NÔNG SẢN CÓ NGUỒN GỐC THỰC VẬT – XÁC ĐỊNH ĐA DƯ LƯỢNG THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT CÓ ĐỘ PHÂN CỰC CAO: PARAQUAT, DIQUAT, GLYPHOSATE, GLUFOSINATE,....

TCVN TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 12570:2019 TCVN :2020 Dự thảo lần NƠNG SẢN CĨ NGUỒN GỐC THỰC VẬT – XÁC ĐỊNH ĐA DƯ LƯỢNG THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT CÓ ĐỘ PHÂN CỰC CAO: PARAQUAT, DIQUAT, GLYPHOSATE, GLUFOSINATE, AXIT PHOSPHONIC, STREPTOMYCIN, KASUGAMYCIN,… Agricultural products of plant origin – Determination highly polar pesticides: Paraquat, Diquat, Glyphosate, Glufosinate, Axit phosphonic, Streptomycin, Kasugamycin, HÀ NỘI  2020 TCVN :2020 TCVN :2020 Lời nói đầu TCVN : 2020 Cục Bảo vệ thực vật biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố TCVN :2020 TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN :2020 Nơng sản có nguồn gốc thực vật - Xác định đa dư lượng thuốc bảo vệ thực vật có độ phân cực cao: Paraquat, Diquat, Glyphosate, Glufosinate, Axit phosphonic, Streptomycin, Kasugamycin, Agricultural products of plant origin – Determination highly polar pesticides: Paraquat, Diquat, Glyphosate, Glufosinate, Axit phosphonic, Streptomycin, Kasugamycin,… Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp phân tích đa dư lượng thuốc bảo vệ thực vật có độ phân cực cao nơng sản có nguồn gốc thực vật: Paraquat, Diquat, Glyphosate, Glufosinate, Axit phosphonic, Streptomycin, Kasugamycin, Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết để áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 5140:2008 (CAC/GL 41-1993, Volume 2A, Part 1-2000) Bộ phận hàng hóa áp dụng giới hạn dư lượng tối đa dùng để phân tích TCVN 4851:1989 (ISO 3696-1987) Nước dùng để phân tích phịng thí nghiệm Ngun tắc Mẫu đồng chiết dung dịch nước chứa % axit formic Tách pha cách ly tâm Dịch chiết sau xác định trực tiếp LC-MS/MS Thuốc thử Trong q trình phân tích sử dụng hóa chất, thuốc thử thuộc loại tinh khiết phân tích, trừ có quy định khác 4.1 Nước, H2O, loại theo TCVN 4851 : 1989 (ISO 3696-1987) 4.2 Metanol, CH3OH, loại dùng cho HPLC 4.3 Axetonitril, CH3CN, loại dùng cho HPLC TCVN :2020 4.4 Axit formic, HCOOH, 98 % 4.5 Dung dịch nước chứa % axit formic Hút 10 ml axit formic (4.4) cho vào bình định mức 000 ml (5.15) chứa sẵn khoảng 500 ml nước (4.1), định mức đến vạch, lắc kỹ, siêu âm 15 4.6 Dung dịch nước chứa 0,1 % axit formic Hút 1,0 ml axit formic (4.4) cho vào bình định mức 000 ml (5.15) chứa sẵn khoảng 500 ml nước (4.1), định mức đến vạch, lắc kỹ, siêu âm 15 4.7 Dung dịch metanol chứa % axit formic Hút 10 ml axit formic (4.4) cho vào bình định mức 000 ml (5.15) chứa sẵn khoảng 500 ml metanol (4.2), định mức đến vạch, lắc kỹ, siêu âm 15 4.8 Dung dịch metanol chứa 0,1 % axit formic Hút 1,0 ml axit formic (4.4) cho vào bình định mức 000 ml (5.15) chứa sẵn khoảng 500 ml metanol (4.2), định mức đến vạch, lắc kỹ, siêu âm 15 4.9 Dung dịch a et nit il t ng nước hêm 100 ml axetonitril (4.3) vào bình định mức 000 ml (5.15) chứa sẵn khoảng 500 ml nước (4.1), định mức đến vạch lắc 4.10 Các chất chuẩn thuốc bảo vệ thực vật: Diquat dibromide monohydrate, Paraquat dichloride, Glufosinate ammonium, Kasugamycin hydrochloride monohydrate, Streptomycin sesquisufate, glyphosate, Axit phosphonic, biết trước hàm lượng : ột số chất chuẩn bán dạng muối ho c hydrat ệ số chuyển đổi chất chuẩn bán hoạt chất phân tích xem bảng Bảng - Hệ số chuyển đổi chất chuẩn bán hoạt chất phân tích Hoạt chất Khối lượng phân tử phân tích Chất chuẩn Diquat 184,2 Paraquat 186,3 Hệ số chuyển đổi bán g/mol Khối lượng phân tử g/mol Diquat dibromide monohydrate Paraquat dichloride 362,1 0,51 257,2 0,72 TCVN Glufosinate Glufosinate 181,1 ammonium :2020 198,2 0,91 433,8 0,87 728,7 0,80 Kasugamycin Kasugamycin 379,4 hydrochloride monohydrate Streptomycin Streptomycin 581,6 Glyphosate 169,1 Glyphosate 169,1 82 Axit Phosphonic 82 Axit Phosphonic sesquisufate 4.11 Các dung dịch chuẩn gốc, dung dịch chuẩn trung gian thuốc bảo vệ thực vật, Cân xác khoảng 0,005 mg chất chuẩn Streptomycin 0,01 g chất chuẩn thuốc bảo vệ thực vật lại (4.10) cân phân tích (5.4) vào bình định mức dung tích 10 ml (5.15), hòa tan định mức đến vạch dung môi đề xuất lắc đều, thu nồng độ dung dịch chuẩn gốc bảng Dùng pipet tự động (5.11) lấy 200 l dung dịch chuẩn gốc Streptomycin 100 l dung dịch chuẩn gốc c n lại (4.17) cho vào bình định mức dung tích 10 ml (5.15), định mức đến vạch dung môi đề xuất lắc đều, thu nồng độ dung dịch chuẩn trung gian bảng Dung dịch chuẩn gốc sau chuẩn bị xong bảo quản nhiệt độ nhỏ ho c âm 20 0C có thời hạn sử dụng không 12 tháng Các dung dịch chuẩn trung gian sau chuẩn bị xong bảo quản nhiệt độ nhỏ ho c C có thời hạn sử dụng khơng q tháng : ung dịch c a chất có khả tương tác với bề m t th y tinh giữ vial nhựa (5.11) (xem àng 2) ảng – Nồng độ dung dịch chuẩn gốc, chuẩn t ung gian v dung Chuẩn gốc Hoạt chất Dung môi i h a tan đ uất Chuẩn trung gian Nồng độ Dung mơi µg/ml Nồng độ Chú ý µg/ml dùng vial Diquat Dung dịch axetonitril 10 nước (4.9) Dung dịch nước 000 chứa % axit formic (4.5) nhựa PP 10 (5.11) bảo vệ dung dịch tránh ánh TCVN :2020 sáng dùng vial Paraquat Dung dịch axetonitril 10 nước (4.9) nhựa PP Dung dịch nước 000 chứa % axit formic (5.11) bảo 10 vệ dung dịch (4.5) tránh ánh sáng Glyphosate Glufosinate Axit Phosphonic Streptomycin Kasugamycin Dung dịch axetonitril 10 nước (4.9) Dung dịch axetonitril 10 nước (4.9) Nước (4.1) Dung dịch nước 000 000 000 chứa % axit formic dùng vial nhựa PP 10 (4.5) (5.11) Dung dịch nước dùng vial chứa % axit formic nhựa PP 10 (4.5) (5.11) Dung