Thủy canh cây cúc vạn thọ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HỒ CHÍ MINH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC CHUYÊN NGÀNH CNSH NÔNG NGHIỆP NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG SẢN XUẤT hỢp chẤt thỨ cẤp CỦA cây CÚC VẠN THỌ (Tagetes patula L ) Trong điỀu kiỆn thỦy canh nhỎ giỌt GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN MSSV LỚP TP HỒ CHÍ MINH, THÁNG 8 NĂM 2020 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, tôi xin bài tỏ lòng biết ơn đến Ban Giám Hiệu, quý thầy cô giảng viên khoa Công nghệ Sinh học trường Đại học Công nghiệp Thự.

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC CHUYÊN NGÀNH CNSH NÔNG NGHIỆP NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG SẢN XUẤT HỢP CHẤT THỨ CẤP CỦA CÂY CÚC VẠN THỌ (Tagetes patula L.) TRONG ĐIỀU KIỆN THỦY CANH NHỎ GIỌT GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN : SINH VIÊN THỰC HIỆN : MSSV : LỚP : TP.HỒ CHÍ MINH, THÁNG NĂM 2020 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, tơi xin tỏ lịng biết ơn đến Ban Giám Hiệu, quý thầy cô giảng viên khoa Công nghệ Sinh học trường Đại học Công nghiệp Thực phẩm tạo điều kiện vật chất, kiến thức kỹ suốt thời gian học tập trường Xin gửi lời cảm ơn đến bạn làm việc phịng thí nghiệm Khoa Cơng nghệ Sinh học ln giúp đỡ tơi q trình học tập hồn thành khóa luận tốt nghiệp Và hết, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến ThS Phạm Văn Lộc, người dành nhiều thời gian tâm huyết giúp nâng cao kiến thức, kĩ kinh nghiệm làm việc, tạo điều thuận lợi vật chất giúp tơi hồn thành khóa luận cách tốt Cuối xin cảm ơn gia đình bạn bè ln quan tâm động viên suốt trình thực khóa luận tốt nghiệp Tp Hồ Chí Minh, ngày 14 tháng năm 2020 Sinh viên Nguyễn Hoàng Sơn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan báo cáo khóa luận tốt nghiệp ngành Cơng nghệ sinh học thực Các số liệu thu thập kết báo cáo trung thực, khơng chép từ đề tài khoa học Tp Hồ Chí Minh, ngày 21, tháng 8, năm 2020 Sinh viên thực MỤC LỤC CHƯƠNG TỔNG QUAN ĐỀ TÀI MỤC LỤC HÌNH CVT cúc vạn thọ ĐẶT VẤN ĐỀ Phương pháp canh tác nông nghiệp bên nhà màng kết hợp với hệ thống tưới tự động khơng cịn q xa lạ với Bằng cách kết hợp hệ thống tưới điều khiển chủ động yếu tố ngoại cảnh người tăng suất kiểm sốt chất lượng sản phẩm Bằng cách họ tạo sản phẩm phẩm có chất lượng cao đạt tiêu an toàn, nâng cao giá trị sản phẩm Hai phương pháp canh tác hiệu thủy canh nhỏ giọt thủy canh hồi lưu Chúng áp dụng rộng rãi hiệu sản xuất loại rau ăn lá, rau ăn loại xà lách, dưa leo, cà chua,…cũng số loài hoa yến thảo, hoa cúc,… Các loại dược liệu đa số trồng phương pháp truyền thống, điều không tránh khỏi không đồng sản phẩm phải sử dụng lượng thuốc bảo vệ thực vật định Làm giảm chất lượng sản phẩm Áp dụng phương pháp canh tác đại vào trồng dược liệu hướng tiềm hồn tồn thực Ngồi khả tạo màu, lutein cịn có tác dụng chống tia cực tím, giúp bảo vệ tránh tổn thương tế bào da, viêm da, ung thư da, chống lão hóa nên lutein quan tâm ứng dụng cơng nghiệp mỹ phẩm Lutein có thành phần loại dược phẩm bổ sung nhằm hỗ trợ điều trị phịng chống suy thối võng mạc tuổi già, hỗ trợ ngăn ngừa bệnh thối hóa điểm vàng, đục thủy tinh thể, giúp cải thiện thị lực người làm việc nhiều với máy tính hay tiếp xúc nhiều với ánh sáng cường độ cao (thợ hàn), (Bowen, 2001) Cơ thể tạo lutein bổ sung từ loại thực phẩm, từ viên uống thực phẩm chức Do ngày có nhiều nghiên cứu liên quan đến lutein Khi mà công nghệ phát triển, việc tiếp xúc với màng hình máy tính, điện thoại, TV điều khơng tránh khỏi, việc bổ xung lutein điều thật cần thiết Kết khảo sát cho thấy cánh hoa cúc vạn thọ (Tagetes) nguồn nguyên liệu lutein tự nhiên lý tưởng cho việc thu nhận lutein ester chứa hàm lượng carotenoid cao (khoảng 1,6 % trọng lượng khô) gần tinh khiết (trên 95% carotenoid lutein ester, lại dạng đồng phân zeaxanthin) (Cantrill, R., 2004) Các biện pháp canh tác truyền thống dần không đáp ứng nhu cầu sản xuất lutein từ cúc vạn thọ, đòi hỏi cần có phương pháp canh tác hiệu Và hết nâng cao chất lượng cúc vạn thọ Và phương pháp canh tác thủy canh nhỏ giọt giải pháp đầy tiềm Vì khóa luận tốt nghiệp “Nghiên cứu khả sản xuất hợp chất thứ cấp cúc vạn thọ Tagetes patula L trồng phương pháp thủy canh nhỏ giọt” thực Mục tiêu đề tài: So sánh khả phát triển, khả sản xuất carotenoid cúc vạn thọ trồng phương pháp thủy canh nhỏ giọt phương pháp truyền thống Nội dung nghiên cứu đề tài: - Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng đạm đến phát triển CVT - So sánh hàm lượng carotenoid CVT phương pháp thủy canh nhỏ giọt phương pháp canh tác truyền thống CHƯƠNG ỔNG QUAN ĐỀ TÀI T 1.1 Giới thiệu hệ thống thủy canh Thủy canh đời từ sớm, lịch sử ghi nhận trồng hỗn hợp khơng có đất gồm cát sỏi xuất từ lâu, vườn treo Babylon, vườn Aztec Mexico minh chứng điển hình vườn thủy canh Với phát triển khoa học công nghệ, thủy canh ngày xem phương pháp hàng đầu việc sản xuất rau, củ đạt chuẩn an tồn Các mơ hình thủy canh thường hoạt động nhà màng nhằm kiểm soát yếu tố ngoại cảnh tránh sâu bệnh hại từ cắt giảm thuốc hóa học, tăng suất trồng 1.2 Các mơ hình canh tác thủy canh Hiện hầu hết máng trồng làm nhựa, làm vật liệu khác bê tông, thủy tinh, kim loại gỗ Các máng trồng nên che sáng để không cho tảo, rong rêu phát triển dung dịch thủy canh Các mơ hình nghiên cứu, điều chỉnh thành kiểu khác phù hợp với điều kiện nơi 1.2.1 Hệ thống dạng bấc (Wick System) Hình Hệ thống thủy canh dạng bấc Hệ thống dạng bấc dạng hệ thống thủy canh đơn giản Đúng tên gọi, bí hệ thống nằm chỗ sợi bấc Đặt đầu sợi bấc hút cho chạm vào phần rễ Đầu bấc chìm dung dịch dinh dưỡng Sợi bấc làm nhiệm vụ hút nước dung dịch dinh dưỡng lên cung cấp cho rễ (tương tự sợi bấc đèn dầu, hút dầu lên để trì cháy) Như có Trang đủ nước chất dinh dưỡng để phát triển 1.2.2 Hệ thống thủy canh tĩnh (Water Culture) Hình Hệ thống thủy canh dạng tĩnh Hệ thống thường thùng hay nước chứa dung dịch thủy canh, phần bệ giữ thường làm chất dẻo nhẹ xốp đặt dung dịch dinh dưỡng, rễ ngập chìm nước có chứa dung dịch dinh dưỡng Vì mơi trường thiếu khí oxy nên cần có máy bơm bơm khí vào khối sủi bọt để cung cấp oxy cho rễ Hệ thống thủy canh dạng thường dùng phổ biến dạy học Hệ thống tốn kém, tận dụng bể chứa nước hay bình chứa khơng rỉ khác 1.2.3 Hệ thống ngập & rút định kỳ (Ebb and Flow System) Trang 10 P Tân Sơn Nhì, Q Tân Phú, TP Hồ Chí Minh), mô theo điều kiện nhà lưới; nhiệt độ 30 ÷ 35oC, ẩm độ 55 ÷ 70%, cường độ ánh sáng 20000 ÷ 50000 lux Hệ thống bao gồm hệ thống thủy canh nhỏ giọt, mái che di động, hệ thông phun sương cảm biến nhiệt độ Hệ thống thủy canh nhỏ giọt có cấu tạo bao gồm thùng chứa dung dịch dinh dưỡng, máy bơm cấp dinh dưỡng cho hệ thống, lọc loại bỏ cặn tránh tắt nghẽn đầu nhỏ giọt, van giúp điều chỉnh lưu lượng tưới, van điện từ tránh dung dịch thoát chênh lệch độ cao, đầu nhỏ giọt que nhỏ giọt quy định lưu lượng tưới Toàn hệ thống điều khiển timer điện tử Cài đặt chế độ tưới: 150 mL/cây/ngày tháng đầu tiên, tháng thứ 300 mL/cây/ngày; tưới lần/ngày vào thời điểm khác ngày: giờ, 10 giờ, 12 giờ, 14 giờ, 16 (Phạm Thị Minh Tâm Nguyễn Thị Bích Phượng, Hình 12 Hệ thống thủy canh nhỏ giọt 2018) Hệ thống cắt nắng thiết kế máy che di động có cấu tạo từ lưới chống nắng, có độ che nắng 50% Hệ thống phun sương Irael với béc phun bốn hướng có lưu lượng 42 L/h tạo động lực máy bơm có cơng suất 240 L/h điều chỉnh lưu lượng Hệ thống phun sương điều khiển khống chế nhiệt, cảm biến đặt khu vực trồng cây, cách mặt đất 50 cm, cài đặt giới hạn 35 oC, giới hạn 30oC Trang 28 Giá thể Giá thể sử dụng có thành phần: 30% phân trùn quế + 35% cát + 17,5% tro trấu + 17,5% mụn dừa Sử dụng chậu chun dụng trồng có kích thước 20 x 15 cm (thể tích giá thể 2.826 cm 3) (Phạm Thị Minh Tâm Nguyễn Thị Bích Phượng, 2018) Bớ trí thí nghiệm Thí nghiệm bố trí theo kiểu khối hồn tồn ngẫu nhiên (RCBD) với lần lặp lại Thí nghiệm 1: chậu trồng cây, lần lặp lại Các tưới dung dịch dinh dưỡng với nồng độ 50, 100, 150, 200 ppm Các yếu tố khoáng vi lượng cung cấp theo thành phần vi lượng môi trường MS (phụ lục 1) Nồng độ môi trường dinh dưỡng thể bảng Bảng Chỉ số cac dung dịch dinh dưỡng Nồng độ N (ppm) pH 50 100 150 200 5,98 5,99 6,01 5,98 EC (µS/cm) 2313 3044 3540 4022 TDS (ppm) – theo thực tế 1178 1522 1770 1931 Nồng độ chất đa lượng dung dịch thủy canh (ppm) - theo tính tốn N P K Ca Mg S 50 100 150 200 150 150 150 150 200 200 200 200 130 130 130 130 50 50 50 50 65 65 65 65 Thí nghiệm 2: chậu trồng ba cây, lần lập lại Một nửa tưới dung dịch dinh dưỡng có nồng độ đạm 100 ppm, nồng độ dung dịch 1607 ppm, EC = 3214, pH = 6,04 Các yếu tố khoáng vi lượng cung cấp theo thành phần vi lượng môi trường MS (phụ lục 1) Một nửa tưới nước bón phân định kì với lượng phân bón là: phân ure 2,91 g; phân lân 29 g; phân kali 5,33 g chia thành lần bón vào ngày 15, 30, 45 trình sinh Trang 29 trưởng Phun phân vi lượng dạng bón tuần lần Thành phần loại phân bón thể bảng Bảng Thành phần phân bón sử dụng Phân bón Thành phần Xuất xứ Urê 46,3% N Việt Nam Lân 16% P2O5 hh, 4% P2O5 td 10% S Việt Nam Kali 61% K2O Việt Nam Vi lượng B: 2000 ppm, Mn: 700 ppm, MgO: 1700 ppm, Zn: 700 ppm, Fe: 700 ppm, Cu: 1700 ppm, CaO: 500 ppm, S: 17000 ppm Việt Nam Khối lượng cụ thể chất (phụ lục 4) Sau tháng trồng, ta thu hoạch CVT, đo sinh khối thu Tiến hành tách chiết carotenoid tổng số (A