sức cần thiết để phân biệt, tránh nhầm lẫn và sử dụng dược liệu hiệu quả hơn. Bài viết này trình bày một số kết quả bước đầu phân tích sơ bộ thành phần hóa học, các đặc điểm hình thái, vi phẫu, và bột dược liệu, định tính,.. của cây Náng hoa trắngMục đích: Đề xuất xây dựng tiêu chuẩn dược liệu lá cây Náng hoa trắng Mục tiêu: Quan sát vi học để đề xuất đặc điểm nhận diện dược liệu lá cây Náng hoa trắng. Phân tích sơ bộ thành phần hóa thực vật, đối chiếu với kết quả đã công bố. Ứng dụng kỹ thuật sắc ký lớp mỏng trong nghiên cứu hóa thực vật để phân lập và xác định được hoạt chất tinh khiết từ dịch chiết của dược liệu lá cây Náng hoa trắng.
GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá 1 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá 2 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá 3 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá LỜI CÁM ƠN Trong suốt trình nghiên cứu đề tài “Xây dựng tiêu chuẩn cở sở dược liệu Náng (hoa trắng)" Với nỗi lực nhóm vận dụng kiến thức học vào thực tiễn Cộng với học hỏi, tìm tịi thu thập thơng tin có liên quan đến đề tài, em nhận giúp đỡ cô, anh chị mơn bạn nhóm Đầu tiền, em xin chân thành cám ơn cô Ths Thái Thị Cẩm - Khoa: Dược - Trường: Đại học Nam Cần Thơ dẫn dắt dạy nhiệt tình cách để em hoàn thành nghiên cứu Em xin gửi lời cám ơn đến cô Nguyễn Thị Linh Em phụ trách dạy thực hành nghiên cứu dược liệu anh, chị phịng mơn, bạn bè, nhiệt tình giúp đỡ, đóng góp ý kiến để em hồn thành tốt báo cáo Sáu tuần thực hành ngắn ngủi hội cho em tổng hợp hệ thống hóa lại kiến thức học, đồng thời kết hợp với thực tế để nâng cao kiến thức chuyên môn Tuy vỏn vẹn tuần qua trình thực hành, em mở rộng tầm nhìn tiếp thu nhiều kiến thức thực tế Từ em nhận thấy, việc cọ sát thực tế vô quan trọng – giúp sinh viên xây dựng tảng lý thuyết học trường vững Bước đầu vào thực tế em nhiều hạn chế cịn bỡ ngỡ nên khơng tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng 4 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá góp quý báu quý Thầy, Cô để kiến thức em báo cáo hoàn thiện hơn, đồng thời có điều kiện bổ sung, nâng cao ý thức Em xin bày tỏ lịng biết ơn với lòng trân trọng nhất! Cần Thơ, ngày… tháng… năm… Sinh viên ĐẶT VẤN ĐỀ Trong số hàng trăm loại thuộc họ Amaryllidaceae, cụ thể chi Crinum L, Việt Nam, chi có lồi Trong đó, Náng hoa trắng tên khoa học là: Crinum asiaticum L Họ Thủy Tiên (Amaryllidaceae) sử dụng nhiều y học Cây Náng (hoa trắng) có có nguồn gốc từ vùng nhiệt đới Châu Á Cây phân bố rải rác từ vùng Ấn Độ, Malaysia, Thái Lan, Campuchia, Lào, Việt Nam, Ở Việt Nam, mọc phổ biến từ Bắc vào Nam Cây dễ trồng, dùng làm cảnh sử dụng Náng tươi cho số trường hợp bong gân, sai gân, bầm tím, sưng tấy ngã Hoặc dùng xoa bóp bị tê thấp, nhức mỏi Bên cạnh đó, Náng hoa trắng cịn sử dụng thuốc cho bệnh nhân phì đại tuyến tiền liệt làm giảm kích thước khối phì đại, lợi niệu, giải triệt để triệu chứng tiểu đêm, tiểu buốt, tiểu không hết, tiểu nhiều lần… Tuy nhiên, q trình sử dụng có nhầm lẫn Náng hoa trắng Trinh nữ hoàng cung Trong thực tế, ta thấy khác biệt Náng hoa