Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8925 : 2012 TINH BÒ SỮA, BÒ THỊT – ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG Dairy and beef cattle semen – Quality evaluation Lời nói đầu TCVN 8925:2012 chuyển đổi từ 10 TCVN 531:2002 thành tiêu chuẩn quốc gia theo quy định khoản Điều 69 Luật Tiêu chuẩn Quy chuẩn kỹ thuật điểm b khoản Điều Nghị định số 127/2007/NĐ-CP ngày 01/8/2007 Chính phủ quy định chi tiết thi hành số điều Luật Tiêu chuẩn Quy chuẩn kỹ thuật; TCVN 8925:2012 Cục Chăn nuôi biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Cơng nghệ cơng bố TINH BỊ SỮA, BỊ THỊT – ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG Dairy and beef cattle semen – Quality evaluation Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định yêu cầu kỹ thuật áp dụng đánh giá chất lượng tinh bò sữa, bò thịt dùng cho nhân giống phương pháp thụ tinh nhân tạo Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ định nghĩa sau: 2.1 Tinh nguyên (semen) Tinh dịch chưa pha loãng lấy từ bò đực giống phương pháp sử dụng âm đạo giả thủ thuật lấy tinh khác 2.2 Tinh đơng lạnh (frozen semen) Tinh bị pha chế, đông lạnh từ tinh nguyên bảo quản dạng cọng rạ nhiệt độ -196 C nitơ lỏng Yêu cầu kỹ thuật 3.1 Đối với tinh nguyên Ngay sau lấy khỏi thể bò đực giống, tinh nguyên giữ nhiệt độ 35 C kiểm tra tiêu kỹ thuật đánh giá chất lượng thời gian không Tinh ngun bị sữa, bị thịt có màu trắng sữa trắng ngà có độ mịn đồng Chỉ có mùi đặc trưng tinh bị, khơng có mùi lạ mùi khác Các tiêu kỹ thuật tinh nguyên quy định Bảng Bảng – Yêu cầu kỹ thuật tinh nguyên Chỉ tiêu Mức Thể tích lần lấy tinh, tính mililít, khơng nhỏ 3,0 Hoạt lực tinh trùng, tính %, khơng nhỏ 70 Mật độ tinh trùng, tính triệu/ml, không nhỏ 800 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình, tính %, nhỏ 20 Tỷ lệ tinh trùng chết, tính %, nhỏ 20 Độ pH từ 6,5 đến 7,0 3.2 Đối với tinh đơng lạnh Tỷ lệ pha lỗng tinh bị phải đảm bảo mật độ để có số lượng tinh trùng sống trước đông lạnh tối thiểu 25 triệu cọng rạ 0,25 ml 0,5 ml Yêu cầu kỹ thuật tinh đông lạnh quy định Bảng LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Bảng – Yêu cầu kỹ thuật tinh đông lạnh Chỉ tiêu Mức Hoạt lực tinh trùng sau giải đơng, tính %, khơng nhỏ 40 Số lượng tinh trùng sống, tính %, khơng nhỏ 10 Mơi trường pha lỗng để sản xuất tinh đông lạnh dạng cọng rạ phải chuẩn bị trước lấy tinh, có hàm lượng kháng sinh theo quy định Thể tích cọng rạ 0,25 ml 0,5 ml, chiều dài 133 mm, sản xuất từ nhựa PVC trung tính Khi sản xuất tinh đông lạnh, thông tin ghi cọng rạ phải đầy đủ; mã nước sản xuất, giống bò, số hiệu bò đực giống, ngày tháng năm sản xuất, tên đơn vị sản xuất tinh Sau 48 h kể từ sản xuất, tinh đông lạnh phải bảo quản nitơ lỏng -196 C Trong trình bảo quản, thường xuyên kiểm tra bổ sung nitơ lỏng Mức nitơ lỏng tối thiểu bảo quản phải đảm bảo ngập hết cọng tinh Phương pháp thử 4.1 Yêu cầu chung 4.1.1 Đối với tinh nguyên Sau lần lấy tinh nguyên, phải kiểm tra tiêu sau: màu sắc mùi, thể tích, hoạt lực, mật độ, độ pH Riêng tiêu tỷ lệ tinh trùng kỳ hình tỷ lệ tinh trùng chết phải kiểm tra định kỳ tháng lần 4.1.2 Đối với tinh đông lạnh Tinh đông lạnh trình bảo quản phải kiểm tra chất lượng định kỳ theo phương pháp xác suất ngẫu nhiên, tối thiểu tháng lần kiểm tra chất lượng xuất kho Tinh đông lạnh kinh doanh