dịch nước dùng vial chứa % axit formic nhựa PP 10 (4.5) MeOH: H2O (1:1, thể tích) Metanol (4.2) 500 000 (5.11) Dung dịch nước chứa % axit formic (4.5) Dung dịch nước chứa % axit formic (4.5) 10 10 4.12 Dung dịch chuẩn làm việc dung môi, n n mẫu (dung dịch chuẩn phù hợp với n n mẫu) Pha loãng liên tục dung dịch chuẩn trung gian (4.11) thành dãy chuẩn làm việc có nồng độ 0,05; 0,1; 0,25; µg/ml cách hút thể tích dung dịch chuẩn trung gian 10 g/ml (4.11) vào bình định mức dung tích 10 ml (5.15) tương ứng theo bảng dung dịch nước chứa % axit formic (4.5) lắc Các dung dịch chuẩn làm việc dung môi sau chuẩn bị xong bảo quản nhiệt độ nhỏ ho c 0C có thời hạn sử dụng khơng q tháng Chuẩn bị dung dịch chuẩn làm việc mẫu giống với chuẩn bị dung dịch chuẩn làm việc dung môi thay dung dịch nước chứa % axit formic dịch chiết mẫu trắng (quá trình chuẩn bị bước 7.2) theo bảng Để thuận tiện việc chuẩn bị dung dịch chuẩn mẫu, nên tham khảo bảng B.1- Nhóm sản phẩm mẫu đại diện (Phụ lục B) ảng - Cách d dung dịch chuẩn làm việc t ng dung i v t ng n n T ng n n Trong dung mơi Điểm chuẩn, µg/ml 0,05 Dịch chiết mẫu trắng ẫu ẫu 0,1 0,25 0,05 0,1 0,25 - - - - 950 990 950 TCVN :2020 (7.3), µl Dung dịch nước chứa 950 % axit formic (4.5), µl 900 950 800 500 - - - - - - 200 500 - 10 - 50 100 - - - 50 - - - - 50 - - - - 50 000 000 000 000 000 000 000 000 Chuẩn trung gian 10 µg/ml, µl Chuẩn làm việc µg/ml, µl Chuẩn làm việc µg/ml, µl Tổng thể tích, µl Thiết bị, dụng cụ 5.1 Thiết bị sắc ký lỏng khối phổ hai lần (LC-MS/MS), trang bị nguồn ion hóa phun điện tử (ESI) 5.2 Cột sắc ký lỏng, HYPERCARB (125 x 4,6 mm)1 -C18 (3,5 µm 3,0 x 100 mm)2 5.3 Máy ly tâm, dùng với loại ống ly tâm sử dụng quy trình (5.10) có khả đạt tốc độ tối thiểu 000 vòng/min 5.4 Cân phân tích, cân xác đến 0,01 mg 5.5 Cân kỹ thuật, cân xác đến 0,01 g 5.6 Tủ lạnh đ ng, hoạt động liên tục nhiệt độ thấp âm 20 0C 5.7 Tủ lạnh, hoạt động liên tục nhiệt độ 0C 5.8 Máy nghi n mẫu 5.9 Máy lắc Vortex 5.10 Ống ly tâm có nắ đậy, dung tích 50 ml, nhựa PP 5.11 Pipet tự động i et định mức, lấy xác từ µl đến 10 µl, từ 10 µl đến 100 µl, từ 200 µl đến 000 µl từ ml đến 10 ml 5.12 Vial nhựa PP, 1,5 ml, dùng cho bơm mẫu tự động sắc ký lỏng 5.13 Màng lọc nylon 0,45 µm, 25 mm 5.14 Xyranh ml, dùng lần 5.15 ình định mức, dung tích 10, 100 1000 ml 5.16 Bể siêu âm .1 ể nước, điều chỉnh nhiệt độ đến 80 0C HYPERCARB sản phẩm cung cấp hãng Thermo Fisher hông tin cung cấp để thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn ác sản phẩm tương đương sử dụng chúng cho kết tương đương ZORBAX SB-C18 sản phẩm cung cấp hãng Agilent hông tin cung cấp để thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn ác sản phẩm tương đương sử dụng chúng cho kết tương đương TCVN :2020 Lấy mẫu Việc lấy mẫu không quy định tiêu