(LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu phát hiện lectin thực vật có khả năng ngưng kết đặc hiệu với một số vi khuẩn gây nhiễm độc thực phẩm phổ biế

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Mai Thị Đàm Linh NGHIÊN CỨU PHÁT HIỆN LECTIN THỰC VẬT CÓ KHẢ NĂNG NGƢNG KẾT ĐẶC HIỆU VỚI MỘT SỐ VI KHUẨN GÂY NHIỄM ĐỘC THỰC PHẨM PHỔ BIẾN LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Hà Nội - 2014 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Mai Thị Đàm Linh NGHIÊN CỨU PHÁT HIỆN LECTIN THỰC VẬT CÓ KHẢ NĂNG NGƢNG KẾT ĐẶC HIỆU VỚI MỘT SỐ VI KHUẨN GÂY NHIỄM ĐỘC THỰC PHẨM PHỔ BIẾN Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 62 42 40 01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS Bùi Phƣơng Thuận PGS.TS Kiều Hữu Ảnh Hà Nội - 2014 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com MỤC LỤC Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình MỞ ĐẦU Chƣơng 1:Tổng quan tài liệu 12 1.1Tình hình ngộ độc thực phẩm giới Việt Nam 12 1.1.1 Trên Thế giới 12 1.1.2 Tại Việt Nam 13 1.2 Ngộ độc thực phẩm vi khuẩn 14 1.3 Một số vi khuẩn gây bệnh qua đƣờng thực phẩm thƣờng gặp 15 1.3.1Vi khuẩn Salmonella bệnh Salmonella 16 1.3.2 Shigella bệnh lỵ trựckhuẩn 21 Đặc điểm sinh học Shigella 21 Ngộ độc thực phẩm Shigella 24 1.3.3 Escherichia coli gây bệnh 26 Đặc điểm sinh học vi khuẩn E coli 26 1.3.3.2 Các nhóm E coli gây bệnh 28 1.3.4 Staphylococcus aureus 30 1.3.4.1 Đặc điểm sinh học 31 1.3.4.2 Khả sinh độc tố 32 1.3.4.3 Nhiễm độc S aureus 33 1.3.5 Các nhóm vi khuẩn khác 33 1.3.5.1 Bệnh Listeria 33 1.3.5.2 Các bệnh Campylobacter (Campylobacteriosis) 34 1.3.5.3 Bệnh viêm đƣờng ruột – dày Clostridium perfringens 34 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 1.3.5.4 Bệnh đƣờng ruột- dày Bacillus cereus 35 1.3.5.5 Vibrio cholera 35 1.3.5.6 Clostridium botulinum bệnh Clostridium botulinum (Botulism) 1.4 Các kĩ thuật phân tích, kiểm tra vi khuẩn thực phẩm 36 36 1.4.1 Các phƣơng pháp truyền thống 36 1.4.2 Các phƣơng pháp đại 37 1.4.3 Phƣơng pháp sử dụng lectin 40 1.5 Lectin ứng dụng chẩn đoán vi khuẩn 41 1.5.1 Lectin 41 1.5.1.1 Định nghĩa lectin 41 1.5.1.2 Nguồn lectin tự nhiên 42 1.5.1.3 Cấu tạo phân tử lectin 43 1.5.1.4Tính đặc hiệu đƣờng lectin 44 1.5.1.5 Ứng dụng lectin 45 1.5.2 Các ứng dụng lectin chẩn đoán vi khuẩn 46 1.5.2.1 Ứng dụng lectin chẩn đoán vi khuẩn Gram dƣơng 47 1.4.2.1 Ứng dụng lectin chẩn đoán vi khuẩn Gram âm 49 1.5.2.3 Mối liên quan tính đặc hiệu đƣờng lectin khả gây ngƣng kết vi khuẩn 50 1.5.3 Ý nghĩa việc sử dụng lectin làm công cụ chẩn đoán vi khuẩn 52 Chƣơng 2: Đối tƣợng phƣơng pháp nghiên cứu 56 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 56 2.2 Dụng cụ - hóa chất – mơi trƣờng 56 2.2.1 Hoá chât – sinh phẩm, thiết bị dùng nghiên cứu vi sinh vật 56 2.2.2 Hoá chât – sinh phẩm, thiết bị dùng tách chiết nghiên cứu lectin 57 2.3.3 Môi trƣờng nuôi cấy 57 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 57 2.3.1 Phân lập định danh vi sinh vật 57 2.3.1.1 Kỹ thuật phát Salmonella, Shigella thực phẩm TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 57 2.3.1.2 Phƣơng pháp phát E coli thực phẩm theo kĩ thuật IMViC 60 2.3.1.3 Phân lập vi khuẩn Staphylococcus aureus 62 2.3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu lectin 65 2.3.2.1 Tách chiết tinh lectin 65 2.3.2.2 Xác định hoạt độ lectin phản ứng ngƣng kết hồng cầu 65 2.3.2.3 Phản ứng ngƣng kết tế bào vi khuẩn lectin 66 2.3.2.4 Phƣơng pháp tiến hành phản ứng đặc hiệu đƣờng 67 2.3.2.5 Xác định ảnh hƣởng pH lên hoạt độ lectin 67 2.3.2.6 Xác định ảnh hƣởng nhiệt độ lên hoạt độ lectin 68 2.3.2.7 Phƣơng pháp định lƣợng protein 68 2.3.2.8 Phƣơng pháp sắc ký trao đổi ion cột CM- Sephadex 69 2.3.2.9 Phƣơng pháp điện di biến tính gel polyacrylamide (SDS-PAGE) 71 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 72 3.1 Nghiên cứu khả gây ngƣng kết lectin lên số nhóm vi khuẩn gây ngộ độc thực phẩm thƣờng gặp 72 3.2 Tính đặc hiệu đƣờng dịch chiết lectin 74 3.3 Nghiên cứu mối tƣơng tác lectin với số vi khuẩn gây ngộ độc thực phẩm phân lập đƣợc 78 3.3.1 Phân lập vi khuẩn 78 3.3.1.1 Phân lập Salmonella 78 3.3.1.2 Shigella 80 3.3.1.3 Escherichia coli 81 3.31.4 Staphylococcus aureus 84 3.2.2 Kết gây ngƣng kết lectin thực vật với vi khuẩn phân lập 88 3.2.2.1 Tác dụng gây ngƣng kết lectin với chủng thuộc chi Salmonella 88 3.3.2.2 Tác dụng gây ngƣng kết lectin với Shigella 91 3.3.2.3 Tác dụng lectin lên loài vi khuẩn thuộc chi E.coli 93 3.3.2.4 Tác dụng lectin lên loài vi khuẩn thuộc chi Staphylococcus 96 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 3.3.2.5 Nghiên cứu tính chất gây ngƣng kết đặc hiệu lectin để ứng dụng lectin vào phân loại vi khuẩn nghiên cứu 101 3.4 TINH CHẾ VÀ NGHIÊN CỨU ĐẶC TÍNH HĨA SINH MIỄN DỊCH CỦA LECTIN CHỌN LỰA 107 3.4.1 Tinh chế nghiên cứu đặc tính lectin hạt Đậu ma 107 3.4.1.1 Lựa chọn đệm chiết thích hợp cho trình tinh chế 107 3.4.1.2 Tinh chế lectin hạt Đậu ma kết tủa phân đoạn nhờ điều chỉnh pH 108 3.4.1.3 Tinh chế ĐM-CP2 cột sắc ký trao đổi ion CM- Sephadex 109 3.3.1.4 Nghiên cứu số tính chất hóa sinh lectin hạt Đậu ma 112 3.4.2 Tinh chế nghiên cứu đặc tính lectin từ Tú cầu đỏ 117 3.4.2.1 Sắc kí qua cột trao đổi ion DE-52 Cellulose 117 3.3.2.2 Kiểm tra độ tinh chế phẩm điện di biến tính 119 3.3.2.3 Nghiên cứu số đặc tính lectin Tú cầu đỏ 120 KẾT LUẬN 125 KIẾN NGHỊ 126 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CỦA TÁC GIẢ CÓ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 127 TÀI LIỆU THAM KHẢO 128 PHỤ LỤC TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com BẢNG DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BSA Albumin huyết bò (Bovine serum albumine ) CDC Trung tâm kiểm soát ngăn ngừa bệnh dịch (Centers of Disease Control and Prevention) Con A Concanavalin A (lectin từ Đậu rựa – jack bean) Gal Galactose GalNAc N- acetylgalactosamine Glc Glucose GlcNAc N - acetylglucosamine Fuc Fucose FucNAc N – acety L- fucosamine Man Mannose ManNAc N- acety – D - Mannosamine Rha Rhamnose Rib Ribose HAA Hoạt độ ngƣng kết hồng cầu (Hemagglutinating activity ) HĐR