Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất điều hòa sinh trưởng đến sự phát triển thân và rễ loài lan trầm (dendrobium nestor) giai đoạn in vitro

TRƢỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƢƠNG KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ HỒNG THÚY NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG ĐẾN SỰ PHÁT TRIỂN THÂN VÀ RỄ LOÀI LAN TRẦM (Dendrobium nestor) GIAI ĐOẠN IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành : Sư phạm Sinh học Phú Thọ, 2017 TRƢỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƢƠNG KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ HỒNG THÚY NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG ĐẾN SỰ PHÁT TRIỂN THÂN VÀ RỄ LỒI LAN TRẦM (Dendrobium nestor) GIAI ĐOẠN IN VITRO KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành : Sư phạm Sinh học NGƯỜI HƯỚNG DẪN: TS CAO PHI BẰNG Phú Thọ, 2017 i LỜI CẢM ƠN Trong thời gian nghiên cứu hồn thành khóa luận, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy giáo hƣớng dẫn TS Cao Phi Bằng hƣớng dẫn tận tình, quan tâm động viên em hồn thành khóa luận Em xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc đến thầy (cô) Trung tâm nghiên cứu Công nghệ sinh học trƣờng Đại học Hùng Vƣơng toàn thể thầy cô giáo khoa Khoa học Tự nhiên, trƣờng Đại học Hùng Vƣơng tạo điều kiện giúp đỡ để em thực hồn thành khóa luận Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè, ngƣời bên cạnh động viên, giúp đỡ em suốt trình thực hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn! Phú Thọ, ngày 15 tháng 05 năm 2017 Sinh viên Nguyễn Thị Hồng Thúy ii MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lí chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn NỘI DUNG CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một vài nét giới thiệu chi Dendrobium loài lan Trầm (D nestor) 1.1.1 Giới thiệu chi Dendrobium 1.1.1.1 Về phân loại 1.1.1.2 Về đặc điểm hình thái 1.1.2 Giới thiệu loài lan Trầm (D nestor) 1.2 Kĩ thuật nhân giống nuôi cấy mô - tế bào thực vật 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Lịch sử phát triển kỹ thuật nhân giống nuôi cấy mô - tế bào thực vật 1.2.3 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô - tế bào thực vật 1.2.3.1 Tính tồn tế bào 1.2.3.2 Sự phân hóa phản phân hóa 1.2.4 Các giai đoạn kỹ thuật nhân giống in vitro 1.2.5 Các điều kiện nuôi cấy in vitro 10 1.2.5.1 Điều kiện vô trùng 10 1.2.5.2 Ánh sáng nhiệt độ 11 1.2.6 Môi trường nuôi cấy in vitro 11 1.2.6.1 Thành phần môi trường 11 1.2.6.2 pH môi trường 15 1.2.6.3 Tính thẩm thấu môi trường 15 1.2.7 Tầm quan trọng phương pháp nuôi cấy mô - tế bào thực vật 15 1.3 Tình hình nghiên cứu 16 1.3.1.Vai trò chất điều hòa sinh trưởng nhân giống in vitro 16 