Lilium poilanei Gapnep là một loài hoa rất hiếm trên thế giới, mang nhiều đặc điểm quý như màu sắc hoa bền đẹp và có hương thơm. Tuy nhiên, loài hoa này đã và đang bị khai thác nghiêm trọng. Do đó, bảo tồn và phát triển nguồn gen này trong chọn tạo giống Lilium là rất cần thiết. Nghiên cứu này nhằm tìm ra các thông số kỹ thuật thích hợp nhằm tạo củ in vitro, phục vụ công tác nhân giống cây này. Củ con in vitro Lilium poilanei Gapnep được nghiên cứu tạo ra thành công từ vảy củ và lá in vitro thông qua kết hợp các kỹ thuật hoặc chất điều tiết sinh trưởng thích hợp. Kết quả đã xác định được (1) nhất sau khi được khử trùng qua HgCl2 0,1% mẫu vảy củ phía trong cùng có kích thước nhỏ hơn 3cm có tỉ lệ sống và tỉ lệ mẫu sống sạch cao sau 2 tuần lần lượt là 100% và 81,67%; (2) khi được nuôi cấy trong môi trường MS + 7,5gl agar + 30gl đường + 0,3mgl BA sau 8 tuần thì tỉ lệ tạo củ cao nhất là ở vảy củ vùng giữa có kích thước từ 36cm, nhưng hệ số tạo củ cao nhất là ở vảy củ vùng giữa có kích thước nhỏ hơn 3cm; (3) khi được nuôi cấy trong môi trường MS + 7,5gl agar + 30gl đường + 0,3mgl BA sau 8 tuần thì tỉ lệ tạo củ cao nhất ở mẫu vảy để nguyên không cắt là 53,33%; (4) môi trường MS + 7,5gl agar + 30gl đường + 0,3mgl BA + 0,5mgl NAA là môi trường thích hợp nhất cho sự tạo củ từ mẫu lá in vitro lily với tỉ lệ tạo củ là 66,67% và hệ số tạo củ là 1,25; (5) củ lily in vitro hoa lily ra rễ hiệu quả nhất trong môi trường MS có bổ sung 30gl đường + 2ppm nano bạc + 1gl than hoạt tính với tỉ lệ ra rễ đạt 100%, số rễ trung bình đạt 9,37cm, chiều dài rễ trung bình đạt 2,17
HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC -🙞🕮🙜 - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ ĐẾN NHÂN GIỐNG IN VITRO HOA LILY SAPA (LILIUM POILANEI GAPNEP)” Hà Nội – 2022 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC -🙞🕮🙜 - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ ĐẾN NHÂN GIỐNG IN VITRO HOA LILY SAPA (LILIUM POILANEI GAPNEP)” Sinh viên thực : Phạm Thị Thanh Xuân Mã sinh viên: : 637094 Lớp: : K63CNSHA Ngành: : Công Nghệ Sinh Học Chuyên ngành: : Công Nghệ Sinh Học Giảng viên hướng dẫn: : TS Bùi Thị Thu Hương Hà Nội - 2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan đề tài khóa luận cơng trình nghiên cứu thực tơi, thực dựa sở nghiên cứu lý thuyết, kiến thức chuyên ngành hướng dẫn khoa học TS Bùi Thị Thu Hương Các số liệu, kết quả, hình ảnh, bảng biểu đưa hồn tồn trung thực, chưa sử dụng công bố cơng trình nghiên cứu khoa học trước Tôi xin cam đoan thông tin, tài liệu tham khảo luận văn ghi rõ nguồn gốc Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm lời cam đoan trước hội đồng học viện Hà Nội, ngày 11 tháng 05 năm 2022 Người thực Phạm Thị Thanh Xuân LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình thực đề tài tốt nghiệp này, nỗ lực cố gắng thân, tơi nhận giúp đỡ nhiệt tình mặt thầy cô, tập thể cá