Mối tương quan giữa hai phương pháp tạo đám hoại tử (PFU) và liều gây nhiễm 50% nuôi cấy tế bào (CCID50) của vắc xin sởi dự tuyển mẫu chuẩn quốc gia Việt Nam

Bài viết trình bày việc xác định hệ số tương quan công hiệu giữa hai phương pháp tạo đám hoại tử (PFU) và liều gây nhiễm 50% nuôi cấy tế bào (CCID50) của vắc xin sởi dự tuyển mẫu chuẩn quốc gia Việt Nam.

vietnam medical journal n02 - APRIL - 2022 NMCT [2] Nghiên cứu gồm có 610 bệnh nhân nam NMCT 733 người nhóm chứng từ nghiên cứu ECTIM (Etude Cas-Témoin de I’Infarctus du Myocarde), nghiên cứu đa trung tâm xác định biến thể gen tiềm thúc đẩy NMCT dân số châu Âu khác (Belfast, Lille, Strasbourg Toulouse), tần suất kiểu gen ACE DD toàn dân số nghiên cứu 32,3% alen D chiếm tỉ lệ 43,0% [2] Các nghiên cứu khác dân số châu Á nhận thấy kiểu gen DD có tỉ lệ thấp nghiên cứu Yoshida M Nhật Bản [7], Zhang Y Trung Quốc [8] Baruah S Ấn Độ [1] Tỉ lệ alen D nghiên cứu tác giả 37,0%; 45,7% 25,5% [1], [7], [8] V KẾT LUẬN Qua nghiên cứu 130 bệnh nhân nhồi máu tim cấp, ghi nhận tỉ lệ kiểu gen II, ID DD điểm đa hình ACE I/D 42,3%; 41,5% 16,2% tỉ lệ alen I D 59,2% 40,8% LỜI CẢM ƠN: Trần Cơng Duy tài trợ Tập đồn Vingroup – Công ty CP hỗ trợ Chương trình học bổng thạc sĩ, tiến sĩ nước Quỹ Đổi sáng tạo Vingroup (VINIF), Viện Nghiên cứu Dữ liệu lớn, mã số VINIF.2021.TS.126 TÀI LIỆU THAM KHẢO Baruah S, Chaliha MS, Borah PS, et al (2016), “Insertion/Insertion genotype of angiotensin Iconverting-enzyme gene predicts risk of myocardial infarction in North East India”, Biochem Genet, 54 (2), pp 134-46 Cambien F, Poirier O, Lecerf L, et al (1992), “Deletion polymorphism in the gene for angiotensin-converting enzyme is a potent risk factor for myocardial infarction”, Nature, 359, pp 641-644 Mehri S, Baudin B, Mahjoub S, et al (2010), “Angiotensin-converting enzyme insertion/deletion gene polymorphism in a Tunisian healthy and acute myocardial infarction population”, Genetic testing and molecular biomarkers, 14 (1), pp 85-91 Ngô Tuấn Hiệp (2017), So sánh giá trị thang điểm nguy tiên lượng bệnh nhân nhồi máu tim cấp, Luận án Tiến sĩ Y học, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Nguyễn Văn Tuấn, Phạm Hồng Phương (2021), “Một số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng kết chụp động mạch vành qua da bệnh nhân nhồi máu tim cấp”, Tạp chí Y Học Việt Nam, 502 (1), tr 180-184 Thygesen K, Alpert JS, Jaffe AS, et al(2018), “Fourth universal definition of myocardial infarction”, Circulation, 138, e618–e651 Yoshida M, Iwai N, Ohmichi N, et al (1999), “D allele of the angiotensin-converting enzyme gene is a risk factor for secondary cardiac events after myocardial infarction”, Int J Cardiol, 70, pp 119–125 Zhang Y, Zhou S, Zhao X, Lei J (2006), “Relationship