(LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu ứng dụng phản ứng trung hòa đánh giá khả năng miễn dịch chéo giữa chủng porcine epidemic diarrhea virus vắc xin và chủng thực địa lưu hành tại việt nam

HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ BÍCH NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG PHẢN ỨNG TRUNG HÒA ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG MIỄN DỊCH CHÉO GIỮA CHỦNG PORCINE EPIDEMIC DIARRHEA VIRUS VẮC XIN VÀ CHỦNG THỰC ĐỊA LƯU HÀNH TẠI VIỆT NAM Ngành: Mã số: Người hướng dẫn khoa học: Thú Y 8.64.01.01 TS Chu Thị Thanh Hương NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2020 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cám ơn, thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 18 tháng 07 năm 2020 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Bích i TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình thực đề tài hồn thành luận văn, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới tổ chức, cá nhân tạo điều kiện thuận lợi trình thực luận văn Xin chân thành cảm ơn q Thầy, Cơ tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm q báu cho tơi suốt q trình học tập trường Bộ môn Vi sinh vật – Truyền nhiễm – Khoa Thú y –Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam giúp đỡ tơi suốt q trình học tập, thời gian thực luận văn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn đến TS Chu Thị Thanh Hương, người hướng dẫn thời gian thực đề tài chỉnh sửa q trình hồn thiện luận văn Xin chân thành cảm ơn Công ty Hanvet tạo điều kiện môi trường, vật tư, trang thiết bị để thực đề tài nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn tới Ths Trần Văn Khánh (Phó tổng giám đốc), phịng kiểm nghiệm anh chị em bạn bè đồng nghiệp Công ty TNHH Dược Hanvet tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Cũng này, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới Gia đình; cảm ơn bạn bè, anh, chị em người động viên, giúp đỡ để tơi hồn thành tốt khóa học Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 18 tháng 07 năm 2020 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Bích ii TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN ix THESIS ABSTRACT x PHẦN ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ 1.2 MỤC TIÊU ĐỀ TÀI 1.3 Ý NGHĨA ĐỀ TÀI 1.4 GIỚI HẠN ĐỀ TÀI PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA PEDV 2.1.1 Đặc tính gây bệnh 2.1.2 Cơ chế sinh bệnh 2.1.3 Chẩn đoán, xét nghiệm PEDV 2.1.4 Sự thích nghi virus tế bào 2.2 DỊCH TỄ HỌC PHÂN TỬ CỦA PEDV 10 2.2.1 Cấu trúc di truyền liên quan đến dịch tễ học phân tử PEDV 13 2.3 ĐẶC ĐIỂM MIỄN DỊCH CỦA PEDV 15 2.3.1 Tìm hiểu cấu trúc PEDV liên quan đặc tính miễn dịch virus PED 15 2.3.2 Phản ứng vật chủ với nhiễm PEDV 16 2.3.3 Vắc xin phòng bệnh PED 17 2.3.4 Phản ứng chéo huyết học 18 2.4 TỔNG QUAN CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN KHÁNG THỂ 20 2.4.1 Phản ứng trung hòa virus 21 2.4.2 Phát kháng thể phản ứng ELISA 24 iii TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com PHẦN NGUYÊN LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 25 3.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 25 3.2 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM 25 3.3 NGUYÊN LIỆU 25 3.3.1 Virus PED dùng nghiên cứu 25 3.3.2 Hóa chất, sinh phẩm nghiên cứu 25 3.3.3 Vật tư thiết bị 26 3.4 NỘI DUNG 27 3.5 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 3.5.1 Phương pháp RT-PCR 28 3.5.2 Phương pháp giám định genogroup PEDV 29 3.5.3 Phương pháp thử độc lực PEDV lợn theo mẹ 30 3.5.4 Phương pháp xác định hiệu giá PEDV tế bào Vero 30 3.5.5 Phương pháp ELISA phát kháng thể kháng PEDV 31 3.5.6 Phương pháp miễn dịch chủng PEDV thỏ 31 3.5.7 Phương pháp thiết lập phản ứng trung hòa PEDV 32 3.5.8 Đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu phản ứng trung hòa virus 33 3.5.9 Phương pháp phản ứng trung hòa chéo chủng virus 33 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 4.1 LỰA CHỌN CHỦNG PEDV DÙNG TRONG NGHIÊN CỨU 35 4.1.1 Xác định đặc tính sinh học hiệu giá virus 35 4.1.2 Giám định tính khiết chủng PEDV 37 4.1.3 Xác định độc lực chủng PEDV thực địa 39 4.2 KẾT QUẢ THIẾT LẬP PHẢN ỨNG TRUNG HÒA PEDV 41 4.2.1 Kết tối ưu mơi trường dùng phản ứng trung hịa 41 4.2.2 Tối ưu cách đánh giá kết phản ứng trung hòa 43 4.3 XÁC ĐỊNH GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA PHẢN ỨNG TRUNG HÒA 44 4.3.1 Kết xác định độ nhạy độ đặc hiệu mẫu thực địa 44 4.3.2 Độ nhạy, độ đặc hiệu phản ứng trung hòa mẫu chuẩn QC 46 4.3.3 Phản ứng trung hòa xác định kháng thể huyết sữa đầu 48 4.4 ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG MIỄN DỊCH CHÉO GIỮA CÁC CHỦNG 49 iv TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 4.4.1 Chế huyết thỏ kháng chủng PEDV thực địa 49 4.4.2 Đánh giá khả trung hòa chéo chủng PEDV 50 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 55 5.1 KẾT LUẬN 55 5.2 KIẾN NGHỊ 55 v TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt ADN AEC ARN Deoxyribonucleic acid 3-Amino-9-ethylcarbazole Ribonucleic acid bELISA Blocking Enzym – linked Imnuno Sorbent Assay CFU Colony Forming Units CPE DAB DMEM Cytopathogenic effect- bệnh tích tế bào 3,3'-Diaminobenzidine Dulbecco's Modified Eagle Medium ELISA Enzym – linked Imnuno Sorbent Assay FBS GLP HT iELISA IFA Fetal bovine serum IgA Immunoglobulin A IgD Immunoglobulin D IgE Immunoglobulin E IgM Immunoglobulin M IHC Immunohistochemistry IPMA Immunoperoxidase monolayer assay OIE P pAPN PBS PEDV The World Organisation for Animal Health PEG 6000 QC RT- PCR TBP TCID 50 Polyethylene glycol 6000 Quanlity control Reverse transcription polymerase chain reaction Tryptose phosphate broth 50% Tissue culture infective dose TGEV Transmissible gastro enteritis virus VNT Virus Neutralization Test YE Yeast extract Good Laboratory Practice Huyết Indirect Enzym – linked Imnuno Sorbent Assay Immunofluorescence assay Passage Porcine aminopeptidase N Phosphate Buffered Saline Porcine epidemic diarrhea virus vi TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Phản ứng trung hòa chéo chủng PEDV chủng TGEV 19 Bảng 3.1 Trình tự mồi virus PEDV, TGEV, Rotavirus 28 Bảng 3.2 Cách tính độ nhạy độ đặc hiệu phương pháp sau 33 Bảng 4.1 Hiệu giá chủng PEDV phân lập thực địa 36 Bảng 4.2 Tối ưu mơi trường phản ứng trung hịa 41 Bảng 4.3 Độ nhạy, độ đặc hiệu phản ứng trung hòa 45 Bảng 4.4 Tương quan ELISA VNT mẫu chuẩn QC 47 Bảng 4.5 Hiệu giá kháng thể trung hòa chéo chủng PEDV 52 vii TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Biểu lâm sàng lợn nhiễm PEDV Hàn Quốc năm 2015 Hình 2.2 Bệnh tích đại thể vi thể ruột lợn nhiễm PEDV Hình 2.3 Virus truyền lây thơng qua khí dung Hình 2.4 PEDV xuất tế bào biểu mô mũi Hình 2.5 Cơ chế xâm nhập tăng sinh PEDV tế bào vật chủ Hình 2.6 Cây phả hệ họ Coronavirus 11 Hình 2.7 Sự xuất nhóm gen PEDV giới 12 Hình 2.8 Giản đồ đại diện gen gốc cấu trúc virion PEDV 13 Hình 2.9 Cây phát sinh lồi PEDV 14 Hình 2.10 Phản ứng miễn dịch vật chủ sau nhiễm PEDV 17 Hình 2.11 Cơ chế trung hòa virus kháng thể trung hịa 21 Hình 2.12 Kháng thể VNT huyết thanh, sữa đầu sữa thường 23 Hình 3.1 Hóa chất, sinh phẩm nghiên cứu 27 Hình 3.2 Thiết bị phịng thí nghiệm đạt chuẩn GLP 27 Hình 4.1 Bệnh tích tế bào chủng PEDV 35 Hình 4.2 Điện di sản phẩm RT- PCR phát PEDV 37 Hình 4.3 Điện di sản phẩm RT- PCR phát Rotavirus TGEV 38 Hình 4.4 Điện di sản phẩm RT- PCR phát genogroup chủng PEDV 38 Hình 4.5 Lợn trước sau nhiễm PEDV 39 Hình 4.6 Bệnh tích ruột sau nhiễm PEDV 32 40 Hình 4.7 Kết đọc phản ứng trung hịa PEDV 43 Hình 4.8 Tương quan hiệu giá trung hòa giá trị OD 44 Hình 4.9 Kết phản ứng ELISA độ pha loãng huyết 46 Hình 4.10 Biến động hiệu giá kháng thể trung hịa nhóm mẫu 48 Hình 4.11 Hiệu giá kháng thể trung hòa kháng virus đồng chủng 49 Hình 4.12 Huyết kháng PEDV 0118 phản ứng với chủng PEDV 51 Hình 4.13 Giá trị r1 biểu diễn khả trung hòa chéo chủng PEDV 53 viii TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Nguyễn Thị Bích Tên Luận văn: Nghiên cứu ứng dụng phản ứng trung hòa đánh giá khả miễn dịch chéo chủng porcine epidemic diarrhea virus vắc xin chủng thực địa lưu hành Việt Nam Ngành: Thú Y Mã số: 8.64.01.01 Tên sở đào tạo: Học viện Nơng nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Nhằm đánh giá khả miễn dịch chủng PEDV khả trung hòa chéo chủng, từ sở cho việc chọn vắc xin chọn chủng virus nghiên cứu sản xuất vắc xin Phương pháp nghiên cứu - Các phương pháp giám định chủng PEDV; - Phương pháp trung hòa virus tế bào Vero; - Phương pháp đánh giá độ nhạy độ đặc hiệu phản ứng trung hòa virus - Phương pháp thực phản ứng trung hòa chéo chủng PEDV; - Phương pháp tổng hợp, phân tích số liệu phần mềm Minitab 16 Kết - Giám định chủng PEDV thực địa thuộc nhóm genogroup 2, PEDV từ vắc xin nhược độc thuộc genogroup 1; - Thiết lập phản ứng trung hòa PEDV tế bào Vero; - Các chủng PEDV có khả sinh kháng thể trung hòa thỏ sau 14 ngày miễn dịch kháng nguyên PEDV; - Chủng PEDV từ vắc xin (gennogroup G1) trung hòa chéo với chủng thực địa (genogroup 2) cho giá trị r1 cao 0,5; - Một số chủng PEDV thực địa có khả trung hịa chéo với chủng PEDV thực địa lại 100% (r1= 1) Kết luận - Các chủng PEDV có khả sinh miễn dịch đồng chủng; - Kháng thể trung hòa vắc xin PED nhược độc trung hòa chéo phần với chủng virus PED thực địa; - Nghiên cứu lựa chọn chủng PEDV thực địa có tiềm việc chọn giống virus nghiên cứu sản xuất vắc xin ix TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hình 4.11 huyết thỏ tối miễn dịch chủng PEDV khảo sát huyết định kỳ ngày lần, kết huyết thỏ trước miễn dịch (ký hiệu D0) sau miễn dịch ngày (ký hiệu D7) kháng thể trung hịa âm tính Kháng thể trung hịa bắt đầu xuất từ D14 sau miễn dịch, huyết thỏ D14, D21, D28, D35, D42 chủng PEDV sinh kháng thể trung hịa, khơng có khác hiệu giá kháng thể chủng (p=0,075>0,05) Trong thỏ đối chứng cho kết âm tính Đề cập thời gian xuất kháng thể