chuẩn này, nên lấy mẫu theo TCVN 5139:2008 (CAC/GL 331999) Phương pháp khuyến cáo lấy mẫu để xác định dư lượng thuốc BVTV phù hợp với giới hạn dư lượng tối đa (MRL) Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm (PTN) phải mẫu đại diện Mẫu không hư hỏng ho c thay đổi suốt trình bảo quản vận chuyển Cách tiến hành 7.1 Chuẩn bị bảo quản mẫu thử 7.1.1 Mẫu phòng thử nghiệm Mẫu chuẩn bị PTN nhận được, trước có thay đổi đáng kể lý hóa Nếu khơng thể chuẩn bị mẫu phải bảo quản mẫu điều kiện thích hợp để tránh suy giảm chất lượng c a mẫu Nhìn chung, mẫu PTN khơng nên bảo quản q ngày trước chuẩn bị 7.1.2 Xử lý sơ mẫu thử Để chuẩn bị mẫu thử, lấy phần mẫu PTN áp dụng mức dư lượng tối đa theo VN 5140:2008 (CAC/GL 41-1993, Volume 2A, Part 1-2000) Có thể loại bỏ phần lại c a mẫu Việc rút gọn mẫu PTN phải thực cho thu phần mẫu đại diện (Ví dụ: chia bốn chọn phần chéo đối diện nhau) 7.1.3 Mẫu thử Từ mẫu thử xử lý sơ bộ, loại phần khó đồng (Ví dụ: loại bỏ hạt cứng hạch) Cần ý để tránh hao hụt phần thịt ho c phần nước Ghi lại khối lượng phần mẫu loại ính dư lượng theo khối lượng ban đầu c a mẫu thử (bao gồm phần mẫu loại ra) Nếu mẫu khó đồng ho c khó chiết dư lượng thuốc V V kích thước mẫu lớn nên nghiền nhỏ mẫu cách thích hợp Thực việc đồng nhiệt độ phòng tách phần thịt phần nước ho c suy giảm thuốc BVTV xảy không đáng kể Nghiền mẫu trạng thái đơng lạnh làm giảm thiểu thất chất phân tích khơng ổn định tính chất hóa học, thường cho cỡ hạt nhỏ đạt độ đồng cao 7.1.4 Phần mẫu thử Từ mẫu thử nghiền (7.1.3) lấy phần mẫu thử riêng lẻ đ cho phép phân tích Các phần mẫu thử cần phân tích Nếu phần mẫu thử khơng phân tích mẫu thử ho c phần mẫu thử phải làm đông lạnh phân tích Nếu phần mẫu thử lấy từ 10 TCVN :2020 Nước từ 90 0,5 có múi Quả có múi ưởi 90 0,5 Chanh 90 0,5 Cam 85 0,75 Quýt 90 0,5 Táo 85 0,75 Cân 6,75 g Táo khô 2,5 30 4,25 thêm nước Quả dạng táo mẫu Nước sốt táo 80 Nước táo 90 0,5 Lê 85 0,75 Mộc 85 0,75 85 0,75 Cân 6,75 g khô 2,5 30 4,25 mẫu thêm nước Quả hạch nh đào 85 0,75 Mận vàng 80 uân đào 85 0,75 90 0,5 Đào Cân 6,75 g Đào khô 2,5 30 4,25 mẫu thêm nước Mận 85 0,75 Cân 6,75 g Mận khô 2,5 30 4,25 mẫu thêm nước âm xôi đen 85 0,75 Việt quất 85 0,75 Phúc bồn tử 85 0,75 Quả nhỏ Lý gai 90 0,5 mềm Nho 80 85 0,75 2,5 30 4,25 âm xôi đỏ Nho khô 12 Cân 6,75 g mẫu TCVN :2020 thêm nước Dâu tây 90 0,5 Dứa 85 0,75 Chuối 75 1,25 Kiwi 85 0,75 Xoài 80 Đu đ 90 0,5 C cải đường 90 0,5 Cà rốt 90 0,5 Cần tây 90 0,5 c rau Cải ngựa 75 1,25 ăn rễ Rễ rau mùi tây 90 0,5 C cải 95 0,25 Khoai tây 80 Tỏi 2,5 60 3,5 Hành tây 90 0,5 Hành 85 0,75 C hẹ 80 Hẹ 85 0,75 Cà tím 90 0,5 ưa chuột 95 0,25 ưa tây 90 0,5 Ớt 90 0,5 Bí ngơ 95 0,25 Cà chua 95 0,25 Bí ngịi 95 0,25 90 0,5 85 0,75 90 0,5 Cải thảo 95 0,25 Cải xoăn 90 0,5 Bắp cải tím 90 0,5 nhăn 90 0,5 Bắp cải trắng 90 