trắng to dày màu xanh đậm Trinh nữ hoàng cung Hơn nữa, củ Trinh nữ hoàng cung màu trắng, hình cầu trịn cịn củ Náng hoa trắng hình bầu dục có màu đỏ nhạt Thêm vào đó, Náng hoa trắng 5 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá dễ nhằm lẫn với Náng hoa đỏ, chúng giống hình thái Nhưng khác màu hoa, cánh hoa Náng hoa đỏ có màu ửng hồng hay tím cịn hoa Náng hoa trắng có màu trắng sữa, có mùi thơm chiều Nhưng nước ta cịn nghiên cứu lồi này, nghiên cứu Náng hoa trắng trồng Việt Nam điều cần thiết để phân biệt, tránh nhầm lẫn sử dụng dược liệu hiệu Bài viết trình bày số kết bước đầu phân tích sơ thành phần hóa học, đặc điểm hình thái, vi phẫu, bột dược liệu, định tính, Náng hoa trắng - tiểu nhóm em thu địa điểm: Kiên Giang (201 ấp Đông Phước - Thạnh Đông A, Huyện Tân Hiệp, Tỉnh Kiên Giang) Thiền viện Trúc Lâm Phương Nam (ấp Mỹ Nhơn, xã Mỹ Khánh, huyện Phong Điền, thành phố Cần Thơ) Mục đích: - Đề xuất xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Náng hoa trắng Mục tiêu: - Quan sát vi học để đề xuất đặc điểm nhận diện dược liệu Náng hoa trắng - Phân tích sơ thành phần hóa thực vật, đối chiếu với kết công bố - Ứng dụng kỹ thuật sắc ký lớp mỏng nghiên cứu hóa thực vật để phân lập xác định hoạt chất tinh khiết từ dịch chiết dược liệu Náng hoa trắng 6 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá MỤC LỤC LỜI CÁM ƠN I ĐẶT VẤN ĐỀ II CHƯƠNG I: TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU DƯỢC LIỆU 1 TỔNG QUAN VỀ THỰC VẬT HỌC 1.1 Định danh 1.2 Phân loại thực vật 1.3 Nguồn gốc phân bố sinh thái 1.4 Mô tả thực vật 7 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá 1.5 Bộ phận dùng: 1.6 Sinh thái, trồng trọt thu hoạch 1.7 Phân biệt Náng hoa trắng Trinh nữ hoàng cung TỔNG QUAN VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC LIỀU DÙNG 11 TÁC DỤNG DƯỢC LÝ 11 TÍNH VỊ, QUI KINH - CƠNG DỤNG 11 KINH NGHIỆM NHÂN GIAN 12 6.1 Chữa sai khớp xương, bong gân (Hải Thượng Lãn Ông): 12 6.2 Chữa tụ máu, sưng tấy bị ngã hay bị đánh, bong gân, bó gãy xương 12 6.3 Chữa thấp khớp, sai gân, bong gân, tụ máu: 12 6.4 Gân nơn, làm tốt mồ hôi, làm long đờm, dùng hành ép lấy nước, pha loãng uống 13 6.5 Điều trị phì đại tiền liệt tuyến 13 6.6 Điều trị bệnh trĩ ngoại 13 CHẾ PHẨM CÓ CHỨA CÂY NÁNG HOA TRẮNG TRÊN THỊ TRƯỜNG 13 7.1 Thực phẩm bảo vệ sức khỏe Náng hoa trắng Plus 13 7.2 Thực phẩm bảo vệ sức khỏe viên uống An Niệu Đêm 14 8 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá 7.3 Thực phẩm bảo vệ sức khỏe LASOTA 15 7.4 Thực phẩm bảo vệ sức khỏe Vương Bảo 16 CHƯƠNG II: TỔNG QUAN TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 NGUYÊN VẬT LIỆU 17 1.1 Đối tượng nghiên cứu 17 1.2 Hóa chất: 17 1.3 Máy móc thiết bị nghiên cứu 17 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Nghiên cứu thực vật 18 2.2.Nghiên cứu thành phần hóa học 18 2.3 Nghiên cứu đặc điểm thực vật 18 2.4 Kiểm nghiệm phương pháp vi học 18 2.1.1 Chọn mẫu 19 2.1.2 Nhuộm vi phẫu: 19 2.1.3 Cách tiến hành 20 PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN HÓA HỌC 9 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá 22 3.1 Xác định nhóm hợp chất dịch chiết phản ứng đặc trưng 22 3.2 Xác định nhóm hợp chất dịch chiết ether 23 3.3 Xác định nhóm hợp chất dịch chiết cồn 24 3.4 Xác định nhóm hợp chất dịch chiết nước 25 ĐỊNH TÍNH XÁC ĐỊNH CÁC NHÓM HỢP CHẤT 26 ĐỊNH TÍNH BẰNG SẮC KÝ LỚP MỎNG (TLC) 27 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 28 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT 28 1.1 Đặc điểm hình thái 28 1.2 Đặc điểm vi phẩu 29 1.2.1 Đặc điểm vi phẩu Náng hoa trắng 31 1.2.2 Đặc điểm vi phẫu thân Náng hoa trắng (tham khảo) 33 1.2.3 Đặc điểm vi phẩu rễ Náng hoa trắng 35 1.3 Bóc tách biểu bì 37 1.4 Đặc điểm bột dược liệu 38 1.5 Soi bột dược liệu 39 1.5.1 Soi bột 39 1.5.2 Soi bột thân 40 10 10 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá Soi UV 254 nm Soi UV 365 nm Nhúng thuốc thử V-S Hình 3.58 Kết sắc ký lớp mỏng Nhận xét: vết tách tốt tương đối cân bảng mỏng soi đèn UV 365 nm UV 254 nm Đối với thuốc thử VS, ta thấy vết, tương ứng với vị trí Rf bên (Hình 3.59.) 96 96 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá R Vết f Rf = 0.8625 cm Rf = 0.7375 cm Rf = 0.6625 cm Rf = 0.4625 cm Rf = 0.25 cm Rf = 0.125 cm = Quãng đườ ng vết di chuyển Quãng đườ ng pha độ ng di chyển Hình 3.59 Bản mỏng nhúng với thuốc thử VS Quãng đường pha động di chuyển 97 97 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá Chiều cm cao vết ( cm ) cm Rf 0,25 0,125 3,7 cm 5,3cm 5,9 cm 6,9 cm cm 0,4625 0,6625 0,7375 0,8625 CHƯƠNG IV: XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN DƯỢC LIỆU LÁ CÂY NÁNG (HOA TRẮNG) TÊN GỌI - Tên thông thường: Náng hoa trắng - Tên gọi khác: tỏi voi, chuối nước, náng, đại tướng quân, văn châu lan, luột lài, cáp gụn (Tày), co lạc quận (Thái), Náng sumatra,… - Tên khoa học: Crinum asiaticum L BỘ PHẬN DÙNG Bộ phận dùng: Lá - Folium Crini asiatici Lá dùng tươi hay phơi khô sấy 50 °C đến 60 °C Náng hoa trắng (Crinum asiaticum L.), họ Thủy tiên (Amaryllidaceae) MÔ TẢ Lá: Lá đơn, mọc cách, tập trung gốc thành hình hoa thị Cây khơng có cuống lá mọc thẳng từ thân hành, nhiều, hình dải giáo, lõm, có khía trên, phiến dày, dài tới 1m, rộng 5-10cm, gốc nở rộng thành bẹ thuôn nhọn phía đầu lá, mép nguyên uốn lượn, gân song song, gân lồi mặt dưới, mặt lõm xuống thành hình lịng máng, hai mặt màu xanh lục đậm, mặt nhẵn bóng Tuy nhiên mặt sậm màu mặt 98 98 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá BỘT Bột lá: có màu trắng xanh, khơng mùi, khơng vị Soi kính hiển vi thấy: - Mảnh biểu bì tế bào hình chữ nhật mang lỗ khí - Rất nhiều tinh thể calci oxalat hình kim, hai đầu nhọn, dài khoảng 100 µm đến 110 µm, đường kính khoảng µm đến µm, đơn lẻ tụ lại thành bó - Nhiều mảnh mạch xoắn, mạch vịng Cuộn sợi nhiều, thường bung thành sợi xoắn dài - Mảnh mô mềm tế bào vách mỏng uốn lượn ĐỊNH TÍNH Định tính: dùng khơ màu nâu nhạt vàng nhạt, mỏng, nhẹ, phần dày, mép mỏng, có nhiều đường gân song song với sống Tại chỗ rách có nhiều sợi tơ màu trắng Lá ngun thn hình mác, dài khoảng 70 cm đến 120 cm, có dài hơn, rộng khoảng cm đến 10 cm 99 99 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá Hình 4.1 Lá khơ Náng hoa trắng chuẩn bị cho phần định tính Định tính theo Dược điển Việt Nam V – tập - trang 1258 chia làm phần: A B A Định tính alkaloid : Lấy g bột dược liệu Thêm ml amoniac (TT), trộn cho thấm Thêm 20 ml cloroform (TT), lắc 30 phút, để yên h Lọc vào bình gạn Thêm 10 ml dung dịch acid sulfuric 10 % (TT), lắc kỹ, để yên cho dung dịch phân thành lớp Gạn lấy phần dịch acid phía chia vào ống nghiệm để làm phản ứng sau: - Ống 1: Nhỏ giọt thuốc thử Mayer (TT), xuất tủa trắng - Ống 2: Nhỏ giọt thuốc thử Dragendorff (TT), xuất tủa vàng cam - Ống 3: Nhỏ giọt thuốc thử Bouchardat (TT), xuất tủa nâu B Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) Bản mỏng: Silica gel 60F 254 Dung môi triển khai: Cloroform - methanol - amoniac (70:10:1) Dung dịch thử: Lấy g dược liệu cắt nhỏ Thêm 10 ml ethanol (TT), chiết siêu âm 20 phút, gạn, lọc Lấy dịch lọc làm dung dịch chấm sắc ký Dung dịch dược liệu đối chiếu: Lấy khoảng g bột Náng hoa trắng (mẫu chuẩn), chiết mô tả phần dung dịch thử Dung dịch chất đối chiếu: Hoà tan lycorin chuẩn ethanol (TT) để dung dịch có nồng độ 0,25 mg/ml 100 100 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng 10 µl dung dịch Sau triển khai sắc ký, lấy mỏng ra, để khơ nhiệt độ phịng Quan sát ánh sáng tử ngoại bước sóng 365 nm phun thuốc thử Dragendorff (TT) phun tiếp dung dịch acid sulfuric 10 % (TT) Trên sắc ký đồ dung dịch thử phải có vết màu sắc giá trị R f với vết sắc ký đồ dung dịch dược liệu đối chiếu có vết màu sắc giá trị Rf với lycorin sắc ký đồ dung dịch chất đối chiếu Định tính theo sách Phương pháp nghiên cứu dược liệu – lưu hành nội – Trường Đại học Nam Cần Thơ – xác định nhóm hợp chất loại dịch chiết: dịch chiết ether, dịch chiết cồn, dịch chiết nước - Alkaloid: Lấy khoảng 10ml dịch nước cho vào bình lắng gạn 50ml, kiểm hóa dịch chiết tới pH 10 dung dịch NH 4OH 10% chiết ether ethylic chloroform (10ml x lần) Gộp chung rửa lớp dung môi hữu với 10ml nước cất Lắc lớp ether với dung dịch acid hydrocloric 5% (2ml x lần) Chia dung dịch acid vào ống nghiệm nhỏ Định tính alkaloid thuốc thử: Mayer, Dragendorff Bouchardat Ống 1: Thuốc thử Valse – Mayer: tủa trắng – vàng nhạt Ống 2: Thuốc thử Dragendorff: tủa đỏ cam Ống 3: Thuốc thử Bouchardat: tủa đỏ nâu So sánh với ống chứng khơng có thuốc thử Nếu dung dịch đục có tủa: có alkaloid - Coumarin: Bốc dịch chiết đến cắn, hòa tan cắn cồn 70% chia vào ống nghiệm Thêm vào ống 0,5ml KOH 10%, ống 4ml nước cất đun cách thủy ống - phút Bổ sung nước cất vào ống cho ống 101 101 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá Nếu dịch ống ống → có coumarin - Định tính Carotenoid Lấy khoảng 5ml dịch ether cho vào chén sứ, bốc nhẹ đến cắn (và gần khơng cịn mùi thơm dịch chiết có tinh dầu) Thêm vào cắn vài giọt dung dịch SbCl3 (khan) bão hòa chloroform, thực hai phản ứng: Phản ứng với thuốc thử Carr – Price cho màu xanh chuyển sang màu đỏ Phản ứng với acid sulfuric đặc cho màu xanh dương đậm hay màu xanh lục sau chuyển sang màu xanh dương - Định tính triterpenoid Lấy khoảng 5ml dịch chiết ether cho vào chén sứ, bốc