between polymorphism of angiotensin I converting enzyme gene insertion/deletion and ACE, PAI-1 activity in patients with myocardial infarction”, Chin J Pathophysiol, 22, pp 2336-2339 MỐI TƯƠNG QUAN GIỮA HAI PHƯƠNG P HÁP TẠO ĐÁM HOẠI TỬ (PFU) VÀ LIỀU GÂY NHIỄM 50% NUÔI CẤY TẾ BÀO (CCID50) CỦA VẮC XIN SỞI DỰ TUYỂN MẪU CHUẨN QUỐC GIA VIỆT NAM Phạm Văn Hùng*, Đoàn Hữu Thiên*, Nguyễn Thị Kiều* TÓM TẮT chuẩn dự tuyển MCQG, ta thấy: Công hiệu vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển MCQG loạt RM 01-07 theo phương pháp PFU là: 4,41 log10 PFU/ 0,5ml Công hiệu vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển MCQG loạt RM 01-07 theo phương pháp CCID50 là: 3,48 log10 CCID50/ 0,5ml Phương pháp PFU CCID50 có mối tương quan chặt chẽ hệ số hai phương pháp thực chủng AIK-C PFU/CCID = 1,28; PFU:CCID = 1: 0,78 Từ khóa: vắc xin sởi, PFU, CCID50, mẫu chuẩn quốc gia, vắc xin dự tuyển, mẫu chuẩn * Viện Kiểm định quốc gia Vắc xin Sinh phẩm y tế, Bộ Y tế SUMMARY 17 Mục tiêu: Xác định hệ số tương quan công hiệu hai phương pháp tạo đám hoại tử (PFU) liều gây nhiễm 50% nuôi cấy tế bào (CCID50) vắc xin sởi dự tuyển mẫu chuẩn quốc gia Việt Nam Đối tượng: Loạt vắc xin Sởi sống giảm độc lực dự tuyển MCQG RM-01-07 sản xuất POLYVAC Phương pháp nghiên cứu: thực nghiệm - phân tích so sánh kết Kết quả: Qua nghiên cứu vắc xin sởi mẫu Chịu trách nhiệm chính: Phạm Văn Hùng Email: hungnicvb@gmail.com Ngày nhận bài: 15.2.2022 Ngày phản biện khoa học: 29.3.2022 Ngày duyệt bài: 15.4.2022 68 THE CORRELATION BETWEEN THE TWO METHODS OF PLAQUES FORMING UNITS (PFU) AND CELL CULTURE INFECTIOUS DOSE 50% (CCID50) OF THE MEASLES VACCINE CANDIDATE FOR THE VIETNAMESE TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 513 - THÁNG - SỐ - 2022 NATIONAL REFERENCE STANDARD Objectives: Determine the effectiveness correlation coefficient between the two methods of Plaques Forming Units (PFU) and Cell Culture Infectious Dose 50% (CCID50) of the Measles vaccine candidate for the Vietnamese national reference standard Materials: The live attenuated measles vaccine candidate for the Vietnamese national reference standard RM-01-07 is manufactured at POLYVAC Methods: Empirical research and comparative analysis the results Results: The efficacy of the Measles vaccine candidate for the Vietnamese national reference standard series RM 0107 by PFU method is: 4.41 log10 PFU/ 0.5ml : The efficacy of the Measles vaccine candidate for the Vietnamese national reference standard series RM 0107 according to the CCID50 method is: 3.48 log10 CCID50/ 0.5ml PFU and CCID50 methods have a close correlation and the coefficient between the two methods when performed on AIK-C strain is PFU/CCID = 1.28; PFU:CCID = 1: 0.78 Key words: Cell Culture Infectious Dose 50%, Plaques Forming Units, reference standard, measles vaccine, candidate vaccine, National Reference Standard I ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh sởi bệnh truyền nhiễm cấp tính vi rút sởi gây ra, bệnh gây dịch lưu hành rộng rãi nơi giới, có tỉ lệ mắc bệnh cao trẻ nhỏ tuổi Ước tính hàng năm khoảng 100 triệu trường hợp mắc triệu người tử vong bệnh sởi [1] Hiện phương pháp phòng bệnh chủ động hiệu tiêm phòng vắc xin Một tiêu chuẩn chất lượng xuất xưởng quan trọng vắc xin kiểm tra hiệu lực bảo vệ vắc xin (công hiệu) phải đạt tiêu chuẩn theo qui định đăng ký nhà sản xuất quan kiểm định quốc gia (KĐQG) theo tiêu chuẩn theo Dược điển Việt Nam (DĐVN) TCYTTG qui định TCYTTG khuyến cáo có hai phương pháp tiêu chuẩn thử nghiệm xác định cơng hiệu vắc xin sởi có giá trị phương pháp xác định đám hoại tử (PFU) phương pháp xác định liều gây nhiễm 50% nuôi cấy tế bào (CCID50) Để xác định rõ mối liên quan hai phương pháp vắc xin dự tuyển MCQG, thực đề tài với mục tiêu sau: Xác định hệ số tương quan công hiệu hai phương pháp tạo đám hoại tử (PFU) liều gây nhiễm 50% nuôi cấy tế bào (CCID50) vắc xin sởi dự tuyển mẫu chuẩn quốc gia Việt Nam II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu: Loạt vắc xin Sởi sống giảm độc lực dự tuyển MCQG RM-01-07 sản xuất POLYVAC Thời gian địa điểm: - Thời gian: từ tháng 6/2014 – tháng 8/2017 - Địa điểm: NICVB, Polyvac Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương Vật liệu nghiên cứu: - Vắc xin sởi mẫu chuẩn quốc tế mã số: 92648, NIBSC – Anh cung cấp, số lượng: lọ; - Vắc xin sởi dự tuyển MCQG mã số RM-0107, sản xuất POLYVAC, số lượng: 100 lọ; - Trình tự chủng chuẩn AIK-C 266286 Kitasato, Nhật Bản ngân hàng GenBank (NCBI); - Trình tự 09 loại vắc xin sởi bao gồm chủng sau: Zagreb AF 266290; EdmonstonEnders FJ211583; Schwarz AF266291; Moraten AF266287; Rubeovax AF266289; Leningrad-4 AY730614; Shangai-191FJ416067; CAM70DQ345723; Changchun-41FJ416068 ngân hàng GenBank (NCBI); - Trình tự chủng hoang dại Edmonnston–wt mã số AF266288 ngân hàng GenBank (NCBI) - Và sinh phẩm, hóa chất, thiết bị dụng cụ khác cần thiết phục vụ cho nghiên cứu 2.2 Phương pháp nghiên cứu: - Phương pháp nghiên cứu thực nghiệm sử dụng để xác định công hiệu vắc xin sởi dự tuyển MCQG - Xác định hệ số tương quan (k) hai phương pháp PFU CCID50 phương pháp phân tích so sánh kết II KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 2.1 Kết công hiệu vắc xin sởi dự tuyển MCQG phương pháp PFU CCID50 Bảng 1: Kết công hiệu vắc xin sởi dự tuyển MCQG M01-07 phương pháp PFU CCID50 STT PFU 4,42 4,35 4,41 4,41 4,42 4,37 -700C CCID50 3,44 3,54 3,49 3,64 3,54 3,54 PFU 4,39 4,33 4,31 4,28 4,36 4,35 40C CCID50 3,39 3,29 3,34 3,39 3,24 3,19 PFU 3,62 3,64 3,59 3,59 3,63 3,60 370C CCID50 2,79 