0,5 Xà lách 95 0,25 Loại trái khác Rau au ăn Rau thân hành Rau dạng úp lơ xanh Cải Bruxen úp lơ trắng Rau họ cải Bắp au ăn cải 13 TCVN rau thơm au ăn thân Đậu hạt :2020 au đắng 95 0,25 Rau diếp cừu 85 0,75 Cải xoong 90 0,5 Mùi tây 80 Rau chân vịt 90 0,5 Atiso 85 0,75 95 0,25 Cần tây 95 0,25 Đậu hạt 90 0,5 Đậu 75 1,25 2,5 < 10 2,5 10 2,5 < 10 2,5 < 10 Gia vị khô < 10 Mật ong 2,5 20 4,5 Hạt cà phê < 10 Nâm 90 0,5 Quả bơ 70 1,5 Chè < 10 5 90 0,5 ăng tây Đậu hạt, đậu an, đậu lăng (khô) Ngũ cốc Ngũ cốc (dạng hạt, bột,…) Đậu phộng, hạt anh túc, hạt bí ngơ, hạt Hạt có vừng, đậu dầu nành, hạt hướng dương, hạt lanh, hạt chia ạnh nhân, hạt điều, dừa Hạt khô, mac ca, hồ đào, hồ trăn, óc chó Các loại khác ượu vang 14 TCVN :2020 7.3 Chuẩn bị dung dịch mẫu trắng Mẫu trắng mẫu khơng chứa ho c có giá trị khơng 30 % LOQ hoạt chất phân tích [1] , thực phần 7.2 7.4 Chuẩn bị dung dịch mẫu kiểm tra hiệu suất thu hồi ân lượng mẫu trắng tương ứng với loại mẫu phần 7.2 vào ống ly tâm có nắp đậy (5.10) Dùng pipet tự động (5.11) thêm 50 l dung dịch chuẩn trung gian (4.11), để yên nhiệt độ phòng tối thiểu 30 phút sau tiến hành phân tích với mẫu thử (7.2) 7.6 Xác định ơm dung dịch chuẩn làm việc mẫu (4.13), mẫu trắng (7.3), dung dịch mẫu kiểm tra hiệu suất thu hồi (7.4) dung dịch mẫu thử (7.2) vào thiết bị ùng đường chuẩn để xác định nồng độ c a mẫu thử mẫu kiểm tra hiệu suất thu hồi Nếu nồng độ c a mẫu thử nằm đường chuẩn điều chỉnh cách pha lỗng dung dịch mẫu thử (khơng phải pha lỗng lượng mẫu bơm) au bơm dung dịch mẫu thử bơm l p lại điểm chuẩn Hiệu suất chuẩn bơm l p lại yêu cầu nằm khoảng từ 70 đến 120 % .1 Xác dịnh Gl h sate, Gluf sinate, Kasugamycin, Axit phosphonic Một số thông số tham khảo c a thiết bị cột sau: - Cột: HYPERCARB (125 x 4,6 mm) (5.2) - Nhiệt độ cột: 40 0C - Tốc độ dòng: 0,5 ml/min - động A: Dung dịch nước chứa % axit formic (4.5) - động B: Dung dịch metanol chứa % axit formic (4.7) Bảng - Chương t ình g adient xác dịnh Gl h sate, Gluf sinate, Kasuga cin, A it phosphonic Thời gian Pha động A Pha động B % % 0,01 100 10,00 70 30 10,01 95 15,00 95 15,01 100 25,00 100 - Thể tích bơm: 10 µl - Nguồn ion: ESI/+,- - Điện áp: 500 V - Tốc độ dịng khí: Drying gas: 15 l/min; Nebulizing gas: l/min 15 TCVN :2020 - Nhiệt độ MS: DL: 250 0C; Heating block: 400 0C Bảng - Đi u kiện MRM xác dịnh Gl STT Hoạt chất Ion mẹ h sate, Gluf sinate, Kasuga cin, A it phosphonic I n định Năng lượng I n định Năng lượng ESI lượng va chạm tính va chạm +/- m/z V m/z V m/z Glyphosate 170,00 88,00 42,00 27 + Glufosinate 179,80 63,10 43 85,10 20 - Kasugamycin 380,00 200,10 12 112,00 20 + Axit 81,00 79,10 19 62,90 28 - phosphonic GHI CHÚ: Có thể tiến hành đo thiết bị, thông số c a thiết bị, cột chương trình gradient khác, tùy theo điều kiện thực tế c a phòng thử nghiệm để