Hoạt độ riêng HĐTS Hoạt độ tổng số KN Kháng nguyên LPS Lipopolysaccharide PAGE Điện di gel polyacrylamid (Polyacrylamide gel Electrophoresis ) PBS Phosphate buffered saline PCR Phản ứng chuỗi trùng hợp (Polymerase Chain Reaction) WGA Wheat germ agglutinin (lectin mầm lúa mỳ) TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 1.1 Tình hình ngộ độc thực phẩm Việt Nam 12 1.2 Các phân tử bề mặt tế bào có khả tƣơng tác với lectin 48 1.3 Một số đặc điểm quan trọng lectin việc ứng dụng thành sản 56 phẩm chẩn đoán vi sinh vật 2.1 Bảng kí hiệu chủng vi khuẩn phân lập đƣợc thực phẩm 64 3.1 Sự tƣơng tác lectin thực vật với vi khuẩn nghiên cứu 72 3.2 Tác dụng ức chế đƣờng lên dịch lectin thô 75 3.3 Kết phân lập Salmonella mẫu thức ăn 78 3.4 Kết phân lập Shigella nhóm thực phẩm 80 3.5 Kết phản ứng sinh hóa chủng E coli phân lập 82 3.6 Kết ngƣng kết với kháng huyết chủng nghiên cứu 83 3.7 Sự có mặt Staphylococcus aureus mẫu thức ăn 85 3.8 Kết thí nghiệm xác định enzym coagulase chủng phân lập 87 3.9 Tác dụng gây ngƣng kết lectin với Salmonella 89 3.10 Tác dụng gây ngƣng kết lectin với Shigella flexneri 92 3.11 Tác dụng gây ngƣng kết lectin với vi khuẩn E.coli 94 3.12 Sự tƣơng tác lectin với loài vi khuẩn Staphylococcus 97 3.13 Sự tƣơng tác lectin với vi khuẩn nghiên cứu 102 3.14 Kết loại bỏ protein tạp DCT lectin hạt Đậu ma pH 3.5 108 3.15 Kết loại bỏ protein tạp DCT lectin hạt Đậu ma pH 9.5 109 3.16 Kết tính đặc hiệu đƣờng lectin Đậu ma 116 3.17 Khả ngƣng kết vi khuẩn dịch thô chế phẩm hạt Đậu ma 117 3.18 Kết tinh chế lectin Tú cầu đỏ qua cột DE – 52 120 3.19 Kết tính đặc hiệu đƣờng lectin Tú cầu đỏ 122 3.20 Tác dụng gây ngƣng kết lectin Tú cầu với vi khuẩn nghiên cứu 123 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình Trang 1.1 Hình thái vi khẩn Salmonella dƣới kính hiển vi điện tử 17 1.2 Thành phần kháng nguyên vi khuẩn Salmonella 17 1.3 Cấu trúc kháng nguyên O Salmonella O6,7 19 1.4 Cấu trúc kháng nguyên O Salmonella O62 ssp.arizonae 19 1.5 Cấu trúc kháng nguyên O Shigella flexneri serotype Y 23 1.6 Mơ hình cấu tạo độc tố vi khuẩn Shigella 24 1.7 Sự xâm nhập Shigella tế bào biểu mô ruột 25 1.8 Cấu trúc oligosaccharide (1) O-polysaccharide (2) E coli 27 O150 1.9 Cấu trúc lớp glycan Staphylococcus aureus 31 1.10 Vị trí liên kết đặc hiệu đƣờng Gal/GaNAc loại lectin họ Đậu 44 1.11 Lectin ConA ngƣng kết với E coli gián tiếp qua đƣờng mannose 50 2.1 Đồ thị biểu diễn mối tƣơng quan mật độ quang học nồng độ 68 protein chuẩn theo phƣơng pháp Lowry 3.1 Kết phản ứng sinh hố chủng Salmonella phân lập 79 3.2 Hình dạng tế bào chủng Shigella 80 3.3 Kết phản ứng sinh hoá chủng Shigella 80 3.4 Hình thái khuẩn lạc tế bào E.coli 81 3.5 Kết phản ứng sinh hóa E.coli 82 3.6 Hình ảnh khuẩn lạc S aureus mơi trƣờng Chapman 84 3.7 Hình ảnh tế bào chủng S aureus phân lập 85 3.8 Hình ảnh khuẩn lạc S aureus môi trƣờng Baird-Parker chứa 86 lỏng đỏ trứng gà 3.9 Kết ngƣng kết lectin thực vật với chủng Salmonella TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 90 3.10 Hình ảnh ngƣng kết