2,74 2,89 2,74 2,69 2,69 69 vietnam medical journal n02 - APRIL - 2022 10 11 12 13 14 15 16 17 18 GM SD GM+2SD GM-2SD CV CI 4,38 4,40 4,34 4,44 4,46 4,40 4,50 4,46 4,49 4,39 4,44 4,42 4,41 0,04 4,50 4,32 0,98 4,32-4,50 3,34 3,39 3,49 3,44 3,49 3,54 3,29 3,34 3,29 3,64 3,69 3,59 3,48 0,11 3,72 3,24 3,44 3,24-3,72 4,39 4,40 4,26 4,27 4,28 4,29 4,34 4,28 4,32 4,25 4,38 4,39 4,32 0,05 4,42 4,22 1,17 4,22-4,42 Kết công hiệu mẫu vắc xin dự tuyển theo phương pháp PFU bảo quản -700C là: 4,41 log10 PFU/ 0,5ml với khoảng tin cậy 95% CI (4,324,50), CV: 0,98%; mẫu bảo quản 40C: 4,32 log10 PFU/0,5ml với khoảng tin cậy CI (4,22 – 4,42), CV: 1,17%; mẫu bảo quản 370C: 3,62 log10 PFU/ 0,5ml với khoảng tin cậy CI (3,53 – 3,70), CV: 1,14% Đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn TCYTTG Dược điển Việt Nam IV cho vắc xin sởi Kết công hiệu mẫu vắc xin sởi dự tuyển MCQG theo phương pháp CCID50 bảo quản -700C là: 3,48 log10 CCID50/ 0,5ml với khoảng tin cậy 95% CI (3,24 – 3,72), CV: 3,44%; mẫu bảo quản 40C: 3,38 log10 CCID50/ 0,5ml với khoảng tin cậy CI (3,19 – 3,56), CV: 2,74%; mẫu bảo quản 370C: 2,78 log10 CCID50/ 0,5ml với khoảng tin cậy CI (2,65 – 2,91), CV: 2,29% Đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn TCYTTG Dược điển Việt Nam IV cho vắc xin sởi 2.2 Xác định hệ số tương quan (k) phương pháp PFU CCID50 Bảng 2: Kết công hiệu vắc xin sởi dự tuyển MCQG M01-07 phương pháp PFU & CCID50 điều kiện bảo quản -700C, 40, 370C STT 70 Nhiệt độ bảo quản -70 C Kết PFU CCID50 4,42 3,44 4,35 3,54 4,41 3,49 4,41 3,64 4,42 3,54 4,37 3,54 4,38 3,34 4,40 3,39 4,34 3,49 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 3,49 3,39 3,29 3,54 3,49 3,39 3,44 3,49 3,39 3,44 3,34 3,34 3,38 0,09 3,56 3,19 2,74 3,19-3,56 40C 370C 3,53 3,64 3,53 3,65 3,65 3,62 3,66 3,64 3,67 3,65 3,61 3,67 3,62 0,04 3,70 3,53 1,14 3,53-3,70 4,44 4,46 4,40 4,50 4,46 4,49 4,39 4,44 4,42 4,39 4,33 4,31 4,28 4,36 4,35 4,39 4,40 4,26 4,27 4,28 4,29 4,34 4,28 4,32 4,25 4,38 4,39 3,62 3,64 3,59 3,59 3,63 3,60 3,53 3,64 3,53 3,65 2,79 2,89 2,74 2,89 2,74 2,74 2,84 2,79 2,79 2,74 2,84 2,79 2,78 0,06 2,91 2,65 2,29 2,65-2,91 3,44 3,49 3,54 3,29 3,34 3,29 3,64 3,69 3,59 3,39 3,29 3,34 3,39 3,24 3,19 3,49 3,39 3,29 3,54 3,49 3,39 3,44 3,49 3,39 3,44 3,34 3,34 2,79 2,74 2,89 2,74 2,69 2,69 2,79 2,89 2,74 2,89 TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 513 - THÁNG - SỐ - 2022 47 48 49 50 51 52 53 54 3,65 3,62 3,66 3,64 3,67 3,65 3,61 3,67 4,12 2,74 2,74 2,84 2,79 2,79 2,74 2,84 2,79 3,21 GM r 0.94 Kết cơng hiệu trung bình lơ vắc xin sởi dự tuyển MCQG M01-07 phương pháp PFU (4,12 log10 PFU) phương pháp CCID50 (3,12 log10 CCID50) bảo quản điều kiện khác -700C, 40C 370C, đạt yêu cầu công hiệu theo tiêu chuẩn TCYTTG Hình 1: Đồ thị