Tính cấp thiết của đề tài
Chăn nuôi dê là một nghề truyền thống quan trọng của người Lào, phát triển nhờ vào điều kiện tự nhiên thuận lợi với nhiều diện tích đồi núi và cây cỏ phong phú Hiện tại, chăn nuôi dê chủ yếu diễn ra theo phương thức tự cung tự cấp, sử dụng cỏ tự nhiên và phụ phẩm nông nghiệp Giống dê chủ yếu được nuôi là dê địa phương (dê Lạt) Hoạt động này đã có nhiều thay đổi, đáp ứng phần lớn nhu cầu thực phẩm của người dân, với tỷ lệ thịt dê chiếm 7,70% tổng lượng thịt tiêu thụ hàng năm Theo Tổng cục thống kê năm 2017, tổng đàn dê đạt 587 nghìn con, trở thành nguồn thu nhập quan trọng cho các hộ nông dân và góp phần chuyển dịch cơ cấu kinh tế nông nghiệp ở Lào.
Sự phát triển của chăn nuôi đã dẫn đến lưu lượng vận chuyển động vật và sản phẩm động vật gia tăng, kéo theo tình hình dịch bệnh phức tạp Nhiều bệnh truyền nhiễm, trong đó có bệnh LMLM (Foot and Mouth Disease, FMD), đã xâm nhập vào Lào qua các con đường lưu thông Bệnh LMLM là một trong những bệnh nguy hiểm nhất đối với động vật guốc chẵn như trâu, bò, lợn, dê, cừu và các loài động vật hoang dã, với khả năng lây lan nhanh chóng Tổ chức Dịch tễ Thế giới đã xếp bệnh này vào danh mục bảng A của các bệnh truyền nhiễm nguy hiểm nhất Virus gây bệnh LMLM thuộc họ Picornaviridae, được phân loại thành 7 type huyết thanh và hơn 70 subtype, không có miễn dịch chéo giữa các type.
Thiệt hại kinh tế do bệnh LMLM gây ra rất lớn, với chi phí tiêu hủy gia súc bệnh bình quân mỗi năm ước tính khoảng 1 tỷ kip, tương đương với khoảng 1,400 con gia súc/năm, chủ yếu là dê (Department of Livestock, 2017).
Trong những năm gần đây, bệnh LMLM đã trở thành vấn đề nghiêm trọng đối với đàn gia súc tại tỉnh Luongphabang Năm 2017, dịch LMLM đã bùng phát, với 1.917 con dê mắc bệnh trên toàn tỉnh Đặc biệt, huyện Phonxay ghi nhận số lượng dê mắc bệnh LMLM cao nhất trong khu vực (Văn phòng Thú y Luongphabang, 2017).
Phonxay là huyện thuộc tỉnh Luang Pha Bang, nằm ở phía Đông và giáp với nhiều huyện và tỉnh lân cận Hệ thống giao thông thuận lợi giúp việc vận chuyển và buôn bán diễn ra dễ dàng Tuy nhiên, quy mô chăn nuôi trang trại ở đây còn hạn chế, chủ yếu là chăn nuôi nông hộ tự cung tự cấp với nguồn giống không rõ ràng, dẫn đến việc thiếu an toàn sinh học trong chăn nuôi thú y Điều này đã gây khó khăn trong việc kiểm soát dịch bệnh, đặc biệt là bệnh LMLM ở dê, làm tăng nguy cơ dịch bệnh lây lan (Luongphabang veterinary office, 2017).
Việc giám sát tình hình bệnh LMLM ở dê và đánh giá các yếu tố nguy cơ tại huyện Phonxay rất quan trọng trong công tác phòng chống dịch bệnh Điều này không chỉ ảnh hưởng đến tỉnh Luongphabang mà còn có ý nghĩa lớn đối với ngành chăn nuôi và công tác thú y của Lào.
Để đáp ứng nhu cầu thực tiễn, tôi thực hiện đề tài nghiên cứu về "Tình hình bệnh lở mồm long móng và phân tích các yếu tố nguy cơ phát sinh bệnh này trên đàn dê nuôi tại tỉnh Luongphabang, Lào".
Mục tiêu nghiên cứu
-Nắm được tình hình chăn nuôi dê và tình hình dịch LMLM trên đàn dê tại tỉnh Luongphabang năm 2017
-Đánh giá được các yếu tố nguy cơ gây bệnh LMLM tại tı̉nh Luongphabang năm 2017
-Xác định được type virus gây bệnh LMLM ở dê tại tỉnh Luongphabang năm 2017.
Những đóng góp mới, ý nghĩa khoa học hoặc thực tiễn
Bài viết cung cấp thông tin và số liệu cụ thể về tình hình mắc bệnh LMLM cùng với các yếu tố nguy cơ tại huyện Phonxay, tỉnh Luongphabang năm 2017 Kết quả nghiên cứu này không chỉ là cơ sở cho các nghiên cứu tiếp theo mà còn hỗ trợ trong việc xây dựng các chương trình khống chế bệnh LMLM tại địa phương.
PHẦN 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU
Bê ̣nh lở mồm long móng
Định nghĩa, hình thái, cấu tạo, phân loại virus lmlm định nghĩa
Lở mồm long móng (LMLM) là một bệnh truyền nhiễm cấp tính do virus LMLM thuộc họ Picornaviridae, giống Aphthovirus gây ra, lây lan nhanh chóng và gây thiệt hại nghiêm trọng cho động vật móng guốc chẵn như trâu, bò, lợn, dê và cừu Bệnh có hai đặc tính nổi bật là tính đa type và khả năng biến đổi kháng nguyên, với bảy type virus được xác định: A, O, C, Asia1, SAT1, SAT2, và SAT3 Mặc dù các type virus này gây ra triệu chứng tương tự như sốt cao và hình thành mụn nước ở niêm mạc miệng, chân, kẽ móng, và vú con cái, nhưng chúng không tạo ra miễn dịch chéo Tại khu vực Đông Nam Á, thường gặp ba type virus là O, A và Asia1, trong khi Lào đã phát hiện các type O, A và Asia1 Bệnh lở mồm long móng còn được biết đến với nhiều tên gọi khác nhau.
- Foot and mouth diseease (FMD)
- Aphaetae Epizooticae (tên La Tinh)
- Feivre Aftosa (tiếng Tây Ban Nha)
Hình thái và cấu tạo:
Virus gây bệnh LMLM thuộc họ Picornaviridae, giống Aphtho virus, là loại virus nhỏ nhất với kích thước từ 20 - 30 nm và hình dạng đa diện có 30 mặt đều Virus này có khả năng vượt qua các máy lọc Berkefeld, Chamberland và màng lọc Seitz (Nguyễn Như Thanh, 2001).
Hạt virus chứa 30% acid nucleic, bao gồm một đoạn ARN chuỗi đơn với khối lượng phân tử 8.6 KiloDalton, được cấu thành từ 8000 nucleotit và có hệ số sa lắng 35S Virus không có tính sinh kháng thể và đặc tính kháng nguyên, nhưng vẫn đóng vai trò quan trọng trong quá trình gây nhiễm Vỏ capxit của virus gồm hơn 60 đơn vị capsome, mỗi capsome chứa bốn loại protein cấu trúc giống nhau: VP1, VP2, VP3 và VP4 Trong đó, VP1, VP2 và VP3 tạo nên bề mặt khối 20 mặt đối xứng, còn VP4 gắn kết ARN virus với bên trong capxit VP1, protein ngoài cùng, có vai trò quan trọng trong việc cố định virus trên tế bào và là kháng nguyên chính tạo ra kháng thể chống lại bệnh LMLM Do đó, việc giải mã nucleotit của gen mã hóa VP1 giúp phân chia thành các serotype và subtype, với sự khác biệt về bộ gen dẫn đến sự đa dạng của phân tử VP1.
Hằng số lắng (S) của hạt virus được xác định như sau: virion hoàn chỉnh có hằng số lắng 140S, trong khi phần vỏ capxit không chứa RNA có hằng số lắng 75S Mảnh protein của capxit bao quanh RNA dài 8 kilobases có hằng số lắng 12S khi chịu tác động của nhiệt độ, môi trường acid hoặc nồng độ ion thấp.
Virus LMLM là loại virus không có vỏ bọc, điều này khiến chúng có khả năng kháng cao với các dung môi hữu cơ như cồn và este.
Virus LMLM có hai đặc điểm nổi bật trong dịch tễ học: tính đa dạng về type và khả năng biến đổi kháng nguyên Mặc dù các type này gây ra triệu chứng và bệnh tích tương tự nhau, nhưng chúng không tạo ra miễn dịch chéo.