nhân Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới giảng viên hướng dẫn TS Bùi Thị Thu Hương dành nhiều thời gian, tâm huyết tận tình bảo, giúp đỡ suốt trình thực khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn tới tập thể thầy cô môn Sinh học – khoa Công nghệ sinh học – Học viện Nông nghiệp Việt Nam tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi hồn thành khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn thầy cô Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình dạy bảo tơi suốt năm đại học qua Cuối cùng, xin bày tỏ lịng biết ơn tới gia đình bạn bè ln bên, động viên, chăm sóc, giúp đỡ suốt thời gian học tập thực đề tài tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 11 tháng 05 năm 2022 Người thực Phạm Thị Thanh Xuân MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH ẢNH vi DANH MỤC BIỂU ĐỒ vii TÓM TẮT ix PHẦN I: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích 1.3 Yêu cầu PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung lily 2.1.1 Nguồn gốc, vị trí phần loại thực vật hoa lily 2.1.2 Phân loại 2.1.3 Đặc điểm thực vật học 2.2.4 Nhân giống hoa lily 2.2 Lily Sapa (Lilium poilanei Gapnep) 10 2.2.1 Cấu tạo 10 2.2.2 Một số nghiên cứu 11 2.3 Tình hình nghiên cứu hoa lily giới Việt Nam 12 2.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 12 2.3.2 Nghiên cứu lily Việt Nam 13 PHẦN III: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 16 3.2 Đối tượng nghiên cứu 16 3.3 Dụng cụ, hoa chất 16 3.3.1 Dụng cụ 16 3.3.2 Hoá chất 17 3.4 Nội dung phương pháp nghiên cứu 17 3.4.1 Tạo vật liệu khởi đầu in vitro 17 3.4.2 Nghiên cứu khả tái sinh củ từ vảy củ, lát cắt vảy củ in vitro Lilium poilanei khác 17 3.4.3 Nghiên cứu hình thành rễ củ in vitro Lilium poilanei 21 3.4.4 Khảo sát tỉ lệ sống, tỉ lệ nảy mầm củ lily in vitro đem vườn ươm 22 3.5 Bố trí thí nghiệm xử lý số liệu: 23 PHẦN IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 4.1 Khả tạo vật liệu khởi đầu in vitro từ vảy củ 24 4.2 Ảnh hưởng kích thước vảy củ đến khả tạo củ in vitro Lilium poilanei 25 4.3 Nghiên cứu ảnh hưởng kích thước lát cắt vảy củ đến khả tạo củ Lilium poilanei 27 4.4 Ảnh hưởng BA kết hợp với NAA đến khả tạo chồi mẫu in vitro lily 30 4.5 Tạo hoàn chỉnh cho củ Lilium poilanei in vitro 32 4.6 Khảo sát tỉ lệ sống, tỉ lệ nảy mầm củ lily in vitro đem vườn ươm 35 PHẦN V: KẾT LUẬN 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Khả tạo vật liệu vảy củ in vitro loại vảy 24 Bảng 4.2 Ảnh hưởng kích thước (nguồn gốc vảy) vảy củ đến khả tạo củ in vitro Lilium poilanei sau 4, tuần nuôi cấy 25 Bảng 4.3 Ảnh hưởng kích thước vảy củ đến khả tạo củ in vitro Lilium poilanei sau 4, tuần nuôi cấy 27 Bảng 4.4 Khả tạo củ in vitro từ mảnh 29 Bảng 4.5 Ảnh hưởng THT kết hợp với ppm nano bạc đến củ lily in vitro sau tuần nuôi cấy 32 Bảng 4.6 Khảo sát tỉ lệ sống tỉ lệ nảy mầm củ lily in vitro sau tuần 34 