nhóm lectin thực vật với chủng E coli 95 3.11 Sơ đồ khoá định loại chủng vi khuẩn E coli 96 3.12 Sơ đồ khoá định loại chủng thuộc chi Staphylococcus 101 3.13 Sơ đồ khoá định loại tổng quát loài vi khuẩn nghiên cứu 104 3.14 Sắc ký đồ ĐM-CP2 cột CM-Sephadex 110 3.15 Ảnh điện di lectin hạt Đậu ma 111 3.16 Ảnh hƣởng pH lên hoạt độ lectin hạt Đậu ma 113 3.17 Độ bền với pH lectin hạt Đậu ma 113 3.18 Độ bền với nhiệt lectin hạt Đậu ma 114 3.19 Sắc kí đồ cột DE - 52 Cellulose dịch chiết thô Tú cầu đỏ 118 3.20 Ảnh điện di lectin Tú cầu đỏ 119 3.19 Ảnh hƣởng pH lên chế phẩm lectin Tú cầu đỏ 120 3.20 Ảnh hƣởng nhiệt độ lên chế phẩm lectin Tú cầu đỏ 121 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Bảng 1: Khảo sát hoạt tính gây ngƣng kết hồng cầu ngƣời số loài thực vật hai mầm (Chú thích: TH: tan huyết, O: khơng gây ngưng kết) Hoạt tính ngƣng kết hồng cầu (HAA) TT Họ I II Annonaceae (Họ Na) Tên khoa học Apiaceae (Họ Hoa tán) 10 11 Bộ phận dùng Nhóm máu A Nhóm máu B Nhóm máu O Mẫu thơ Mẫu xử lý nhiệt Mẫu thô Mẫu xử lý nhiệt Mẫu thô Mẫu xử lý nhiệt III IV V VI VII VIII IX X XI Annona squamosa L Na Hạt 0 0 0 Angelica dahurica Bạch 160 160 80 Centalla asiatica Rau má Củ Thân 320 0 0 Lá 0 0 0 Lá 0 0 0 Hoa sữa Lá 0 0 0 Ngũ gia bì Lá TH TH TH TH TH TH Mây Hạt 640 640 640 Mã thầy Củ 2560 1280 5120 Cải xanh Củ cải trắng Hạt 0 0 0 Hạt 0 0 0 Allamanda cathartica L Apocynaceae (Họ Dừa cạn) Tên thƣờng gọi Nerium oleander Alstonia scholaris Araliaceae Cortex acanthopanacis (Họ Cam Tùng ) Radicis Arecaceae Rhapis excelsa (Thunb.) (Họ Cau) Henry ex Rehd Asteraceac Heleocharis dulcis (Họ Cúc) (Burm.f.) Brassica juncea L Brassiacaceae (Họ Cải) Raphanus sativus L Móng rồng Trúc đào 142 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Tiếp bảng I II V VI VII VIII IX X XI Trám đen Hạt 320 320 320 320 640 320 Trám xanh Hạt 160 80 160 80 160 80 Thảo minh Hạt 80 40 80 40 80 40 Măng cụt Hạt 5120 5120 5120 Bí đỏ Lá 0 0 0 Gấc Hạt TH TH TH TH TH TH Dƣa lê Thiên hoa phấn Hạt 0 0 0 Hạt 40 0 0 Bischofia Javanica Blume Ricinnus communis Lablab purpureus (L.) Sweet Subsp purpureus Vigna unguiculata L Nhội Hạt 640 320 640 640 Thầu dầu Đậu ván trắng Đậu đen Hạt 320 160 160 160 160 160 Lá 5120 5120 5120 Hạt 640 2560 10240 Vigna angularis Ohwi Đậu đỏ Hạt 20480 40960 40960 Caesalpinia sappan L Tô mộc Lá 640 1280 640 26 Samanea saman Lá 0 0 0 27 Cacssia Puleherima SW Muồng ngủ Kim phƣợng Hạt 0 40 40 0 12 13 14 15 16 17 18 Burseraceae (Họ Râm) 21 Euphorbiaceae (Họ Thầu dầu) 23 25 Canarium nigrum Engler Canarium album Raeusch Radix trichosantes 22 24 IV Caesalpiniaceae Cassia tora L (Họ Vang) Clusiaceae Garcinia mangostara L (Họ Măng cụt) Cucurbita moschata Momordica Cucurbitaceae cochinchinensis (Họ Bầu bí) Cucumis melo 19 20 III Fabaceae (Họ Đậu) 143 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com I II III V VI VII VIII IX X XI Lá 0 0 0 Hạt 20480 40 0 0 Lá 5120 5120 5120 Castanea sativa Hạt dẻ Trùng Khánh Hạt 1280 1280 1280 Illicium verum Hook Hoa hồi Quả 0 80 80 Pogostemon cablin Benth Hoắc hƣơng