tới cắn Hòa tan cắn với 0,5ml anhydrid acetic thêm vào dung dịch 0,5ml chloroform Chuyển dung dịch vào ống nghiệm nhỏ, khô Dùng pipet Pasteur thêm cẩn thận 12ml H2SO4 đđ lên thành ống nghiệm để nghiêng cho acid chảy xuống đáy ống nghiệm Nơi tiếp xúc lớp dung dịch có màu đỏ nâu hay đỏ đến tím, lớp dung dịch phía chuyển thành màu xanh lục hay tím - Định tính alkaloid Lấy khoảng 5ml dịch cồn cho vào chén sứ, bốc tới cắn Hòa cắn 24ml dung dịch acid hydroclorid 5% Chia dung dịch acid vào ống nghiệm nhỏ Nhỏ vào ống nghiệm thứ thuốc thử Mayer, ống nghiệm thứ hai thuốc thử Bouchardat, dung dịch hai ông nghiệm bị đục có tủa 102 102 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá - Định tính tannin Lấy 2ml dịch chiết cho vào chén sứ, bốc tới cắn Hòa tan cắn với 4ml nước bếp cách thủy Lọc, chia dịch chiết vào hai ống nghiệm Ống nghiệm 1: Pha loãng 0,5ml dịch chiết với 1ml nước cất Thêm 2-3 giọt thuốc thử FeCl3 5% lắc đều, dung dịch có màu xanh đen hay xanh rêu Ống nghiệm thứ 2: Thêm vào dịch lọc giọt dung dịch gelatin muối, lắc đều, có tủa bơng trắng - Định tính Flavonoid Lấy 5ml dịch chiết cho vào chén sứ, bóc tới cắn hòa tan cắn 2ml cồn 25%, lọc vào ống nghiệm nhỏ → thêm vào bột magnesi 0,5ml HCl đậm đặc → dung dịch có màu từ hồng tới đỏ → có flavonoid - Định tính acid hữu Lấy 2ml dịch chiết cho vào ống nghiệm Pha loãng với 1ml nước thêm vào dung dịch tinh thể natri carbonat Có bọt khí nhỏ sủi lên từ tinh thể Na2CO3 - Polyuronid: nhỏ giọt khoảng ml dịch chiết nước vào ống nghiệm chứa 10ml cồn 95% hay aceton Nếu có tủa bơng trắng → có polyuronid (Xem kỹ chương III Kết nghiên cứu - phần Phân tích thành phần hóa học báo cáo này) ĐỊNH LƯỢNG (Theo Dược điển Việt Nam V – tập - trang 1258) Phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) 103 103 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá Pha động A: Acetonitril (TT), Pha động B: Dung dịch đệm kali dihydrophosphat 0,02 M - triethylamin (100 : 0,3) điều chỉnh tới pH acid phosphoric (TT) Dung dịch chuẩn: Hòa tan lycorin chuẩn dung dịch acid hydrocloric 0,1 M (TT) để dung dịch có nồng độ xác khoảng 0,15 mg/ml Dung dịch thử: Cân xác khoảng g bột dược liệu (qua rây số 250) cho vào bình nón nút mài dung tích 100 ml, làm ẩm ml amoniac (TT), đậy kín, để yên 15 phút Thêm 50 ml ethanol (TT), lắc siêu âm 30 phút, để nguội, gạn lấy dịch chiết Bã chiết lần nữa, lần với 30 ml ethanol (TT) Gộp dịch chiết, cô cách thủy đến cạn Dùng dung dịch acid hydrocloric 0,1 M (TT) để hịa tan chuyển tồn cắn vào binh định mức 25 ml, thêm dung dịch acid hydrocloric 0,1 M (TT) đến vạch, lắc đều, lọc qua giấy lọc thường lọc tiếp qua màng lọc 0,45 µm Điều kiện sắc ký: Cột: kích thước (25 cm x 4,6 mm) nhồi pha tĩnh C (5 µm) Detector quang phổ tử ngoại: đặt bước sóng 290 nm Tốc độ dòng: ml/phút, điều chỉnh cần thiết Thể tích tiêm: 10 µl Cách tiến hành: Tiến hành sắc ký theo chương trình dung mơi sau: Thời gian Pha động A Pha động B (phút) (%tt/tt) (%tt/tt) 104 104 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá – 10 10 90 10 - 11 10 → 40 90 → 60 11 - 21 40 60 21 - 22 40 → 10 