Theo hệ thống phân loại mới nhất do hội nghị Quốc tế về virus học lần thứ
11 tại Sydney, Australia năm 1999 quy định thì virus được phân loại như sau:
Virus thuộc họ Picornaviridae, giống Aphthovirus, Virus LMLM gồm
7 type khác nhau: O; A; C; SAT-1; SAT-2; SAT-3 và Asia1
Người ta phân biệt các type, subtype, các biến chủng và theo mức độ sinh miễn dịch chéo Hiện nay có trên 70 subtype đã biết
Type A consists of 32 subtypes, ranging from A1 to A32, which include various strains such as A1 Babaria, A2 Spain, A3 Purlenberg, A4 Hansen, A5 Westerwald, A5 Greece, A8 Parma, A Kemron, ABC, AGB, Brasil 1/50 (Santos), Spain 1/59 (Banjio), Thai 1/60, A Belem, A Guarruhos, A Zulia (Venezuela), A Suipacha (Argentina), USSR 1/64, and Kenya 3/64.
Iraq 24/64, Kenya 46/55, Acruizairo, A Argentine 59, A Argentine 66, A Colombia 67, Folatli, A Peru 69, A Uruguay 68, Colombia 69, A Venezuela
- Type O có 11 subtype: O1 đến O 11 và các chủng vi rut bao gồm: Lombardy, O2 Bresia, Venezuela, India 1/62, OVI, Polan 1/59, Brasil 1/60,
- Type SAT1 có 7 subtype: SAT1/1 - SAT1/7 và có các chủng: EV 11/37, SWA 1/49, SR 2/58, SA 13/61, SWA 40/61, Israel 4/62
- SAT2 có 3 subtype: SAT 2/1 – đến SAT 2/3 và có các chủng: Rho 1/48,
- SAT3 có 4 subtype: SAT3/1 đến SAT3/4 và có các chủng: RV 7/34, SA 57/59, Bech 20/61, Bech 1/65
- Asia1 có 3 subtype từ Asia 1/1 đến Asia 1/3, gồm các chủng: Park 1/54, Israel 3/63, Kemron, Asia Asia 1
Một trong số đó không cho miễn dịch chéo với nhau
Các subtype mới của bệnh LMLM đang ngày càng gia tăng một cách ngẫu nhiên và không theo quy luật cố định Tuy nhiên, tại mỗi thời điểm cụ thể, chỉ có một subtype nhất định gây bệnh ở các khu vực nhất định (Taylo, 1986).
Tầm quan trọng của subtype trong sản xuất vắc xin là nó chỉ có thể được phát triển cho một khu vực cụ thể, nơi mà subtype virus xuất hiện Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng trong một ổ dịch, có thể ban đầu do một chủng virus gây ra, nhưng sau đó lại phát hiện được các chủng hoặc subtype virus khác Điều này xảy ra do virus LMLM có khả năng biến đổi cao để thích nghi và phát triển thông qua động vật cảm thụ (Tô Long Thành và cs., 2006).
Khả năng nảy sinh biến dị của virus LMLM có thể xuất phát từ việc sử dụng vacxin không tạo được miễn dịch đầy đủ cho động vật, dẫn đến sự gia tăng đột biến ở các chủng thực địa (Tô Long Thành, 2000) Các ổ dịch có thể xảy ra do sự hiện diện của các type hoặc subtype, hoặc do sự kết hợp của cả hai loại này.
Virus LMLM có khả năng giữ nguyên các đặc tính khi sinh sản, nhưng trong quá trình bùng phát dịch, có thể xuất hiện biến chủng mới do sự biến dị Nhiều nghiên cứu đã ghi nhận sự chuyển đổi giữa các type virus, chẳng hạn như type A và C biến thành type O, hay type O chuyển thành type C và A5 Sự đa dạng này dẫn đến việc một số động vật đã khỏi bệnh lại có thể tái nhiễm sau một thời gian ngắn, như trường hợp trâu, bò có thể mắc bệnh trở lại chỉ sau 10 ngày, thậm chí có thể tái nhiễm tới 3 lần trong một tuần (Nguyễn Vĩnh Phước, 1978).
Sức đề kháng và khả năng gây bệnh
Virus LMLM là loại virus không có vỏ bọc, nên chúng có khả năng kháng cao với các dung môi hữu cơ như cồn và ete, nhưng lại nhạy cảm với ánh sáng mặt trời, axit và formon.
Virus LMLM có khả năng bền vững cao trong điều kiện tự nhiên, thích nghi tốt với pH từ 7,2 đến 7,6 và có thể tồn tại ở pH từ 6,7 đến 9,5 khi nhiệt độ giảm xuống 4°C hoặc thấp hơn Tuy nhiên, virus sẽ bị vô hoạt nhanh chóng ở pH dưới 5 hoặc trên 11, do đó không nên sử dụng cồn làm chất khử trùng Khi virus tồn tại trong các dịch tự nhiên như phân, nước tiểu hay rơm rạ, tính gây bệnh của nó vẫn tương đối bền vững Virus sẽ chết sau 5-15 phút ở nhiệt độ 60-70°C và ngay lập tức khi đun sôi ở 100°C Ngược lại, ở nhiệt độ lạnh, virus có thể sống lâu, lên đến 425 ngày trong tủ lạnh Dưới tác động của ánh sáng yếu, virus cũng có thể sống trên mặt đồng cỏ ít nhất một thời gian nhất định.
2 tháng về mùa đông, 3 ngày về mùa thu, virus còn hoạt lực 4 tuần lễ trên lông bò Trong đất ẩm ướt virus có thể sống hàng năm
Sức đề kháng của virus chủ yếu phụ thuộc vào chất chứa nó Virus có khả năng sống lâu hơn khi bám vào các chất khô hoặc protein; chẳng hạn, trong cỏ khô, virus có thể tồn tại từ 8 đến 15 tuần, trong khi ở tuỷ xương dài và phủ tạng, thời gian sống lên tới 40 ngày Đặc biệt, virus có sức đề kháng cao với các hóa chất sát trùng, những chất này có thể tiêu diệt vi khuẩn khác.
Virus có khả năng tồn tại từ 5 đến 10 tuần trong điều kiện thời tiết mát, đặc biệt là trong các mô bào hoặc tổ chức ngoài cơ thể với pH không dưới 6,5 Tại chuồng trâu bò, virus có thể duy trì khoảng 14 ngày, trong khi ở đồ phế thải của động vật, thời gian tồn tại lên đến 39 ngày, và trên bề mặt phân trong mùa thu cũng có khả năng sống sót lâu dài.
Virus có thể tồn tại lâu trong môi trường, sống đến 28 ngày trong mùa hè và 67 ngày trong mùa đông Trong thức ăn, virus có thể sống tới 4 tuần trên lông trâu bò và hơn 130 ngày trong nước thải Tuy nhiên, virus sẽ bị bất hoạt khi có sự axit hoá của sữa và thịt Đối với các chất sát trùng thông thường, virus có sức đề kháng mạnh; ví dụ, Crezon 3% vẫn còn độc lực sau 6 giờ và Clorofoc 1% sau 20 ngày Để tiêu diệt virus, cần sử dụng chất sát trùng mạnh như NaOH 1% trong 1-10 phút hoặc nước vôi 5-10%, formol 2% trong 6 giờ Virus có lớp lipid bên ngoài, giúp nó kháng cự với các chất hữu cơ như cồn, nhưng lại nhạy cảm với acid và formol Do đó, có thể dùng các axit nhẹ như dấm ăn, phèn chua, chanh, axit citric, axit axetic 5% để tiêu diệt virus trên cơ thể động vật.
Đường xâm nhập và cơ chế gây bệnh của virus
- Trong thiên nhiên, virus xâm nhập qua đường hô hấp, tiêu hoá, qua các vết thương Ngoài ra, đường sinh dục là đường xâm nhập phụ
Trong phòng thí nghiệm, tiêm nội bì là phương pháp hiệu quả nhất để tiêm virus vào bò và dê qua niêm mạc lưỡi, trong khi chuột lang thường được tiêm vào nội bì gan bàn chân Các phương pháp tiêm khác như tiêm bắp thịt, dưới da hoặc tĩnh mạch có kết quả không ổn định và yêu cầu liều virus cao hơn.