trung hòa lợn nhóm tác giả (Diel & cs., 2016) cho biết kháng thể trung hòa bắt đầu xuất huyết lợn từ ngày thứ đến ngày thứ 14 sau nhiễm PEDV cao 21 ngày, kéo dài tới tháng Trong thí nghiệm này, chúng tơi tạo huyết thỏ kháng chủng PEDV chứa kháng thể trung hòa PEDV, nguyên liệu đánh giá khả kháng chéo chủng 4.4.2 Đánh giá khả trung hòa chéo chủng PEDV 4.4.2.1 Khả trung hòa chủng virus huyết kháng PEDV 0118 Các tài liệu mô tả trước (Rweyemamu, 1978; Long, 2016; OIE, 2009) cho biết: phương pháp tin cậy để đánh giá chủng virus có khả miễn dịch chéo với chủng virus khác số miễn dịch bảo hộ chéo động vật, điều trả lời xác hiệu lực tính kháng chéo tồn diện Nhưng liên quan an toàn sinh học vấn đề khác, nên việc sử dụng phương pháp huyết học thay thế, thực phịng thí nghiệm (in vitro) tổ chức OIE khuyến cáo nên dùng Hình 4.12 (trang bên) mơ tả khả trung hịa chéo huyết thỏ kháng PEDV 0118 với dòng PEDV thuộc genogroup G1 genogroup G2 Hình 4.12 cho thấy, bệnh tích tế bào (CPE - cytopathic effects) quan sát qua nhuộm miễn dịch, CPE đặc trưng tế bào nhiễm virus hợp màng nguyên sinh chất thành cụm tế bào đa nhân hay gọi thể hợp bào Trong thí nghiệm thấy với cách đánh giá phản ứng trung hòa thiết lập (phản ứng dương tính số cụm CPE giảm 90% so với đối chứng nồng độ pha loãng huyết thanh) hiệu giá kháng thể trung hịa chủng PEDV 0118 xác định 256 phản ứng với chủng thuộc nhóm G2 (đồng nhóm) phản ứng chéo với PED từ vắc xin (thuộc nhóm G1) thấp lần 50 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Ghi chú: dương tính (+) , âm tính (-); HT: huyết thanh; PEDV VX: Virus PED có nguồn gốc từ vắc xin nhược độc thuộc nhóm G1; VNT- virus neutralizing test- hiệu giá kháng thể trung hòa -hiệu giá kháng thể trung hịa xác định dương tính có số tế bào nhiễm virus giảm 90% so đối chứng âm Hình 4.12 Huyết kháng PEDV 0118 phản ứng với chủng PEDV Từ năm 2013 vụ dịch PEDV bùng phát trở lại Mỹ mốc thời gian xác định biến đổi, có đa dạng kháng nguyên dòng cổ điển dòng (Wang & cs., 2013) Vắc xin PED có nguồn gốc từ dịng PEDV cổ điển khơng bảo vệ hoàn toàn đàn lợn thất bại châu Á Hơn nữa, nghiên cứu tính kháng chéo kháng nguyên dựa dòng thấy rằng, có bảo vệ chéo phần dịng cổ điển dịng có độc lực cao (Chen, 2016) Trong nghiên cứu này, thấy có khác biệt khả kháng chéo kháng thể trung hòa dòng với dòng PEDV cổ điển, kháng chéo chủng PEDV 0118 với dịng nhóm G2 lại khơng có khác biệt 51 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 4.4.2.2 Kết hiệu giá kháng thể trung hịa chéo chủng PEDV Sau thích nghi PEDV thực địa tế bào Vero xây dựng phản ứng trung hòa với chủng virus này, việc nghiên cứu đủ điều kiện để thực phản ứng chéo huyết học chủng PEDV Phản ứng trung hòa chéo giúp đánh giá chủng PEDV thuộc nhóm G2 có hay khơng mối quan hệ huyết học với PEDV thuộc nhóm G1 ngược lại Phản ứng trung hòa chéo thực cặp đôi huyết kháng PEDV đồng chủng PEDV dị chủng Kết trình bày Bảng 4.5 Bảng 4.5 Hiệu giá kháng thể trung hòa chéo chủng PEDV Hiệu giá trung hòa chéo PEDV theo nhóm di truyền Chủng virus Nhóm 01 (G1) Nhóm 02 (G2) PEDV PEDV 0117 0317 128 32 PEDV 0118 256 PEDV VX PEDV0116 PEDV 0116 128 512a PEDV 0117 32 128 128a 32 256 PEDV 0317 32 256 128 64a 256 PEDV 0118 32 128 64 32 256a PEDV VX 256a 64 64 64 128 Ghi chú: Số in đậm (a) bảng kết hiệu giá kháng thể trung hòa đồng chủng Kết thấy rằng, hiệu giá kháng thể trung hòa huyết thỏ kháng dòng PEDV vắc xin thuộc G1 phản ứng với virus đồng chủng 256 cao so với phản ứng với PEDV dị chủng thuộc dịng G2 từ đến lần Trong hiệu giá kháng thể trung hòa chéo chủng PEDV thuộc G2 đồng chéo chủng chênh đến lần Liên quan tính kháng chéo, tác giả (Chen, 2016) ghi nhận hiệu giá kháng thể trung hòa kháng PEDV chủng cổ điển với virus đồng chủng cao hiệu giá chéo chủng từ đến 32 lần, giao động tùy thuộc chủng thực địa khác Dữ liệu nghiên cứu này, minh chứng vắc xin PEDV từ dòng cổ điển trung hòa chéo phần với PEDV dòng (genogroup G2) miền Bắc Việt Nam Theo tài liệu OIE tái năm 2009 để xác định phù hợp vắc xin hay lựa chọn chủng virus sản xuất vắc xin, số phân tích cần làm: đáp ứng miễn dịch chéo chủng điều kiện phịng thí nghiệm (in vitro) tiến hành cách xác định số r1, r1 tiến tới kháng nguyên 52 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com chủng tương đồng cao Trong nghiên cứu này, giá trị r1 chủng PEDV trình bày Hình 4.13 Ghi chú: HTK: huyết kháng; giá trị r1 tỉ số hiệu giá kháng thể kháng virus di chủng hiệu giá kháng thể kháng virus đồng chủng Hình 4.13 Giá trị r1 biểu diễn khả trung hịa chéo chủng PEDV Hình 4.13 Cho thấy, giá trị r1 biểu diễn khả trung hòa chéo huyết kháng chủng PEDV phản ứng với chủng PEDV Trong hình ta thấy chủng PEDV 0118 biểu diễn hình ngũ giác màu đỏ chiếm diện tích rộng nhất, tương ứng khả trung hòa chéo cao nhất, giá trị r1 PEDV 0116 PEDV từ vắc xin biểu diễn màu xanh lam màu vàng cam có diện tích nhỏ Các nghiên cứu trước công bố rằng: có serotype huyết học PEDV lại có đa dạng kháng ngun dịng PEDV đa dạng kiểu gen (Song & Park., 2012) 53 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Bảo hộ chéo vắc xin PEDV có nguồn gốc thuộc nhóm G1 PEDV thuộc nhóm G2, nghiên cứu trước vắc xin sống nhược độc PEDV từ genogroup G1 không bảo hộ sau thử thách với PEDV dịng G2b, vắc xin thương mại vơ hoạt từ PEDV thuộc dòng G2b bảo vệ hoàn toàn (Lee & cs., 2018) Tác giả cho hiệu bảo hộ vắc xin liên quan đến vai trò kháng thể trung hòa đặc hiệu có huyết sữa lợn nái tiêm vắc xin dòng 2b (Collin & cs., 2017; Lee & cs., 2018) Các nghiên cứu trang trại lợn dùng vắc xin phơi nhiễm tự nhiên với PEDV có nguồn gốc từ dịng PEDV thuộc genogroup G1 kết bảo vệ chéo phần hay khơng bảo vệ hồn tồn lợn lợn nhiễm PEDV dòng (Puranaveja & cs., 2009; Opriessnig & cs., 2017) Nghiên cứu xác định khả trung hòa chéo chủng virus thực địa số địa phương Việt Nam Nghiên cứu cho thấy vắc xin PED nhược độc có nguồn gốc từ dịng cổ điển khơng trung hịa chéo hồn tồn với chủng địa phương, đồng thời phát chủng thực địa PEDV 0118 số chủng phân lập có kháng thể trung hòa chéo 100% với chủng genogroup G2 lưu hành miền Bắc Việt Nam 54 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu kết luận sau: (1) Nghiên cứu giám định chủng virus phân lập thực địa: thuộc genogroup G2, chủng PEDV 0118 xác định độc lực với biểu bệnh lý đặc trưng PEDV dòng nhanh, mạnh, thời gian ủ bệnh ngắn 5/5 lợn thí nghiệm chết 32 đến 46 sau nhiễm (2) Thiết lập phản ứng trung hòa virus với dòng PEDV thực địa, với ngưỡng dương mẫu ≥ 25 (3) Đánh giá giá trị sử dụng phản ứng trung hòa với độ nhạy độ đặc hiệu 100% mẫu QC (4) Đánh giá khả miễn dịch miễn dịch chéo chủng PEDV: - Các chủng PEDV nghiên cứu có khả sinh kháng thể trung hịa đặc hiệu sau 14 ngày miễn dịch - Kháng thể trung hòa chủng PEDV vắc xin (genogroup G1) chéo phần (giá trị r1: 0,125 đến 0,5) với chủng PEDV thực địa (genogroup G2) - Kháng thể trung hòa chủng PEDV thực địa lưu hành miền Bắc Việt Nam từ năm 2016 đến năm 2018 có tính chéo với chủng genogroup cho kết khác (giá trị r1 từ 0,25 đến 1), chủng PEDV 0118 (giá trị r1=1) có tiềm việc chọn giống virus nghiên cứu sản xuất vắc xin 5.2 KIẾN NGHỊ - Nên ứng dụng phản ứng trung hòa nghiên cứu biến động kháng thể trung hòa đặc hiệu lợn miễn dịch PEDV - Thực trạng nay, bệnh PED nguyên nhân gây thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi, nên cần xem xét vấn đề sau: + Trong việc sử dụng vắc xin PED, cần cân nhắc vắc xin có nguồn gốc từ chủng thuộc genogroup G1 + Trong nghiên cứu này, chủng PED 0118 thực địa chủng ứng viên cần nghiên cứu sâu để phát triển vắc xin phòng bệnh PED phù hợp địa phương 55 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com TÀI LIỆU THAM KHẢO Ana C., Lanza I., Diego R., Rubio P & Cámenes P (1995) Evaluation of a blocking ELISA using monoclonal antibodies for the detection of porcine epidemic diarrhea virus and its antibodies Journal of veterinary diagnostic investigation 7(1): 60-64 Annamalai T., Lin C.-M., Gao X., Liu X., Lu Z., Saif L J & Wang Q (2017) Cross protective immune responses in nursing piglets infected with a US spike-insertion deletion porcine epidemic diarrhea virus strain and challenged with an original US PEDV strain Veterinary research 48(1): 61 Ayudhya S N N., Assavacheep P & Thanawongnuwech R (2012) One world–one health: the threat of emerging swine diseases An Asian perspective Transboundary and emerging diseases 59: 9-17 Baek P.-S., Choi H.-W., Lee S., Yoon I.-J., Lee Y J., Lee D S., Lee S & Lee C (2016) Efficacy of an inactivated genotype 2b porcine epidemic diarrhea virus vaccine in neonatal piglets Veterinary immunology and immunopathology 174: 45-49 Bjustrom-Kraft J., Gimenez-Lirola L., Zimmerman J., Main R & Rademacher C (2016) Understanding PEDV shedding, immune response aids in implementing gilt acclimation [WWW Document] Natl Hog Farmer URL http://nationalhogfarmer com/pedv/understanding-pedv-shedding-immuneresponse-aidsimplementing-gilt-acclimation Bosch B J., Van Der Zee R., De Haan C A & Rottier P J (2003) The coronavirus spike protein is a class I virus fusion protein: structural and functional characterization of the fusion core complex Journal of virology 77(16): 8801-8811 Chang S.-H., Bae J.-L., Kang T.-J., Kim J., Chung G.-H., Lim C.-W., Laude H., Yang M.-S & Jang Y.-S (2002) Identification of the epitope region capable of inducing neutralizing antibodies against the porcine epidemic diarrhea virus Molecules and cells 14(2): 295-299 Changhee L (2015) Porcine epidemic diarrhea virus: an emerging and re-emerging epizootic swine virus Virology journal 12(1): 193 Chen Q (2016) Porcine epidemic diarrhea virus in the United States: Cell culture isolation, genetic phylogeny, pathogenesis, and immunity Chen Q., Li G., Stasko J., Thomas J T., Stensland W R., Pillatzki A E., Gauger P C., Schwartz K J., Madson D & Yoon K.-J (2014) Isolation and characterization of porcine epidemic diarrhea viruses associated with the 2013 disease outbreak among swine in the United States Journal of clinical microbiology 52(1): 234-243 56 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Choi J.-C., Lee K.-K., Pi J H., Park S.-Y., Song C.-S., Choi I.-S., Lee J.-B., Lee D.-H & Lee S.-W (2014) Comparative genome analysis and molecular epidemiology of the reemerging porcine epidemic diarrhea virus strains isolated in Korea Infection, Genetics and Evolution 26: 348-351 Chung H.-C., Van Giap Nguyen H.-J M., Lee J.-H., Park S.-J., Lee G.-E., Kim H.-K., Noh Y.-S., Lee C.-H., Goede D & Park B K (2015) Isolation of porcine epidemic diarrhea virus during outbreaks in South Korea, 2013–2014 Emerging infectious diseases 21(12): 2238 Clement T., Singrey A., Lawson S., Okda F., Nelson J., Diel D., Nelson E A & Christopher-Hennings J (2016) Measurement of neutralizing antibodies against porcine epidemic diarrhea virus in sow serum, colostrum, and milk samples and in piglet serum samples after feedback Journal of Swine Health and Production 24(3): 147-153 Collin E A., Anbalagan S., Okda F., Batman R., Nelson E & Hause B M (2015) An inactivated vaccine made from a US field isolate of porcine epidemic disease virus is immunogenic in pigs as demonstrated by a dose-titration BMC veterinary research 11(1): 62 Correa I., Jiménez G., Suñé C., Bullido M J & Enjuanes L (1988) Antigenic structure of the E2 glycoprotein from transmissible gastroenteritis coronavirus Virus research 10(1): 77-93 Cruz D J., Kim C J & Shin H J (2006) Phage-displayed peptides having antigenic similarities with porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) neutralizing epitopes Virology 354(1): 28-34 Cruz D J M & Shin H.-J (2007) Application of a focus formation assay for detection and titration of porcine epidemic diarrhea virus Journal of virological methods 145(1): 56-61 De Arriba M., Carvajal A., Lanza I., Rubio P & Blanchard P (1995) Development of an ELISA for the detection of antibody isotypes against porcine epidemic diarrhoea virus (PEDV) in sow’s milk Proc 3rd Congr ESVV 222-225 Debouck P & Pensaert M (1980) Experimental infection of pigs with a new porcine enteric coronavirus, CV 777 Am J Vet Res 41(2): 219-23 Dee S., Clement T., Schelkopf A., Nerem J., Knudsen D., Christopher-Hennings J & Nelson E (2014) An evaluation of contaminated complete feed as a vehicle for porcine epidemic diarrhea virus infection of naive pigs following consumption via natural feeding behavior: proof of concept BMC veterinary research 10(1): 176 57 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Delmas B., Rasschaert D., Godet M., Gelfi J & Laude H (1990) Four major antigenic sites of the coronavirus transmissible gastroenteritis virus are located on the amino-terminal half of spike glycoprotein S Journal of General Virology 71(6): 1313-1323 Diel D., Lawson S., Okda F., Singrey A., Clement T., Fernandes M., ChristopherHennings J & Nelson E (2016) Porcine epidemic diarrhea virus: an overview of current virological and serological diagnostic methods Virus research 226: 60-70 Duarte M., Tobler K., Bridgen A., Rasschaert D., Ackermann M & Laude H (1994) Sequence analysis of the porcine epidemic diarrhea virus genome between the nucleocapsid and spike protein genes reveals a polymorphic ORF Virology 198(2): 466-476 Gallagher T M & Buchmeier M J (2001) Coronavirus spike proteins in viral entry and pathogenesis Virology 279(2): 371-374 Gong L., Lin Y., Qin J., Li Q., Xue C & Cao Y (2018) Neutralizing antibodies against porcine epidemic diarrhea virus block virus attachment and internalization Virology journal 15(1): 133 Guscetti F., Bernasconi C., Tobler K., Van Reeth K., Pospischil A & Ackermann M (1998) Immunohistochemical detection of porcine epidemic diarrhea virus compared to other methods Clin Diagn Lab Immunol 5(3): 412-414 Hao J., Zhang Y., Fang S., Wen Z., Zhang X., Xue C & Cao Y (2017) Evaluation of purified recombinant spike fragments for assessment of the presence of serum neutralizing antibodies against a variant strain of porcine epidemic diarrhea virus Virol Sin 32(4): 307-316 Hofmann M & Wyler R (1988) Propagation of the virus of porcine epidemic diarrhea in cell culture Journal of clinical microbiology 26(11): 2235-2239 Hofmann M & Wyler R (1990) Enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of porcine epidemic diarrhea coronavirus antibodies in swine sera Veterinary microbiology 21(3): 263-273 Huang Y.-W., Dickerman A W., Piñeyro P., Li L., Fang L., Kiehne R., Opriessnig T & Meng X.-J (2013) Origin, evolution, and genotyping of emergent porcine epidemic diarrhea virus strains in the United States MBio 4(5): e00737-13 Joseph T., Chen Q., Gauger P C., Giménez-Lirola L G., Sinha A., Harmon K M., Madson D M., Burrough E R., Magstadt D R & Salzbrenner H M (2015) Effect of porcine epidemic diarrhea virus infectious doses on infection outcomes in naïve conventional neonatal and weaned pigs PLoS One 10(10) Kim S Y., Song D S & Park B K (2001) Differential detection of transmissible gastroenteritis virus and porcine epidemic diarrhea virus by duplex RT-PCR Journal of veterinary diagnostic investigation 13(6): 516-520 58 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Kimpston-Burkgren K., Mora-Diaz J C., Roby P., Bjustrom-Kraft J., Main R., Bosse R & Gimenez-Lirola L G (2020) Characterization of the humoral immune response to porcine epidemic diarrhea virus infection under experimental and field conditions using an AlphaLISA platform Pathogens 9(3) Klasse P (2014) Neutralization of virus infectivity by antibodies: old problems in new perspectives Advances in biology 2014 Kusanagi, H K., T K., Nunoya T., Y I., Samejima T & Tajima M (1992) Isolation and serial propagation of porcine epidemic diarrhea virus in cell cultures and partial characterization of the isolate J Vet Med Sci 54(2): 313-8 Kweon C.-h., Kwon B.-j., Jung T.-s., Kee Y.-j., Hur D.-h., Hwang E.-k., Rhee J.-c & An S.-h (1993) Isolation of porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) in Korea Korean Journal of Veterinary Research 33(2): 249-254 Kweon C.-H., Kwon B.-J., Lee J.-G., Kwon G.-O & Kang Y.-B (1999) Derivation of attenuated porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) as vaccine candidate Vaccine 17(20-21): 2546-2553 Lee C (2015) Porcine epidemic diarrhea virus: An emerging and re-emerging epizootic swine virus Virol J 12(1): 193 Lee D.-K., Park C.-K., Kim S.-H & Lee C (2010) Heterogeneity in spike protein genes of porcine epidemic diarrhea viruses isolated in Korea Virus research 149(2): 175-182 Lee S & Lee C (2014) Outbreak-related porcine epidemic diarrhea virus strains similar to US strains, South Korea, 2013 Emerging infectious diseases 20(7): 1223 Lee S H., Yang D.-K., Kim H.-H & Cho I.-S (2018) Efficacy of inactivated variant porcine epidemic diarrhea virus vaccines in growing pigs Clinical and experimental vaccine research 7(1): 61-69 Li R., Qiao S., Yang Y., Guo J., Xie S., Zhou E & Zhang G (2016) Genome sequencing and analysis of a novel recombinant porcine epidemic diarrhea virus strain from Henan, China Virus Genes 52(1): 91-98 Li W., Li H., Liu Y., Pan Y., Deng F., Song Y., Tang X & He Q (2012) New variants of porcine epidemic diarrhea virus, China, 2011 Emerging infectious diseases 18(8): 1350 Li Y., Wu Q., Huang L., Yuan C., Wang J & Yang Q (2018) An alternative pathway of enteric PEDV dissemination from nasal cavity to intestinal mucosa in swine Nature communications 9(1): 1-14 Lin C.-M., Gao X., Oka T., Vlasova A N., Esseili M A., Wang Q & Saif L J (2015) Antigenic relationships among porcine epidemic diarrhea virus and transmissible gastroenteritis virus strains Journal of virology 89(6): 3332-3342 59 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Lin C.-M., Saif L J., Marthaler D & Wang Q (2016) Evolution, antigenicity and pathogenicity of global porcine epidemic diarrhea virus strains Virus research 226: 20-39 Meng F., Ren Y., Suo S., Sun X., Li X., Li P., Yang W., Li G., Li L & SchwegmannWessels C (2013) Evaluation on the efficacy and immunogenicity of recombinant DNA plasmids expressing spike genes from porcine transmissible gastroenteritis virus and porcine epidemic diarrhea virus PLoS One 8(3) Morales R., Umandal A & Lantican C (2007) Emerging and re-emerging diseases in Asia and the Pacific with special emphasis on porcine epidemic diarrhoea Conference OIE 185-189 Ngô Thanh Long, Nguyễn Thanh Phương, Võ Văn Hùng, Bạch Đức Lữu, Nguyễn Văn Long, Nguyễn Thu Thủy & Phạm Văn Đông (2016) Chọn chủng virus lở mồm long móng týp O từ thực địa để nghiên cứu sản xuất vacxin Việt Nam Khoa học kỹ thuật thú y 23(7): 5-14 Nguyễn Tất Tồn, Nguyễn Đình Qt, Trịnh Thị Thanh Huyền, Đỗ Tiến Duy, Trần Thị Dân, Nguyễn Thị Phước Ninh & Năm N T T (2012) Phát virus gây bệnh tiêu chảy cấp (PEDV) heo tỉnh miền Đông Nam Bộ Khoa học kỹ thuật thú y 19(5): 26-30 Nguyễn Thị Hoa, Nguyễn Thị Lan, Trương Quang Lâm, Trịnh Đình Thâu & Ngơ Thị Hạnh (2018) Nghiên cứu phân lập xác định số đặc điểm sinh học virus PED (Porcine epidemic diarrhea virus) Tạp chí Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 16(3): 257-267 Nguyễn Trung Tiến, Vũ Thị Thu Hằng, Huỳnh Thị Mỹ Lệ, Nguyễn Bá Hiên & Lê Văn Phan (2017) Một số đặc điểm sinh học phân tử virus gây dịch tiêu chảy cấp lợn (porcine epidemic diarrhea- PED) Quảng Trị, Thái Nguyên Thái Bình từ năm 2013-2014 Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam 13(7): 1089-1100 Nguyễn Văn Giáp, Đặng Hữu Anh, Trương Hà Thái & Huỳnh Thị Mỹ Lệ (2020) Một số đặc điểm sính học phân tử chủng PEDV (porcine epidemic diarrhea virus) phân lập lợn ni Hưng n Tạp chí Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 18(7): 463-474 Oh J., Lee K.-W., Choi H.