Trong nghiên cứu này, tế bào H9C2 được sử dụng để gây mô hình bệnh thiếu máu-tái tưới máu cơ tim in vitro. Tác dụng bảo vệ tế bào cơ tim của Hesperidin được đánh giá thông qua tỉ lệ sống của tế bào và sự thay đổi hàm lượng cardiolipin màng trong ti thể.
BÁO CÁO KHOA HỌC VỀ NGHIÊN CỨU VÀ GIẢNG DẠY SINH HỌC Ở VIỆT NAM - HỘI NGHỊ KHOA HỌC QUỐC GIA LẦN THỨ DOI: 10.15625/vap.2020.00078 ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG BẢO VỆ CỦA HESPERIDIN ĐỐI VỚI TẾ BÀO CƠ TIM H9C2 TRONG TỔN THƯƠNG THIẾU MÁU- TÁI TƯỚI MÁU IN VITRO Ngô Thị Hải Yến1, Hồ Lý Phương1, Nguyễn Thị Hà Ly2, Phạm Thị Bích1, Vũ Thị Thu1,* Tóm tắt: Trong nghiên cứu này, tế bào H9C2 sử dụng để gây mơ hình bệnh thiếu máu-tái tưới máu tim in vitro Tác dụng bảo vệ tế bào tim Hesperidin đánh giá thông qua tỉ lệ sống tế bào thay đổi hàm lượng cardiolipin màng ti thể Kết thu nhận cho thấy Hesperidin nồng độ 5X 10X (X = 0,01562 mg/ml) làm tăng đáng kể khả sống thành phần cardiolipin màng ti thể nhóm tế bào H9C2 bị gây mơ hình bệnh so với đối chứng (p < 0.05) Kết nghiên cứu bước đầu Hesperidin chất tiềm bảo vệ tế bào tim chống lại tổn thương thiếu máu-tái tưới máu tim hướng đích ti thể Từ khóa: Cardiolipin, H9C2, hesperidin, ti thể ĐẶT VẤN ĐỀ Tổn thương tái tưới máu tim, cụ thể tổn thương tái cung cấp oxy (reoxygenation injury), tượng tổn thương mô tim gây tái thơng dịng đến mơ tim sau thời gian vùng mô bị thiếu máu ngừng cung cấp máu (Kalogeris et al., 2016) Nghiên cứu trước ti thể đóng vai trị quan trọng q trình sinh lý bệnh thiếu máu cục bộ-tái tưới máu (TMTTM) tim (Walters et al., 2012) Do vậy, bảo toàn chức ti thể cần thiết để hạn chế tổn thương cho tế bào tim, qua hạn chế tiến triển bệnh Trên thực tế, công việc sàng lọc tìm hoạt chất thiên nhiên có tác dụng bảo vệ tim hướng đích ti thể đạt nhiều thành tựu đáng kể cũng cần tiếp tục mở rộng nhằm tìm hoạt chất tiềm cũng tối ưu hóa điều kiện sử dụng thuốc có sẵn (Andrew et al., 2012) Hesperidin (flavanone-7-rhamnoglucoside, Hsd) flavanon glycosid có hàm lượng cao vỏ loại có múi (chi Cam chanh) (Peterson et al., 2006) Hsd chứng minh có tác dụng kháng viêm (Ansorge et al 2003), chống oxy hóa (Wilmsen et al., 2005), kháng virus (Saha et al., 2009) chống nấm (del Rio et al., 2004) Hợp chất cũng ghi nhận có vai trị quan trọng điều trị nhiều bệnh rối loạn thần kinh, rối loạn tâm thần, ung thư biểu mô đặc biệt bệnh tim mạch (Li C & Schluesener C, 2017) Tuy nhiên, tới thời điểm tại, sở khoa học liên quan đến tác dụng bảo vệ hướng đích ti thể Hsd mơ hình bệnh TMTTM tim in vitro sử dụng tế bào H9C2 chưa công bố Trong nghiên cứu này, khảo sát tác 1Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội Dược liệu