Hạt 80 40 80 640 320 640 320 640 320 0 0 0 Lá 40 40 0 0 Hạt 1280 320 640 320 1280 320 Hạt 0 0 0 Đậu bắp Thân 160 160 320 160 640 160 Corchsus olitorius Rau đay Hạt 20480 320 20480 320 20480 320 Aglaia odorata Lour Ngâu Lá 0 0 0 28 Mirnosa pudica L 29 Phaseolus lunatus L 30 Peuraria Phaseoloides 31 32 33 Fagaceae (Họ Sồi) Illiciaceae (Họ Hồi) Labiatae (Họ Hoa môi) 34 35 Lauraceae (Họ Nguyệt quế) 36 37 38 39 40 41 Cinnamomum cassia Litsea glutinosa Lythraceae (Họ Bằng lăng) Malvaceae (Họ Cẩm Quỳ) Meliaceae (Họ Xoan) Lagerstroemia speciosa Lagerstroemia speciosa (L.) Pers Abelmoschus esculentus IV Trinh nữ Đậu ngự Đậu ma Quế Quế Bời lời nhớt Bằng lăng nƣớc Bằng lăng tím Vỏ thân Lá 144 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Tiếp bảng I II 42 43 44 Moraceae (Họ Dâu tằm) 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 Muntingiaceae (Họ Trứng cá) Myrsinaceae (Họ Đơn nem) Oleaceae (Họ Nhài) Paeoniaceae (Họ Mẫu đơn) Piperaceae (Họ Hồ tiêu) Polygonacaea (Họ Rau dăm) 55 56 57 Rosaceae (Họ Hoa hồng) III Artocarpus integrifolia L Ficus glomerata IV V VI VII VIII IX X XI Mít mật Hạt 655360 655360 2621440 Sung Quả 0 0 0 Morus alba Dâu tằm Hạt 1280 640 320 Lá 320 0 0 Lá 1280 40960 160 40960 160 Broussonetia tapiri Vent Dƣờng Artocarpus heterophyllus Mít dai Lam Muntingia calabura Trứng cá Lá 320 80 320 80 320 80 Maese indicawal Đơn cƣa Lá 0 0 0 Jasminum Sambac Ait Hoa nhài Lá 20480 40 40960 40 20480 Paeonia lactiflora Mẫu đơn Hạt 40 40 40 Piper nigrum L Hạt tiêu Hạt TH TH TH TH TH TH Piper lolot Lá lốt 0 0 0 Polygonum odoratum Rau dăm 0 0 0 Antigonon leptopus Hoa ti gôn Quả Thân Hoa 40 40 40 40 0 Rubus fruticosus Mâm xôi Lá 0 0 40 Prunus armeniaca L Prunus persica (L) Batsch Hạnh nhân Lá 0 0 0 Đào Hạt 80 80 80 145 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Tiếp bảng I II III IV V VI VII VIII IX X XI Ixora chinensis Lamk Đơn trắng Chi tử (Dành dành) Dây mơ Lá 640 160 320 160 320 160 Hạt 320 320 320 Lá 0 0 0 Bƣởi bung Lá 0 0 0 Hồng bì Hạt 2560 1280 1280 Vải Hạt 2560 160 2560 160 2560 160 Nhãn Hạt 80 80 80 80 160 80 Kỷ tử Hạt 40 0 0 Khoai tây Củ 640 80 320 80 640 80 Theaceae Camellia sinensis Chè xanh (Họ Chè) Tactona grandis L Tếch Verbenaceae (Họ Cỏ roi Mạn kinh Vitex trifolia L ngựa) tử Vitaceae Vitis vinifera Nho (Họ Nho) Tỷ lệ mẫu ngưng kết với nhóm máu Lá 640 640 320 Lá 160 0 160 Lá TH TH TH TH TH TH Hạt 20480 320 10240 320 20480 58 59 Rubiacaea (Họ Thiến thảo) 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 Rutaceae (Họ Cửu lý hƣơng) Sapindaceae (Họ Bồ hòn) Solanaceae (Họ Cà) Gardenia jasminoides ellis Pea deriatomen tusa Glycosmis pentaphylla Corr Clausena lansium (Lour.) Skeels Litchi chinensis Sonn Dimocarpus longan Lour Lycium barbarum L Solanum tuberosum L 61,43% 54,29% 54,29% Tỷ lệ mẫu có hoạt tính cao 20,00% 21,43% 20,00% Tỷ lệ mẫu đặc hiệu với nhóm máu 7,14% 1,43% 146 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Bảng 2: Hoạt tính gây ngƣng kết hồng cầu thỏ số thực vật mầm (Chú thích: TH: tan huyết, O: khơng gây ngưng kết) Hoạt