-W & Lee C (2014) Immunogenicity and protective efficacy of recombinant S1 domain of the porcine epidemic diarrhea virus spike protein Archives of virology 159(11): 2977-2987 Oh J S., Song D S., Yang J S., Song J Y., Moon H J., Kim T Y & Park B K (2005) Comparison of an enzyme-linked immunosorbent assay with serum neutralization test for serodiagnosis of porcine epidemic diarrhea virus infection J Vet Sci 6(4): 349-52 60 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Oka T., Saif L J., Marthaler D., Esseili M A., Meulia T., Lin C.-M., Vlasova A N., Jung K., Zhang Y & Wang Q (2014) Cell culture isolation and sequence analysis of genetically diverse US porcine epidemic diarrhea virus strains including a novel strain with a large deletion in the spike gene Veterinary microbiology 173(3-4): 258-269 Okda F., Liu X., Singrey A., Clement T., Nelson J., Christopher-Hennings J., Nelson E A & Lawson S (2015) Development of an indirect ELISA, blocking ELISA, fluorescent microsphere immunoassay and fluorescent focus neutralization assay for serologic evaluation of exposure to North American strains of Porcine Epidemic Diarrhea Virus BMC Vet Res 11(1): 180 Oldham J (1972) Pig farming Health Serv J 121: 18 Opriessnig T., Gerber P F., Shen H., De Castro A M M., Zhang J., Chen Q & Halbur P (2017) Evaluation of the efficacy of a commercial inactivated genogroup 2bbased porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) vaccine and experimental live genogroup 1b exposure against 2b challenge Veterinary research 48(1): 69 Ouyang K., Shyu D.-L., Dhakal S., Hiremath J., Binjawadagi B., Lakshmanappa Y S., Guo R., Ransburgh R., Bondra K M & Gauger P (2015) Evaluation of humoral immune status in porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) infected sows under field conditions Veterinary research 46(1): 140 Park B & Song D (2016) Recent outbreaks and emergence of mutants of porcine epidemic diarrhea viruses (PEDV) in Korea Japanese Journal of Veterinary Research 64(Supplement 1): S25-S32 Park C., Lee C (2009) Clinical examination and control measure in a commercial pig farm persistently infected with porcine epidemic diarrhea virus Park J.-E., Cruz D J M & Shin H.-J (2011) Receptor-bound porcine epidemic diarrhea virus spike protein cleaved by trypsin induces membrane fusion Archives of virology 156(10): 1749-1756 Paudel, S, Park J., Jang H & Shin H (2014a) Comparison of serum neutralization and enzyme-linked immunosorbent assay on sera from porcine epidemic diarrhea virus vaccinated pigs Veterinary Quarterly 34(4): 218-223 Paudel S., Park J E., Jang H., Hyun B H., Yang D G & Shin H J (2014b) Evaluation of antibody response of killed and live vaccines against porcine epidemic diarrhea virus in a field study Vet Q 34(4): 194-200 Pensaert M & De Bouck P (1978) A new coronavirus-like particle associated with diarrhea in swine Archives of virology 58(3): 243-247 Pensaert M & Yeo S (2006) Porcine epidemic diarrhea, p 367–372 Diseases of swine, 9th ed Blackwell Publishing Professional, Ames, IA 61 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Plut J., Toplak I & Štukelj M (2018) Variations in the detection of anti-PEDV antibodies in serum samples using three diagnostic tests–short communication Acta Veterinaria Hungarica 66(2): 337-342 Porter P (1969) Transfer of immunoglobulins IgG, IgA and IgM to lacteal secretions in the parturient sow and their absorption by the neonatal piglet Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Protein Structure 181(2): 381-392 Puranaveja S., Poolperm P., Lertwatcharasarakul P., Kesdaengsakonwut S., Boonsoongnern A., Urairong K., Kitikoon P., Choojai P., Kedkovid R & Teankum K (2009) Chinese-like strain of porcine epidemic diarrhea virus, Thailand Emerging infectious diseases 15(7): 1112 Qi C., Thomas J T., Giménez-Lirola L G., Hardham J M., Gao Q., Gerber P F., Opriessnig T., Zheng Y., Li G & Gauger P C (2016) Evaluation of serological cross-reactivity and cross-neutralization between the United States porcine epidemic diarrhea virus prototype and S-INDEL-variant strains BMC veterinary research 12(1): 70 Rweyemamu M & Hingley P (1984) Foot and mouth disease virus strain differentiation: analysis of the serological data Journal of biological standardization 12(2): 225-229 Saif L J (1993) Coronavirus immunogens Veterinary microbiology 37(3-4): 285-297 Shasha Li J Y., Zixiang Zhu and Haixue Zheng (2020) Porcine epidemic diarhea virus and the host innate immune respone MDPI Shibata I., Tsuda T., Mori M., Ono M., Sueyoshi M & Uruno K (2000) Isolation of porcine epidemic diarrhea virus in porcine cell cultures and experimental infection of pigs of different ages Veterinary microbiology 72(3-4): 173-182 Shin H.-J & Park J.-E (2019) Newly isolated porcine epidemic diarrhea virus resistance to interferon and neutralizing antibody The Journal of Immunology 202(1 Supplement): 73.12 Song D S., Kang B K., Oh J S., Ha G W., Yang J S., Moon H J., Jang Y.