Đánh giá khả năng thay thế của mẫu huyết tương Heparin cho mẫu huyết thanh đối với các xét nghiệm AFP, CEA, Hybritech PSA và Free PSA trên máy Beckman Coulter DxI800

Hiện nay, đối với các xét nghiệm hóa sinh, bệnh phẩm mẫu huyết tương chống đông Heparin đang dần thay thế loại mẫu huyết thanh do có ưu điểm về thời gian xử lý mẫu, tránh phải lấy nhiều loại ống mẫu gây lãng phí và sự không hài lòng từ người bệnh. Mục đích của nghiên cứu là đánh giá khả năng thay thế của hai loại mẫu với nhau đối với các xét nghiệm AFP, CEA, Hybritech PSA và Free PSA trên máy trên máy Beckman Coulter DxI 800.

HỘI NGHỊ KHOA HỌC LẦN THỨ XXIV CỦA HỘI HÓA SINH Y HỌC HÀ NỘI VÀ CÁC TỈNH PHÍA BẮC White, T J et al, 1990, Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA Genes for phylogenetics, PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, chapter 38, 315-322 Jun Fang et al, 2020, Extracts of Phellinus linteus, Bamboo (Sasa senanensis) Leaf and Chaga Mushroom (Inonotus obliquus) Exhibit Antitumor Activity through Activating Innate Immunity, Nutrients, 12, 2279 Jung-Ok Kim et al, 2008, Antioxidative and Biological Activity of Hot Water and Ethanol Extracts from Phellinus linteus, J Korean Soc Food Sci Nutr, 37(6), 684-690 ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG THAY THẾ CỦA MẪU HUYẾT TƯƠNG HEPARIN CHO MẪU HUYẾT THANH ĐỐI VỚI CÁC XÉT NGHIỆM AFP, CEA, HYBRITECH PSA VÀ FREE PSA TRÊN MÁY BECKMAN COULTER DxI800 Điêu Thị Thúy Chuyên*, Nguyễn Gia Bình*, Nguyễn Văn Đam**, Đỗ Văn Toản**, Nguyễn Văn Tính*, Hồng Mạnh Hưng** TĨM TẮT 21 Hiện nay, xét nghiệm hóa sinh, bệnh phẩm mẫu huyết tương chống đông Heparin dần thay loại mẫu huyết có ưu điểm thời gian xử lý mẫu, tránh phải lấy nhiều loại ống mẫu gây lãng phí khơng hài lịng từ người bệnh Tuy nhiên, có số xét nghiệm miễn dịch q trình sản xuất nhà sản xuất khơng đánh giá xét nghiệm với loại mẫu huyết tương chống đơng Heparin Do mục đích nghiên cứu đánh giá khả thay hai loại mẫu với xét nghiệm AFP, CEA, Hybritech PSA Free PSA máy máy Beckman Coulter DxI 800 **Khoa xét nghiệm, bệnh viện Vinmec Time *Khoa Sinh hóa - Miễn dịch, Bệnh viện K sở Tân Triều Chịu trách nhiệm chính: Nguyễn Văn Đam Email: nguyenvandam13@gmail.com Ngày nhận bài: 25.11.2021 Ngày phản biện khoa học: 27.11.2021 Ngày duyệt bài: 30.11.2021 146 Để đánh giá độ xác, với xét nghiệm, sử dụng mẫu sẵn có bệnh nhân định thực xét nghiệm thường quy khoa hai loại ống mẫu: mẫu huyết mẫu huyết tương chống đông Heparin để đánh giá Để đánh giá độ chụm, độ ổn định mẫu, mẫu huyết tương chia nhỏ bảo quản nhiệt độ -20oC, mẫu chạy lặp lại lần ngày ngày liên tiếp Để đánh giá độ tuyến tính, mẫu huyết tương bệnh nhân có nồng độ cao trộn với mẫu bệnh nhân có nồng độ thấp để mẫu trộn Để xác nhận việc có khả thay loại mẫu, giới hạn chấp nhận xét nghiệm AFP, CEA, Hybritech PSA Free PSA 11.8, 14.3, 18.7 18.7% độ chệch 6.2, 6.4, 9.1 9.1% độ chụm Kết sử dụng mẫu huyết tương chống đông Heparin cho thấy mức sai số độ độ chụm mức chấp nhận được, đồng thời khơng ảnh hưởng tới dải phân tích xét nghiệm TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 509 - THÁNG 12 - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2021 