tính ngƣng kết hồng cầu (HAA) Mẫu xử Mẫu thô lý nhiệt VI VII TT Họ Tên khoa học Tên thƣờng gọi Bộ phận dùng I II III IV V C.esculenta var.antiquorum Schott Củ 5120 80 Colocasia india Harsk Củ 2560 80 Anthurium andraenum Lind Khoai Sọ Khoai mơn trắng Khoai mơn tím Củ 320 Colocasia esculenta (L) Schott Khoai nƣớc Củ 1280 80 Amorphophalus konjac K Koch Khoai Lệ Phố Thân củ 320 Pistia stratiotes L Bèo Thân 40 Typhonium flagelliorme (Lodd) Bl Bản hạ roi Thân củ 2506 Aglaonema siamense Engl Vạn Niên Thân củ 0 Alocasia odora (Roxb.) C Koch Dọc mùng Củ 160 40 Thân 0 Allium sativum L Tỏi ta Củ 80 Allium fistulosum L Hành ta Củ 1280 40 Allium cepa L Hành tây Củ 640 40 14 Allium porrum L Tỏi tây Lá 1280 40 15 Allium tuberrosum Rott.et Spreng Hẹ Thân hành 0 Araceae (Họ Ráy) 10 11 12 13 Alliaceae (Họ Hành) 147 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Bảng –tiếp I II III IV V VI VII Haemanthus mutiflorus Củ 20480 320 Củ 1280 Củ 5120 320 Lá 0 18 Zephyranthes candida Herb 19 Dracaena fragrans (L.) Ker.-Gawl Tú cầu Phong huệ hồng Phong huệ trắng Thiết mộc lan Blumea lanceolaria (Roxb) Xƣơng Sông Lá 0 Enydra fluctuans Lour Ngổ hƣơng Lá 0 Vỏ 640 Thịt 1280 Chồi 1280 Thân 1280 320 Thân 2560 160 Lá 1280 160 16 17 20 Amaryllidaceae ( Họ Thủy tiên) Asteliaceae (Họ Cúc) 21 Zephyranthes candida Herb 22 23 Bromeliaceae (Họ Dứa) Bromelia karatas Dứa 24 25 26 27 Commelinaceae ( Họ Thài lài) 28 29 30 31 Crassulaceae (Họ Tai hùm) Iridaceae (Họ Lay ơn) Musacea (Họ Chuối) Tradescantia spathacea Sw Lẻ bạn Tradescantia zebrina Thài lài tía Commelina coelestis Thài lài trắng Lá 1280 40 Cotyledon glanca Baker Hoa đá Lá 320 Belamcanda chinensis L Rẻ quạt Lá 320 40 Musa troglodytarum Quả chuối tiêu Quả xanh 5120 2560 148 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Bảng – tiếp I 32 33 II Orchidaceae (Họ Lan) III Spathiphyllum sensation IV Lan ý V Lá VI 160 VII Cymbidium aloifolium (L.) Sw Lan tai voi Lá 160 34 Pontederiaceae (Họ Cỏ cá chó) Eichhornia crassipes Bèo tây Thân rễ 0 35 36 37 Zinggiberaceae (Họ gừng) Zingiber officinale Rosc Curcuma longa L Curcuma zedoaria (Berg.) Rosc Gừng Nghệ vàng Nghệ đen Củ Củ Thân củ 80 0 0 Phrynium placentarium Dong Củ 2560 80 Dendrocalamus asper Cymbopogon spreng Tre Xả Măng Củ 327680 5120 160 80 Garcinia multiflora Champ Dọc Quả 2560 640 Ipomoea batatas Khoai Lang Củ 5120 160 Trapa bicornis L Ấu Củ 0 Dioscorea esculenta Burk Củ Từ Củ 0 Sansevieria triasciata prain var Lƣỡi hổ Lá 80 Tỷ lệ mẫu ngưng kết hồng cầu 76% 44,44% Tỷ lệ mẫu có hoạt tính cao 26,67% 38 39 40 41 42 43 44 45 Marantaceae (Họ Dong) Poaceae (Họ Tre) Clusiaceae ( Họ Bứa) Convolvulaceae (Họ Bìm bìm) Hydrocaryaceae (Họ Ấu) Dioscoreaceae (Họ Củ nâu) Agavaceae (Họ Thùa) 149 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Thành phần mơi trƣờng thí nghiệm xác định vi khuẩn - Thạch Chapman medium ( Manitol – Salt agar ) Thành phần g/lít Pepton 5g Cao thịt 1g NaCl 65g Đƣờng Manitol 10g Đỏ Phenol 0,025g Thạch 12g Nƣớc cất 1000ml - Môi trƣờng thạch Baird – Parker Thành phần g/lít Pepton 