Nghiên cứu vi nấm gây bệnh thối cổ rễ ở cây lạc (Arachis hypogaea L.) trồng ở thành phố Huế

“Nghiên cứu vi nấm gây bệnh thối cổ rễ ở cây lạc (Arachis hypogaea L.) trồng ở thành phố Huế” nhằm mục đích: Phân lập và thuần khiết một số chủng vi nấm gây bệnh thối cổ rễ trên cây lạc trồng ở thành phố Huế; Tìm hiểu các đặc điểm sinh học của vi nấm gây bệnh thối cổ rễ phân lập được; Đề xuất các biện pháp giảm thiểu mức độ tác hại của chúng.

NGHIÊN CỨU VI NẤM GÂY BỆNH THỐI CỔ RỄ Ở CÂY LẠC (Arachis hypogaea L.) TRỒNG Ở THÀNH PHỐ HUẾ LÊ NGUYỄN KIỀU NHỊ NGUYỄN THỊ THÚY HÒA - NGUYỄN THỊ XỊ Khoa Sinh học Tóm tắt: Từ mẫu lạc bị bệnh thối cổ rễ thành phố Huế, phân lập khiết đƣợc 02 chủng vi nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc thuộc chi Aspergillus với ký hiệu N4 N5 Hai chủng sinh trƣởng tốt mơi trƣờng Czapek, mơi trƣờng peptone - glucose; có khả đồng hóa tốt nguồn đƣờng glucose, saccharose có khả chịu đƣợc nồng độ muối NaCl nhƣng không cao (0,2-0,25%) Chủng N4 qua nghiên cứu chứng tỏ chủng gây bệnh thối cổ rễ lạc trồng thành phố Huế, có khả sinh enzyme ngoại bào phân giải cellulose, tinh bột mạnh tiết sắc tố melanin ĐẶT VẤN ĐỀ Vi nấm phân bố rộng rãi tự nhiên nhƣ đất, nƣớc, khơng khí, ngun vật liệu, lƣơng thực, thực phẩm,… Bên cạnh vai trị to lớn vi nấm nguyên nhân gây tới 60% tổng số bệnh Việt Nam lại nƣớc có khí hậu nhiệt đới ẩm nên tạo điều kiện cho nấm phát triển gây nhiều bệnh trồng Đặc biệt lồi nấm có nguồn gốc đất thƣờng gây bệnh đoạn cổ rễ lạc, gây tƣợng thối, lở cổ rễ làm chết gây thiệt hại suất Vì vậy, việc nghiên cứu nấm bệnh thối rễ lạc cần thiết, làm sở khoa học cho cơng tác phịng trừ chúng Xuất phát từ vấn đề thực đề tài: “Nghiên cứu vi nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc (Arachis hypogaea L.) trồng thành phố Huế” nhằm mục đích: - Phân lập khiết số chủng vi nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc trồng thành phố Huế - Tìm hiểu đặc điểm sinh học vi nấm gây bệnh thối cổ rễ phân lập đƣợc - Đề xuất biện pháp giảm thiểu mức độ tác hại chúng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu - Cây lạc (Arachis hypogaea L.) bị bệnh thối rễ trồng thành phố Huế - Các chủng vi nấm gây bệnh thối cổ rễ đƣợc phân lập từ lạc trồng thành phố Huế 2.2 Địa điểm thu mẫu thời vụ Các mẫu cậy lạc bị bệnh đƣợc thu Vụ Đông Xuân 2013-2014 ruộng trồng lạc thuộc phƣờng Kim Long, Hƣơng Sơ, Thủy Biều, phƣờng Đúc thành phố Huế Kỷ yếu Hội nghị Khoa học Sinh viên năm học 2014-2015 Trƣờng Đại học Sƣ phạm Huế, tháng 12/2014: tr 90-94 NGHIÊN CỨU VI NẤM GÂY BỆNH THỐI CỔ RỄ Ở CÂY LẠC 91 2.3 Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu lý thuyết: Tổng hợp tài liệu thông tin liên quan đến bệnh thối cổ rễ lạc Nghiên cứu thực nghiệm: - Trên đồng ruộng: Đi thực tế số địa bàn vào thời điểm vi nấm gây bệnh, theo dõi phƣơng pháp diệt trừ địa phƣơng Chủ động gây nhiễm vi nấm gây bệnh vào lành quan sát trình nhiễm bệnh lạc - Trong phịng thí nghiệm: + Phân lập khiết vi nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc theo phƣơng pháp Robert Koch + Nghiên cứu đặc điểm hình thái, ni cấy, sinh