Có thể sử dụng mẫu huyết tương chống đơng Heparin thay cho mẫu huyết xét nghiệm AFP, CEA, Hybritech PSA Free PSA máy Beckman Coulter DxI 800 SUMMARY EVALUATION OF INTERCHANGEABILITY BETWEEN SERUM AND HEPARIN PLASMA FOR AFP, CEA, HYBRITECH PSA AND FREE PSA TESTS ON BECKMAN COULTER DxI800 Nowaday, for biochemistry tests, there is a trend that heparin plasma might be alternative to serum due to some of its advantages including reducing turn-around time and blood waste and raising patient customers’ satisfaction However, some immunoassays have not evaluted for heparine plasma by its manufacturer Thus, this study aimed to evaluate the heparin plasma alternative to serum for AFP, CEA, Hybritech PSA and Free PSA on Beckman Coulter DxI 800 To evaluate accuracy, for each test, using avaliable tested tubes of serum and heparin plasma to it After preanalytical process, all tubes were analyzed To evaluate precision and also the stability of the analyte in plasma tube, plasma samples were split into cups which were run in consecutive days, and times per day To evaluate liniearity range, high level plasma were mixed with low level plasma of each test to generate more samples that have levels between original ones To detemine the interchangeability is acceptable, allowable bias and allowables precision of AFP, CEA, Hybritech PSA and Free PSA are 11.8, 14.3, 18.7, 18.7% for bias and 6.2, 6.4, 9.1, 9.1% for precision Alls evaluations are acceptable for pricision, bias and linearity range Conclusion: heparin plasma can be used as alternative to serum for AFP, CEA, Hybritech PSA and Free PSA tests on máy Beckman Coulter DxI 800 I ĐẶT VẤN ĐỀ Ước tính khoảng 70% định lâm sàng dựa kết phòng xét nghiệm [1] Thời gian trả kết yếu tố quan trong việc chẩn đoán điều trị kịp thời việc giảm thời gian chờ đợi bệnh nhân, đặc biệt bệnh nhân cấp cứu Tuy theo nghiên cứu Q-probes thực vào năm 2016 [2] thời gian trả kết xét nghiệm chưa đáp ứng kỳ vọng Bác sĩ lâm sàng Trong bối cảnh đó, phịng xét nghiệm thường xun phải đối mặt với vấn đề liên quan đến thời gian trả kết Hiện Việt Nam giới, khoa xét nghiệm sinh hóa, huyết tương mẫu bệnh phẩm phổ biến sử dụng chung cho máy xét nghiệm sinh hóa miễn dịch [3] Cho mẫu huyết coi tinh không bị nhiễu yếu tố cation (NH4+, Na+, K+,Li+), phức hợp kim loại với EDTA, Citrate, … [4], lựa chọn tốt cho xét nghiệm miễn dịch mẫu huyết Nhưng đặt hai vấn đề, kéo dài thời gian trả kết mà ống huyết yêu cầu 10-15 phút chờ hình thành cục đơng hồn tồn trước ly tâm [5] hai bệnh nhân phải lấy ống xét nghiệm huyết huyết tương để thực xét nghiệm hóa sinh Theo yêu cầu Hiệp hội nhà Bệnh học Hoa Kỳ (College of American Pathologists-CAP) [6], xét nghiệm mà bị thay đổi so với hướng dẫn sử 147 HỘI NGHỊ KHOA HỌC LẦN THỨ XXIV CỦA HỘI HĨA SINH Y HỌC HÀ NỘI VÀ CÁC TỈNH PHÍA BẮC dụng phê duyệt/ thông qua FDA (approved/cleared FDA), phòng xét nghiệm phải xác nhận lại thiết lập độ xác, độ chụm, khoảng phân tích xét nghiệm Vì vậy, xét nghiệm muốn thay loại mẫu khuyến cáo nhà sản xuất phải đánh giá lại độ đúng, độ chụm khoảng phân tích loại mẫu Trong nghiên cứu này, mục tiêu đánh giá