lưu thông thị trường kiểm tra định kỳ đột xuất đánh giá chất lượng quy định Nội dung kiểm tra bao gồm: - thông tin chung cọng tinh: mã nước sản xuất, giống bò, số hiệu bò đực giống, ngày tháng năm sản xuất, tên đơn vị sản xuất tinh - tiêu đánh giá chất lượng tinh đông lạnh bao gồm thể tích, hoạt lực, mật độ - đánh giá kết phối giống hay tỷ lệ có thai 4.2 Xác định màu sắc mùi Kiểm tra màu sắc mùi tinh nguyên cảm quan 4.3 Xác định thể tích Kiểm tra thể tích ống hứng tinh, sử dụng ống đong có chia độ, xác đến 0,1 ml 4.4 Xác định hoạt lực tinh trùng 4.4.1 Phương pháp dùng kính hiển vi Sử dụng kính hiển vi có độ phóng đại từ 200 lần đến 400 lần Căn vào tốc độ hình thành cuộn sóng để xác định sức hoạt động từ 1+ đến 5+ (dấu + tương đương với 20 %, dấu – tương đương với 10 %) 1+ tinh trùng hoạt động yếu 5+ tinh trùng hoạt động mãnh liệt: có chuyển động mạnh nhất, số trường hợp chuyển động trơng giống xốy nước dịng nước 4.4.2 Phương pháp dùng thị kính Sử dụng tiêu có phủ lamen thị kính có độ phóng đại từ 200 lần đến 400 lần để xác định tỷ lệ tinh trùng tiến thẳng theo hệ thống thang 10 điểm Trước kiểm tra, tinh dịch phải pha loãng với dung dịch NaCl 0,9 % theo tỷ lệ định để có mật độ tinh trùng từ 50 triệu/ml đến 100 triệu/ml 4.5 Xác định mật độ tinh trùng LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Mật độ tinh trùng xác định thông qua việc đếm hồng cầu buồng đếm Neubawer Đồng hóa tinh dịch: dùng ống hút pha loãng hồng cầu đặt lên bề mặt tinh dịch hỗn hợp kỹ hút đến vạch 0,5 1,0 Lau tinh dịch dính quanh miệng ống hút Sau hút dịch pha lỗng (nước muối %) đến vạch 101, lắc kỹ bịt kín hai đầu ống hút Tinh dịch dung dịch pha loãng đồng nhất, mức pha loãng tương ứng 200 lần 100 lần Đưa giọt tinh dịch pha lỗng vào khoảng khơng gian gờ trái gờ phải buồng đếm Đặt buồng đếm nằm ngang từ đến đợi cho tinh trùng lắng xuống Sau đặt buồng đếm lên kính hiển vi với độ phóng đại thấp đếm số lượng tinh trùng hai rìa rìa trái Số lượng tinh trùng tính sau: Số tinh trùng mm3 hỗn hợp Số tinh trùng cm3 hỗn hợp Hút tinh dịch đến vạch 0,5 400 000 400 000 000 Hút tinh dịch đến vạch 1,0 200 000 200 000 000 CHÚ THÍCH: Có thể sử dụng máy so màu để xác định mật độ tinh trùng hàng tháng phải kiểm tra lại độ xác máy phương pháp đếm hồng cầu 4.6 Xác định tinh trùng kỳ hình Kiểm tra tinh trùng kỳ hình định kỳ hàng tháng phương pháp nhuộm màu Giemsa Dùng kính hiển vi có độ phóng đại 400 lần, kiểm tra 500 tinh trùng để xác định tỷ lệ tinh trùng kỳ hình Đặt giọt tinh dịch lên cạnh kính, đặt nghiêng cạnh kính có tinh dịch lên phiến kính, phết tinh dịch lên phiến kính mỏng tốt Hong khơ khơng khí cố định methanol đến Sau rửa nước nhuộm với dung dịch carbo fuchshin vài phút Kiểm tra tinh trùng kỳ hình qua kính hiển vi sau rửa nước hong khô 4.7 Xác định tinh trùng chết Kiểm tra tinh trùng chết phương pháp nhuộm màu Eosin Phải nhuộm sau lấy tinh, thao tác nhanh, không kéo dài Dùng kính hiển vi có độ phóng đại 400 lần, đếm 500 tinh trùng để xác định tỷ lệ tinh trùng sống chết 4.8 Xác định độ pH tinh nguyên Kiểm tra định kỳ hàng tháng tiêu độ pH tinh nguyên máy đo pH giấy đo pH 4.9 Đánh giá kết phối giống (tỷ lệ có thai) Tiến hành khám lâm sàng sau phối giống tháng Biểu diễn kết theo số bò có chửa/số lần phối giống LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162