10g Cao thịt bò 5g Cao nấm men 1g Lithium chlorit 5g Thạch 20g Natri Sulfamethazine 0,055g Nƣớc cất 1000ml Sau chuẩn bị mơi trƣờng hồn thiện : Đun chảy giữ nhiệt độ (45-500C) 90ml môi trƣờng bản, cho thêm vào mơi trƣờng dung dịch : Dung dịch glycin 20% 6,3ml Dung dịch potassium tellurit 1% 1ml Dung dịch Natri pyruvate 20% 5ml Dung dịch lòng đỏ trứng thể sữa 5ml - Thạch DC (Decarboxylase) Thành phần g/lít Peptone gelysate Cao nấm men 150 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Glucose Bromocresol purple Nƣớc cất 1lít Đun hồ tan chất Chỉnh pH = 6,5 - Môi trƣờng KIA (Kligler Iron Agar) Thành phần g/lít Peptone 20 Lactose 20 Dextrose NaCl Ferric ammonium citrate 0,5 Sodium thiosulfate 0,5 Agar 15 Phenol red 15 Nƣớc cất 1lít Đun nóng hồ tan chất Chỉnh pH = 7,4 - Môi trƣờng Manit di động (Mannitol Salt Agar) Thành phần g/lít Cao thịt Polypeptone 10 NaCl 75 Mannitol 10 Phenol red 0,025 Agar 15 Nƣớc cất lít Làm nóng lắc nhẹ để hồ tan Chỉnh pH = 7,4 - Mơi trƣờng Ure-Indol Thành phần g/lít L-Triptophan Photphat monoopotasic Photphat dipotasic Natri clorua (NaCl) Ure 20 151 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Phenol red cồn 2ml Đun chất với 1000 ml nƣớc cất 50-600C Chỉnh pH = 7,2 - Môi trƣờng Lysin decacboxylaza (LDC) Thành phần g/lít L-Lysine HCl 0,5 Dextrose 0,5 KH2PO4 0,5 Nƣớc cất 100ml Hoà tan thành phần Chỉnh pH = 4,6 - Môi trƣờng Simmons Citrate Thành phần g/lít Sodium citrate NaCl K2HPO4 NH4H2PO4 MgSO4 0,2 Bromothymon Blue 0,08 Agar 15 Nƣớc cất 1lít Đun nóng nhẹ lắc cho tan chất Chỉnh pH = 6,8 + + + + + + Sinh Indol + + + + + Môi trƣờng UreIndol Urease + Di động + + + + + Lên men mannitol Lên men Chủng lactose - Sinh H2S + + + + + Môi trƣờng Mannitol Sinh 3.3 5.2 5.3 27.1 27.3 30.2 Môi trƣờng Klingler Lên men glucose Kí hiệu chủng Bảng Kết phản ứng sinh hóa chủng Salmonella phân lập - + - Sử Phản dụng ứng Lysine citrate decarbo MT xylase Kết luận ban đầu Citrate simon + - + + + + + Chƣa xác định Salmonella Salmonella Salmonella Chƣa xác định Chƣa xác định 152 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 30.6 32.2 33.2 34.2 38.1 39.1 40.4 40.5 42.2 43.2 43.4 44.5 52.3 55.1 55.2 59.3 60.5 61.1 62.4 63.4 63.5 64.1 65.1 72.1 72.4 75.1 75.2 77.2 77.3 79.2 79.3 83.1 83.2 86.3 86.4 89.1 89.3 90.3 93 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + - + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + - + + + + + + + - + + + + - + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Chƣa xác định Salmonella Salmonella Chƣa xác định Chƣa xác định Chƣa xác định Chƣa xác định Chƣa xác định Salmonella Chƣa xác định Salmonella Chƣa xác định Salmonella Salmonella Chƣa xác định Chƣa xác định Salmonella Chƣa xác định Chƣa xác định Chƣa xác định Salmonella Chƣa xác định Salmonella Chƣa xác định Chƣa xác định Chƣa xác định Chƣa xác định Salmonella Chƣa xác định Chƣa xác định Chƣa xác định Chƣa xác định Chƣa xác định Chƣa xác định Chƣa xác định Chƣa xác định Chƣa xác định Chƣa xác định Salmonella Chú thích: + phản ứng dương tính - phản ứng âm