Prieto et al., 2011) Phương pháp sử lí sớ liệu Số liệu thu thập phân tích phần mềm Stagraphics Centurion, so sanh kiêu trắc nghiệm đa biên độ Duncan với độ tin cậy 95% Trang 30 CHƯƠNG KẾT QUẢ VA THẢO LUẬN Khảo sat ảnh hương nồng độ đạm đến phat triên CVT điều kiện thủy canh nhỏ giọt Kết theo dõi trình sinh trưởng cúc vạn thọ tháng Các tiêu đường kính tán, chiều cao cây, số cành cúc vạn thọ ghi nhận kết thể bảng Bảng Ảnh hương nồng độ đạm lên sinh trương cúc vạn thọ Nồng độ N (ppm) Đường kính tán (cm) Chiều cao 50 (cm) Số cành (cành/cây) Đặc điểm khác 16,3 ± 3,7a (*) 19,8 ± 0,5c 8,5 ± 4,4a Chậm nụ 100 20,0 ± 2,2a 20,0 ± 0,8c 9,3 ± 0,9a Ra nụ sớm 150 20,6 ± 2,4a 18,0 ± 0,8b 11,8 ± 1,9a Ra nụ sớm 200 19,7 ± 5,5a 16,7 ± 0,5a 8,0 ± 3,8a Cây dễ gãy *Các mẫu tự khác biểu diễn mức độ sai biệt có ý nghĩa khác (theo cột) độ tin cậy 95% Kết thí nghiệm cho thấy nồng độ đạm khác nhau, tiêu số cành đường kính tán khơng khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê Về tiêu chiều cao nồng độ đạm thấp (50; 100 ppm) cao so với nồng độ đạm cao (150; 200 ppm) Cây nồng độ đạm 50 ppm xu hướng chồi chậm nụ Trong nồng độ đạm trung bình (100; 150 ppm) có xu hướng phát triển cân chiều cao chồi phù hợp để nụ sớm Việc nụ sớm rút ngắn thời gian canh tác từ 15 ÷ 20 ngày so với canh tác truyền thống Ở nồng độ đạm 200 ppm chậm phát triển dễ gãy đổ Kết hợp tiêu theo dõi, nồng độ đạm 100 ppm đánh giá phù hợp thủy canh cúc vạn thọ Kết tương tự công bố Owen đồng tác giả (2017) cho thấy nồng độ N phù hợp thủy canh cúc vạn thọ 100 ÷ 200 ppm Trang 32 Hình 13 Cây cúc vạn thọ qua từng giai đoạn (1, 2, 3, 4: nồng độ 50, 100, 150, 200 ppm; A, B, C: 14, 21, 28 ngày tuổi) Khảo sat hình thành carotenoid CVT trồng điều kiện bình thường thủy canh nhỏ giọt Kết theo dõi trình sinh trưởng cúc vạn thọ tháng Các tiêu đường kính tán, chiều cao cây, số cành cúc vạn thọ ghi nhận kết thể bảng Bảng Ảnh hưởng phương pháp trồng đén phát triển CVT Phương pháp Đường kính tán (cm) Chiều cao (cm) Truyền thống 22,86 ± 4,91a (*) 40,14 ± 1,35a Thủy canh nhỏ giọt 29,00 ± 2,16b 39,57 ± 1,90a Số cành (cành/cây) Đặc điểm khác 4,43 ± 0,79a Phát triển chiều cao 8,14 ± 2,04b Tán phát triển mạnh *Các mẫu tự khác biểu diễn mức độ sai biệt có ý nghĩa khác (theo cột) độ tin cậy 95% Sau thu hoạch tiến hành đo sinh khối mẫu, số liệu thu thể bảng Trang 33 Bảng Khối lượng chất khô mẫu cúc vạn thọ Phương pháp trồng Khối lượng tươi (g) Khối lượng khô (g) Truyền thống 87,67 ± 13,28a 17,55 ± 5,14a Thủy canh nhỏ giọt 161,67 ±17,56b 27,71 ± 1,37b Hàm lượng carotenoid có mẫu sau xác định thể bảng Bảng Hàm lượng carotenoid tổng (C1, C2, C3 chậu 1, chậu 2, chậu 3) Phương pháp trồng Hàm lượng carotenoid tổng (µg/mL) C1 C2 C3 Truyền thống 198,37 ±3,48a 209,00 ± 0,65a 205,2 ± 5,45a Thủy canh nhỏ giọt 234,83 ± 12,33b 244,37 ± 5,42b 248,87 ± 3,43b Kết thí nghiệm cho thấy hai phương pháp trồng khác nhau, tiêu chiều cao cho thấy khơng có khác biệt mặt thống kê Về tiêu đường kính tán, số nhánh sinh khối phương pháp thủy canh nhỏ giọt cao phương pháp trồng truyền thống Cây trồng phương pháp truyền thống có xu hướng phát triển chiều cao, tán hẹp thưa Cây trồng phương pháp thủy canh nhỏ giọt phát triển cân chiều cao, tán dày có số nhánh nhiều Khi phân tích hàm lượng carotenoid hình thành q trình phát triển CVT cho thấy CVT trồng thủy canh có hàm lượng carotenoid cao CVT trồng truyền thống Trang 34 Hình 14 Cây cúc vạn thọ qua từng giai đoạn (1, 2: phương pháp truyền thống thủy canh nhỏ giọt; A, B, C: 14, 28, 49 ngày tuổi) Trang 35 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Khi tiến hành thủy canh CVT nồng độ đạm thích hợp 100 ppm Cây CVT trồng theo phương pháp thủy canh nhỏ giọt phát triển toàn diện cho lượng sinh khối hàm lượng carotenoid cao so với CVT trồng theo phương pháp truyền thống Kiến nghị − Cải tạo vườn thực vật, mái tôn làm gảm cường độ ánh sáng làm cho phát triển − Tiến hành phân tích hàm lượng lutein zeaxanthin để kết luận xác hình thành hợp chất thứ cấp CVT điều kiện thủy canh nhỏ giọt Trang 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Anh [1] Bowen (2001), lutein ester having high bioavailability, US Paten: 6,313,169 B1 [2] Cantrill, R (2004), Lutein from Tagetes erecta, Chemical and Technical Assessment (CTA), 52(12): 1-5 [3] Soule, J.A (1996), Novel annul and perennial Tagetes pp 546 - 551 [4] United States Department of Agriculture (2011), "Genus: Tagetes L.", Germplasm Resources Information Network Retrieved 2011-07-14 [5] Saha TN, Singh Kanwar P (2006), Genetic Variability, Heritability and Genetic Advance in French Marigold (Tagetes patula L.), Indian Journal of Plant Genetic Resources, 19(2):206 - 208 [6] Evans FJ, Kasahara Y, Khan MT, Kitanaka S, Yasukawa K (2002), Effect of metanol extract from flower petals of Tagetes patula L on acute and chronic inflammation model, Phytother Res, 16(3):217 - 22 [7] Aneela Naz, Humaira Siddiqui Mohammad Ahmad, Rubeena Saleem, Shaheen Faizi, Syed Iqbal Ahmad (2004), Hypotensive and toxicological study of citric acid and other constituents from Tagetes patula roots, Archives of pharmacal research, 27(10):1037 - 1042 [8] Bernards M A Garner S.R and Neff B D (2010), Dietary carotenoid levels affect carotenoid and retinoid allocation in female Chinook salmon Oncorhynchus tshawytscha, Journal of Fish Biology, 76:1474 - 1490 [9] Serena Lim Sue Lynn (2003), A study on the extraction of lutein from selected locally grown vegetation, A thesis submitted in fulfillment of the requirements Trang 38 for the award of the degree of master of engineering (chemical), University Teknologi Malaysia [10] Thorne (2005), Lutein and zeaxanthin, Alternative Medicine Revuew, 10(2):128 -129 [11] Owen WG, Josh H, Brian EW (2017) Nutritional monitoring: Marigolds (Tagetes erecta & T patula) E – Gro: 6(41): - [12] Xu L, Wang G, Shi Y (2011) Chemical constituents from Tagetes erecta flowers Chem Nat Compd, 47(2): 281 – 283 [13] A Shaish, A Ben-Amotz, and M Avron, "[41] Biosynthesis of β-carotene in Dunaliella," in Methods in Enzymology vol 213, ed: Academic Press, 1992, pp.439-444 [14] A Prieto, J Pedro Canavate, and M Garcia-Gonzalez, "Assessment of carotenoid production by Dunaliella salina in different