Sự phát tán mầm bệnh chịu ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố, trong đó động vật cảm nhiễm và sự tiếp xúc giữa chúng là yếu tố quan trọng nhất Các yếu tố khác bao gồm di chuyển của động vật và con người, mật độ động vật trong khu vực, phương thức chăn nuôi, điều kiện môi trường, cùng với các biện pháp kiểm soát sự lây lan của bệnh.
Virus LMLM chủ yếu lây truyền qua không khí, tiếp xúc trực tiếp và qua thực phẩm, nước uống Đặc biệt, virus này xâm nhập vào cơ thể chủ yếu qua đường hô hấp.
Cơ chế lây truyền virus LMLM chủ yếu phụ thuộc vào sự di chuyển của động vật cảm nhiễm, bên cạnh đó, việc trao đổi sản phẩm động vật cũng đóng vai trò quan trọng trong quá trình này.
Virus LMLM có thể lây lan rộng rãi trong môi trường từ một hoặc nhiều động vật nhiễm bệnh, với số lượng virus thải ra rất lớn Các động vật mang mầm bệnh, như chó hoang, cùng với phương tiện vận chuyển như xe tải chở thức ăn, có thể phát tán virus xa hơn Rác thải, bao gồm thức ăn chưa nấu chín và xương từ động vật nhiễm bệnh, là nguồn lây nhiễm cho dê Ngoài ra, con người có thể hít phải virus LMLM và trở thành nơi ẩn náu cho virus trong vòng 24 giờ, từ đó cũng có khả năng lây nhiễm cho động vật.
Bệnh LMLM có đặc trưng là sự bài thải virus trước khi động vật xuất hiện triệu chứng lâm sàng, với giai đoạn ủ bệnh kéo dài tùy thuộc vào từng chủng virus, mức độ phơi nhiễm và con đường lây nhiễm Virus LMLM lây lan qua không khí, có thể gây bệnh trong vòng 4-5 ngày và có thể được bài thải lên đến 4 ngày trước khi có dấu hiệu đầu tiên Virus này có khả năng phát tán trên khoảng cách 60 km trên đất liền và 200 km trên biển, với gió và độ ẩm cao là những yếu tố quan trọng nhất trong việc phát tán Điều kiện lý tưởng để virus LMLM tồn tại là độ ẩm trên 60% và không khí ổn định (Riemann, 2008).
Virus LMLM, theo nghiên cứu của Nguyễn Vĩnh Phước (1978), có tính hướng thượng bì và chủ yếu sinh sản trong các tế bào thượng bì non của niêm mạc và da Khi xâm nhập vào cơ thể, virus nhân lên đầu tiên trong lớp thượng bì tại vị trí xâm nhập, gây hủy hoại tế bào thượng bì và hình thành mụn nước sơ phát Virus sau đó sẽ vào dịch lâm ba và máu, gây sốt cho cơ thể Trong giai đoạn sốt, virus tiếp tục nhân lên và tạo ra các mụn nước thứ phát tại những vùng thượng bì có sự phân chia mạnh mẽ như niêm mạc, xoang miệng, và vành móng Mụn nước này phát triển lớn dần nhưng không có mủ trừ khi có sự nhiễm trùng kế phát.
Sau khi mụn vỡ, các tổn thương trên bề mặt da nhanh chóng được phục hồi mà không để lại sẹo nhờ vào sự nguyên vẹn của tế bào lớp Manpighi Tuy nhiên, mụn nước có thể loét khi bị nhiễm khuẩn kế phát, khiến vi khuẩn sinh mủ xâm nhập và gây hoại tử, dẫn đến các bệnh lý nghiêm trọng và có thể gây bại huyết, thậm chí làm chết con vật.
Thời kì nung bệnh thường từ 1 - 3 ngày khi gây bệnh thực nghiệm: 2 -
7 ngày hoặc 11 ngày khi gây bệnh trong tự nhiên (Tô Long Thành và cs., 2005)
Virus LMLM xâm nhập vào động vật chủ qua đường hô hấp hoặc qua vết thương trên da, ban đầu nhân lên với số lượng nhỏ tại nơi xâm nhập Vùng yết hầu của động vật nhai lại được xem là nơi sinh bệnh ban đầu của virus, sau đó virus xâm nhập vào tổ chức lympho vùng hầu hoặc các hạch liên quan và đi vào máu Trong giai đoạn đầu, virus LMLM có mặt trong máu trước khi xuất hiện các mụn nước đặc trưng.
Sau khi xâm nhập vào cơ thể, virus LMLM di chuyển đến các vị trí thứ cấp như các tuyến, hạch lympho và biểu mô quanh miệng, chân, nơi hình thành các mụn nước (Lê Minh Hà, 2000).
Mụn nước dày đặc thường xuất hiện ở các vị trí như viền móng, vòm khẩu cái, mõm, lưỡi và đầu vú (Callens, 1997) Virus LMLM có khả năng lây truyền qua đường sinh dục, qua các niêm mạc khác và qua da ở vùng vành móng (Văn Đăng Kỳ, 2008).
Virus có thể lưu hành trong máu và sinh sản trong nếp nhăn cơ tim, dẫn đến bại huyết, thoái hóa cơ tim và viêm cơ tim Viêm cơ tim không phải do virus trực tiếp gây ra mà do liên cầu khuẩn và tụ cầu khuẩn đã xâm nhập vào cơ tim, gây tổn thương Bệnh LMLM ở động vật trưởng thành thường biểu hiện triệu chứng rõ ràng khi mụn nước giai đoạn khỏi, trong khi ở con non, thoái hóa cơ tim có thể dẫn đến tử vong trước khi xuất hiện mụn nước thứ phát.
Virus có thể xâm nhập vào phôi thai qua đường tuần hoàn con mẹ, do đó gia súc có chửa thường hay sẩy thai khi mắc bệnh LMLM.
Triệu chứng, bệnh tích
Bệnh LMLM (Lở mồm long móng) tác động đến nhiều loại gia súc khác nhau Tùy thuộc vào đặc tính sinh học của virus và vật chủ, các loài gia súc sẽ có những phản ứng và biểu hiện khác nhau khi bị nhiễm bệnh Triệu chứng điển hình của bệnh LMLM bao gồm
“lở mồm long móng” theo cách đặt tên của Việt Nam Tên gọi quốc tế bắt nguồn từ chữ aphta có nghĩa là “mụn nước” (Nguyễn Tiến Dũng, 2000)
Virus LMLM là loại virus tấn công các tế bào biểu bì, thường có thời gian ủ bệnh từ 2-3 ngày ở trâu bò, trong khi ở dê thì kéo dài hơn Các triệu chứng chính của virus này cần được chú ý để có biện pháp can thiệp kịp thời.
- Tăng thân nhiệt: Sốt theo kiểu hai đợt Đợt 1 do virus LMLM, đợt 2 do nhiễm trùng thứ cấp
Động vật non, đặc biệt là những con đang bú sữa, thường biểu hiện vẻ mệt mỏi và dáng đi ủ rũ, dẫn đến tỷ lệ chết cao Bệnh súc khiến chúng nằm chui rúc và dửng dưng với các tác động bên ngoài, đặc biệt là thức ăn Đối với gia súc non, tử vong có thể xảy ra chỉ 24 giờ sau khi triệu chứng đầu tiên xuất hiện.
Dáng đi khập khiễng ở gia súc do sự xuất hiện của mụn nước quanh gờ và vành móng, cũng như ở các khe móng và đế guốc Các mụn nước này chuyển sang màu trắng ngà và xung quanh có màu đỏ hồng do xung huyết trước khi vỡ Khi mụn nước vỡ sau 2-3 ngày, dịch bên trong có màu vàng như huyết thanh Ở bò, có thể thấy móng long ra trong các trường hợp nặng, nhưng hiếm gặp; trong khi ở dê, triệu chứng chính là dáng đi khập khiễng do mụn nước ở móng, ít thấy mụn nước ở miệng Trong trường hợp mãn tính, móng chân dê thường để lại vết màu xanh trên móng, tương tự ở bò nhưng khó nhận thấy do màu tối của móng bò Nếu có bội nhiễm vi trùng thứ phát, các móng chân có thể phát triển thành các mụn hoại tử.
Mụn nước xuất hiện trên miệng, mõm, lưỡi, xoang miệng và vú thường gặp ở bò, đặc biệt là bò sữa, và có thể gây ra các vết thương nghiêm trọng Những mụn nước này có hình dạng tương tự như mụn nước ở vành móng Trong xoang miệng, chúng thường nằm ở mặt trên của lưỡi và có thể kết hợp lại, tạo thành các vết bong niêm mạc lớn Viêm nhiễm xoang miệng và đau họng khiến vật bệnh chảy nước dãi nhiều hơn bình thường.
- Con vật bệnh thường đau khi nhai (nhất là loài ăn cỏ) nên bỏ ăn Nguyên nhân của tử vong do bệnh LMLM là:
+ Gia súc trưởng thành: đói do không ăn được mà chết
+ Gia súc non: do sự nhân lên của virus gây ra bệnh cấp tính mà chết, nhiều khi chưa kịp có triệu chứng và các bệnh tích điển hình
- Cuối cùng phải nói đến hiện tượng chết yểu và sẩy thai chủ yếu ở đàn dê nái sinh sản
- Thời gian nung bệnh dài: từ 2 đến 12 ngày
- Sốt ở dê mắc bệnh LMLM không liên tục và ổn định vì đôi khi nhiệt độ hạ thấp ở một số dê nhiễm bệnh nặng
Dê nhiễm bệnh thường có biểu hiện ban đầu như đi khập khiễng, nhưng đôi khi dấu hiệu này không rõ ràng Mụn nước thường xuất hiện ở mõm và phần trong cuống lưỡi, khiến việc phát hiện lâm sàng trở nên khó khăn Mụn nước xung quanh vành móng chân dễ thấy hơn, và dê thường rất đau đớn Một số dê có thể đứng trên đầu móng, tạo cảm giác như “đi rón rén” Ở những trường hợp nặng, phần sừng của móng chân có thể bị tróc ra sau khi xuất hiện mụn nước Đặc biệt, dê con có thể chết mà không có dấu hiệu rõ ràng của bệnh LMLM do suy tim.
- Đối với heo nái chửa mang thai giai đoạn cuối có thể gây xẩy thai
Triệu chứng lâm sàng của LMLM trên dê thường không thể phân biệt rõ ràng với các bệnh có mụn nước khác như viêm miệng mụn nước, ngoại ban có mụn nước và các bệnh mụn nước ở dê (Callis et al., 1986).
Bệnh LMLM chủ yếu gây ra các mụn nước ở các vị trí như xung quanh miệng, gờ vành móng, đầu vú và móng chân, tức là các tổn thương chủ yếu nằm ngoài cơ thể Bên trong, bệnh gây hoại tử các cơ bắp, đặc biệt là cơ tim, dẫn đến hiện tượng được gọi là “tim vằn hổ” Khi mổ động vật, có thể quan sát thấy các vết xuất huyết trên bề mặt tim, tạo thành hình dáng giống như da hổ, đây là dấu hiệu quan trọng trong kiểm soát giết mổ Các tổn thương khác như loét niêm mạc hay thoái hóa tụy không có ý nghĩa nhiều trong chẩn đoán bệnh.
Dịch tễ học
Virus LMLM xâm nhập vào cơ thể vật mẫn cảm qua niêm mạc đường hô hấp, và kháng thể trung hòa trong huyết thanh gia súc không ảnh hưởng đến virus, tạo ra động vật mang trùng Sau khi phát triển ở khu vực cuống họng, virus thâm nhập vào máu, gây sốt và các bệnh tích Vật mắc bệnh có thể bài thải virus rất sớm, thậm chí trước khi có triệu chứng lâm sàng Virus LMLM có sức đề kháng mạnh, đặc biệt vào mùa đông, và lây lan qua không khí Một con dê có thể sản sinh ra lượng virus gấp 3000 lần so với bò, đủ để nhiễm 70.000 con bò chỉ trong một phút Bệnh cũng có khả năng lây lan qua dụng cụ chăn nuôi, và việc thăm gia đình có vật bệnh có thể mang virus về cho gia súc của mình.
Các cách bài thải virus:
Virus LMLM có mặt trong nhiều sản phẩm động vật như thịt, hơi thở, nước dãi, máu, sữa, nước tiểu, thai sẩy, tinh dịch, phôi đông lạnh và len Do đó, các sản phẩm từ động vật là nguồn lây nhiễm chính của bệnh LMLM.
Động vật như trâu, bò, dê và cừu sau khi tiêm phòng vẫn có thể nhiễm virus và mang trùng, đồng thời, vật bệnh sau khi hồi phục cũng có thể tiếp tục bài thải virus ra môi trường, gây nguy hiểm cho các súc vật nhạy cảm Nhiều gia súc mắc bệnh không biểu hiện triệu chứng lâm sàng, điều này lý giải tại sao các quốc gia phát triển không chỉ tập trung vào tiêm phòng mà còn tìm cách phát hiện và tiêu hủy gia súc mang trùng để kiểm soát bệnh LMLM hiệu quả Chính sách tiêm phòng ngụ ý chấp nhận sự tồn tại của virus LMLM trong đàn gia súc, trong khi dê, sau khi khỏi bệnh hoặc tiêm phòng, hầu như không mang trùng, dẫn đến việc dê được xem là loài miễn dịch vô trùng, trái ngược với trâu, bò và cừu, vốn là động vật miễn dịch mang trùng đối với bệnh này.
Bệnh LMLM chủ yếu lây truyền qua không khí trong một khu vực, như đã được nghiên cứu bởi Nguyễn Tiến Dũng (2000) Tại Anh, vào năm 1981, virus đã lây lan từ Pháp qua không khí, và tương tự, từ Đức sang Đan Mạch vào năm 1983 Tuy nhiên, thực tế cho thấy việc lây lan bệnh LMLM chủ yếu liên quan đến di chuyển gia súc Tại Việt Nam và nhiều quốc gia khác, việc vận chuyển và buôn bán gia súc, đặc biệt là buôn bán bất hợp pháp, là nguyên nhân chính dẫn đến sự lây lan của bệnh này.
-Về mặt dịch tễ những điểm quan trọng sau đây cần ghi nhớ:
1) Động vật (kể cả loài hoang dã) nhiễm virus trước khi có biểu hiện lâm sàng đã phát tán virus ra xung quanh hơi thở và các chất tiết dịch
2) Con vật đang mắc bệnh
3) Động vật loài nhai lại sau khi khỏi bệnh (virus có nhiều trong phân, nước tiểu và là nguồn virus nguy hiểm nhất)
4) Động vật loài nhai lại đã tiêm phòng nhưng vẫn có khả năng nhiễm virus và phát tán virus ra xung quanh
5) Các sản phẩm động vật: thịt và các sản phẩm thịt, sữa, nước dãi, hơi thở, nước tiểu, phân, máu, thai sẩy, tinh dịch, phôi đông lạnh, len và các loại hormone lấy từ động vật mắc bệnh
6) Các loại dụng cụ, xe cộ, thức ăn chăn nuôi đã tiếp xúc với vật bệnh
- Tiếp xúc trực tiếp giữa các con vật
- Lây lan theo sự di chuyển của gia súc và các sản phẩm chăn nuôi
- Thông qua người chăn nuôi, cán bộ thú y, dụng cụ, phương tiện dùng trong chăn nuôi
Việc vứt xác, phân, nước tiểu của gia súc và nước rửa thịt khi mổ ra các dòng nước như sông suối là một đặc điểm đáng chú ý ở các nước kém phát triển Điều này đặt ra những thách thức nghiêm trọng trong việc phòng chống bệnh tật, yêu cầu các biện pháp cải thiện vệ sinh và quản lý chất thải hiệu quả hơn.
- Sự lây lan rất đặc biệt và rất nhanh chóng
Tại các quốc đảo, dịch xảy ra theo từng đượt và cách nhau một vài năm Giữa các đợt hầu như không có vật bệnh lâm sàng
- Tại các châu lục, bệnh mang tính địa phương (có một tỷ lệ rất thấp động vật mắc bệnh) xen vào đó là các đợt dịch lớn
- Các đợt dịch lớn thường phát ra vào lúc độ ẩm không khí cao, thời tiết nóng, lượng tia tử ngoại thấp
Cơ sở phân loại virus lmlm, chẩn đoán bằng phản ứng elisa
Cơ sở phân loại virus lmlm
Hiện nay, virus LMLM được phân loại thành ba loại chính: loại A và loại O do hai nhà khoa học Pháp phát hiện, trong khi loại C được phát hiện bởi hai nhà khoa học Đức.
Đến cuối năm 1926, virus LMLM đã được phân loại thành ba loại chính: O, A và C Vài năm sau, ba loại virus LMLM mới được phát hiện ở miền Nam châu Phi, được gọi là SAT1, SAT2 và SAT3 Tiếp theo, các phòng thí nghiệm virus LMLM của Anh đã báo cáo về việc phân lập được loại virus thứ bảy, được đặt tên là Asia1, tại nhiều quốc gia ở châu Á.