lý, sinh hóa, phân loại chủng vi nấm gây bệnh thối cổ rễ lựa chọn theo Egorov, 1983 + Nghiên cứu yếu tố ảnh hƣởng đến khả sinh enzyme amylase cellulase protease chủng vi nấm gây bệnh theo Egorov, Nguyễn Lân Dũng 1983 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Phân lập khiết số chủng vi nấm từ lạc bị bệnh Hình Các hình ảnh lạc bị thối cổ rễ thu mẫu phường Đúc TP Huế Hình 2: Cuống sinh bào tử chủng N4 mơi trường Czapek Hình 3: Cuống sinh bào tử chủng N5 môi trường Czapek 92 LÊ NGUYỄN KIỀU NHỊ cs Thu mẫu lạc bị bệnh thối cổ rễ vụ Đông Xuân từ địa điểm trồng lạc phƣờng Kim Long, Hƣơng Sơ, Thủy Biều, phƣờng Đúc thành phố Huế Từ mẫu lạc bị bệnh thối cổ rễ, phân lập khiết đƣợc 02 chủng vi nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc thuộc chi Aspergillus với ký hiệu N4 N5 3.2 Một số đặc điểm sinh học hai chủng N4 N5 Bảng Một số đặc điểm sinh học hai chủng N4 N5 Đặc điểm Chủng N4 Chủng N5 Đặc điểm khuẩn lạc Hình trịn, lớn, màu Hình trịn, lớn, màu xanh đen, bề mặt xù xì, xanh lam, bề mặt xù xì, lồi, mép màu nâu, có lồi, có khuẩn ty khí khuẩn ty khí sinh sinh Hình dạng xếp tế bào Cấu tạo dạng sợi phân Cấu tạo dạng sợi phân nhánh tạo thành hệ sợi nhánh tạo thành hệ sợi nấm, có vách ngăn Đầu nấm, có vách ngăn Đầu sợi nấm hình trụ dạng sợi nấm hình trụ dạng ống dài ống dài Khả sinh Czapek +++ +++ trƣởng Khoai tây + + môi trƣờng Martin ++ ++ Peptone- glucose +++ +++ Khả đồng Saccharose +++ +++ hóa nguồn Glucose +++ +++ đƣờng: Fructose ++ ++ Maltose ++ + Tinh bột ++ ++ CMC ++ ++ Khả đồng NaNO3 hóa nguồn KNO3 13 nitrogen (NH4)2SO (mm) NH4Cl 11 16 NH4NO3 18 Hoạt tính Amylase 12 enzyme (mm) Protease 11 Cellulase 13 Khả sinh Tối đa 0,25 0,2 trƣởng môi trƣờng chứa Tối thiểu 0,15 0,15 muối NaCl (%) Thích hợp với Tối đa 9,2 9,2 nồng độ pH Tối thiểu 6,8 6,0 Khả sinh trƣởng nhiệt độ 28 - 300C 28 - 300C thích hợp Ký hiệu: (+++): sinh trƣởng tốt, (++): sinh trƣởng trung bình, (+): sinh trƣởng yếu, (-) khơng sinh trƣởng NGHIÊN CỨU VI NẤM GÂY BỆNH THỐI CỔ RỄ Ở CÂY LẠC (a) 93 (b) Hình 4: Vùng phân giải CMC (a) Tinh bột (b) chủng N4 sau 48h với thuốc thử lugol Từ kết thu đƣợc bảng hình 4, chúng tơi nhận thấy chủng N4 N5 có đặc điểm chi Aspergillus phù hợp với khóa phân loại Bùi Xuân Đồng, 1986 E Kiffer, M Morelet, 2000 Chúng thuộc loại đa bào, sợi có vách ngang Từ hệ sợi nấm mọc lên cuống thẳng đứng Cuống phồng to phía đầu, xung quanh có mang nhiều tế bào hình chai Từ đầu thể bình hình chai mọc bào tử tỏa trịn trơng giống nhƣ tia sáng Cả hai chủng có khả tiết enzyme ngoại bào mạnh nhƣ cellulose, amylase protease phân hủy rễ lạc nguyên nhân làm chết lạc Các nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu Nguyễn Thị Lài, 2012 3.3 Biện pháp phịng trừ Biện pháp thủ cơng: nhổ bỏ bị bệnh để tránh lây lan sang khác, rắc vơi bột vào gốc (5g/gốc) Biện pháp hóa học: Dùng dung dịch Booc-đo Hiệu thấp - Dùng thuốc TMTD (viết tắt thuốc trừ nấm Tetra methyl thiuram disulfur) cịn có tên khác là: Wolfen Thiuram 85, Thiram, SPT30, Thionock, Geril, Pol fungitoxT + Trừ độc cho đất: trƣớc gieo hạt dùng TMTD 85% (dạng bột thấm nƣớc chứa 