1.3.1.1 Vai trò auxin nhân giống in vitro 16 1.3.1.2 Vai trò cytokinin nhân giống in vitro 17 iii 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nhân giống in vitro lan Hoàng thảo 18 1.3.2.1 Tình hình nghiên cứu giới 18 1.3.2.2 Tình hình nghiên cứu nước 18 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 21 2.2 Nội dung nghiên cứu 21 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 21 2.3.1 hương pháp ố trí thí nghiệm 21 2.3.1.1 hương pháp luận 21 2.3.1.2 hương pháp ố trí thí nghiệm 21 2.3.2 hương pháp thu thập số liệu 24 2.3.3 hương pháp ph n tích l số liệu 24 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 25 3.1 Ảnh hƣởng nồng độ phối hợp chất điều hòa sinh trƣởng đến phát triển thân in vitro lan Trầm (D nestor) 25 3.1.1 Ảnh hưởng BA đến phát triển thân in vitro lan Trầm (D nestor) 25 3.1.2 Ảnh hưởng Kinetin đến phát triển thân in vitro lan Trầm (D nestor) 29 3.1.3 Ảnh hưởng phối hợp BA Kinetin đến phát triển thân in vitro lan Trầm (D nestor) 32 3.2 Ảnh hƣởng nồng độ phối hợp chất điều hòa sinh trƣởng đến khả rễ in vitro lan Trầm (D nestor) 35 3.2.1 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ in vitro lan Trầm (D nestor) 35 3.2.2 Ảnh hưởng NAA đến khả rễ in vitro lan Trầm (D nestor) 38 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 Kết luận 41 Kiến nghị 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BAP : Bezylamino purine IBA : Indole butyric acid MS : Môi trƣờng Murashige & Skoog MT : Môi trƣờng NAA : Axit napthalen axetic v DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Ảnh hưởng BA đến hệ số nhân phát triển thân in vitro loài lan Trầm (D nestor) 25 Bảng 3.2 Ảnh hưởng BA đến số in vitro loài lan Trầm (D nestor) 28 Bảng 3.3 Ảnh hưởng Kinetin đến hệ số nhân phát triển thân in vitro loài lan Trầm (D nestor) 29 Bảng 3.4 Ảnh hưởng Kinetin đến số in vitro loài lan Trầm (D nestor) 31 Bảng 3.5 Ảnh hưởng phối hợp BAP Kinetin đến hệ số nhân phát triển thân in vitro loài lan Trầm (D nestor) 33 Bảng 3.6 Ảnh hưởng Kinetin đến số in vitro loài lan Trầm (D nestor) 34 Bảng 3.7 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ in vitro loài lan Trầm (D nestor) 36 Bảng 3.8 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ in vitro loài lan Trầm (D nestor) 38 vi DANH MỤC HÌNH Hình 3.1 Ảnh hưởng BA đến hệ số nhân chồi 26 Hình 3.2 Chồi c y in vitro mơi trường có bổ sung BAP 26 môi trường đối chứng 26 Hình 3.3 Ảnh hưởng BA đến phát triển thân 27 Hình 3.4 Ảnh hưởng BA đến số 28 Hình 3.5 Ảnh hưởng Kinetin đến hệ số nhân chồi 30 Hình 3.6 Chồi c y in vitro mơi trường có bổ sung BAP môi trường đối chứng 30 Hình 3.7 Ảnh hưởng Kinetin đến phát triển thân 31 Hình 3.8 Ảnh hưởng BA đến số 32 Hình 3.9 Ảnh hưởng kết hợp BA Kinetin đến hệ số