culture systems and operation regimes," J Biotechnol, vol 151, pp.180-5 [15] Ausich, R L., Sanders, D J (1997), Process for the formation, isolation and purification of comestible xanthophyll crystals from plants, US Patent: 5,648,564 Tiếng Việt [16] Phạm Thị Minh Tâm, Nguyễn Thị Bích Phượng (2018) Ảnh hưởng giá thể trồng nồng độ đạm đến sinh trưởng phát triển hương thảo (Rosmarinus officinalis L.) trồng chậu Tạp chí khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 54(3B): 102-108 [17] Hà Thị Bích Ngọc, Nguyễn Văn Mùi, Trần Thị Huyền Nga (2006), Điều tra hợp chất carotenoid số thực vật Việt Nam, Tạp chí khoa học ĐHQGHN, Khoa học tự nhiên công nghệ 23:130-134 Trang 39 [18] Nguyễn Văn Cường (2012), Phân tích động học q trình trích ly dầu từ hạt Jatropha có hỗ trợ cơng nghệ Dic, tạp chí khoa học 21(A): 45-51 Tài liệu web: [19] https://en.wikipedia.org/wiki/Lutein truy cập ngày 25/7/2020 [20] https://en.wikipedia.org/wiki/Tagetes_erecta truy cập ngày 25/7/2020 [21] https://vi.wikipedia.org/wiki/Thủy _canh truy cập ngày 20/6/2020 Trang 40 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Thành phần vi lượng môi trường MS: Thành phần khoáng vi lượng thể bảng sau: Nhóm Ḿi khống Nồng độ (mg/L) MnSO4 22,30 H3BO3 6,20 ZnSO4.7H2O 8,60 KI 0,83 Na2MoO4.2H2O 0,25 CuSO4.5H2O 0,025 CoCl2.6H2O 0,025 Khoáng vi lượng Phụ lục 2: Xác định hàm lượng carotenoid mẫu CVT phương pháp đo quang phổ Nguyên tắc: Dựa nguyên lý tượng quang phổ hấp thụ Quang phổ hấp thụ thực chất trình tương tác hạt photon ánh sáng với phần vật chất Khi ta chiếu chùm tia sáng gồm photon có mức lượng khác qua dung dịch chất hấp thụ Dung dịch hấp thụ chọn lọc photon có mức lượng phù hợp với mức lượng điện tử, lưượng dao động lượng quay phân tử chất Như phân tử vật chất có cấu trúc khác cho phổ hấp thụ với đỉnh bước sóng đặc trưng khác Trang 41 Tiến hành: Chuẩn bị ống nghiệm làm sạch, cân g mẫu CVT sấy đến khối lượng không đổi, nghiền nhuyễn, cho vào ống nghiệm Thêm mL hỗn hợp dung môi ethanol: hexane (2:1 v/v) Lắc nhẹ, sau cho thêm mL nước cất mL hexane, vortex hỗn hợp Dùng micro pipet hút mL dung dịch cho vào eppendorf, li tâm hỗn hợp li trích 3000 v/p phút Hút 100 µL lớp sắc tố bên hịa với 900 µL hỗn hợp dung mơi ethanol: hexane (2:1 v/v) Tiến hành đo OD bước sóng 450 nm bàng cuvet thạch anh Hàm lượng carotenoid tổng xác định theo cơng thức: Carotenoid (µg/mL) = A450 x 25,2 Phụ lục 3: Phương pháp xác định hàm lượng khô CVT Nguyên tắc: dùng nhiệt độ cao làm bốc nước mẫu phân tích, dựa vào hiệu khối lượng trước sau sấy ta tính hàm lượng nước chất khô mẫu phân tích Thiết bị: cân sấy ẩm XM60 precica Tiến hành: mẫu tươi CVT sau thu hái xác định khối lượng tươi Sau chọn phần mẫu đồng nhất, cắt nhỏ mẫu, cân xác 20 g mẫu, tiến hành sấy đến khối lượng không đổi Khối lượng khơ mẫu tính theo cơng thức Khối lượng khô (g) = (100 - %ẩm) x 20 Phụ lục 4: Khối lượng chất dung dịch dinh dưỡng Nồng độ N (ppm) 50 100 150 200 Lượng chất tan có 100L mơi trường (g) CaCl2 MgSO4 KH2PO4 KNO3 (NH4)2SO4 36,1 25 65,8 3,1 23,2 36,1 25 65,8 3,1 46,9 36,1 25 65,8 3,1 70,5 36,1 25 65,8 3,1 94,1 Trang 42