85% TMTD) với liều lƣợng 20gr/m2 + Dùng TMTD hòa với nƣớc nồng độ 0,2-0,4% phun vào gốc lạc Trộn giống: Mỗi tạ hạt dùng 200-600 gr TMTD Biện pháp chủ động gây nhiễm: Khi sử dụng chủng vi nấm N4 N5 gây nhiễm vào hạt giống thử nghiệm điều kiện invitro phịng thí nghiệm gieo thử ngồi đồng ruộng, nhận thấy: chủng N4 gây chết lạc dấu hiệu bệnh tích bệnh thối cổ rễ KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Qua nghiên cứu vi nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc (Arachis hypogaea L.) trồng thành phố Huế rút số kết luận đề nghị sau: 94 LÊ NGUYỄN KIỀU NHỊ cs 4.1 Kết luận - Từ mẫu lạc bị bệnh thối cổ rễ thành phố Huế, phân lập khiết đƣợc 02 chủng vi nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc thuộc chi Aspergillus với ký hiệu N4 N5 - Hai chủng N4 N5 sinh trƣởng tốt môi trƣờng Czapek môi trƣờng peptone - Glucose - Hai chủng N4 N5 có khả đồng hóa tốt nguồn đƣờng glucose saccharose có khả chịu đƣợc nồng độ muối NaCl nhƣng không cao (0,2-0,25%) - Hai chủng N4 N5 có khả sinh enzyme cellulase phân giải cellulose enzyme amylase phân giải tinh bột có khả tiết sắc tố melanin - Qua nghiên cứu cho chủng vi nấm N4 chủng gây bệnh thối cổ rễ lạc trồng thành phố Huế 4.2 Đề nghị - Tiến hành khảo sát thực tế đồng ruộng để xác định thời điểm diệt trừ nấm gây bệnh thối cổ rễ cho lạc có hiệu - Cần tiếp tục nghiên cứu loại thuốc trừ vi nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc - Nghiên cứu sử dụng chế phẩm sinh học trừ vi nấm gây bệnh thối rễ lạc thay phần thuốc trừ vi nấm hóa học TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] [2] [3] [4] [5] Lê Nhƣ Cƣơng (2004) “Tình hình bệnh héo rũ lạc kết nghiên cứu số biện pháp phòng trừ tỉnh Thừa Thiên Huế”, Tạp chí Bảo vệ thực vật, số 1/2004, tr 9-14 Bùi Xuân Đồng cộng (1999) Vi nấm phương pháp phòng chống, NXB Khoa học Kỹ thuật Vũ Thị Minh Đức (2001) Thực tập vi sinh vật học, NXB Đại học Quốc gia, Hà Nội, trang 28-39 Biền Văn Minh (2013) “Phân lập chọn lọc nấm mốc có khả phân hủy tinh bột dạy thực hành Sinh học trƣờng THPT” Tạp chí Thiết bị giáo dục, ISSN 1859 – 0810, số 100/tháng 12/2013, tr: 22-23 40 Egorov N.X (1993) Thực tập Vi sinh vật, NXB Mir, Maxcơva Nguyễn Lân Dũng dịch, NXB ĐH&THCN, Hà Nội LÊ NGUYỄN KIỀU NHỊ NGUYỄN THỊ THÚY HÒA NGUYỄN THỊ XỊ SV lớp KTNL 3, khoa Sinh học, trƣờng Đại học Sƣ phạm - Đại học Huế ĐT: 0935 935 947, Email: lenguyenkieunhi0605@gmail.com ... nhận thấy: chủng N4 gây chết lạc dấu hiệu bệnh tích bệnh thối cổ rễ KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Qua nghiên cứu vi nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc (Arachis hypogaea L.) trồng thành phố Huế rút số kết luận...NGHIÊN CỨU VI NẤM GÂY BỆNH THỐI CỔ RỄ Ở CÂY LẠC 91 2.3 Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu lý thuyết: Tổng hợp tài liệu thông tin liên quan đến bệnh thối cổ rễ lạc Nghiên cứu thực nghiệm:... rễ cho lạc có hiệu - Cần tiếp tục nghiên cứu loại thuốc trừ vi nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc - Nghiên cứu sử dụng chế phẩm sinh học trừ vi nấm gây bệnh thối rễ lạc thay phần thuốc trừ vi nấm hóa