60 → 90 22 – 30 10 90 Bảng 4.1 Định lượng sắc ký lỏng theo chương trình dung mơi Tiêm lần dung dịch chuẩn vào hệ thống sắc ký, tiến hành sắc ký theo điều kiện nêu trên, ghi sắc ký đồ Độ lệch chuẩn tương đối tính theo diện tích pic lycorin không 2,0 % Tiêm riêng biệt dung dịch chuẩn, dung dịch thử, Căn vào diện tích pic thu từ dung dịch thử, dung dịch chuẩn hàm lượng C 16H17NO4 ,trong lycorin chuẩn, tính hàm lượng lycorin (C16H17NO4.) dược liệu Dược liệu phải chứa 0,4 % lycorin (C 16H17NO4) tính theo dược liệu khô kiệt CHẾ BIẾN Thu hái bánh tẻ, loại bỏ vàng úa, cắt thành đoạn dài từ cm đến cm, phơi râm sấy 40 °C đến 50 °C đến khô BẢO QUẢN - Đối với tươi: Cần sử dụng sau chế biến, không dùng hết bảo quản ngăn lạnh tủ lạnh - Đối với khô: Cần bảo quản hộp bọc kín, đậy kín bao bì sau lần dùng để sử dụng nhiều lần, tránh để ẩm móc 105 105 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá ĐỘ ẨM Không 12,0 % (Phụ lục 9.6, g, 105 °C, h) 10 TRO TOÀN PHẦN Không 12,0 % (Phụ lục 9.8) Dùng g dược liệu 11.TẠP CHẤT Không 1% (Phụ lục 12.11) 12 CÔNG NĂNG, CHỦ TRỊ Náng hoa trắng dùng để trị vết tụ máu sang chấn, gây đau đớn, sai gân, bong gân té ngã, khớp xương sưng đau, xoa bóp bị tê thấp, nhức mỏi chân tay, nhục Các nghiên cứu gần cho thấy náng hoa trắng có tác dụng làm giảm kích thước khối phì đại tiền liệt tuyến 13 CÁCH DÙNG, LIỀU LƯỢNG Dùng ngoài: Hơ tươi vừa đủ nóng, bóp nhẹ vào nơi bị bệnh Cũng thái nhỏ, xào nóng để bỏ vào nơi đau Lượng thích hợp, tùy thuộc vào tình trạng bệnh đối tượng sử dụng CHƯƠNG V: NHẬN XÉT VỀ DƯỢC LIỆU LÁ CÂY NÁNG (HOA TRẮNG) Trên tiêu chuẩn xây dựng cho Náng hoa trắng Dựa thực nghiệm thực phòng thực hành Phương pháp nghiên cứu Dược 106 106 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá Liệu – Bộ Môn Dược Liệu – Khoa Dược – Trường Đại học Nam Cần Thơ ✓ Phần vi phẫu, vi phẫu thân Náng hoa trắng, thân to thân hành (củ) nên dùng kỹ thuật cắt vi phẩu dao lam bình thường Trong q trình thao tác, khơng đủ thời gian dụng cụ hỗ trợ (dao chuyên dụng, ) nên báo cáo chưa thể hoàn thành việc cắt – nhuộm vi phẩu thân NHT ✓ Phần soi bột tìm thấy biểu bì mang lỗ khí kiểu mầm, hạt tinh bột, mô mềm, mạch (vòng, xoắn) tinh thể calci oxalat hình kim Theo thực nghiệm làm, em xin đề xuất tiêu chuẩn Náng hoa trắng đặc điểm sau: ✓ Về mô tả thực vật: tiêu chuẩn đưa đặc điểm thực vật đặc trưng Náng hoa trắng, ngồi cịn bổ sung thêm đặc điểm dựa quy định chung tiêu chuẩn dược liệu có Dược Điển Việt Nam V góp phần nhận dạng chống nhầm lẫn Náng hoa trắng thu mua sử dụng ✓ Về soi bột: cấu tử đặc trưng Náng hoa trắng nêu rõ, phương pháp đơn giản, dễ làm, cấu tử tìm bước đầu góp phần đánh giá chất lượng mẫu bột dược liệu khô, chống nhầm lẫn giả mạo ✓ Về vi phẫu: so với tài liệu đưa thêm tiêu chuẩn vi phẫu lá, rễ đặc điểm đặc trưng dễ nhận biết góp phần phong phú thêm tiêu chuẩn kiểm nghiệm dược liệu Náng hoa trắng sau ✓ Về định tính sơ thành phần hóa học: sử dụng dịch chiết từ khô Náng hoa trắng để định tính sơ thành phần hóa học 107 107 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá ✓ Về định tính sắc ký