nhân chồi 33 Hình 3.10 Chồi c y in vitro mơi trường có bổ sung kết hợp BAP với Kinetin môi trường đối chứng 33 Hình 3.11 Ảnh hưởng kết hợp BA Kinetin đến phát triển thân 34 Hình 3.12 Ảnh hưởng kết hợp BA Kinetin đến số 35 Hình 3.13 Rễ c y in vitro mơi trường có bổ sung IBA 37 Hình 3.14 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ 36 Hình 3.15 Ảnh hưởng IBA đến khối lượng 38 Hình 3.16 Rễ c y in vitro mơi trường có bổ sung NAA 39 Hình 3.17 Ảnh hưởng NAA đến khả rễ 40 Hình 3.18 Ảnh hưởng IBA đến khối lượng 40 MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Phong lan đƣợc biết đến loài hoa đẹp mang nhiều ý nghĩa đƣợc ngƣời ƣa chuộng Phong lan thƣờng đƣợc dùng làm cảnh, trang trí, số lồi có tác dụng chữa bệnh [14] Họ Lan có số lƣợng thành phần lồi khơng phong phú tự nhiên mà cịn đa dạng lồi lan đƣợc lai tạo Tính đến nay, có đến 25.000 lồi Lan khác Ở Việt Nam, theo Phong lan Việt Nam Trần Hợp Việt Nam có 137 đến 140 chi gồm 800 loài lan rừng [5] Hoàng thảo (Dendrobium) chi lớn họ Phong lan (Orchidaceae), có khoảng 1400 lồi, Việt Nam có 107 loài thứ phân bố vùng núi từ Bắc vào Nam số đảo ven biển [17] Trong chi này, có nhiều lồi có hoa đẹp đƣợc nhiều ngƣời yêu thích Tuy nhiên nhiều nguyên nhân tác động khác mà nhiều loài bị khai thác mức dẫn đến bị đe dọa biến [6] Năm 1893, Veitch đăng kí tên cho lồi lan đƣợc lai tạo D anosmum - Phi điệp D parishii - Song hồng, đƣợc gọi Lan Trầm (Dendrobium nestor) Hoa lan Trầm có mùi thơm nhẹ nhàng, dễ chịu giống nhƣ mùi hƣơng trầm không hắc Hoa gần giống hai cha mẹ nhƣng có màu tím hồng màu trắng, đẹp nên đƣợc nhiều ngƣời yêu thích Hiện số lƣợng lồi tự nhiên cịn khó nhân giống [3] Ngày với phát triển cơng nghệ sinh học vi nhân giống (in vitro) công cụ đắc lực việc bảo tồn phát triển loài lan quý Nhân giống in vitro phƣơng pháp nhân giống mang lại nhiều ƣu điểm nhƣ: hệ số nhân giống cao, tạo đồng mặt di truyền, bệnh, đồng thời có tiềm sinh học cao mà lại khơng tốn diện tích nhân giống Trong nhân giống in vitro, ngồi mơi trƣờng ni cấy bản, ngƣời ta thƣờng bổ sung thêm vào môi trƣờng nuôi cấy vitamin, chất điều hòa sinh trƣởng, đƣờng, than hoạt tính, nƣớc ép loại hoa nhƣ: chuối, nƣớc dừa, khoai tây…Trong đó, chất điều hịa sinh trƣởng có ảnh hƣởng lớn đến hệ số nhân chất lƣợng chồi, nhƣ có ảnh hƣởng lớn tới khả rễ Chính chúng tơi lựa chọn thực đề tài: “Nghiên cứu ảnh hưởng số chất điều hòa sinh trưởng đến phát triển thân rễ loài lan Trầm (Dendrobium nestor) giai đoạn in vitro” Đề tài đƣợc thực góp phần hồn thiện quy trình nhân giống in vitro cho lồi lan q Mục tiêu nghiên cứu Đánh giá đƣợc ảnh hƣởng nồng độ phối hợp chất điều hòa sinh trƣởng đến phát triển thân in vitro Lan Trầm Đánh giá đƣợc ảnh hƣởng nồng độ phối hợp chất điều hòa sinh