-S & Park B K (2006) Multiplex reverse transcription-PCR for rapid differential detection of porcine epidemic diarrhea virus, transmissible gastroenteritis virus, and porcine group A rotavirus Journal of veterinary diagnostic investigation 18(3): 278-281 Song D & Park B (2012) Porcine epidemic diarrhoea virus: a comprehensive review of molecular epidemiology, diagnosis, and vaccines Virus Genes 44(2): 167-75 Song D., Moon H & Kang B (2015) Porcine epidemic diarrhea: a review of current epidemiology and available vaccines Clinical and experimental vaccine research 4(2): 166-176 62 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Song Q., Stone S., Drebes D., Greiner L L., Dvorak C M & Murtaugh M P (2016) Characterization of anti-porcine epidemic diarrhea virus neutralizing activity in mammary secretions Virus research 226: 85-92 Stevenson G W., Hoang H., Schwartz K J., Burrough E R., Sun D., Madson D., Cooper V L., Pillatzki A., Gauger P & Schmitt B J (2013) Emergence of porcine epidemic diarrhea virus in the United States: clinical signs, lesions, and viral genomic sequences Journal of veterinary diagnostic investigation 25(5): 649-654 Sun D., Cai R J., Chen Y Q., Liang P S., Chen D K & Song C X (2012) Outbreak of porcine epidemic diarrhea in suckling piglets, China Emerg Infect Dis 18(1): 161-163 Sun R., Leng Z., Zhai S L., Chen D & Song C (2014) Genetic variability and phylogeny of current Chinese porcine epidemic diarrhea virus strains based on spike, ORF3, and membrane genes ScientificWorldJournal 2014: 208439 Temeeyasen G., Srijangwad A., Tripipat T., Tipsombatboon P., Piriyapongsa J., Phoolcharoen W., Chuanasa T., Tantituvanont A & Nilubol D (2014) Genetic diversity of ORF3 and spike genes of porcine epidemic diarrhea virus in Thailand Infection, Genetics and Evolution 21: 205-213 Thomas J T., Chen Q., Gauger P C., Gimenez-Lirola L G., Sinha A., Harmon K M., Madson D M., Burrough E R., Magstadt D R., Salzbrenner H M., Welch M W., Yoon K J., Zimmerman J J & Zhang J (2015) Effect of porcine epidemic diarrhea virus infectious doses on infection outcomes in naive conventional neonatal and weaned pigs PLoS One 10(10): e0139266 Toan N T., Puranaveja S & Thanawongnuwech R (2011) Genetic characterization of porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) isolates from southern Vietnam during 2009-2010 outbreaks The Thai Journal of Veterinary Medicine 41(1): 55-64 Trung Tiến N., Thị Thu Hằng V., Thị Mỹ Lệ H., Bá Hiên N & Văn Phan L (2015) Một số đặc điểm sinh học phân tử virus gây dịch tiêu chảy cấp lợn (porcine epidemic diarhea) Quảng Trị, Thái NGuyên Thái Bình từ năm 2013 - 2014 Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam (7): 1089 Van T Than, Se-Eun Choe, Thi T.H.Vu, Tien D.Do, Thi L Nguyen, Thi T.N Bui, Thi.N Mai, Ra M.Cha, Deasub Song, Dong-Jun An, Van P.Le (2020) Genetic characterrization of the spike gene of porcine epidemic diarrhea viruses (PEDVs) circulating in Vietnam from 2015 to 2016.Vet Med Sci.2020;00:1-8 Wang, Jinbao, Pengwei Z., Guo L., Liu Y., Du Y., Ren S., Li J., Zhang Y., Fan Y & Huang B (2013) Porcine epidemic diarrhea virus variants with high pathogenicity, China Emerging infectious diseases 19(12): 2048 63 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Wang L., Byrum B & Zhang Y (2014) New variant of porcine epidemic diarrhea virus, United States, 2014 Emerg Infect Dis 20(5): 917-9 Wicht O., Li W., Willems L., Meuleman T J., Wubbolts R W., Van Kuppeveld F J., Rottier P J & Bosch B J (2014) Proteolytic activation of the porcine epidemic diarrhea coronavirus spike fusion protein by trypsin in cell culture Journal of virology 88(14): 7952-7961 Yang D.-K., Kim H.-H., Lee S.-H., Yoon S.-S., Park J.-W & Cho I.-S (2018) Isolation and characterization of a new porcine epidemic diarrhea virus variant that occurred in Korea in 2014 Journal of veterinary science 19(1): 71-78 Yoo D., Parker M D & Babiuk L A (1991) The S2 subunit of the spike glycoprotein of bovine coronavirus mediates membrane fusion in insect cells Virology 180(1): 395-399 Zhao P D., Bai J., Jiang P., Tang T S., Li Y., Tan C & Shi X (2014) Development of a multiplex TaqMan probe-based real-time PCR for discrimination of variant and classical porcine epidemic diarrhea virus J Virol Methods 206: 150-5 64 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com ... LUẬN VĂN Tên tác giả: Nguyễn Thị Bích Tên Luận văn: Nghiên cứu ứng dụng phản ứng trung hòa đánh giá khả miễn dịch chéo chủng porcine epidemic diarrhea virus vắc xin chủng thực địa lưu hành Việt Nam. .. ? ?Nghiên cứu ứng dụng phản ứng trung hòa đánh giá khả miễn dịch chéo chủng porcine epidemic diarrhea virus vắc xin chủng thực địa lưu hành Việt Nam? ?? 1.2 MỤC TIÊU ĐỀ TÀI - Nhằm xây dựng phản ứng trung. .. trung hòa virus PED thực địa để có cơng cụ đánh giá khả miễn dịch chủng PED - Nhằm đánh giá khả miễn dịch chéo chủng PEDV vắc xin thực địa, từ khuyến cáo việc dùng vắc xin lưu ý chọn chủng virus