Việt Nam *Email: vtthu2015@gmail.com 2Viện PHẦN II NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG SINH HỌC PHỤC VỤ ĐỜI SỐNG VÀ PHÁT TRIỂN XÃ HỘI 631 dụng Hsd mơ hình bệnh lý TMTTM thơng qua phân tích tỉ lệ sống tế bào H9C2 cấu trúc màng ti thể tế bào Kết thu cho thấy Hsd có tác dụng bảo vệ tế bào tim chuột H9C2 chống lại tổn thương TMTTM in vitro thơng qua việc trì ổn định cấu trúc ti thể Kết tiền đề cho phân tích chế phân tử đánh giá biểu gen tham gia điều hòa ti thể Hsd tổn thương TMTTM ĐỐI TƯỢNG - VẬT LIỆU, HÓA CHẤT, THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng - vật liệu Dòng tế bào tim phơi chuột H9C2 (hãng ATCC® - USA) tặng Trung tâm nghiên cứu bệnh chuyển hóa tim mạch, Trường Đại học Inje, Hàn Quốc (CMDC, Inje, Hàn Quốc) Hesperidin C28H34O15 sản phẩm tự nhiên có độ tinh khiết 95% (HPLC, tính theo % diện tích pic), cơng đoạn tách chiết thực Viện Dược liệu Việt Nam Nghiên cứu thực Trung tâm Khoa học sống, Khoa Sinh học, Phịng Thí nghiệm trọng điểm Cơng nghệ Enzym Protein, trường ĐHKHTN-ĐHQG Hà Nội 2.2 Hóa chất, thiết bị Mơi trường Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, Gibco, Mỹ); Photphate buffered saline (PBS, Gibco, Mỹ); Fetal bovine serum (FBS, Gibco, Mỹ); Cell Counting Kit-8 (CCK-8, Dojindo, Nhật Bản); Chất nhuộm thị cardiolipin màng ti thể 10-Nnonyl acridine orange (NAO, Invitrogen, Mỹ); Penicillin-Streptomycin (PS, Gibco, Mỹ); Dimethyl Sulfoxide (DMSO, Sigma, Mỹ); Đĩa nuôi cấy 60x15 mm, 90x20 mm, đĩa 96 giếng (SPL-Life Sciences, Hàn Quốc); Đĩa 96 giếng đen (Corning, Mỹ); Buồng khí hypoxia; Tủ ấm CO2; Kính hiển vi soi ngược Axiovert (Carl Zeiss, Đức); Máy đọc đĩa 96 giếng Spectramax plus 384 thiết bị, vật tư tiêu hao khác 2.3 Phương pháp nghiên cứu Nuôi cấy tế bào tim chuột H9C2 Tế bào tim chuột H9C2 (ATCC) nuôi cấy môi trường Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) 4,5g/l glucose có bổ sung 10% huyết phơi bị (FBS) 1% Penicillin-Streptomycin (PS) điều kiện 37 oC 5% CO2 Môi trường nuôi thay sau 1-2 ngày cấy chuyển tế bào cấy chuyển mật độ che phủ đĩa nuôi đạt 80% Gây mơ hình thiếu máu-tái tưới máu (TMTTM/HR) tim Mơ hình bệnh TMTTM tim in vitro gây cách thay đổi nồng độ oxy (thiếu oxy tái cung cấp oxy môi trường nuôi cấy, hypoxia/reoxygenation-HR) Điều kiện HR tạo cách sử dụng buồng hypoxia hỗn hợp khí (95% N2, 5% CO2) mô tả nghiên cứu trước (Ngô Thị Hải Yến nnk., 2019) Tế bào H9C2 nuôi đĩa 96 giếng với mật độ 5x103 tế bào/giếng Sau 24 h nuôi cấy, tế bào chia thành nhóm đối chứng nhóm thử nghiệm mơ sau: 632 BÁO CÁO KHOA HỌC VỀ NGHIÊN CỨU VÀ GIẢNG DẠY SINH HỌC Ở VIỆT NAM 1) Nhóm đối chứng nhóm tế bào ni điều kiện bình thường (DMEM, 10% FBS, 1% PS, 37 oC 5% CO2); 