trƣởng đến khả rễ in vitro Lan Trầm Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học Kết đề tài nhằm cung cấp thêm thông tin khoa học ảnh hƣởng nồng độ khác chất điều hòa sinh trƣởng đến phát triển thân rễ in vitro loài lan Trầm 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Đề tài đƣợc thực sở cho việc hồn thiện quy trình nhân giống in vitro cho loài lan đẹp Kết đề tài góp phần nâng cao suất, chất lƣợng nhƣ hiệu kinh tế sản xuất giống lan Trầm địa bàn tỉnh Phú Thọ 30 Hình 3.5 Ảnh hưởng Kinetin đến hệ số nhân chồi ĐC K05 K1 K15 K2 K25 Hình 3.6 Chồi in vitro mơi trường có bổ sung BAP mơi trường đối chứng 31 Hình 3.7 Ảnh hưởng Kinetin đến phát triển thân Qua bảng 3.3 hình 3.7 ta thấy sinh trƣởng chiều cao tƣơng đối có giá trị cao môi trƣờng bổ sung Kinetin với nồng độ 2,5mg/l (B25) đạt 15,37mm Khi giảm nồng độ Kinetin môi trƣờng nuôi cấy xuống 2mg/l (B2), 1,5mg/l (B15), 1mg/l (B1), 0,5mg/l sinh trƣởng chiều cao tƣơng đối giảm dần xuống 10,63mm, 9,96mm, 7,33mm, 5,63mm Tất cao so với sinh trƣởng chiều cao tƣơng đối công thức đối chứng Giống nhƣ thí nghiệm có bổ sung BAP, thí nghiệm ta thấy tỉ lệ phát sinh rễ đạt 100% Số rễ tăng dần ta tăng nồng độ Kinetin đạt giá trị cao 8,85 rễ nồng độ 2,5mg/l Bảng 3.4 Ảnh hưởng Kinetin đến số in vitro loài lan Trầm (D nestor) Công thức Tuần Tuần Tuần ĐC 3,20 3,45 3,45 K05 3,55 3,90 4,20 K1 3,75 4,60 4,85 K15 3,90 4,50 4,70 K2 3,95 4,50 4,70 K25 3,60 4,40 4,75 32 So với thí nghiệm có sử dụng BAP, ta thấy sử dụng Kinetin có ổn định phát sinh lá, nhiên hiệu không BAP Số liệu cụ thể đƣợc thể bảng 3.4 hình 3.8 Sự tăng trƣởng số sử dụng môi trƣờng có bổ sung 1mg/l Kinetin cao nhất, Ở giai đoạn tuần có giá trị 3,75 nhƣng sau tuần tuần số lần lƣợt 4,6 4,85 Khi tăng nồng độ Kinetin lên 1,5mg/l, 2mg/l 2,5mg/l tăng trƣởng số giảm so với mơi trƣờng có nồng độ Kinetin 1mg/l Kinetin Giá trị tăng trƣởng số thấp công thức đối chứng; số đạt 3,2 tuần, lên tuần đạt 3,45 tuần 3,45 Hình 3.8 Ảnh hưởng BA đến số Nhƣ vậy, bổ sung Kinetin nồng độ 0,5mg/l cho hệ số nhân tốt Ngồi ra, để có đƣợc sinh trƣởng tƣơng đối cao số rễ phát sinh nhiều cần bổ sung vào môi trƣờng nuôi cấy với nồng độ Kinetin 2,5mg/l 3.1.3 Ảnh hưởng phối hợp BAP Kinetin đến phát triển thân in vitro lan Trầm (D nestor) Trong thí nghiệm sử dụng nồng độ 1mg/l BAP kết hợp với 1mg/l Kinetin để so sánh với công thức đối chứng không sử dụng chất điều hòa sinh 33 trƣởng, điều kiện môi trƣờng Kết thu thập đƣợc thống kê bảng 3.5 dƣới đây: Bảng 3.5 Ảnh hưởng phối hợp BAP Kinetin đến hệ số nhân phát triển thân in vitro loài lan Trầm (D nestor) Công Hệ số nhân Sinh trưởng chiều Tỉ lệ rễ Số rễ thức (lần) cao tư ng đối (mm) (%) (rễ) ĐC 1,80 3,60 100 3,28 K1B1 2,72 21,83 100 9,72 Hình 3.9 Ảnh hưởng kết hợp BA Kinetin đến hệ số nhân chồi ĐC K1B1 Hình 3.10 Chồi in vitro mơi trường có bổ sung kết hợp BAP với Kinetin môi trường đối chứng Qua kết bảng 3.5 nhận thấy: Có chênh lệch rõ rệt cơng thức đối chứng cơng thức có kết hợp BAP Kinetin Về hệ số nhân 34 chồi công thức B1K1 2,72 lần, cao so với cơng thức đối chứng (1,8 lần) Hình 3.9 mô thay đổi hệ số nhân môi trƣờng Đặc điểm sinh trƣởng tƣơng đối cơng thức có khác biệt rõ rệt Ở công thức K1B1 21,83mm, cao gấp 6,06 lần so với cơng thức đối chứng có giá trị 3,6mm Điều đƣợc thể rõ hình 3.11 Hình 3.11 Ảnh hưởng kết hợp BA Kinetin đến phát triển thân Dựa vào bảng 3.5 ta thấy có kết hợp BAP Kinetin số rễ trung bình đạt giá trị cao so với công thức đối chứng lẫn hai thí nghiệm với giá trị cụ thể 9,72 rễ Số có khác biệt hai cơng thức Dƣới bảng số liệu hình: Bảng 3.6 Ảnh hưởng Kinetin đến số in vitro lồi lan Trầm (D nestor) Cơng thức Tuần Tuần Tuần ĐC 3,2 3,45 3,45 K1B1 3,35 4,05 4,90 35 Hình 3.12 Ảnh hưởng kết hợp BA Kinetin đến số Qua bảng 3.6 hình 3.12 thấy rằng, tăng trƣởng số mơi trƣờng có kết hợp hai loại phytohoocmon 3,35 tuần, 4,05 tuần 4,9 tuần; cao so với công thức đối chứng (3,2 tuần, 3,45 tuần, 3,45 tuần) Vậy bổ sung vào môi trƣờng nuôi cấy với nồng độ 1mg/l BAP 1mg/l Kinetin thu đƣợc hệ số nhân chất lƣợng chồi tƣơng đối tốt 3.2 Ảnh hưởng nồng độ phối h p c c chất điều hòa sinh trưởng đến khả rễ in vitro lan Trầm (D nestor) 3.2.1 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ in vitro lan Trầm (D nestor) Thử nghiệm IBA, thay đổi nồng độ bổ sung vào môi trƣờng nuôi cấy từ 0,25 mg/l đến 1,5 mg/l, kết thu đƣợc thể bảng 3.7 Qua bảng 3.7 hình 3.13, ta nhận thấy tăng nồng độ IBA từ 0,25 mg/l đến 1,5 mg/l số rễ thay đổi lớn nồng độ IBA 0,25mg/l với giá trị số rễ trung bình 10,25 rễ, nồng độ có số rễ đạt giá trị lớn thí nghiệm Khi tăng nồng độ IBA lên 0,5mg/l, 0,75mg/l, 1mg/l, 1,5mg/l giá trị số rễ giảm cịn 8,6 rễ, 8,5 rễ, 8,53 rễ 8,92 rễ Các công thức có giá trị cao so với cơng thức đối chứng 36 Bảng 3.7 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ in vitro lồi lan Trầm (D nestor) Cơng Số rễ Chiều dài rễ Khối lư ng Tỉ lệ ph t sinh chồi Hệ số thức (rễ) (mm) (g) ĐC 5,77 38,45 1,31 73,33 2,00 I025 10,25 29,76 2,02 91,67 2,33 I05 8,60 36,38 3,18 86,67 2,13 I075 8,50 37,15 2,93 83,33 2,25 I1 8,53 34,51 2,31 73,33 2,27 I15 8,92 32,84 1,89 100 2,46 (%) nhân (lần) Bên cạnh việc phát sinh rễ mới, rễ cịn có tăng lên chiều dài Cụ thể công thức I025, chiều dài rễ đạt giá trị thấp (29,76mm) giá trị cao 38,45mm công thức đối chứng Khi ta tăng nồng độ IBA lên 0,5mg/l 0,75mg/l chiều dài rễ tăng theo lên 36,38mm 37,15mm Nhƣng tiếp tục tăng nồng độ IBA lên 1mg/l 1,5mg/l chiều dài rễ giảm dần 34,51mm 32,84mm Qua thấy đƣợc IBA ảnh hƣởng không nhiều tới việc tăng chiều dài rễ rễ Ảnh hƣởng IBA đến khả rễ in vitro lan Trầm đƣợc mô qua hình 3.13 Hình 3.13 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ 37 ĐC I025 I05 I075 I1 I15 Hình 3.14 Rễ in vitro mơi trường có bổ sung IBA Ngồi nghiên cứu rễ, tơi cịn ý đến sinh khối in vitro Sau sử dụng cân phân tích để cân khối lƣợng cây, thu đƣợc số liệu nhƣ hình 3.15 Ở cơng thức đối chứng có khối lƣợng nhỏ (1,31g), khối lƣợng tăng từ 2,02g lên 3,18g tăng nồng độ IBA từ 0,25mg/l lên 0,5mg/l Tiếp đến, tăng thêm nồng độ IBA cơng thức I075, I1, I15 thấy đƣợc khối lƣợng có xu hƣớng giảm dần Bên cạnh đó, dù q trình bổ sung Auxin nhƣng phát sinh thêm chồi với tỷ lệ phát sinh chồi cao có hệ số nhân lớn Dựa vào bảng 3.7 ta nhận thấy, tỉ lệ phát sinh chồi thấp với 73,33% công thức đối chứng công thức I15 với hệ số nhân lần lƣợt 38 lần 2,27 lần Tỉ lệ phát sinh chổi đạt giá trị cao (100%) hệ số nhân cao (2,46 lần) mơi trƣờng có bổ sung 1,5mg/l IBA Hình 3.15 Ảnh hưởng IBA đến khối lượng Nhƣ vậy, môi trƣờng nuôi cấy có bổ sung IBA nồng độ 0,25mg/l mơi trƣờng thích hợp cho khả rễ in vitro loài lan Trầm 3.2.2 Ảnh hưởng NAA đến khả rễ in vitro lan Trầm (D nestor) Trong thí nghiệm tơi bổ sung NAA vào môi trƣờng nuôi cấy với nồng độ: 0,25mg/l, 0,5mg/l, 0,75mg/l, 1mg/l, 1,5mg/l Tiến hành theo dõi mẫu cấy, xác định mơi trƣờng thích hợp để giai đoạn rễ đạt kết tốt Kết đƣợc thống kê bảng nhƣ sau: Bảng 3.8 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ in vitro lồi lan Trầm (D nestor) Cơng Số rễ Chiều dài Khối lư ng Tỉ lệ ph t sinh Hệ số thức (rễ) rễ (mm) (g) chồi (%) nhân (lần) ĐC 5,77 38,45 1,31 73,33 2,00 N025 10,27 33,95 3,06 100 2,47 N05 9,56 36,47 1,73 77,78 2,11 N075 9,08 29,18 2,04 83,33 2,58 N1 8,27 30,48 2,27 93,33 2,33 N15 9,93 32,47 3,53 93,33 2,47 39 ĐC N025 N05 N075 N1 N15 Hình 3.16 Rễ in vitro mơi trường có bổ sung NAA Kết phân tích cho thấy, tƣơng tự nhƣ IBA, nồng độ NAA môi trƣờng 0,25mg/l đạt số rễ nhiều 10,27 rễ, lớn so với IBA nồng độ Ở cơng thức N05, N075, N1, N15 có số rễ lần lƣợt 9,56 rễ, 9,08 rễ, 8,27 rễ 9,93 rễ Giá trị số rễ nhỏ 5,77 rễ môi trƣờng công thức đối chứng Giống nhƣ thí nghiệm 4, chiều dài rễ cơng thức đối chứng lớn (38,45 rễ) nhƣng khối lƣợng hệ số nhân chồi lại thấp so với công thức khác Khối lƣợng cao mơi tƣờng ni cấy có nồng độ NAA 1,5mg/l Tƣơng tự nhƣ thí nghiệm 4, in vitro thí nghiệm có phát sinh chồi, tỉ lệ phát sinh chồi tƣơng đối cao, nhỏ 40 công thức đối chứng (73,33%) lớn công thức N025 (100%) Hệ số nhân có giá trị lớn cơng thức N075 với hệ số 2,58 lần Hình 3.17 Ảnh hưởng NAA đến khả rễ Hình 3.18 Ảnh hưởng IBA đến khối lượng Nhƣ vậy, bổ sung NAA nồng độ 0,25mg//l cho khả rễ cao thí nghiệm 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Khi so sánh nồng độ BAP khác nhau, mơi trƣờng có bổ sung mg/l BAP mơi trƣờng cho hệ số nhân chồi cao (3 lần), phát triển thân đạt kết cao môi trƣờng bổ sung 1,5mg/l BAP (sinh trƣởng chiều cao tƣơng đối 25,23 mm) Giữa nồng độ Kinetin nghiên cứu, mơi trƣờng có bổ sung 0,5 mg/l Kinetin mơi trƣờng thích hợp nhân nhanh chồi, hệ số nhân đạt 2,65 lần, nhiên, chồi nuôi cấy môi trƣờng có bổ sung 2,5mg/l có sinh trƣởng chiều cao tƣơng đối cao (15,37 mm) Khi có kết hợp BAP Kinetin số rễ/cây cao so với sử dụng riêng rẽ BAP Kinetin (9,72 rễ/cây) Trong số nồng độ IBA nghiên cứu, mơi trƣờng có 0,25 mg/l IBA thích hợp để rễ in vitro loài lan Trầm Giữa nồng độ NAA nghiên cứu, môi trƣờng bổ sung 0,25 mg/l NAA thích hợp cho phát sinh rễ đạt giá trị cao (10,27 rễ/cây) Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu giai đoạn để hoàn thiện quy trình nhân giống in vitro lồi lan 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tham khảo tiếng Việt [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] [10] [11] [12] [13] [14] Trần Văn Bảo (2002), Kỹ thuật nuôi trồng phong lan, NXB Trẻ Nguyễn Thị Mỹ Duyên (2009), Nhân giống lan Dendrobium anosmum, Dendrobium mini phƣơng pháp nuôi cấy mô Nghiên cứu loại giá thể trồng lan Dendrobium mini thích hợp cho hiệu cao, Đề tài nghiên cứu khoa học cấp trƣờng, Trƣờng Đại học An Giang Nguyễn Văn Hai, Lƣơng Trọng Nhàn (2013), Kĩ thuật trồng lan Dendrobium, NXB Thời đại Trần Hợp (1993), Phong lan có hương thơm, NXB Khoa học kỹ thuật Trần Hợp (1998), Phong lan Việt Nam, NXB Nơng nghiệp, TP Hồ Chí Minh Dƣơng Đức Huyến (2007), Thực vật chí Việt Nam - Họ lan (Orchidceae), NXB Khoa học Kỹ thuật Nguyễn Nhƣ Khanh, Cao Phi Bằng (2009), Giáo trình sinh lý thực vật, NXB Giáo Dục Dƣơng Công Kiên (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật, NXB TP.Hồ Chí Minh Vũ Ngọc Lan, Nguyễn Thị Lý Anh (2013), Nhân giống in vitro lồi Lan địa Dendrobium nobile Lindl, Tạp chí Khoa học Phát triển, 11(7), tr 917-925 Hoàng Thị Sản (2011), Phân loại học thực vật, NXB Giáo dục Việt Nam Vũ Thanh Sắc, Nguyễn Thị Thu Huyền, Lê Thị Lý (2012), Nghiên cứu nhân giống in vitro lan Hoàng thảo trầm trắng (D anosmum var.alba), Tạp chí khoa học công nghệ, Đại học Thái Nguyên, 93(05), tr 131-135 Nguyễn Văn Song cộng (2011), Nhân nhanh in vitro lan Kim Điệp (Dendrobium Chrysotoxum) – Một loài lan rừng có nguy tuyệt chủng, Tạp chí khoa học, Đại học Huế, số 64 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh Nguyễn Thị Phƣơng Thảo, (2005), Giáo trình cơng nghệ sinh học nông nghiệp, NXB Nông Nghiệp Thân Thị Thúy (2015), Bƣớc đầu nghiên cứu quy trình nhân nhanh giống lan Phi điệp tím (D anosmum) phân bố Vĩnh Phúc công 43 [15] [16] [17] [18] [19] nghệ ni cấy mơ tế bào, Khóa luận tốt nghiệp đại học, Trƣờng đại học sƣ phạm Hà Nội Nguyễn Thị Tình (2015), Nghiên cứu nhân giống Lan Thạch Hộc (Dendrobium nobile Lindl) ống nghiệm từ phôi, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nơng thơn tháng 11 năm 2015, tr 44-52 Nguyễn Vũ Thị Hoàng Uyên (2005), Nhân giống lan Dendrobium phƣơng pháp gieo hạt in vitro, Khóa luận tốt nghiệp đại học Đào Thị Thanh Vân, Đặng Thị Tố Nga (2008), Giáo trình hoa lan, NXB Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Văn Vinh, Nguyễn Hữu Lễ (2009), Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng thực vật lên phát sinh chồi rễ Phong lan giả hạt D anosmum, Tạp chí khoa học công nghệ, tập 47, số 5, 2009 Tr 99 - 10 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp, (2005), Công nghệ sinh học tế bào, tập 2, NXB Giáo dục, Hà Nội Tài liệu tham khảo tiếng nước [20] Hongthongkham J, Bunnag S (2014), In vitro propagation and cryopreservation of Aerides odorata Lour (Orchidaceae)”, US national library of medicine national institutes of health [21] Jaime A Teixeira da Silva, Jean Carlos Cardoso, Judit Dobra´nszki, Songjun Zeng (2015), Dendrobium micropropagation: a review, Plant Cell Rep (2015) 34:671–704 DOI 10.1007/s00299-015-1754-4 [22] Kaewduangta W, PraneeReamkatog (2011), Effect of Modification Medium on Growth Development of D parishii In vitro, AmericanEurasian J Agric & Environ Sci., 11 (1): 117-121 [23] Kalimuthu K, Senthilkumar R And Vijayakumar S (2007) In vitro micropropagation of orchid, Oncidium sp (Dancing Dolls), African Journal of Biotechnology Vol (10), pp 1171-1174 [24] Khatun H, Khatun M M, Biswas M S, Kabir M R, AL- Amin M, (2010), In vitro growth and development of Dendrobium hybrid orchid, SSN 0258-7122 Bangladesh J Agril Res 35(3) : 507-514 [25] Tuhuteru S (2012), “Growth and development of D anosmum orchid on in vitro culture media with several coconut water concentrations”, Agrologia, Vol 1, No 1, April 2012, hal 1-12 Phú Thọ, ngày 15 tháng 05 năm 2017 Ý kiến giảng viên hướng dẫn Sinh viên thực (Kí ghi rõ họ tên) (Kí ghi rõ họ tên) TS Cao Phi Bằng Nguyễn Thị Hồng Thúy ... THÚY NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG ĐẾN SỰ PHÁT TRIỂN THÂN VÀ RỄ LOÀI LAN TRẦM (Dendrobium nestor) GIAI ĐOẠN IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành : Sư phạm Sinh. .. QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Ảnh hưởng nồng độ phối h p c c chất điều hòa sinh trưởng đến ph t triển thân in vitro lan Trầm (D nestor) 3.1.1 Ảnh hưởng BAP đến phát triển thân in vitro lan Trầm. .. in vitro lan Trầm (D nestor) 25 3.1.1 Ảnh hưởng BA đến phát triển thân in vitro lan Trầm (D nestor) 25 3.1.2 Ảnh hưởng Kinetin đến phát triển thân in vitro lan Trầm (D nestor)