tương quan tuyến tính PFU CCID50 Kết phương pháp PFU CCID50 có tính tương quan mật thiết chất nguyên lý phương pháp với hệ số tương quan r = 0,94 (r>0) phương trình tuyến tính y = 0,847x – 0,273 Bảng 3: Kết xác định hệ số tương quan (k) quy đổi phương pháp PFU CCID50 STT 10 11 12 13 14 15 Kết -700C 1,28 1,22 1,26 1,21 1,24 1,23 1,31 1,29 1,24 1,29 1,27 1,24 1,36 1,33 1,36 PFU/CCID50 40C 370C 1,29 1,29 1,31 1,32 1,29 1,24 1,26 1,31 1,34 1,34 1,36 1,33 1,25 1,26 1,29 1,25 1,29 1,28 1,20 1,26 1,22 1,33 1,26 1,32 1,26 1,28 1,22 1,30 1,27 1,31 16 1,20 1,23 1,33 17 1,20 1,31 1,27 18 1,23 1,31 1,31 GM 1,26 1,27 1,29 Hệ số tương quan PFU/CCID50 (k): 1,28 P (Anova) 0,323 (> 0,05) Kết nghiên cứu hệ số trung bình điều kiện khác PFU/CCID50 = 1,28 Kết so sánh nhóm mẫu khác kiểm định Anova cho thấy kết nhóm khơng có khác biệt với p = 0,323 (>0,05), khơng có ý nghĩa thống kê IV BÀN LUẬN Sự cần thiết việc thiết lập đơn vị cho vắc xin sởi MCQG Để đảm bảo chất lượng vắc xin việc kiểm tra chất lượng coi tảng Chất lượng sinh phẩm kiểm tra phương pháp lý, hóa học sinh học Quy trình kiểm tra sử dụng phương pháp sinh học gọi thử nghiệm sinh học Trong thử nghiệm sinh học người ta thường sử dụng động vật thí nghiệm, mô, tế bào nuôi cấy, chủng vi sinh vật Giá trị thử nghiệm thường có độ chênh lệch lớn so với thử nghiệm lý hóa Nguyên nhân gây chênh lệch khác biệt sinh học loài tham gia thử nghiệm, khác phịng thí nghiệm, người thực kỹ thuật, trang thiết bị… WHO thiết lập mẫu chuẩn quốc tế (MCQT) sai lệch độ cảm nhiễm đáp ứng nhóm động vật thí nghiệm sử dụng điều kiện thí nghiệm ảnh hưởng giống đồng thời đến mẫu chuẩn mẫu thử hai thử nghiệm điều kiện thí nghiệm Bằng phương pháp giảm tối thiểu độ chênh lệch kết kiểm tra chất lượng vắc xin sinh phẩm Mẫu chuẩn quốc tế chuẩn định labo đạt tiêu chuẩn giới đặt số quốc gia đại diện cho khu vực, châu lục để đảm bảo tính đồng khắp giới hiệu lực hoạt tính Chúng cung cấp dạng đơng khơ ống dạng dung dịch có ghi số đơn vị hoạt tính cơng hiệu biểu thị dạng đơn vị quốc tế (IU) Do giá thành ống chuẩn quốc tế cao số lượng hạn chế nên không đủ số lượng phục vụ thường xuyên cho công tác kiểm định chất lượng vắc xin sởi sản xuất nước Vì vậy, nước giới có sản xuất vắc xin sởi phải triển khai sản xuất mẫu chuẩn quốc gia chuẩn định với mẫu chuẩn quốc tế 71 vietnam medical journal n02 - APRIL - 2022 Hiện mẫu chuẩn quốc tế có giá trị hiệu giá cơng bố đơn vị CCID50, mẫu chuẩn quốc gia chuẩn định theo chuẩn quốc tế có đơn vị CCID50, nhiên với đơn vị CCID50 mẫu chuẩn quốc gia không thực làm thang đánh giá cho sản phẩm vắc xin đăng ký đơn vị PFU Trên giới có nhiều sản phẩm vắc xin sởi thương mại sử dụng đơn vị CCID50 PFU, quốc gia sản xuất mẫu chuẩn cần phải chuẩn định đơn vị phù hợp theo điều kiện thực tế