2) Nhóm thử nghiệm nhóm tế bào xử lý mơ hình HR Trong đó, nhóm HR tiếp tục chia thành nhóm: HR (tế bào ni điều kiện thiếu oxy h tái cung cấp oxy 36 h); Nhóm HR + Hsd (tế bào nuôi điều kiện thiếu oxy h, Hsd bổ sung thêm vào môi trường nuôi thời điểm tái cung cấp oxy tế bào tiếp tục nuôi 36 h 37 oC 5% CO2) Dải nồng độ Hsd sử dụng 1X, 5X, 10X, 15X với X= 0,01562 mg/ml Hsd hịa tan dung mơi DMSO; Nhóm DMSO nhóm tế bào xử lý HR có bổ sung DMSO 0,1% thời điểm tái cung cấp oxy Cuối thời điểm thí nghiệm, hình ảnh tế bào chụp nhờ sử dụng kính hiển vi soi ngược Axiovert Tỉ lệ sống tế bào xác định kít CCK-8 Thông số lipid màng ti thể đánh giá thị huỳnh quang NAO Mỗi thí nghiệm lặp lại lần Đánh giá khả sống tế bào CCK-8 Tỉ lệ sống tế bào xác định gián tiếp thông qua CCK-8 với nguyên lý WST-8 (highly water-soluble tetrazolium salt) CCK-8 bị khử hoạt động dehydrogenase tế bào sống tạo formazan màu cam Sau bước gây mơ hình HR (Ngơ Thị Hải Yến nnk., 2019), mẫu tế bào ủ với CCK-8 37 oC, 5% CO2 thời gian từ - h Tiếp đó, mẫu phân tích đo máy đọc đĩa 96 giếng bước sóng hấp thụ 450 nm Mỗi thí nghiệm lặp lại lần Đánh giá thành phần cardiolipin màng ti thể Thành phần cardiolipin màng ti thể đo gián tiếp kít huỳnh quang 10-N-nonyl acridine orange (NAO) Tế bào H9C2 nuôi cấy ổn định đĩa 96 giếng thành đen, đáy kính với mật độ 5.103 tế bào/giếng điều kiện 37 oC, 5% CO2 Sau 24 h, tế bào thử nghiệm mơ hình TMTTM mô tả nghiên cứu trước (Ngô Thị Hải Yến nnk., 2019) Tại cuối thời điểm thí nghiệm, tế bào H9C2 nhuộm NAO (0,1 µM, ex/em: 495/519 nm) 30 phút nhiệt độ phịng, sau tế bào rửa 2-3 lần PBS Mật độ huỳnh quang NAO xác định máy đọc đĩa 96 giếng Mỗi thí nghiệm lặp lại lần Xử lý số liệu Phần mềm Excel 2016, Origin 8.5 sử dụng để xử lý thống kê Số liệu trình bày dạng X ± SD (X: giá trị trung bình, SD: độ lệch chuẩn) Sự khác biệt nhóm phân tích Anova t-test Giá trị p two-tailed < 0,05 phản ánh khác biệt có ý nghĩa thống kê KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Hesperidin làm tăng khả sống tế bào H9C2 Ảnh hưởng Hsd nồng độ khác lên khả sống tế bào H9C2 mơ hình HR thể Hình Hình PHẦN II NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG SINH HỌC PHỤC VỤ ĐỜI SỐNG VÀ PHÁT TRIỂN XÃ HỘI a c b 633 d Hình Hình ảnh tế bào H9C2 a: Tế bào ni điều kiện bình thường (37 oC, 5% CO2); b: Tế bào nuôi điều kiện HR; c: Tế bào nuôi điều kiện HR+Hsd 1X; d: Tế bào nuôi điều kiện HR+Hsd 5X Ảnh chụp kính hiển vi Axiovert, vật kính 5X Hình ảnh đại diện tế bào H9C2 Hình cho thấy tế bào ni điều kiện HR (Hình 1b) số lượng tế bào chết nhiều, thể qua tượng tế bào bong tách, chết trôi lơ lửng mơi trường ni Trong đó, đĩa đối chứng (nhóm tế bào khơng bị gây mơ hình), tế bào sinh trưởng tốt, kích thước tế bào đồng đều, to, sáng rõ (Hình 1a) Tuy nhiên, Hsd bổ sung vào mơi trường ni số lượng tế bào sống (bám dính) tăng lên mạnh, mật độ dày (Hình 1c, d) Kết tương đồng với kết phân tích tỉ lệ sống tế bào H9C2 sử dụng kít CCK-8 thể Hình Tỷ lệ tế bào sống (% so với đối chứng) 100 * * * *$ # *$ # * 50 Doi chung HR DMSO Hsd 1X Hsd 5X Hsd 10XHsd 15X Hình Tỉ lệ sống tế bào H9C2 điều kiện nuôi khác Đối chứng: tế bào nuôi điều kiện thường; HR: tế bào nuôi điều kiện thiếu oxy/tái cung cấp oxy; DMSO: tế bào ni điều kiện HR có bổ sung DMSO; Hsd: tế bào nuôi điều kiện HR có bổ sung Hsd nồng độ 1X, 5X, 10X 15X (X = 0,01562 mg/ml); * p 0,05) Tác dụng làm tăng tỉ lệ sống tế bào tim điều kiện HR Hsd giống với tác dụng Hesperetin (một dẫn xuất Hsd) nghiên cứu Shangfei He et al., (2017) Đồng thời, kết tỉ lệ tế bào sống cũng khẳng định vai trò Hsd việc cải thiện tổn thương gây thiếu máu-tái tưới máu tim in vivo trước (Gandhi et al., 2009; Xuefei Li, 2018) Trong nghiên cứu này, kích thước vùng nhồi máu tim chuột tiền điều trị Hsd giảm đáng kể so với đối chứng Tác dụng Hsd thực thông qua việc ức chế tự thực bào (Xuefei Li, 2018), giảm phản ứng viêm stress oxy hóa (Gandhi et al., 2009), bảo tồn cấu trúc ti thể (Agrawal et al., 2014) Hơn nữa, số liệu nghiên cứu cũng cho thấy ảnh hưởng Hsd tới khả sống H9C2 mô hình HR nồng độ 5X 10X khơng có khác biệt đáng kể (p > 0, 05) Dựa kết này, định lựa chọn sử dụng Hsd hai nồng độ 5X 10X cho thí nghiệm phân tích thành phần cấu trúc màng ti thể tế bào H9C2 Đồng thời, chúng tơi cũng đánh giá độc tính Hsd 5X 10X tế bào H9C2 không gây mơ hình bệnh (tế bào khỏe mạnh) CCK-8 Kết thu thể Hình Hình Tỉ lệ sống tế bào H9C2 không gây mô hình bệnh Tỷ lệ sống tế bào (% so với đối chứng) 100 50 DMEM DMSO Hsd 5X Hsd 10X Đối chứng: tế bào nuôi môi trường DMEM; DMSO: tế bào nuôi môi trường có bổ sung DMSO 0,1 %; Hsd 5X, Hsd 10X: tế bào ni mơi trường có bổ sung Hsd 5X 10X; Số lần lặp lại thí nghiệm, n=4 Kết từ Hình cho thấy, tỉ lệ tế bào sống nhóm tế bào ni mơi trường có bổ sung Hsd 10X (99,35 ± 3,2%) 5X (102,76 ± 1,02%) khơng có khác biệt so với nhóm tế bào ni mơi trường bình thường (DMEM mơi trường DMEM có bổ sung DMSO) Điều gợi ý Hsd nồng độ 10X 5X tác động tế bào tim điều kiện bình thường Trong đó, nghiên cứu Zheng Yang et al., (2014) Hesperetin tế bào H9C2 lại cho thấy, Hesperetin nồng độ cao (12,5 µM, 25 µM 50 µM) làm giảm khoảng 20% tỉ lệ tế bào sống (Yang et PHẦN II NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG SINH HỌC PHỤC VỤ ĐỜI SỐNG VÀ PHÁT TRIỂN XÃ HỘI 635 al., 2014) Sự khác biệt củng cố thêm tính hợp lý việc định hướng sử dụng Hsd 5X 10X thí nghiệm 3.2 Hesperidin bảo vệ ti thể tế bào H9C2 Ảnh hưởng Hsd lên ti thể tế bào H9C2 đánh giá thông qua biến đổi hàm lượng cardiolipin màng ti thể Sự thay đổi hàm lượng cardiolipin xác định việc đo mức độ thay đổi mật độ huỳnh quang NAO (Hình 4) Mật độ huỳnh quang NAO (% so với đối chứng) Hình Mật độ huỳnh quang NAO tế bào H9C2 100 *$ * * HR DMSO *$ 50 DMEM Hsd 5X Hsd 10X * p < 0,05 khác biệt có ý nghĩa thống kê so với đối chứng, $ p < 0,05 khác biệt có ý nghĩa thống kê so với HR; Số lần lặp lại thí nghiệm, n=4 Cardiolipin phospholipid đặc trưng màng ti thể có vai trò thiết yếu nhiều chức ti thể hoạt động chuỗi hô hấp chuyển hóa lượng (Dudek, 2017) Trong bệnh TMTTM tim, sản sinh mức gốc tự oxy hóa dẫn đến oxy hóa cardiolipin Tiếp theo, suy giảm hàm lượng cardiolipin ảnh hưởng tới hoạt động chuỗi vận chuyển điện tử I, III, IV qua làm rối loạn hoạt động chức ti thể (Paradies G., 2014) gây chết tế bào Do vậy, việc trì ổn định cấu trúc hàm lượng cardiolipin có vai trị quan trọng nhằm hạn chế tổn thương ti thể tế bào TMTTM tim Kết thể Hình cho thấy, mật độ huỳnh quang NAO nhóm tế bào xử lý với Hsd tăng lên 80,79 ± 1,21% (Hsd 10X) 88,39 ± 2,49% (Hsd 5X), giá trị cao đáng kể so với nhóm HR (71,64 ± 1,37%) DMSO (71,7 ± 1,9%) (p < 0,05) Điều thể hiện, Hsd nồng độ 10X 5X có khả bảo tồn cardiolipin màng ti thể tổn thương gây HR, qua làm tăng khả chống stress oxy hóa hiệu hoạt động chuỗi vận chuyển điện tử (Paradies G, 2014; Wang et al., 2014) Kết đo NAO lần khẳng định vai trò Hsd việc bảo vệ cấu trúc ti thể mơ hình bệnh lý chuột tiểu đường kết hợp với TMTTM tim trước (Agrawal et al., 2014) Trong nghiên cứu này, Hsd làm giảm trương phồng (swelling) giảm xuất bóng bào ti thể gây TMTTM chuột bị tiểu đường, giữ ổn định cấu trúc chức ti thể Bên cạnh đó, liệu Hình cũng rằng, tỉ lệ mật độ huỳnh quang NAO nhóm tế bào xử lý Hsd 5X cao so với nhóm Hsd 10X Tuy nhiên, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Kết phù hợp với thay đổi tỉ lệ sống tế bào H9C2 636 BÁO CÁO KHOA HỌC VỀ NGHIÊN CỨU VÀ GIẢNG DẠY SINH HỌC Ở VIỆT NAM Như vậy, kết thu nghiên cứu cho thấy Hsd có khả bảo vệ tế bào tim chuột H9C2 thơng qua tác động hướng đích ti thể Tuy nhiên, nghiên cứu chưa đánh giá chế bảo vệ tế bào H9C2 Hsd cấp độ phân tử mơ hình bệnh lý TMTTM tim KẾT LUẬN Nghiên cứu cung cấp số liệu ảnh hưởng Hsd tự nhiên Việt Nam lên tế bào H9C2 mô hình thiếu máu-tái tưới máu tim in vitro Hsd nồng độ 5X 10X làm tăng đáng kể khả sống tế bào H9C2 bị gây mô hình bệnh thơng qua việc bảo tồn cấu trúc cardiolipin màng ti thể Chúng hy vọng, kết tiền đề sở cho nghiên cứu đánh giá vai trò tiềm Hsd điều trị bệnh lý liên quan Lời cảm ơn: Chúng chân thành cảm ơn quỹ nghiên cứu Nafosted 06-YS.06-2016.23 hỗ trợ kinh phí; Trung tâm Khoa học sống, Khoa Sinh học, Phịng thí nghiệm trọng điểm công nghệ enzym protein, Trường ĐHKHTN-ĐHQG Hà Nội tạo điều kiện cho thực nghiên cứu; Giáo sư Han Jin Kim Hyoung Kyu (CMDM, Inje, Hàn Quốc) tặng nhóm nghiên cứu mẫu tế bào H9C2 TÀI LIỆU THAM KHẢO Agrawal YO et al 2014 Hesperidin produces cardioprotective activity via PPAR-γ pathway in ischemic heart disease model in diabetic rats PloS one 9(11):e111212- e111212 Andrew MW, George AP and Paul SB, 2012 Mitochondria as a Drug Target in Ischemic Heart Disease and Cardiomyopathy Circulation Research 111(9): 1222-1236 Ansorge S, Reinhold D and Lendeckel U, 2003 Propolis and some of its constituents down- regulate DNA synthesis and inflammatory cytokine production but induce TGF-beta1 production of human immune cells Z Naturforsch CJ Biosci 58(7-8): 580-9 Del Rio JA et al 2004 Changes in the levels of polymethoxyflavones and flavanones as part of the defense mechanism of Citrus sinensis (cv Valencia Late) fruits against Phytophthora citrophthora J Agric Food Chem 52(7):1913-7 Dudek Jan, 2017 Role of Cardiolipin in Mitochondrial Signaling Pathways Frontiers in Cell and Developmental Biology 5(90) Gandhi C, Upaganalawar A and Balaraman R, 2009 Protection against in vivo focal myocardial ischemia/reperfusion injury-induced arrhythmias and apoptosis by hesperidin Free Radic Res 43(9):817-27 He S et al 2017 Hesperetin post-treatment prevents rat cardiomyocytes from hypoxia/ reoxygenation injury in vitro via activating PI3K/Akt signaling pathway Biomed Pharmacother 91:1106-1112 Kalogeris Theodore et al 2016 Ischemia/Reperfusion Comprehensive Physiology 7(1): 113-170 Li C and Schluesener H, 2017 Health-promoting effects of the citrus flavanone hesperidin Crit Rev Food Sci Nutr 57(3):613-631 Paradies G, Paradies V, De Benedictis V, Ruggiero FM and Petrosillo G, 2014 Functional role of cardiolipin in mitochondrial bioenergetics Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics 1837(4): 408-417 PHẦN II NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG SINH HỌC PHỤC VỤ ĐỜI SỐNG VÀ PHÁT TRIỂN XÃ HỘI 637 Peterson J et al 2006 Flavanones in oranges, tangerines (mandarins), tangors, and tangelos: a compilation and review of the data from the analytical literature Journal of food composition and analysis: an official publication of the United Nations University, International Network of Food Data Systems 19(1): S66-S73 Saha RK, Takahashi T and Suzuki T, 2009 Glucosyl hesperidin prevents influenza a virus replication in vitro by inhibition of viral sialidase Biol Pharm Bull 32(7): 1188-92 Walters AM, Porter GA Jr and Brookes PS, 2012 Mitochondria as a drug target in ischemic heart disease and cardiomyopathy Circ Res 111(9): 1222-36 Wang Dongmei et al 2014 Hesperidin Alleviates Cognitive Impairment, Mitochondrial Dysfunction and Oxidative Stress in a Mouse Model of Alzheimer’s Disease Cellular and Molecular Neurobiology 34(8): 1209-1221 Wilmsen P K, Spada DS and Salvador M, 2005 Antioxidant activity of the flavonoid hesperidin in chemical and biological systems J Agric Food Chem 53(12):4757-61 Xuefei Li et al 2018 Inhibition of autophagy via activation of PI3K/Akt/mTOR pathway contributes to the protection of hesperidin against myocardial ischemia/reperfusion injury Inernational joural of molecular medicine 42:1917-1924 Yang Zheng et al 2014 Hesperetin attenuates mitochondria-dependent apoptosis in lipopolysaccharideinduced H9C2 cardiomyocytes Molecular medicine reports 9(5):1941-1946 Ngơ Thị Hải Yến, Đồn Thị Dậu, Phạm Thị Bích, Vũ Thị Thu, 2019 Thiết kế đánh giá hiệu buồng thiếu oxi (buồng hypoxia) ứng dụng mơ hình bệnh thiếu máu cục - tái tưới máu tim in vitro Tạp chí Sinh lý học Việt Nam 23(3):1-8 EVALUATING THE PROTECTIVE EFFECTS OF HESPERIDIN ON H9C2 CELLS AGAINST HYPOXIA-REOXYGENATION INJURY IN VITRO Ngo Thi Hai Yen1, Ho Ly Phuong1, Nguyen Thi Ha Ly2, Pham Thi Bich1, Vu Thi Thu1,* Abstract: In this study, H9C2 cells were subjected to hypoxia- reoxygenation (HR) model in vitro The cardioprotective effects of Hesperidin were assessed based on the cell viability indicator and the change in the cardiolipin contents The data showed that treatment with Hesperidin 5X and 10X (X = 0,01562 mg/ml) significantly improved the cell viability and cardiolipin contents against HR-stimulated H9C2 groups compared to those in the control group (p < 0,05) The results demonstrated that Hesperidin could be a potential active compound in protecting H9C2 against HR injury targeting mitochondria Keywords: Cardiolipin, H9C2, Hesperidin, mitochondria 1University of Science, Vietnam National University, Hanoi Institute of Medicinal Materials *Email: vtthu2015@gmail.com 2National ... TMTTM tim KẾT LUẬN Nghiên cứu cung cấp số liệu ảnh hưởng Hsd tự nhiên Việt Nam lên tế bào H9C2 mơ hình thiếu máu- tái tưới máu tim in vitro Hsd nồng độ 5X 10X làm tăng đáng kể khả sống tế bào H9C2. .. kế đánh giá hiệu buồng thiếu oxi (buồng hypoxia) ứng dụng mô hình bệnh thiếu máu cục - tái tưới máu tim in vitro Tạp chí Sinh lý học Việt Nam 23(3): 1-8 EVALUATING THE PROTECTIVE EFFECTS OF HESPERIDIN. .. tế bào xác định kít CCK-8 Thông số lipid màng ti thể đánh giá thị huỳnh quang NAO Mỗi thí nghiệm lặp lại lần Đánh giá khả sống tế bào CCK-8 Tỉ lệ sống tế bào xác định gián tiếp thông qua CCK-8