khả thay loại bệnh phẩm huyết tương chống đông Lithium heparin với loại bệnh phẩm huyết với xét nghiệm AFP, CEA, hybritech PSA Free PSA máy xét nghiệm máy Beckman Coulter DxI 800 II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Thu thập mẫu Với mẫu xét nghiệm bệnh nhân, sau thực xét nghiệm thường quy định bác sĩ lâm sàng, tiến hành lựa chọn mẫu huyết có nồng độ bao phủ dải tuyến tính, đồng thời tìm ống huyết tương chống đơng Heparin bệnh nhân để chạy đối chiếu với ống huyết tương ứng Như khuyến cáo Viện tiêu chuẩn xét nghiệm Lâm sàng (Clinical Laboratory Standards Institutes – CLSI EP 09A3) [7], quy trình chúng tơi lựa chọn 30, 34, 34 34 cặp mẫu (huyết huyết tương chống đông Heparin) tương ứng với xét nghiệm AFP, CEA, PSA free PSA để đánh giá Tại khoa Sinh hóa - Miễn dịch, chúng tơi sử dụng loại ống mẫu: (1) Ống huyết tương Lithium Heparin V-tube ml (2) Ống huyết VACUETTE® TUBE 3.5 ml CAT Serum Separator Clot 148 Activator Theo hướng dẫn CLSI EP 15A3 [8], xét nghiệm chọn mẫu huyết tương ngưỡng định lâm sàng, mẫu lại chia làm ống nhỏ, bảo quản nhiệt độ -20oC Theo hướng dẫn CLSI EP 06A [9], xét nghiệm chọn mẫu huyết tương, mẫu có nồng độ cận ngưỡng dải tuyến tính, mẫu có nồng độ cận ngưỡng dải tuyến tính Từ mẫu trên, trộn lại thêm mẫu có nồng độ Phương pháp phân tích Ống huyết để đơng 30 phút nhiệt độ phịng sau ly tâm tốc độ 4500 vòng vòng 10 phút sử dụng máy ly tâm lạnh Hettich ROTINA 380R Ống huyết tương ly tâm tốc độ 4500 vòng 10 phút Bốn xét nghiệm AFP, CEA, hybritech PSA Free PSA thực máy Beckman Coulter DxI 800 (Beckman Coulter, USA) theo hướng dẫn nhà sản xuất Thiết bị DxI800 đặt khoa xét nghiệm Sinh hóa - Miễn dịch bệnh viện K sở Tân Triều Phân tích thống kê a Phân tích độ Áp dụng phương pháp phân tích hồi quy Passing-Bablok phân tích tương quan vào việc đánh giá mối liên hệ hai loại mẫu Trong phân tích hồi quy Passing- Bablok, khoảng tin cậy hệ số góc hệ số chắn tính toán dựa vào kỹ thuật bootstrap khuyến cáo CLSI EP 09A3 [7] Trong phân tích tương quan, hệ số tương quan Pearson sử dụng Tính tốn thực phần mềm Medcalc Version 20.015 b Phân tính độ chụm TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 509 - THÁNG 12 - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2021 Áp dụng phương pháp phân tích ANOVA để phân tích độ lặp lại tái lập mẫu huyết tương theo hướng dẫn CLSI EP 15A3[8] c Phân tích khoảng tuyến tính xét nghiệm Áp dụng phương pháp phân tích hồi quy tuyến tính hướng dẫn CLSI EP 06A3 [9] Nghiên cứu thực lượng mẫu (huyết tương huyết thanh) lại sau thực xét nghiệm thường quy bệnh nhân, hồn tồn khơng ảnh hưởng tới quyền lợi sức khỏe, tinh thần bảo mật thông tin bệnh nhân III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Đánh giá độ Kết đánh giá độ thể qua phân tích tương quan, phân tích hồi quy tuyến tính phân tích độ chệch (bảng 1) Tất xét nghiệm phân tích mức nồng độ từ thấp đến cao, bao phủ tất ngưỡng định lâm sàng Kết đánh giá cho thấy độ chệch tất thông số đánh giá nhỏ ngưỡng độ chệch mong đợi độ chệch lớn 7.2% từ thông số Free PSA Mối tương quan kết loại mẫu vô chặt chẽ, tất xét nghiệm có hệ số tương quan lớn 0.99 Phân tích hồi quy tuyến