đạt độ nhạy tốt Xác dịnh Di uat, Paraquat, Streptomycin Một số thông số tham khảo c a thiết bị cột sau: - Cột: ZORBAX SB-C18 (3,5 µm, 3,0 x 100 mm) (5.2) - Nhiệt độ cột: 40 0C - Tốc độ dòng: 0,5 ml/min - động: A: dung dịch nước chứa 0,1 % axit formic (4.6) : B: dung dịch metanol chứa 0,1 formic (4.8) axit 80 : 20 (thể tích) - Thể tích bơm: 10 µl - Nguồn ion: ESI/+,- - Điện áp: 500 V - Tốc độ dòng khí: Drying gas: 15 l/min; Nebulizing gas: l/min - Nhiệt độ MS: DL: 250 0C; Heating block: 400 0C Bảng - Đi u kiện MRM xác dịnh Di uat, Pa a uat, St e t Năng STT Hoạt chất Ion mẹ I n định lượng va m/z lượng m/z chạm V I n định tính m/z cin Năng ESI lượng va +/- chạm V Diquat 184,10 128,00 40 156,20 23 + Paraquat 185,90 171,10 19 77,10 48 + Streptomycin 614,20 582,10 22 263,20 37 + GHI CHÚ: Có thể tiến hành đo thiết bị, thông số c a thiết bị, cột chương trình gradient khác, tùy theo điều kiện thực tế c a phòng thử nghiệm để đạt độ nhạy tốt Đánh giá ết 8.1 Nhận biết 16 TCVN :2020 Các thông số thu c a chất phân tích cần xác định dịch chiết mẫu so sánh với thông số thu c a thuốc BVTV dung dịch chuẩn theo tiêu chuẩn SANTE/11813/2017 [4]: - Độ lệch thời gian lưu c a chất cần phân tích mẫu thử nghiệm so với dung dịch chuẩn ho c mẫu thêm chuẩn 0,1 cho sắc ký khí sắc ký lỏng - Đối với mẫu phân tích thiết bị khối phổ (MS/MS), cần có thêm điều kiện: +) có product ion (ion con) (2 MRM transition) +) khoảng dao động c a tỉ lệ ion diện tích ion định tính ion định lượng mẫu thử nghiệm so với dung dịch chuẩn ho c mẫu thêm chuẩn ± 30 , tính sau: (1) 8.2 Tính kết 8.2.1 Sử dụng đường chuẩn phù hợp n n mẫu hương trình đường chuẩn: (2) lượng thuốc BVTV tìm thấy mẫu: (3) rong đó: X: nồng độ dư lượng thuốc BVTV tìm thấy mẫu, tính miligam kilơgam (mg/kg); xm: nồng độ dư lượng thuốc BVTV dung dịch mẫu thử xác định đường chuẩn, tính micrơgam mililít (g/ml); (4) y: diện tích pic thu được; b: giá trị hệ số ch n c a đường chuẩn; a: giá trị độ dốc c a đường chuẩn; m: khối lượng mẫu thử, tính gam (g); Ve: Thể tích cuối c a mẫu, tính mililít (ml) 8.2.2 Sử dụng hương há thê chuẩn Khi nghi ngờ dư lượng vượt mức cho phép ho c chất bị ảnh hưởng nhiều mẫu ho c có tượng triệt tiêu tín hiệu, nên sử dụng phương pháp thêm chuẩn với điều kiện có tuyến tính tín hiệu phân tích nồng độ dải nồng độ dự kiến Quy trình đ i hỏi phải biết trước khoảng xấp xỉ mức dư lượng X từ phép phân tích sơ 17 TCVN :2020 Giả sử với lượng mẫu sử dụng g có mức dư lượng dự đoán 0,5 mg/kg, đường chuẩn thực bảng Lượng chất phân tích có dịch chiết mẫu trước thêm chuẩn tính cách sử dụng đồ thị ình theo phép hồi quy tuyến tính Hình - Đường chuẩn sử dụng quy trình thêm chuẩn hương trình đường chuẩn: (5) | | : ượng chất phân tích có dịch chiết mẫu trước thêm chuẩn, tính micrơgam (µg) Bảng – Chuẩn bị đường