lớp mỏng: sau tiến hành thực nghiệm, so với hệ dung mơi nhóm tìm kiếm tài liệu Nhóm tìm hệ dung mơi tách hợp chất Saponin cho rõ tất hệ khảo sát ✓ Về độ ẩm: không 12,0 % (Phụ lục 9.6, g, 105 °C, h) ✓ Về tro tồn phần: khơng 12,0 % (Phụ lục 9.8) ✓ Về tạp chất: không 1% (Phụ lục 12.11) ✓ Khai triển sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi: + Hệ: CHCl3 : MeOH : H2O (65 : 35 : 10, lớp dưới) + Hệ: nBuOH – AcOH - H2O (4 : 1: 5, lớp trên) + Hệ: CHCl3 : MeOH (9 : 1) → Kết luận: Hệ dung mơi CHCl3 : MeOH (9:1) tách tốt - Ngồi ra, cịn số phản ứng định tính chưa thực Do số thí nghiệm khơng có đủ hóa chất để thực phản ứng Các tiêu chuẩn chất lượng khác dược liệu chưa xây dựng phịng thí nghiệm chưa đủ thiết bị cần thiết 108 108 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt: Bộ môn Dược liệu, Trường Đại học Nam Cần Thơ, Phương pháp nghiên cứu dược liệu, Khoa Y-Dược trường Đại học Nam Cần Thơ, 2017 Bộ môn Dược liệu, Trường Đại học Nam Cần Thơ, Thực hành Thực vật dược, Khoa Y-Dược trường Đại học Nam Cần Thơ, 2014 Đỗ Tất Lợi, Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, 1995 Võ Văn Chi, Từ điển thuốc Việt Nam, Tập I II NXB Y học, 2012 Bộ môn Thực vật Dược, Trường Đại học Dược Hà Nội, Thực vật dược – Phân loại thực vật, Hà Nội 1997 Dược điển Việt Nam V, Bộ Y tế, NXB Y học, 2015 Tài liệu Internet: https://vi.wikipedia.org/wiki/Chi_Náng https://caythuoc.vn/nang-hoa-trang https://www.thuocdantoc.org/duoc-lieu/nang-hoa-trang http://tracuuduoclieu.vn/crinum-asiaticum-l.html http://tailieuduockhoa.blogspot.com/2013/12/mo-ta-giai-phau-nang-hoatranglop-hanh.html?m=1 http://uphcm.edu.vn/caythuoc/index.php?q=book/export/html/379 Tài liệu Tiếng Anh 109 109 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá https://www.researchgate.net/publication/327117112_Antioxidant_toxicit y_and_antibacterial_properties_of_ompuompu_crinum_asiaticumL_ethanol_extract https://www.researchgate.net/publication/268277112_GCMS_studies_of_Crinum_asiaticum_L_Leaves_and_Flowers http://www.missouribotanicalgarden.org/PlantFinder/PlantFinderDetails.a spx? taxonid=275689 https://www.gbif.org/species/2853796 https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S025462992030941 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/27406068/ http://tropical.theferns.info/viewtropical.php?id=Crinum%20asiaticum 110 110 ... tiêu chuẩn dược liệu Lá Náng GVHD: Thái Thị Cẩm Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá Náng dọc Hoa: Thuộc hoa lưỡng tính giống hoa loa kèn Cánh hoa to gồm cánh màu trắng sữa, có hương thơm thoang thoảng... dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá Náng GVHD: Thái Thị Cẩm Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá Náng PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN HĨA HỌC - Trong nghiên cứu, sản xuất dược liệu chế phẩm từ dược liệu, để chiết xuất... củ Náng hoa trắng hình bầu dục có màu đỏ nhạt Thêm vào đó, Náng hoa trắng 5 GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá GVHD: Thái Thị Cẩm Náng Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Lá dễ