tính, hệ số góc tất xét nghiệm nằm khoảng 0.9-1.1, biểu đồ phân tích thể hình Đánh giá độ chụm Kết đánh giá độ chụm sử dụng phân tích ANOVA (bảng 2) Mỗi xét nghiệm đánh giá mức nồng độ gần ngưỡng định lâm sàng Mỗi mức chọn đánh giá chạy lặp lại lần ngày ngày liên tiếp Các thông số độ lặp lại xét nghiệm mức nồng độ tốt nhỏ ngưỡng độ chụm mong đợi Đồng thời với liệu phân tích độ tái lập nằm giới hạn độ chụm mong đợi cho thấy sử dụng ống huyết tương, bảo quản nhiệt độ -20oC nồng độ chất phân tích khơng thay đổi Đánh giá độ tuyến tính Kết phân tích hồi quy tuyến tính tương quan xét nghiệm thể qua hình Kết cho thấy mức độ tương quan đánh giá tuyến tính xét nghiệm có R lớn 0.99 hệ số góc nằm giới hạn 0.9– 1.1 Bảng 1: Bảng tổng hợp liệu phân tích so sánh kết ống huyết huyết tương chống đông Heparin Sai số Dải giá Hệ số Độ chệch Ngưỡng độ Xét Hệ số góc Hệ số chắn tổng cho trị đánh tương trung bình chệch mong nghiệm (95% CI) (95% CI) phépa giá quan R (%) đợia (%) (%) 0.989 -0.0223 AFP 1.4 (0.9375, (-0.2806, 0.997 3.3 11.8 21.9 (ng/mL) 2117.1 1.0613) 0.2406) 0.996 -0.114 CEA 0.9- 43.3 (0.9321, (-0.1940, 0.998 4.8 14.3 24.7 (ng/mL) 1.0545) 0.01244) 149 HỘI NGHỊ KHOA HỌC LẦN THỨ XXIV CỦA HỘI HÓA SINH Y HỌC HÀ NỘI VÀ CÁC TỈNH PHÍA BẮC Sai số Dải giá Hệ số Độ chệch Ngưỡng độ Xét Hệ số góc Hệ số chắn tổng cho trị đánh tương trung bình chệch mong nghiệm (95% CI) (95% CI) phépa giá quan R (%) đợia (%) (%) 1.035 0.00767 PSA 0.0 – (0.9879, (-0.01842, 0.998 5.1 18.7 33.6 (ng/mL) 73.4 1.1089) 0.03520) 1.070 0.0135 Free PSA 0.01 – (1.0467, (0.0009599, 0.999 7.2 18.7 33.6 (ng/mL) 6.53 1.1290) 0.02936) a Tiêu chuẩn ngưỡng độ chệch mong đợi Sai số tổng cho phép lấy theo tiêu chuẩn biến thiên sinh học Bảng 2: Bảng tổng hợp liệu phân tích độ chụm sử dụng mẫu huyết Độ chụm Mức nồng Độ tái Sai số tổng cho Xét nghiệm Độ lặp lại mong đợia độ lập phépa (%) (%) 12.84 2.73 3.03 6.2 21.9 AFP (ng/mL) 86.68 4.73 4.57 6.2 21.9 378 5.09 6.2 6.2 21.9 8.18 5.39 6.01 6.4 24.7 CEA (ng/mL) 44.62 3.37 3.37 6.4 24.7 670.3 4.69 6.35 6.4 24.7 1.27 3.12 5.2 9.1 33.6 PSA (ng/mL) 14 2.78 5.29 9.1 33.6 38.65 1.91 2.87 9.1 33.6 1.35 3.18 5.2 9.1 33.6 Free PSA 8.39 4.43 4.82 9.1 33.6 (ng/mL) 18.44 4.23 4.29 9.1 33.6 a Tiêu chuẩn ngưỡng độ chệch mong đợi Sai số tổng cho phép lấy theo tiêu chuẩn biến thiên sinh học 150 TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 509 - THÁNG 12 - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2021 Hình 1: Biều đồ hồi quy tuyến tính so sánh kết loại ống Hình 2: Biểu đồ tương quan hồi quy truyến tính đánh giá độ tuyến tính IV BÀN LUẬN Sự khác biệt kết sử dụng ống huyết tương ống huyết xét nghiệm nằm giới hạn độ ngưỡng độ chệch mong đợi (khác biệt khơng có ý nghĩa mặt lâm sàng) 11.8, 14.3, 18.7 18.7% tương ứng với xét nghiệm AFP, CEA, PSA Free PSA; kết tương đương với kết nghiên cứu Piere-Oliver Hétu cộng [10] Hệ số tương quan kết hai loại bệnh phẩm tốt, lớn 0.99 hệ số góc phân tích hồi quy tuyến tính nằm ngưỡng từ 0.9 đến 1.1 điều cho thấy hai loại bệnh phẩm có kết hồn tồn thay lẫn mà khơng ảnh hưởng đến việc chẩn đoán hay theo dõi điều trị cho bệnh nhân Kết đánh giá độ chụm sử dụng