chuẩn hương há thê Thêm chuẩn Vial Vial Vial Vial 500 500 500 500 (= 0,1 g mẫu) (= 0,1 g mẫu) (= 0,1 g mẫu) (= 0,1 g mẫu) - 25 50 75 - 0,025 0,05 0,075 Thể tích dung mơi, µl 100 75 50 25 Thể tích cuối, µl 600 600 600 600 Thể tích dịch chiết mẫu V, µl Thể tích dung dịch chuẩn µg/ml thêm vào, µl Khối lượng tạo thành c a chất phân tích thêm, µg lượng thuốc BVTV tìm thấy mẫu: (6) rong đó: X: nồng độ dư lượng thuốc BVTV tìm thấy mẫu, tính miligam kilơgam (mg/kg); : ượng chất phân tích có dịch chiết mẫu trước thêm chuẩn, tính micrơgam (µg); 18 TCVN | | :2020 (7) V: thể tích dịch chiết mẫu dùng thêm chuẩn, tính mililít (ml); m: khối lượng mẫu thử, tính gam (g); Ve: Thể tích cuối c a mẫu, tính mililít (ml) Hiệu suất thu hồi giới hạn định lượng 9.1 Hiệu suất thu hồi hương há : trung bình từ 71 % đến 109 % 9.2 Giới hạn định lượng hương há (LOQ): 9.2.1 Mẫu rau tươi - 0,05 mg/kg: hoạt chất: Glyphosate, Kasugamycin, Axit phosphonic, Diquat, Paraquat - 0,10 mg/kg: hoạt chất: Glufosinate, Streptomycin 9.2.2 Mẫu h , ngũ cốc, hạt - 0,10 mg/kg: hoạt chất: Glyphosate, Kasugamycin, Axit phosphonic, Diquat, Paraquat - 0,20 mg/kg: hoạt chất: Glufosinate, Streptomycin 10 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: - thông tin cần thiết để nhận biết mẫu thử; - phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; - phương pháp thử dùng, viện dẫn tiêu chuẩn này; - tất chi tiết không quy định tiêu chuẩn ho c điều coi tùy chọn ảnh hưởng đến kết quả; - kết thử nghiệm thu 19 TCVN :2020 PHỤ LỤC A (Tham khảo) Giới thiệu hoạt chất thuốc BVTV [5] A.1 Diquat Tên hóa học: 9,10-dihydro-8a,10a-diazoniaphenanthrene Cơng thức hóa học: Công thức phân tử: C12H12N2 Khối lượng phân tử: 184,2 g/mol A.2 Paraquat Tên hóa học: 1,1′-dimethyl-4,4′-bipyridinium Cơng thức hóa học: Công thức phân tử: C12H14N2 Khối lượng phân tử: 186,3 g/mol A.3 Glyphosate Tên hóa học: N-(phosphonomethyl) glycine Cơng thức hóa học: Cơng thức phân tử: C3H8NO5P Khối lượng phân tử: 169,1 g/mol 20 TCVN :2020 A.4 Glufosinate Tên hóa học: (2RS)-2-amino-4-[hydroxy(methyl)phosphinoyl]butyric acid Cơng thức hóa học: Cơng thức phân tử: C5H12NO4P Khối lượng phân tử: 181,1 g/mol A.5 Axit propionic Tên hóa học: (2RS)-2-amino-4-[hydroxy(methyl)phosphinoyl]butyric acid Cơng thức hóa học: Công thức phân tử: H3PO3 Khối lượng phân tử: 82 g/mol A.6 Streptomycin Tên hóa học: O-2-deoxy-2-(methylamino)-α-L-glucopyranosyl-(1→2)-O-5-deoxy-3-C-formyl-α-L- lyxofuranosyl-(1→4)-N1,N3-diamidino-D-streptamine Cơng thức hóa học: 21 TCVN :2020 Cơng thức phân tử: C21H39N7O12 Khối lượng phân tử: 581,6 g/mol A.7 Kasugamycin Tên hóa học: 1L-1,3,4/2,5,6-1-deoxy-2,3,4,5,6-pentahydroxycyclohexyl 2-amino 2,3,4,6-tetradeoxy-4(α-iminoglycino)-α-D-arabino-hexopyranoside Cơng thức hóa học: Cơng thức phân tử: C14H25N3O9 Khối