Ngoài 7 kiểu cơ bản, đã có hơn 70 kiểu phụ (subtyp) của virus LMLM được công nhận Một số kiểu phụ này có sự khác biệt rõ rệt về mặt miễn dịch so với kiểu gốc, do đó, vắc-xin chỉ phát huy hiệu quả khi virus trong vắc-xin tương đồng với virus gây bệnh cho gia súc trong ổ dịch.
Các phương pháp phân loại virus LMLM chủ yếu dựa vào kết quả chẩn đoán và các phản ứng trong phòng thí nghiệm Hiện nay, có nhiều phương pháp giám định và phân biệt virus LMLM, cùng với kiến thức phân loại virus LMLM được cập nhật thường xuyên.
+ Các phương pháp miễn dịch học:
- Giám định bằng bản động vật
- Phương pháp miễn dịch gắn với enzyme (ELISA)
- Phản ứng kết hợp bổ thể
- Các phản ứng huyết thanh học khác
- Giám định virus LMLM bằng các phương pháp hiện đại
Xác định type virus lmlm bằng phương pháp elisa
Phương pháp ELISA gián tiếp hiện đang được ưa chuộng trong chẩn đoán bệnh LMLM nhờ vào khả năng phát hiện nhanh chóng và chính xác kháng nguyên virus LMLM (Tô Long Thành, 2000).
-Phương pháp này thực hiện cần nhất phải là có một bộ KIT ELISA kháng nguyên, một số dung dịch bổ trợ khác và máy đọc ELISA
-Kết quả chẩn đoán phụ thuộc vào một quá trình bao gồm:
+ Phương pháp lấy mẫu bệnh phẩm
+ Bảo quản và bao gói bệnh phẩm
Phản ứng ELISA dùng kháng thể hoặc kháng kháng thể gắn enzym cho kết hợp trực tiếp hoặc gián tiếp với kháng nguyên, rồi cho cơ chất vào
Khi kháng thể tương tác với kháng nguyên, kháng thể hoặc kháng thể gắn enzym sẽ không bị rửa trôi Enzym sẽ phân giải cơ chất và tạo ra màu sắc, cho phép định lượng mức độ phản ứng thông qua quang phổ kế.
Phân loại phản ứng ELISA Được phân thành ba loại chính như sau
- Phản ứng ELISA trực tiếp (direct ELISA): dùng kháng thể gắn enzym để xác định kháng nguyên nghi cố định trên đĩa chuyên dụng
- Phản ứng ELISA gián tiếp (indirect ELISA): dùng kháng nguyên chuẩn và kháng kháng thể gắn enzym để phát hiện kháng thể nghi
- Phản ứng Sandwich ELISA gồm 2 loại:
+ Phản ứng Sandwich ELISA trực tiếp (direct Sandwich ELISA): kháng nguyên chuẩn được kẹp giữa kháng thể chuẩn và kháng thể gắn emzym
Phản ứng Sandwich ELLISA gián tiếp (indirect Sandwich ELISA) là phương pháp mà kháng nguyên chuẩn được kẹp giữa kháng thể chuẩn và kháng thể nghi, sau đó kháng thể nghi được phát hiện bằng kháng kháng thể loài gắn enzym Phương pháp này được ứng dụng rộng rãi trong chẩn đoán bệnh LMLM, giúp xác định sự hiện diện của các kháng nguyên một cách chính xác.
Phản ứng ELISA phát hiện kháng nguyên virus LMLM:
Phương pháp ELISA là kỹ thuật phổ biến để phát hiện kháng nguyên virus LMLM trong mẫu bệnh phẩm từ gia súc nghi ngờ nhiễm virus Trong trường hợp mẫu chứa ít virus hoặc chất lượng không đảm bảo, cần thực hiện nuôi cấy virus trên môi trường tế bào trước khi tiến hành định type virus bằng ELISA.
Phản ứng ELISA phát hiện kháng thể kháng virus LMLM:
Phương pháp ELISA được áp dụng để phát hiện và xác định các serotype của virus LMLM trong huyết thanh gia súc Trong quá trình thực hiện, mỗi đĩa ELISA chỉ được sử dụng cho một loại virus LMLM chuẩn, nhằm phát hiện kháng thể nghi ngờ có trong huyết thanh của gia súc cần được chẩn đoán.
Có ba phương pháp ELISA có thể được sử dụng để phát hiện kháng thể kháng virus LMLM, nhưng hiện nay, phương pháp Sandwich ELISA gián tiếp đang được ưa chuộng hơn cả Kỹ thuật ELISA này nổi bật với tính đặc hiệu cao, độ nhạy tốt và tính kinh tế, khiến nó trở thành lựa chọn phổ biến cho nhiều ứng dụng khác nhau.
Phương pháp Sandwich ELISA gián tiếp cho phép chẩn đoán và phát hiện virus LMLM thông qua việc xác định kháng nguyên từ mẫu bệnh phẩm biểu mô và dịch tiết, đồng thời cũng có thể phát hiện kháng thể và xác định serotype virus LMLM từ mẫu huyết thanh.
Để đánh giá khả năng đáp ứng miễn dịch của gia súc sau khi tiêm phòng vacxin, cũng như hiệu quả sử dụng vacxin, phương pháp Sandwich LISA gián tiếp được áp dụng để định lượng kháng thể kháng virus LMLM.
Yếu tố nguy cơ
Khái niệm
Yếu tố nguy cơ là yếu tố làm cho ký chủ bị phơi nhiễm trước các vi sinh vật (virus, vi khuẩn ) hoặc các chất độc hại khác
Một nguy cơ bao gồm ba thành phần: tác nhân có hại, yếu tố nguy cơ và mức độ hậu quả Thông thường, người ta thường nhầm lẫn giữa tác nhân có hại và yếu tố nguy cơ, coi chúng như nhau Tuy nhiên, trong dịch tễ học, cần phân biệt rõ ràng giữa hai khái niệm này khi sử dụng thuật ngữ "nguyên nhân".
Phương pháp xác định yếu tố nguy cơ
Để xác định nguy cơ dịch bệnh, cần tính toán và chứng minh yếu tố nào thực sự là yếu tố nguy cơ Điều này bao gồm việc tính xác suất xảy ra bệnh khi không có yếu tố nguy cơ và so sánh với xác suất khi có yếu tố đó Ba chỉ số chính để so sánh xác suất trong nghiên cứu dịch tễ là tỷ số chênh lệch (Odd Ratio - OR), tỷ số tỷ lệ nhiễm (Prevalence Ratio - PR) và nguy cơ tương quan (Relative Risk - RR).
Tỷ số chênh or (odd ratio) và nghiên cứu (điều tra) hồi cứu
Nghiên cứu hồi cứu là phương pháp điều tra ngược thời gian nhằm xác định các yếu tố nguy cơ gây ra bệnh Một trong những phương pháp phổ biến là nghiên cứu bệnh chứng (case-control study), trong đó người ta phân chia gia súc thành hai nhóm: nhóm bệnh và nhóm đối chứng Qua việc so sánh hai nhóm này, các nhà nghiên cứu tìm ra sự khác biệt giữa chúng, chủ yếu do các yếu tố tác động khác nhau Nếu gia súc chịu ảnh hưởng của các yếu tố đó, chúng được coi là đã phơi nhiễm; ngược lại, nếu không có tác động, chúng được xem là không phơi nhiễm.
Phân tích hồi quy logic đa tầng, nhiều biến (multilevel analysis) được áp dụng để định lượng các yếu tố nguy cơ theo các phân tầng khác nhau (Dohoo,
Tỷ số chênh OR > 1 cho thấy rằng gia súc tiếp xúc với yếu tố nguy cơ có khả năng dương tính huyết thanh học với virus LMLM cao hơn Ngược lại, nếu tỷ số chênh nhỏ hơn hoặc bằng 1, khả năng này sẽ giảm.
OR < 1 cho thấy nguy cơ gia súc dương tính huyết thanh học với virus LMLM giảm Ngược lại, OR = 1 chỉ ra rằng không có sự ảnh hưởng của yếu tố nguy cơ đến xác suất gia súc có kết quả dương tính huyết thanh học với virus LMLM.
Tình hình dịch bệnh lmlm
Trên thế giới
Lần đầu tiên, bệnh LMLM được Frascastorius phát hiện và mô tả vào năm
Bệnh này lần đầu tiên được phát hiện ở Ý vào năm 1514 và sau đó lan rộng ra Bắc Ý, Pháp, Anh, cùng nhiều quốc gia châu Âu khác (Hyattsville, 1991) Đến năm 1897, hai nhà khoa học người Đức, Loeffler và Frosch, đã xác định được tác nhân gây bệnh, cho thấy nó có khả năng qua được màng lọc (Đào Trọng Đạt, 2000) Vào những năm đầu thế kỷ 20, cụ thể là năm 1920, nhiều nghiên cứu chi tiết về bệnh này đã được tiến hành (Andersen).
Vào năm 1922, Valée và Carré đã phát hiện tính đa dạng của huyết thanh miễn dịch chống virus, bao gồm các loại O và A, trong khi Waldman và Trautwein tìm ra virus loại C vào năm 1926 Lawrence cũng phát hiện các loại SAT1, SAT2, SAT3 từ mẫu bệnh phẩm ở châu Phi, và loại Asia1 từ Ấn Độ, Myanmar và Hồng Kông Tại châu Âu, bệnh bắt đầu xuất hiện ở Nga vào cuối thế kỷ 19 và nhanh chóng lây lan sang nhiều quốc gia như Đức, Hà Lan, Thụy Sĩ, Bỉ, Hungary, Áo, Đan Mạch, Pháp và Ý, gây ảnh hưởng đến hàng chục triệu trâu bò Từ 1951 đến 1954, dịch LMLM bùng phát ở Tây Đức và lây lan sang các nước như Hà Lan, Bỉ, Luxembourg, Pháp, Anh, Ý, Áo, Đan Mạch, Thụy Điển, Na Uy và Ba Lan Năm 2000, Hy Lạp ghi nhận 14 ổ dịch LMLM loại Asia1, theo điều tra từ Thổ Nhĩ Kỳ Năm 2001, dịch bùng phát ở Đông Nam nước Anh và sau đó lan rộng ra toàn nước Anh, Scotland, Wales, Bắc Ireland, Cộng hòa Ireland, Hà Lan và Pháp Tại châu Mỹ, từ 1870 đến 1929, có 9 ổ dịch xuất hiện ở các bang Mỹ như New England, Portland, Maine và Boston, chủ yếu do nhập khẩu gia súc mang mầm bệnh Bệnh cũng đã xuất hiện ở Canada vào năm 1870, tại Mexico từ 1946 đến 1954, và ở Argentina vào năm 1953.
Năm 2000, dịch LMLM bùng phát tại Nam Mỹ với các chủng loại khác nhau: type O ở Nam Bra-xin, Uruguay, Bolivia; type A ở Áchen ti na, Colombia, Peru; và Ecuador Châu Phi cũng ghi nhận nhiều trường hợp dịch bệnh, cả ở Bắc và Nam Phi (Nguyễn Vĩnh Phước, 1978) Đến năm 2001, dịch LMLM type O xuất hiện ở Uganda, trong khi Malawi ghi nhận type SAT1 và Zimbabwe type SAT2 Tại châu Á, tình hình dịch LMLM trở nên nghiêm trọng, đặc biệt là ở Ấn Độ.
(1929, 1952 ), In đô nê xia (1952), Phi lip pin (1902), My an ma (1936, 1948),
Ba loại virus thường xuyên gây bệnh LMLM ở khu vực Đông Nam Á bao gồm type O, A và Asia1 Các quốc gia như Ma lay xia (1939), Thái Lan (1952), Campuchia (1931, 1946, 1952) và Trung Quốc (1951) đã ghi nhận sự xuất hiện của bệnh này (Nguyễn Vĩnh Phước, 1978; Văn Đăng Kỳ, 2008).
Năm 2000, hơn 30 quốc gia châu Á đã ghi nhận sự xuất hiện của bệnh LMLM, với các loại huyết thanh chủ yếu là type O (24 quốc gia, bao gồm Việt Nam), type A (6 quốc gia), Asia1 (Thái Lan, Iran, Thổ Nhĩ Kỳ, Gruzia) và SAT2 (Ả Rập Xê Út, Kuwait) Một số quốc gia khác như Ác-mê-ni-a, Azerbaijan, Tiểu vương quốc Ả Rập thống nhất và Ấn Độ vẫn chưa xác định được loại virus gây bệnh (Thomson, 2002).
Trong những năm gần đây, nhiều quốc gia như Trung Quốc, Lào, Căm pu chia, Thái Lan, Ma lay xia và Miến Điện đã ghi nhận các ổ dịch LMLM trên gia súc Virus LMLM được thu thập vào tháng 10 năm 2012 tại miền nam Thái Lan thuộc loại A/ASIA Sea-97 Dịch LMLM mới đã được báo cáo trong tháng gần đây.
Vào năm 2013, tại Bayan - Ulgii, Tây Mông Cổ, một đợt bùng phát do virus LMLM type A đã xảy ra, gần biên giới Trung Quốc và cách biên giới Nga cùng Đông Kazakhstan khoảng 25 - 30 km Các sublineage của virus này vẫn chưa được xác định rõ ràng.
Theo báo cáo của tổ chức FAO vào tháng 6 năm 2013, virus LMLM đã được phân chia thành 7 vùng (pool) từ năm 2010 đến 2013, dựa trên đặc điểm của virus Trong đó, các nước Đông Nam Á và Trung Quốc thuộc vùng 1 (pool 1).
Virus LMLM có 07 Serotype: O, A, Asia 1, SAT 1, SAT 2, SAT3 và C, từ
2004 không phát hiện được serotype C
Virus LMLM hiện đang lưu hành tại vùng 1 và vùng 2, với ba serotype là O, A và Asia 1 Tuy nhiên, đặc điểm của các virus này lại có sự khác biệt rõ rệt giữa hai vùng.
Virus LMLM type A/Iran-05 đã bùng phát tại Krasnodar Krai, Tây Nam Nga, với subtype chưa xác định và hiện chưa có vắc xin phù hợp FAO cảnh báo về nguy cơ lây lan của virus này trong khu vực.
LMLM type A/ASIA Sea-97 đã được ghi nhận lưu hành tại Đông Á trong giai đoạn 2012 - 2013 Phân tích di truyền của virus LMLM type A (A GDMM-CHA - 2013 - S (LVRI)), thu thập từ gia súc và dê ở Bắc Trung Quốc vào tháng 3 năm 2013, cho thấy mối quan hệ di truyền gần gũi với một chủng virus phân lập tại Nga (A/Zabaikalsky/RUS/2013), cũng được lấy mẫu vào tháng 3 năm 2013 từ gia súc ở huyện Priargunsky, Zabaikalsky kray, Đông - Nam Liên Bang Nga, gần biên giới Trung Quốc, với độ tương đồng di truyền lên tới 99,06% trong vùng mã hóa VP1.
Trong năm 2013 có số ca bệnh do serotype A gấp 3 lần số ca bệnh do serotype O (Donald King, 2013)
Virus LMLM được thu thập vào tháng 10 năm 2012 tại miền Nam Thái Lan (Nakhon Pathom), thuộc loại A/ASIA Sea-97 Dịch LMLM mới đã được báo cáo vào tháng 7 năm 2013 tại Bayan - ULGII, Tây Mông Cổ, gần biên giới Trung Quốc và cách biên giới Nga từ 25-50 km, do virus LMLM type A gây ra Hiện tại, các sublineage di truyền vẫn chưa được xác định rõ.
Vào năm 2013, một số subtype của virus LMLM type A - Iran 05 vẫn còn tồn tại trong khu vực dịch địa phương Tây Âu - Á, bao gồm các chủng như A/Asia/Iran-05 SIS-12 (Pakistan), A/Asia/Iran-05 SIS-10 (giống 100% với phân lập từ Pakistan năm 2012), và A/Asia/Iran-05 AFG-07 (Iran) Phân tích di truyền cho thấy, virus LMLM mới đã nhanh chóng lây lan từ Nam Á (Thái Lan, Việt Nam) đến Bắc Trung/Đông Á và từ Nam, Đông Âu - Á (Pakistan, Iran) đến Tây Á (Thổ Nhĩ Kỳ), tạo ra mối đe dọa nghiêm trọng cho châu Âu.
Bộ Nông nghiệp Trung Quốc đã báo cáo nhiều đợt bùng phát dịch LMLM do virus LMLM type A và O tại các vùng khác nhau Tại tỉnh Vân Nam, Tây - Nam Trung Quốc, một ổ dịch serotype A đã xảy ra ở gia súc tại huyện Shangri La, dẫn đến việc tiêu hủy 1.767 gia súc Virus LMLM chủ yếu lưu hành ở Trung Quốc là type O (O/Mya-98) và Panasia, trong đó type O (O/Mya-98) chủ yếu ảnh hưởng đến gia súc, mặc dù cũng ghi nhận một số trường hợp ở dê và cừu Ngược lại, loại O (O/Panasia) chủ yếu tác động đến trâu và bò.
Trong 7 type virus Type A là type có số lượng biến chủng lớn nhất, làm cho việc tiêm phòng vắc xin phòng bệnh gặp nhiều khó khăn Trong tháng 10 năm 2012 phòng thí nghiệm tham chiếu của Thế giới Fibright đã nhận được 360 mẫu bệnh phẩm, có 290 mẫu bệnh phẩm đạt tiêu chuẩn phân lập, kết quả phân lập có 5 serotype được phát hiện là O, A, SAT1, SAT2, Asia1 Số ca bệnh do serotype A gấp 2 lần số ca bệnh do serotype O, khoảng 30% số mẫu gửi đến phòng thí nghiệm tham chiếu của Thế giới là không đạt yêu cầu xét nghiệm (Ngô Thanh Long, 2013) Ở Trung Quốc trong năm 2013 số ca bệnh do serotype A gấp 3 lần số ca bệnh do serotype O (Donald King, 2013)
Tại lào
Từ năm 1980, dịch bệnh LMLM đã lây lan rộng rãi tại Lào, chủ yếu do nhu cầu buôn bán động vật quốc tế trái phép với các quốc gia khác Tình trạng này đã ảnh hưởng nghiêm trọng đến tỷ lệ mắc bệnh trong nước.
Vào năm 1996, các mẫu từ những ổ dịch nghi ngờ bệnh LMLM tại thành phố Viêng Chăn đã được gửi đến Cục Chăn nuôi và Thủy sản (DLF) trước khi thiết lập phòng thí nghiệm dự án để đánh giá theo kiểu sero type Asia1.
Năm 1997, tại tỉnh Luongphabang, Chăm Pa Sắc và Sa Văn Na Khêt, đã thu thập 1204 mẫu dê từ 58 thôn của 13 huyện Kết quả cho thấy loại sero phổ biến nhất là type O, với tỷ lệ 16,4% ở Luongphabang và 23,4% ở Chăm Pa Sắc, trong khi sero-type A và Asia1 được phát hiện ở mức thấp Từ tháng 12/1997 đến tháng 12/1998, 26 mẫu được chẩn đoán, trong đó có 10 mẫu type O, 3 mẫu type Asia I và 13 mẫu âm tính Đầu năm 1998, dịch LMLM đã được báo cáo tại huyện Vangvieng, Viêng Chăn, được xác định là type Asia1 Tháng 9 năm 1998, một dịch lớn hơn xảy ra tại huyện Sa Ma Khy Xay, Ắt Tạ Pư, sau đó lây lan sang bốn huyện khác và huyện Pac Song, Chăm Pa Sắc Dịch LMLM lây lan từ Ắt Tạ Pư đến Chăm Pa Sắc do di chuyển của động vật nhiễm bệnh dọc theo Quốc lộ 10 Số lượng động vật bị ảnh hưởng ước tính là 5.810 trong tổng số 27.600 con (21%) Các mẫu từ động vật bị ảnh hưởng đã được gửi đến Phòng thí nghiệm LMLM thế giới, Pừbright, Vương quốc Anh để phân tích Nguyên nhân bùng phát dịch ở Attapeu và Champassak vẫn chưa được xác định (Vongthilath et al.,1998).
Năm 2003 ở mô ̣t số tı̉nh của Lào bệnh phát ra nhiều tại các tỉnh giáp biên giới nhưng Không có thông tin chi tiết
Vào năm 2008, bệnh LMLM đã bùng phát tại tỉnh Ắt Tạ Pư la, khiến 285 con gia súc mắc bệnh (Văn phòng thú y Ắt Tạ Pư la, 2008) Đến tháng 2 cùng năm, dịch bệnh tiếp tục xảy ra ở huyện Thu La Khôm, tỉnh Viêng Chăn, làm 540 con dê mắc bệnh và 23 con đã tử vong (Manichanh, 2008).
Năm 2010 dịch LMLM xảy ra ta ̣i huyê ̣n Viêng Xay, tı̉nh Hua Phăn làm
310 con gia súc mắc bệnh trong đó có 2 con trâu, 15 con dê bị chết (Houaphanh veterinary office, 2010)
Từ năm 2012 - 2014 bệnh LMLM đã xảy ra ở mô ̣t số tı̉nh nhưng không có thông tin chi tiết
Tháng 4 năm 2015 bê ̣nh xảy ra ở huyê ̣n Xăng Thong và huyê ̣n Pác Ngưm, Thủ đô Viêng Chăn làm 3.108 con dê mắc bê ̣nh (Department of Livestock, 2015) Năm 2016 dịch LMLM xảy ra tại tı̉nh Chăm Pa Sắc làm 200 con dê mắc bệnh
40 con bi ̣ chết (Champasack veterinary office, 2016)
Năm 2017 dịch phát ra mạnh tại các tı̉nh miền bắc
Tỉnh Hua Phăn đã ghi nhận dịch bệnh xảy ra tại các huyện Mương Ét, Xăm Tay, Xiêng Kho và Xăm Nưa, khiến 10.413 con dê mắc bệnh và 119 con dê chết (Chi cục Thú y tỉnh Hua Phăn, 2017) Cuối năm 2017, huyện Viêng Xay cũng bị ảnh hưởng bởi bệnh LMLM, với 3.600 gia súc mắc bệnh và 729 con dê chết do virus serotype.
-Tı̉nh Luongphabang: Bệnh LMLM phát ra tại các huyê ̣n làm 1.917 con dê mắc bệnh do virus serotype O (Luongphabang veterinary office, 2017)
Tỉnh Xay Nhạ Bu Ly, đặc biệt là huyện Khớp và huyện Bo Ten, đã ghi nhận sự bùng phát của bệnh LMLM tại các khu vực giáp biên giới Thái Lan Tuy nhiên, hiện tại không có thông tin chi tiết về tình hình dịch bệnh này (Sở Nông nghiệp, 2017).
PHẦN 3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Địa điểm nghiên cứu
-Địa điểm: Huyện Phonxay, tỉnh Luongphabang
-Địa điểm xét nghiệm mẫu: Phòng thí nghiệm Cục Thú y Lào.
Thời gian nghiên cứu
-Thời gian: Tháng 11/2017 đến tháng 7/2018
Đối tượng/vật liệu nghiên cứu
- Đàn dê nuôi ta ̣i tı̉nh Luoangphabang
-Mẫu bệnh phẩm biểu mô mụn nước của dê mắc bệnh LMLM
-Bộ kit ELISA dùng để phát hiện các kháng nguyên của virus LMLM với các serotypes O, A, C, và Asia1 của Pirbright - UK
-Hóa chất cần thiết: các hóa chất tinh khiết của Merck như NaOH, HCl,
H2SO4, Na2HPO4, KH2PO4, đỏ phenol, nước đề ion
-Thiết bị: Hệ thống thiết bị dùng trong phân tích, xét nghiệm và chẩn đoán bệnh của Trung tâm chẩn đoán thú y
-Xác định type virus O, A, C, Asia 1 gây bệnh LMLM ở dê dựa theo phương pháp xét nghiê ̣m cu ̣c thú y Lào.
Nội dung nghiên cứu
Đề tài gồm 3 nội dung nghiên cứu:
- Tình hình chăn nuôi dê và tình hình dịch LMLM ở dê tại tı̉nh Luongphabang năm 2017
- Đánh giá các yếu tố nguy cơ gây bệnh LMLM tại huyện Phonxay, tı̉nh Luongphabang năm 2017
- Xác định type virus LMLM trên địa bàn huyện Phonxay, tı̉nh Luongphabang năm 2017.
Phương pháp nghiên cứu
Tình hình chăn nuôi dê và tình hình dịch lmlm ở dê trên địa bàn huyện
Để nghiên cứu tình hình chăn nuôi dê và dịch bệnh LMLM ở dê, chúng tôi đã thu thập và phân tích số liệu từ các tài liệu lưu trữ của Cục Thống kê, Chi cục Thú y và Trạm Thú y Số liệu thứ cấp này bao gồm các chỉ tiêu liên quan đến tình hình chăn nuôi và dịch bệnh, nhằm cung cấp cái nhìn tổng quan và chính xác về thực trạng ngành chăn nuôi dê.