mẫu huyết tương cao khơng có ý nghĩa 151 HỘI NGHỊ KHOA HỌC LẦN THỨ XXIV CỦA HỘI HĨA SINH Y HỌC HÀ NỘI VÀ CÁC TỈNH PHÍA BẮC thống kê so với khảo sát nhà sản xuất thực mẫu huyết [11] Tất thông số độ chụm đạt yêu cầu ngưỡng độ chụm mong đợi 6.2, 6.4, 9.1 9.1% tương ứng với xét nghiệm AFP, CEA, PSA Free PSA Điều độ ổn định chất phân tích ống huyết tương chống đơng Heparin hồn tồn tương đương với ống huyết Việc sử dụng ống huyết tương hoàn tồn khơng ảnh hưởng đến giới hạn phân tích xét nghiệm, độ tuyến tính mẫu huyết tương tương đương với mẫu huyết Đánh giá hệ số tương quan thấp 0.99 hệ số góc nằm giới hạn 0.9- 1.1 V KẾT LUẬN Việc sử dụng ống huyết tương chống đông Heparin thay cho ống huyết khác biệt kết khơng có ý nghĩa mặt lâm sàng Đồng thời sử dụng ống huyết tương chống đông Heparin không gây ảnh hưởng đến ổn định chất phân tích mẫu khơng bị tác động giới hạn phân tích Ống huyết tương chống đơng Heparin sử dụng thay cho ống huyết xét nghiệm AFP, CEA, hybritech PSA Free PSA TÀI LIỆU THAM KHẢO Forsman RW Why is the laboratory an afterthought for managed care organizations? Clin Chem 1996;42:813–6 McCall SJ, Souers RJ, Blond B, Massie L Physician satisfaction with clinical laboratory 152 services: A College of American Pathologists Q-Probes study of 81 institutions Arch Pathol Lab Med 2016;140: 1098–103 Arslan FD, Karakoyun I, Basok BI, Aksit MZ, Baysoy A, Ozturk YK, et al The local clinical validation of a new lithium heparin tube with a barrier: BD Vacutainer® Barricor LH Plasma tube Banfi G, Bauer K, Brand W, Buchberger M, Deom A, Ehret W, et al Use of anticoagulants in diagnostic laboratory investigations and stability of blood, plasma and serum samples Geneva: WHO/ DIL/LAB/99.1 Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI GP44-A4 document: procedures for the handling and processing of blood specimens All Common Checklist CAP Accreditation Program Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI EP09-A3 document: measurement procedure comparison and bias estimation using patient samples Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI EP15-A3 document: User Verification of Precision & Bias Estimation Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI EP06-A3 document: Evaluation of Linearity of Quantitative Measurement Procedures 10 Hétu et al., “Improved Sample Quality and Decreased Turnaround Time When Using Plasma Blood Collection Tubes with a Mechanical Separator in a Large University Hospital.” 11 Beckman Coulter instruction for use  ... Lithium heparin với loại bệnh phẩm huyết với xét nghiệm AFP, CEA, hybritech PSA Free PSA máy xét nghiệm máy Beckman Coulter DxI 800 II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Thu thập mẫu Với mẫu xét nghiệm. .. dụng mẫu huyết tương chống đông Heparin thay cho mẫu huyết xét nghiệm AFP, CEA, Hybritech PSA Free PSA máy Beckman Coulter DxI 800 SUMMARY EVALUATION OF INTERCHANGEABILITY BETWEEN SERUM AND HEPARIN. .. (huyết huyết tương chống đông Heparin) tương ứng với xét nghiệm AFP, CEA, PSA free PSA để đánh giá Tại khoa Sinh hóa - Miễn dịch, sử dụng loại ống mẫu: (1) Ống huyết tương Lithium Heparin V-tube