lượng phân tử: 379,4 g/mol 22 TCVN :2020 PHỤ LỤC B (Tham khảo) Nhóm sản phẩm n n mẫu đại diện Bảng B.1 - Nhóm sản phẩm n n mẫu đại diện [4] Nhóm sản phẩm N n mẫu đại diện Quả dạng táo Táo, lê Quả hạch ơ, anh đào, đào Quả khác Chuối Hành tỏi C hành, hành au ăn quả/dạng bầu bí Rau brassica Cà chua, ớt, dưa chuột, dưa úp lơ, cải Brussels, cải bắp, cải xanh au ăn rau thơm Rau diếp, rau bina, húng quế au ăn thân Cần tây, măng tây Rau họ đậu tươi Đậu Nấm tươi Nấm Champignon, nấm Chanterelle au ăn c an tươi có vỏ, đậu an, đậu Pháp C cải đường, cà rốt, khoai tây, khoai lang Cam quýt Cam, chanh Quả nhỏ Dâu tây, việt quất, mâm xôi, nho Trái sấy khô Nho khô, mơ khô, mận khô, mứt trái Hạt Ĩc chó, phỉ, hạt dẻ Hạt có dầu Bột nhão c a hạt hạt có dầu Quả có dầu sản phẩm c a có dầu Hạt cải dầu, hướng dương, hạt bơng, đậu nành, đậu phộng, vừng đậu phộng, bột phỉ Ô liu, bơ bột nhão Rau họ đậu khô Đậu khô, đậu lăng Ngũ cốc sản phẩm ngũ cốc Lúa mì, lúa mạch đen, lúa mạch hạt yến mạch, ngô 23 TCVN :2020 PHỤ LỤC C (Tham khảo) Kết nghiên cứu Dùng mẫu trắng thêm chuẩn c a hoạt chất mẫu dưa leo cam mức nồng độ: 0,05; 0,50 1,00 mg/kg hoạt chất: iquat, araquat, lyphosate, Axit phosphonic, Kasugamycin mức nồng độ: 0,10; 0,50 1,00 mg/kg hoạt chất: lufosinate Streptomycin mẫu nho khô, gạo tiêu mức nồng độ: 0,10; 0,50 1,00 mg/kg hoạt chất: iquat, araquat, lyphosate, Axit phosphonic, Kasugamycin mức nồng độ: 0,20; 1,00 2,00 mg/kg hoạt chất: lufosinate treptomycin để xác định hiệu suất thu hồi, độ l p lại kết lần phân tíchđể xác định hiệu suất thu hồi, độ l p lại kết lần phân tích Các kết thu thể bảng C.1 bảng Bảng C.1 - Hiệu suất thu hồi (H), độ lặp lại (RSD) n n mẫu dưa le v ca STT 24 Hoạt chất Diquat Paraquat Glyphosate Axit phosphonic Kasugamycin Streptomycin Glufosinate Dưa le Nồng độ mg/kg Cam H RSD H RSD % % % % 0,05 87 14 83 10 0,50 82 12 88 1,00 89 93 14 0,05 83 13 78 0,50 81 10 72 1,00 84 91 0,05 103 11 71 0,50 92 12 83 10 1,00 88 13 94 11 0,05 95 14 103 0,50 106 11 102 1,00 89 10 93 16 0,05 101 103 0,50 109 10 107 1,00 97 95 16 0,10 84 15 82 0,50 89 14 85 11 1,00 81 12 86 13 0,10 92 13 98 17 0,50 86 14 88 13 1,00 82 11 97 11 TCVN :2020 Bảng C.2 - Hiệu suất thu hồi (H), độ lặp lại (RSD) n n mẫu nho khô, gạo tiêu STT Hoạt chất Diquat Paraquat Glyphosate Axit phosphonic Kasugamycin Streptomycin Glufosinate Nho khô Nồng độ mg/kg Gạo Tiêu H RSD H RSD H RSD % % % % % % 0,10 74 10 75 10 82 10 0,50 86 85 12 81 11 1,00 90 11 82 16 79 0,1 86 84 79 12 0,50 81 72 79 1,00 91 14 76 12 83 0,1 85 86 84 0,50 83 89 10 76 10 1,00 89 12 82 78 10 0,1 82 10 88 12 72 0,50 90 81 84 1,00 84 14 86 85 14 0,1 79 10 88 84 12 0,50 83 84 16 87 1,00 79 11 87 12 83 11 0,20 82 10 88 72 1,00 88 16 89 86 10 2,00 81 15 83 10 79 0,20 72 74 16 81 1,00 75 11 89 13 80 2,00 81 14 86 83 12 25