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1: Lilium poilanei 11 Hình 2: Mẫu củ lily Sapa (Lilium poilanei Gapnep) 16 Hình 3: Vảy củ có kích thước khác 18 Hình 4: Các kích thước lát cắt vảy củ 19 Hình 5: Kích thước củ phân loại trước đem vườn ươm 23 Hình Củ lily hình thành từ vảy củ có kích thước khác 26 Hình Củ lily hình thành từ vảy củ có kích thước lát cắt khác (bao gồm phần đế vảy) 28 Hình Mảnh mơi trường bổ sung NAA 0.3 mg/l BA khác 30 Hình Củ rễ môi trường MS bổ sung 2ppm nano bạc than hoạt tính 33 Hình 10: Củ sau tuần trồng vườn ươm 35 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT CT Công thức MT Môi trường ĐC Đối chứng MS Murashige & Shood medium, 1962 α-NAA Naphthyl acetic acid 6-BA 6-Benzylaminopurine CV (%) Hệ số biến động (Correlation of Variants) 𝐿𝑆𝐷0,05 Sai khác tối thiểu có ý nghĩa P = 0,05 (Least Significant Diffencence) THT Than hoạt tính TB Trung bình TĨM TẮT Lilium poilanei Gapnep loài hoa giới, mang nhiều đặc điểm quý màu sắc hoa bền đẹp có hương thơm Tuy nhiên, lồi hoa bị khai thác nghiêm trọng Do đó, bảo tồn phát triển nguồn gen chọn tạo giống Lilium cần thiết Nghiên cứu nhằm tìm thơng số kỹ thuật thích hợp nhằm tạo củ in vitro, phục vụ cơng tác nhân giống Củ in vitro Lilium poilanei Gapnep nghiên cứu tạo thành công từ vảy củ in vitro thông qua kết hợp kỹ thuật chất điều tiết sinh trưởng thích hợp Kết xác định (1) sau khử trùng qua HgCl 0,1% mẫu vảy củ phía có kích thước nhỏ 3cm có tỉ lệ sống tỉ lệ mẫu sống cao sau tuần 100% 81,67%; (2) nuôi cấy môi trường MS + 7,5g/l agar + 30g/l đường + 0,3mg/l BA sau tuần tỉ lệ tạo củ cao vảy củ vùng có kích thước từ 3-6cm, hệ số tạo củ cao vảy củ vùng có kích thước nhỏ 3cm; (3) nuôi cấy môi trường MS + 7,5g/l agar + 30g/l đường + 0,3mg/l BA sau tuần tỉ lệ tạo củ cao mẫu vảy để nguyên không cắt 53,33%; (4) môi trường MS + 7,5g/l agar + 30g/l đường + 0,3mg/l BA + 0,5mg/l NAA mơi trường thích hợp cho tạo củ từ mẫu in vitro lily với tỉ lệ tạo củ 66,67% hệ số tạo củ 1,25; (5) củ lily in vitro hoa lily rễ hiệu mơi trường MS có bổ sung 30g/l đường + 2ppm nano bạc + 1g/l than hoạt tính với tỉ lệ rễ đạt 100%, số rễ trung bình đạt 9,37cm, chiều dài rễ trung bình đạt 2,17 với củ lớn 6,67%; củ trung 35%; cao củ nhỏ 66,67% Đối với tiêu số lá/ giảm dần giống tỉ lệ nảy mầm; Cao CT1 Ngoài yếu tố bên ngồi yếu tố nội sinh quan trọng cho trình phát triển ngồi vườn ươm Theo Nguyễn Như Khanh (2006) sau hình thành củ, chuyển từ giai đoạn sinh trường sang giai đoạn sinh sản lúc hàm lượng ABA tạo thành tăng dần ABA chất ức chế tăng trưởng, gây ngủ cây, củ lớn, già tích luỹ ABA nhiều Vì vậy, phân loại củ có kích thước khác trước đem trồng ngồi vườn ươm tỉ lệ nảy mầm củ khác Cụ thể củ nhỏ nảy mầm sớm ngược lại Ngồi nảy mầm sớm tạo tốt nhiều nảy mầm sớm 37 PHẦN V: KẾT LUẬN 1) Sử dụng HgCl2 0,1% để khử trùng mẫu vảy củ khác cho tỷ lệ mẫu sống tỉ lệ mẫu sống mẫu vảy vòng có kích thước