quốc gia Trong dược điển Châu Âu hồ sơ đăng ký số nhà sản xuất Bỉ, Pháp, Ấn Độ, Mỹ… sử dụng đơn vị CCID50 cho hiệu giá vắc xin sởi, Nhật Bản số nhà máy nhận chuyển giao kỹ thuật từ Nhật Bản lại sử dụng đơn vị PFU Trong hướng dẫn kiểm sốt chất lượng vắc xin sởi TCYTTG hai đơn vị PFU CCID50 lựa chọn để sử dụng [2], việc xác định giá trị hiệu giá vắc xin sởi dự tuyển mẫu chuẩn quốc qia đơn vị PFU CCID50 việc cần thiết Tuy nhiên chuẩn định phương pháp tốn nhiều thời gian, ngồi khơng có mẫu chuẩn nối chuẩn cho phương pháp PFU Giữa phương pháp PFU CCID50 có mối tương quan với xác định hệ số quy đổi [3] Việc tìm hệ số quy đổi mối tương quan giúp cho việc xác định đơn vị PFU mẫu chuẩn quốc gia sau thiết lập Xác định công hiệu mẫu chuẩn dự tuyển phương pháp PFU điều kiện nhiệt độ khác -700C, 40C/7 ngày, 370C/7 ngày Xác định công hiệu vắc xin phương pháp PFU xác định số đám hoại tử (plaque) vi rút sau gây nhiễm tế bào Vero Số plaque xác định cách đếm trực tiếp phiến tế bào nuôi cấy, thông thường phiến 24 giếng phiến giếng Sự khác biệt chủng vi rút cho đặc điểm hình thái plaque khác nhau, ví dụ plaque vi rút thủy đậu có hình dấu phẩy, plaque vi rút sởi có hình trịn Giữa chủng sản xuất vắc xin sởi có khác biệt kích thước plaque nuôi cấy tế bào Vero Chủng Schwarz Moraten có plaque nhỏ chủng Edmonston Zagreb (EZ), CAM, Leningrad -16 có plaque lớn Thử nghiệm xác định công hiệu vắc xin sởi theo phương pháp PFU thẩm định sử dụng KĐQG Trong nghiên cứu thay đổi điều kiện nhiệt độ bảo quản vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển MCQG từ điều kiện tối ưu 72 700C đến điều kiện bảo quản 40C nhiệt độ bảo quản thông thường vắc xin tiêm chủng điều kiện 370C điều kiện thử thách tính ổn đinh nhiệt vắc xin Kết nghiên cứu cho thấy công hiệu vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển MCQG loạt RM 01-07 có giá trị nằm khoảng tin cậy 95%, CV nhỏ tiêu chuẩn (CV ≤ 12%) Có giá trị tương đồng điều kiện bảo quản -700C với 40C, mẫu bảo quản 370C có cơng hiệu thấp hai mẫu Chênh lệch mẫu bảo quản 370C với mẫu 40C 0,7 log10 PFU/ liều (0,5ml), mẫu 370C với mẫu 700C 0,79 log10 PFU/ liều (0,5ml) Công hiệu vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển MCQG loạt RM 01-07 theo phương pháp PFU là: 4,41 log10 PFU/ 0,5ml Xác định công hiệu mẫu chuẩn dự tuyển phương pháp CCID50 điều kiện nhiệt độ khác -700C, 40C/7 ngày, 370C/7 ngày Phương pháp CCID50 thẩm định áp dụng cho kiểm định công hiệu hầu hết vắc xin sởi nhập bao gồm vắc xin phối hợp sởi với Rubella (MR) Sởi, quai bị, Rubella (MMR) KĐQG Công hiệu CCID50 xác định qua hủy hoại vi rút tế bào gây nhiễm Đối với loại vi rút có hủy hoại đặc trưng, việc xác định hủy hoại thực cách quan sát kính hiển vi Xác định cơng hiệu vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển MCQG phương pháp CCID50 thực song song với MCQT Giữa lần thực giá trị MCQT luôn xác định nằm giới hạn tiêu chuẩn cho phép (104,3log10 CCID50 ± 0,5), điều khẳng định lần thực nghiên cứu có giá trị kết nghiên cứu có độ tin cậy cao Các kết thể bảng cho thấy công hiệu vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển MCQG loạt RM 01-07 có giá trị nằm khoảng tin cậy 95%, CV nhỏ tiêu chuẩn (CV ≤ 12%) Có giá trị tương đồng điều kiện bảo quản -700C với 40 C, cịn mẫu bảo quản 370C có công hiệu thấp hai mẫu Chênh lệch mẫu bảo quản 370C với mẫu 40 C 0,6 log10 CCID50/ liều (0,5ml), mẫu 370C với mẫu -700C 0,7 log10 CCID50/ liều (0,5ml) Công hiệu vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển MCQG loạt RM 01-07 theo phương pháp CCID50 là: 3,48 log10 CCID50/ 0,5ml Mối tương quan hai phương pháp Hai phương pháp xác định công hiệu vắc xin sởi CCID50 PFU TCYTTG mơ tả TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 513 - THÁNG - SỐ - 2022 WHO Requirement, nhiên khơng rõ phương pháp thực thuận tiện Các quốc gia lựa chọn hai phương pháp thực phù hợp với điều kiện Nghiên cứu cho thấy giá trị công hiệu vắc xin sởi mẫu chuẩn dự tuyển MCQG có khác biệt hai phương pháp thực so sánh mẫu thử nghiệm bảo quản -700C với kiểm định T-test có giá trị p = 1,798E < 0,05, tα = 15,887 > t Nghiên cứu Nhật năm 1997 so sánh hai phương pháp vắc xin sởi cho hai phương pháp PFU CCID50 có khác biệt có ý nghĩa thống kê [4] Kết nghiên cứu nồng độ vi rút hai phương pháp có giảm dần mẫu để điều kiện nhiệt độ bảo quản cao Trong nghiên cứu chúng tơi nhận thấy hai phương pháp có mối tương quan chặt chẽ với r = 0,94 Các kết nghiên cứu mối tương quan hai phương pháp cho kết tương đồng với công bố nghiên cứu theo tài liệu hướng dẫn TCYTTG Theo kết trên, xác định hệ số trung bình PFU/CCID50 = 1,28, tương đương với tỉ lệ PFU: CCID50 = 1: 0,78; độ biến thiên CV: 1,07% Kết so sánh nhóm mẫu khác kiểm định Anova cho thấy kết nhóm khơng có khác biệt với p > 0,05 Mối quan hệ hai phương pháp tương đương với giá trị lý thuyết (1: 0,69) phương pháp CCID50 thực cho vi rút hấp phụ với hỗn dịch tế bào phương pháp PFU thực tế bào kín lớp [5], Kenny Schell báo cáo phương pháp PFU nhạy cảm gấp 10 lần thực nghiên cứu điều kiện tương tự chủng Schawrz [6] Trong nghiên cứu thu kết gần với giá trị lí thuyết thực phương pháp CCID50 cách gây nhiễm vi rút lên hỗn dịch tế bào phiến 96 giếng thực gây nhiễm lên tế bào kín lớp tiến hành phương pháp PFU phiến giếng Trong nghiên cứu trước Nhật Bản thực so sánh vắc xin từ chủng CAM -Biken nồng độ vi rút hai phương pháp CCID50 phương pháp PFU có tỉ lệ PFU/10 [4] Mann tìm thấy CCID50 tương đương với 0,60 PFU thử nghiệm chủng Moraten tế bào Vero [7] Có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến mối quan hệ hai phương pháp xác định công hiệu vắc xin, bao gồm: phương pháp hấp phụ vi rút, loại tế bào nồng độ tế bào sử dụng thử nghiệm, ảnh hưởng phương pháp cố định nhuộm màu phương pháp PFU, thiết kế thử nghiệm, ảnh hưởng phiến nuôi cấy, môi trường nuôi cấy, nhiệt độ độ ẩm Như nghiên cứu khẳng định hai phương pháp PFU CCID50 có mối tương quan chặt chẽ hệ số hai phương pháp thực chủng AIK-C PFU/CCID = 1,28; PFU:CCID = 1: 0,78 V KẾT LUẬN Qua nghiên cứu vắc xin sởi mẫu chuẩn dự tuyển MCQG chúng tơi có kết luận sau: Mối tương quan phương pháp PFU CCID50 chặt chẽ • Công hiệu vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển MCQG loạt RM 01-07 theo phương pháp PFU là: 4,41 log10 PFU/ 0,5ml • Cơng hiệu vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển MCQG loạt RM 01-07 theo phương pháp CCID50 là: 3,48 log10 CCID50/ 0,5ml • Phương pháp PFU CCID50 có mối tương quan chặt chẽ hệ số hai phương pháp thực chủng AIK-C PFU/CCID = 1,28; PFU:CCID = 1: 0,78 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bernard D Davis, Renato Dulbecco, Herman N Eisen, et al, Microbiology, fouth ed Philadelphia : Lippincott, 1990 Dự án tiêm chủng mở rộng Quốc gia, Tổng kết công tác tiêm chủng mở rộng năm 2004, Hà Nội, Hà Nội, 2005 Huỳnh Phương Liên, Nguyễn Anh Tuấn cs, "Nghiên cứu sản xuất vắc xin viêm não mẫu chuẩn VNR203 dùng kiểm định chất lượng vắc xin VNNB" Đề tài nhánh cấp nhà nước KC10-10, nghiệm thu 1/2005 T Nakayama, K Komase, R Uzuka, A Hoshi, and T Okafuji, "Leucine at position 278 of the AIK-C measles virus vaccine strain fusion protein is responsible for reduced syncytium formation," J Gen Virol, vol.82, no.9, pp.2143-2150, Sep 2001 Dự án tiêm chủng mở rộng, "Báo cáo tổng kết tiêm chủng mở rộng 2013", 2014 Nguyễn Thị Kê cs, "Nghiên cứu tiếp thu cơng nghệ xây dựng quy trình sản xuất vắc xin thương hàn", Đề tài cấp nhà nước KC11-11B, nghiệm thu 5/2001 Vũ Quốc Ái, Nguyễn Thị Minh Phượng, Nguyễn Ngọc Ấn, "Kết khảo sát vụ dịch sởi đầu năm 2000 tỉnh Đồng Tháp," Tạp chí Y học dự phòng, tập XI, số 1(47), 65-67, 2001 73 ... định hệ số tương quan công hiệu hai phương pháp tạo đám hoại tử (PFU) liều gây nhiễm 50% nuôi cấy tế bào (CCID50) vắc xin sởi dự tuyển mẫu chuẩn quốc gia Việt Nam II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN... hiệu vắc xin sởi có giá trị phương pháp xác định đám hoại tử (PFU) phương pháp xác định liều gây nhiễm 50% nuôi cấy tế bào (CCID50) Để xác định rõ mối liên quan hai phương pháp vắc xin dự tuyển. .. sau: Mối tương quan phương pháp PFU CCID50 chặt chẽ • Cơng hiệu vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển MCQG loạt RM 01-07 theo phương pháp PFU là: 4,41 log10 PFU/ 0,5ml • Cơng hiệu vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển