Qua bảng 3.6 và hình 3.12 trên thấy rằng, sự tăng trƣởng của số lá ở môi trƣờng có kết hợp cả hai loại phytohoocmon là 3,35 lá ở 0 tuần, 4,05 lá ở 4 tuần và 4,9 lá ở 8 tuần; cao hơn so với công thức đối chứng (3,2 lá ở 0 tuần, 3,45 lá ở 4 tuần, 3,45 lá ở 8 tuần).
Vậy khi bổ sung vào môi trƣờng nuôi cấy với nồng độ 1mg/l BAP và 1mg/l Kinetin thu đƣợc hệ số nhân và chất lƣợng chồi tƣơng đối tốt.
3.2. Ảnh hưởng của nồng độ và sự phối h p c c chất điều hòa sinh trưởng đến khả năng ra rễ của cây in vitro lan Trầm (D. nestor)
3.2.1. Ảnh hưởng của IBA đến khả năng ra rễ của cây in vitro lan Trầm (D. nestor) (D. nestor)
Thử nghiệm đối với IBA, tôi thay đổi các nồng độ bổ sung vào môi trƣờng nuôi cấy từ 0,25 mg/l đến 1,5 mg/l, kết quả thu đƣợc thể hiện trong bảng 3.7.
Qua bảng 3.7 và hình 3.13, ta nhận thấy khi tăng nồng độ IBA từ 0,25 mg/l đến 1,5 mg/l thì số rễ thay đổi lớn ở nồng độ IBA là 0,25mg/l với giá trị số rễ trung bình là 10,25 rễ, đây là nồng độ có số rễ đạt giá trị lớn nhất trong thí nghiệm này. Khi tăng nồng độ IBA lên 0,5mg/l, 0,75mg/l, 1mg/l, 1,5mg/l thì giá trị số rễ giảm còn 8,6 rễ, 8,5 rễ, 8,53 rễ và 8,92 rễ. Các công thức này đều có giá trị cao hơn so với công thức đối chứng.
Bảng 3.7. Ảnh hưởng của IBA đến khả năng ra rễ của cây in vitro loài lan Trầm (D. nestor)
Công thức Số rễ (rễ) Chiều dài rễ (mm) Khối lư ng cây (g) Tỉ lệ ph t sinh chồi (%) Hệ số nhân (lần) ĐC 5,77 38,45 1,31 73,33 2,00 I025 10,25 29,76 2,02 91,67 2,33 I05 8,60 36,38 3,18 86,67 2,13 I075 8,50 37,15 2,93 83,33 2,25 I1 8,53 34,51 2,31 73,33 2,27 I15 8,92 32,84 1,89 100 2,46
Bên cạnh việc phát sinh rễ mới, các rễ này còn có sự tăng lên về chiều dài. Cụ thể là ở công thức I025, chiều dài rễ đạt giá trị thấp nhất (29,76mm) và giá trị cao nhất là 38,45mm ở công thức đối chứng. Khi ta tăng nồng độ IBA lên 0,5mg/l và 0,75mg/l thì chiều dài rễ cũng tăng theo lên 36,38mm và 37,15mm. Nhƣng khi tiếp tục tăng nồng độ IBA lên 1mg/l và 1,5mg/l thì chiều dài rễ giảm dần còn 34,51mm và 32,84mm. Qua đây thấy đƣợc rằng IBA ảnh hƣởng không nhiều tới việc tăng chiều dài rễ của rễ.
Ảnh hƣởng của IBA đến khả năng ra rễ của cây in vitro lan Trầm đƣợc mô phỏng qua hình 3.13.
ĐC I025
I05 I075
I1 I15
Hình 3.14. Rễ cây in vitro trên các môi trường có bổ sung IBA
Ngoài nghiên cứu về rễ, tôi còn chú ý đến sinh khối của cây con in vitro.
Sau khi sử dụng cân phân tích để cân khối lƣợng của cây, đã thu đƣợc số liệu nhƣ hình 3.15. Ở công thức đối chứng có khối lƣợng cây là nhỏ nhất (1,31g), khối lƣợng cây tăng từ 2,02g lên 3,18g khi tăng nồng độ IBA từ 0,25mg/l lên 0,5mg/l. Tiếp đến, khi tăng thêm nồng độ IBA ở các công thức I075, I1, I15 thì thấy đƣợc khối lƣợng cây có xu hƣớng giảm dần.
Bên cạnh đó, dù trong quá trình này chỉ bổ sung Auxin nhƣng vẫn phát sinh thêm chồi mới với tỷ lệ phát sinh chồi khá cao và có hệ số nhân đều lớn hơn 2. Dựa vào bảng 3.7 ở trên ta nhận thấy, tỉ lệ phát sinh chồi là thấp nhất với 73,33% ở công thức đối chứng và công thức I15 với hệ số nhân lần lƣợt là
2 lần và 2,27 lần. Tỉ lệ phát sinh chổi đạt giá trị cao nhất (100%) và hệ số nhân cao nhất (2,46 lần) ở môi trƣờng có bổ sung 1,5mg/l IBA.
Hình 3.15. Ảnh hưởng của IBA đến khối lượng cây
Nhƣ vậy, môi trƣờng nuôi cấy có bổ sung IBA ở nồng độ 0,25mg/l là môi trƣờng thích hợp cho khả năng ra rễ của cây con in vitro loài lan Trầm.
3.2.2. Ảnh hưởng của NAA đến khả năng ra rễ của cây in vitro lan Trầm (D. nestor) (D. nestor)
Trong thí nghiệm này tôi bổ sung NAA vào môi trƣờng nuôi cấy với các nồng độ: 0,25mg/l, 0,5mg/l, 0,75mg/l, 1mg/l, 1,5mg/l. Tiến hành theo dõi mẫu cấy, xác định môi trƣờng thích hợp để giai đoạn ra rễ đạt kết quả tốt nhất. Kết quả đƣợc thống kê ở bảng nhƣ sau:
Bảng 3.8. Ảnh hưởng của IBA đến khả năng ra rễ của cây in vitro loài lan Trầm (D. nestor)
Công thức Số rễ (rễ) Chiều dài rễ (mm) Khối lư ng cây (g) Tỉ lệ ph t sinh chồi (%) Hệ số nhân (lần) ĐC 5,77 38,45 1,31 73,33 2,00 N025 10,27 33,95 3,06 100 2,47 N05 9,56 36,47 1,73 77,78 2,11 N075 9,08 29,18 2,04 83,33 2,58 N1 8,27 30,48 2,27 93,33 2,33 N15 9,93 32,47 3,53 93,33 2,47
ĐC N025
N05 N075
N1 N15
Hình 3.16. Rễ cây in vitro trên các môi trường có bổ sung NAA
Kết quả phân tích cho thấy, tƣơng tự nhƣ đối với IBA, khi nồng độ NAA trong môi trƣờng là 0,25mg/l thì cây đạt số rễ nhiều nhất là 10,27 rễ, lớn hơn so với IBA ở cùng nồng độ. Ở các công thức N05, N075, N1, N15 có số rễ lần lƣợt là 9,56 rễ, 9,08 rễ, 8,27 rễ và 9,93 rễ. Giá trị số rễ nhỏ nhất là 5,77 rễ trong môi trƣờng công thức đối chứng.
Giống nhƣ ở thí nghiệm 4, chiều dài rễ ở công thức đối chứng là lớn nhất (38,45 rễ) nhƣng khối lƣợng cây và hệ số nhân chồi lại là thấp nhất so với các công thức khác. Khối lƣợng cây cao nhất là ở môi tƣờng nuôi cấy có nồng độ NAA là 1,5mg/l. Tƣơng tự nhƣ ở thí nghiệm 4, cây in vitro trong thí nghiệm này cũng có sự phát sinh chồi, tỉ lệ phát sinh chồi tƣơng đối cao, nhỏ nhất là ở
công thức đối chứng (73,33%) và lớn nhất là ở công thức N025 (100%). Hệ số nhân có giá trị là lớn nhất ở công thức N075 với hệ số 2,58 lần.
Hình 3.17. Ảnh hưởng của NAA đến khả năng ra rễ
Hình 3.18. Ảnh hưởng của IBA đến khối lượng cây
Nhƣ vậy, bổ sung NAA ở nồng độ 0,25mg//l cho khả năng ra rễ là cao nhất trong thí nghiệm này.
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
1. Kết luận
Khi so sánh giữa các nồng độ BAP khác nhau, môi trƣờng có bổ sung 2 mg/l BAP là môi trƣờng cho hệ số nhân chồi cao nhất (3 lần), sự phát triển thân đạt kết quả cao trên môi trƣờng bổ sung 1,5mg/l BAP (sinh trƣởng chiều cao tƣơng đối là 25,23 mm).
Giữa các nồng độ Kinetin nghiên cứu, môi trƣờng có bổ sung 0,5 mg/l Kinetin là môi trƣờng thích hợp nhân nhanh chồi, hệ số nhân đạt 2,65 lần, tuy nhiên, chồi nuôi cấy trên môi trƣờng có bổ sung 2,5mg/l có sự sinh trƣởng chiều cao tƣơng đối là cao nhất (15,37 mm).
Khi có sự kết hợp giữa BAP và Kinetin thì số rễ/cây cao hơn so với sử dụng riêng rẽ BAP và Kinetin (9,72 rễ/cây).
Trong số các nồng độ IBA nghiên cứu, môi trƣờng có 0,25 mg/l IBA thích hợp để ra rễ cây in vitro loài lan Trầm.
Giữa các nồng độ NAA nghiên cứu, môi trƣờng bổ sung 0,25 mg/l NAA thích hợp cho sự phát sinh rễ đạt giá trị cao nhất (10,27 rễ/cây).
2. Kiến nghị
Tiếp tục nghiên cứu các giai đoạn tiếp theo để hoàn thiện quy trình nhân giống in vitro loài lan này.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tài liệu tham khảo tiếng Việt
[1]. Trần Văn Bảo (2002), Kỹ thuật nuôi trồng phong lan, NXB Trẻ.
[2]. Nguyễn Thị Mỹ Duyên (2009), Nhân giống lan Dendrobium anosmum,
Dendrobium mini bằng phƣơng pháp nuôi cấy mô. Nghiên cứu các loại
giá thể trồng lan Dendrobium mini thích hợp và cho hiệu quả cao, Đề tài nghiên cứu khoa học cấp trƣờng, Trƣờng Đại học An Giang.
[3]. Nguyễn Văn Hai, Lƣơng Trọng Nhàn (2013), Kĩ thuật trồng lan
Dendrobium, NXB Thời đại.
[4]. Trần Hợp (1993), Phong lan có hương thơm, NXB Khoa học và kỹ thuật. [5]. Trần Hợp (1998), Phong lan Việt Nam, NXB Nông nghiệp, TP Hồ
Chí Minh.
[6]. Dƣơng Đức Huyến (2007), Thực vật chí Việt Nam - Họ lan
(Orchidceae), NXB Khoa học Kỹ thuật.
[7]. Nguyễn Nhƣ Khanh, Cao Phi Bằng (2009), Giáo trình sinh lý thực vật, NXB Giáo Dục.
[8]. Dƣơng Công Kiên (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật, NXB TP.Hồ Chí Minh.
[9]. Vũ Ngọc Lan, Nguyễn Thị Lý Anh (2013), Nhân giống in vitro loài Lan bản địa Dendrobium nobile Lindl, Tạp chí Khoa học và Phát triển, 11(7), tr 917-925
[10]. Hoàng Thị Sản (2011), Phân loại học thực vật, NXB Giáo dục Việt Nam. [11]. Vũ Thanh Sắc, Nguyễn Thị Thu Huyền, Lê Thị Lý (2012), Nghiên cứu
nhân giống in vitro lan Hoàng thảo trầm trắng (D. anosmum var.alba),
Tạp chí khoa học công nghệ, Đại học Thái Nguyên, 93(05), tr 131-135.
[12]. Nguyễn Văn Song và cộng sự (2011), Nhân nhanh in vitro lan Kim
Điệp (Dendrobium Chrysotoxum) – Một loài lan rừng có nguy cơ tuyệt
chủng, Tạp chí khoa học, Đại học Huế, số 64.
[13]. Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh và Nguyễn Thị Phƣơng Thảo, (2005), Giáo trình công nghệ sinh học nông nghiệp, NXB Nông Nghiệp. [14]. Thân Thị Thúy (2015), Bƣớc đầu nghiên cứu quy trình nhân nhanh
nghệ nuôi cấy mô tế bào, Khóa luận tốt nghiệp đại học, Trƣờng đại học sƣ phạm Hà Nội 2.
[15]. Nguyễn Thị Tình (2015), Nghiên cứu nhân giống Lan Thạch Hộc
(Dendrobium nobile Lindl) trong ống nghiệm từ phôi, Tạp chí Nông
nghiệp và Phát triển Nông thôn tháng 11 năm 2015, tr 44-52.
[16]. Nguyễn Vũ Thị Hoàng Uyên (2005), Nhân giống lan Dendrobium bằng phƣơng pháp gieo hạt in vitro, Khóa luận tốt nghiệp đại học.
[17]. Đào Thị Thanh Vân, Đặng Thị Tố Nga (2008), Giáo trình hoa lan, NXB Nông nghiệp, Hà Nội.
[18]. Nguyễn Văn Vinh, Nguyễn Hữu Lễ (2009), Ảnh hƣởng của chất điều hòa sinh trƣởng thực vật lên sự phát sinh chồi và rễ Phong lan giả hạt D.
anosmum, Tạp chí khoa học và công nghệ, tập 47, số 5, 2009 Tr 99 - 10.
[19]. Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp, (2005), Công nghệ
sinh học tế bào, tập 2, NXB Giáo dục, Hà Nội.
Tài liệu tham khảo tiếng nước ngoài
[20]. Hongthongkham. J, Bunnag. S (2014), In vitro propagation and cryopreservation of Aerides odorata Lour. (Orchidaceae)”, US national library of medicine national institutes of health.
[21]. Jaime A. Teixeira da Silva, Jean Carlos Cardoso, Judit Dobra´nszki, Songjun Zeng (2015), Dendrobium micropropagation: a review, Plant Cell Rep (2015) 34:671–704 DOI 10.1007/s00299-015-1754-4.
[22]. Kaewduangta. W, PraneeReamkatog (2011), Effect of Modification Medium on Growth Development of D. parishii In vitro, American-
Eurasian J. Agric & Environ. Sci., 11 (1): 117-121.
[23]. Kalimuthu K, Senthilkumar R. And Vijayakumar S (2007) In vitro
micropropagation of orchid, Oncidium sp. (Dancing Dolls), African
Journal of Biotechnology Vol. 6 (10), pp. 1171-1174.
[24]. Khatun. H, Khatun. M. M, Biswas. M. S, Kabir. M. R, AL- Amin. M, (2010), In vitro growth and development of Dendrobium hybrid orchid, SSN 0258-7122 Bangladesh J. Agril. Res. 35(3) : 507-514.
[25]. Tuhuteru S. (2012), “Growth and development of D. anosmum orchid
on in vitro culture media with several coconut water concentrations”,
Phú Thọ, ngày 15 tháng 05 năm 2017
Ý kiến của giảng viên hướng dẫn Sinh viên thực hiện
(Kí và ghi rõ họ tên) (Kí và ghi rõ họ tên)