tính 153 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Bảng Kết xác định phản ứng sinh hoá chủng Shigella phân lập + _ + + + + + + + _ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ + _ _ + _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ + _ _ + + _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ + + _ _ Sinh Indol + _ + + + + + + + _ + + + + + + + + + + + + + _ + + + + + + + + + + + + + + Urease _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ Di động 2-(2) 5-(2) 29-(1) 29-(2) 30-(3) 31 33-(3) 38-(3) 39-(5) 41-(2) 42-(1) 43-(2) 43-(3) 44-(5) 48-(4) 52-(4) 58-(3) 59-(3) 60-(1) 62-(1) 63-(1) 64-(3) 72-(4) 77-(1) 78-(3) 79-(3) 83-(3) 86-(1) 86-(4) 88 89-(2) 91-(3) 92-(1) 93 95-(2) 97-(1) 99 Lên men mannitol 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 Phản ứng sinh hố Mơi trƣờng Môi trƣờng Manitol Ure-Indol Sinh H2S Chủng nghi ngờ Lên men glucose Lên men lactose Sinh TT Môi trƣờng Kligler Iron Agar _ _ _ _ + _ _ _ _ _ + _ + _ _ + _ + _ + _ _ _ _ _ + _ _ _ _ + _ _ + _ _ + _ Phản ứng Lysine decarbo xylase _ + _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ + + _ _ _ + _ _ _ _ + _ + _ _ _ Sử dụng citrate MT Citrate simon _ + + + _ + _ + + + + _ _ + + _ _ + _ + + _ _ + _ _ _ + _ _ + _ + + + _ + + Chú thích: + phản ứng dương tính - phản ứng âm tính 154 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Bảng Kết thí nghiệm xác định enzym coagulase chủng S aureus phân lập STT Kí hiệu chủng Trên lam kính 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 11 12 17 18 20 23 25 27 29 32 36 37 39 43 46 47 49 55 57 59 61 64 69 71 77 79 88 93 94 99 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Chú thích : Trên lam kính : Trên ống nghiệm - 6h Sau 24h 4+ 3+ 3+ 4+ 3+ 3+ 4+ 3+ + 3+ 4+ 3+ 3+ 3+ 4+ 3+ + 4+ 3+ 4+ 2+ + 4+ 2+ 2+ 4+ + + 2+ 4+ 2+ 2+ 2+ 4+ 2+ + 4+ 2+ Kết luận ban đầu * ** * * * * * ** * * * * * ** * * * * * ** * * * * * * * ** * * * ** * * (+) : Sau vài giây tụ cầu tụ lại với (-) : Khơng có tượng 155 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Trên ống nghiệm : Huyết tương đơng cứng sau 46h, khó di động 4+ Xác định S aureus (**) Huyết tương đông không sau 6h, dễ di động 3+ Không xem S aureus (*) Không đông sau 24h 2+ Không xem S aureus (*) Đông thành cục nhỏ, không liên kết khối 1+ Không xem S aureus (*) - Không xem S aureus (*) Khơng có tượng 156 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com ... NHIÊN Mai Thị Đàm Linh NGHIÊN CỨU PHÁT HIỆN LECTIN THỰC VẬT CÓ KHẢ NĂNG NGƢNG KẾT ĐẶC HIỆU VỚI MỘT SỐ VI KHUẨN GÂY NHIỄM ĐỘC THỰC PHẨM PHỔ BIẾN Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 62 42 40 01 LUẬN... tác đặc hiệu với nhóm vi khuẩn gây ngộ độc thực phẩm phân lập Vi? ??t Nam Tinh chế, xác định đƣợc số tính chất lectin có biểu tƣơng tác đặc hiệu với vi khuẩn, bƣớc đầu xây dựng quy trình phát vi khuẩn. .. vi khuẩn gây ngộ độc thực phẩm phản ứng ngƣng kết với lectin Những đóng góp luận án: Đây cơng trình nghiên cứu cách tồn diện nhóm lectin thực vật gây ngƣng kết đặc hiệu với số vi khuẩn gây bệnh