+ Số dê mắc bệnh LMLM (con)
+ Số dê bị tiêu hủy (con)
Để thu thập thông tin về các hộ chăn nuôi, chúng tôi tiến hành sử dụng bảng hỏi (phiếu điều tra) kết hợp với việc phỏng vấn sâu các cán bộ thú y cơ sở Phương pháp này giúp thu thập dữ liệu một cách toàn diện và chính xác.
Sử dụng phần mềm Microsoft Excel 2016 để phân tích số liệu, nhằm hiểu rõ tình hình chăn nuôi dê và diễn biến dịch LMLM ở dê tại Luang Pha Bang trong năm 2017.
Đánh giá các yếu tố nguy cơ làm phát sinh và lây lan bệnh lmlm ở dê trên địa bàn huyện phonxay, tı̉nh luongphabang năm 2017
Năm 2017, tại huyện Phonxay, tỉnh Luongphabang, đã tiến hành điều tra và thu thập dữ liệu thông qua các phiếu điều tra trực tiếp Các yếu tố đánh giá được sử dụng bao gồm phỏng vấn sâu với cán bộ kỹ thuật và người chăn nuôi để thu thập thông tin chi tiết.
-Gần chợ buôn bán giết mổ động vật và sản phẩm động vật
-Không tiêm phòng các bệnh truyền nhiễm nguy hiểm
-Nguồn gốc con giống không rõ ràng
-Không sử dụng thuốc sát trùng để vệ sinh tiêu độc định kỳ
Xử lý bằng phầm mềm Microsoft Excel 2016 các dữ liệu để biết được số hộ chăn nuôi dê mắc bệnh và không mắc bệnh LMLM
Phần mềm Epicalc 2000 được sử dụng để xác định các yếu tố nguy cơ liên quan đến sự phát sinh và lây lan dịch bệnh LMLM thông qua phương pháp nghiên cứu bệnh – chứng hoặc hồi cứu (case-control studies).
Có yếu tố nguy cơ a b a+b
Không có yếu tố nguy cơ c d c+d
→ Sử dụng phép thử khi bình phương (Chi-square) để có kết luận về mối liên quan giữa yếu tố nguy cơ và số hộ mắc bệnh
Tỷ suất chênh OR (Odd Ratio) là chỉ số quan trọng trong việc đánh giá mối liên hệ giữa bệnh và yếu tố nguy cơ, được tính theo công thức OR = ad/bc.
OR > 1: Yếu tố nguy cơ có liên quan đến bệnh (nguy cơ tăng)
OR = 1: Không có ảnh hưởng, khác nhau giữa hai nhóm
OR < 1: Nguy cơ giảm (khi đối tượng nghiên cứu được bảo vệ)
Ho: Không có mối liên hệ giữa yếu tố nguy cơ với việc phát sinh và lây lan bệnh LMLM
Tính khi bình phương (Chi-square) theo công thức:
- Tính khi bình phương, tìm giá trị xác suất P trong bảng để khẳng định chấp nhận hay không chấp nhận Ho
Nếu P < 0,05, điều này cho thấy có sự liên hệ giữa yếu tố nguy cơ và việc phát sinh, lây lan bệnh LMLM tại địa bàn nghiên cứu, với giá trị OR lần Ngược lại, nếu P > 0,05, ta chấp nhận giả thuyết không có sự liên hệ giữa yếu tố nguy cơ và sự phát sinh, lây lan bệnh LMLM.
Xác định type virus gây bệnh lmlm ở dê trên địa bàn huyện phonxay năm 2017
Để bảo quản mẫu mụn nước, cần lấy tối thiểu 2g tổ chức biểu mô từ mụn nước chưa vỡ hoặc mới vỡ cùng với dịch mụn nước Sau đó, mẫu này được bảo quản trong dung dịch đệm PBS 0,04M có Glyxerin, với pH từ 7,2 đến 7,6, ở nhiệt độ -20°C.
Biểu mô và mụn nước dùng để phát hiện kháng nguyên được lấy trong vòng 7 ngày kể từ khi phát hiện bệnh
Mẫu bệnh phẩm được lấy từ biểu mô của mụn nước và nghiền trong cối chày sứ với dung dịch PBS 0,04M theo tỷ lệ 1:10 Sau đó, tiến hành ly tâm huyễn dịch ở tốc độ 2000 vòng/phút Hút lấy dịch nước trong ở phía trên, rồi thêm dung dịch kháng khuẩn (0,01 ml/1 ml huyễn dịch), lắc đều trong 15 đến 20 phút trước khi thực hiện phản ứng ELISA.
Khay vi thể 96 giếng, được đánh số hàng ngang theo thứ tự từ 1 - 12 và theo hàng dọc từ A - H (12 cột, 8 hàng)
+ Theo hàng dọc: đĩa được chia làm 2 phần từ A - D và từ E - H tương ứng từng hàng với các serotype O, A, C, Asia1
+ Theo hàng ngang: từ cột số1 - 4 là các đối chứng kháng nguyên (+) mạnh và các kháng nguyên (+) yếu
(+) ma ̣nh (+) yếu Blank Mẫu 1 Mẫu 3 Mẫu 5
Hı̀nh 3.1 Sơ đồ đĩa phản ứng ELISA phát hiện kháng nguyên tiến hành xét nghiệm
Sử dụng phương pháp ELISA để phát hiện kháng nguyên virus
LMLM được tiến hành theo sơ đồ sau:
Hấp thụ kháng thể thỏ virus LMLM của các serotyp O, A, C, Asia1 được thực hiện bằng cách pha loãng 1:1000 với dung dịch Carbonate/bicarbonate 50µl/1 giếng theo hàng phản ứng Quá trình ủ được thực hiện qua đêm ở 4°C hoặc lắc trong 1 giờ ở 37°C Sau đó, tiến hành rửa 3 lần bằng dung dịch PBS 0,002M và thấm khô.
Cho 50 àl khỏng nguyờn đối chứng (+) của từng type virus O, A, C, Asia1 và các huyễn dịch mẫu bệnh phẩm cần kiểm tra vào các hàng tương ứng đã gắn kháng thể thỏ
Lắc, ủ 1 giờ ở 37°C Rửa 3 lần, thấm khô Cho 50àl khỏng thể chuột lang khỏng virus LMLM của từng serotyp O, A, C, Asia1 vào các hàng tương ứng
Lắc, ủ 1 giờ ở 37°C Rửa 3 lần, thấm khô Cho 50àl Conjugate đó được pha loóng vào mối giếng
Lắc và ủ mẫu trong 1 giờ ở nhiệt độ 37°C, sau đó rửa 3 lần và thấm khô Tiếp theo, cho 50µl One shot substrate vào mỗi giếng và để ở nhiệt độ phòng trong 15 phút, tránh ánh sáng Dừng phản ứng bằng cách thêm 50µl H2SO4 1,25M và đọc kết quả bằng máy đọc ELISA ở bước sóng 492nm Điều kiện chấp nhận kết quả là ít nhất 3 serotype đối chứng có giá trị OD trung bình sau khi đã trừ OD blank > 0.1 với cả 4 nồng độ có hệ số pha loãng là 5.
Mỗi serotype đối chứng cần có tối thiểu 3 nồng độ pha loãng bậc 5 với giá trị OD trung bình sau khi trừ OD blank lớn hơn 0.1 để đánh giá kết quả chính xác.
Mẫu được xem là dương tính khi đủ các điều kiện sau:
-Mẫu xét nghiệm có giá trị OD trung bình sau khi đã trừ trung bình OD blank > 0.1
Nếu có nhiều serotype với giá trị OD trung bình sau khi trừ OD blank > 0.1, serotype được coi là dương tính khi giá trị OD trung bình của nó trừ OD blank phải gấp đôi giá trị OD trung bình của serotype tiếp theo sau khi trừ OD blank.
-Nếu mẫu xét nghiệm có giá trị OD trung bình sau khi đã trừ trung bình
OD blank dừng ở 0.1 (= 0.1) thì có thể làm lại (retesting) hoặc tiến hành phân lập mẫu trên tế bào (tissus culture) và kiểm tra lại bằng ELISA
Nếu giá trị OD trung bình của mẫu xét nghiệm, sau khi trừ giá trị OD blank, nhỏ hơn 0.1, thì mẫu sẽ được xác định là âm tính với serotype tương ứng.
PHẦN 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
