DỤNG CỤ ĐO THỂ TÍCH CÓ CƠ CẤU PITTÔNG - PHẦN 7: ĐÁNH GIÁ TÍNH NĂNG CỦA THIẾT BỊKHÔNG SỬ DỤNG PHƯƠNG PHÁP KHỐI LƯỢNG

TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 10505-7:2015 ISO 8655-7:2005 DỤNG CỤ ĐO THỂ TÍCH CĨ CƠ CẤU PITTƠNG - PHẦN 7: ĐÁNH GIÁ TÍNH NĂNG CỦA THIẾT BỊ KHƠNG SỬ DỤNG PHƯƠNG PHÁP KHỐI LƯỢNG Piston-operated volumetric apparatus - Part 7: Non-gravimetric methods for the assessment of equipment performance Lời nói đầu TCVN 10505-7:2015 hoàn toàn tương đương với ISO 8655-7:2005 đính kỹ thuật 1:2008 ISO 8655-7:2005 phê duyệt lại năm 2014 với bố cục nội dung không thay đổi TCVN 10505-6:2015 Ban Kỹ thuật Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN/TC 48 Dụng cụ thí nghiệm thủy tinh biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Bộ tiêu chuẩn TCVN 10505:2015 (ISO 8655) Dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng gồm tiêu chuẩn sau: TCVN 10505-1:2015 (ISO 10505-1:2002), Phần 1: Thuật ngữ, yêu cầu chung hướng dẫn người sử dụng; TCVN 10505-2:2015 (ISO 10505-2:2002), Phần 2: Pipet pittông; TCVN 10505-3:2015 (ISO 10505-3:2002), Phần 3: Buret pittông TCVN 10505-4:2015 (ISO 10505-4:2002), Phần 4: Dụng cụ pha loãng TCVN 10505-5:2015 (ISO 10505-5:2002), Phần 5: Dụng cụ phân phối định lượng TCVN 10505-6:2015 (ISO 10505-6:2002), Phần 6: Xác định sai số phép đo phương pháp khối lượng TCVN 10505-7:2015 (ISO 10505-7:2005), Phần 7: Đánh giá tính thiết bị khơng sử dụng phương pháp khối lượng Lời giới thiệu Bộ tiêu chuẩn TCVN 10505 (ISO 8655) xây dựng để quy định loại dụng cụ đo thể tích có cấu pittông khác để cung cấp phương pháp tham chiếu phương pháp thử thay cho việc xác nhận đặc tính dụng cụ bao trùm khoảng dung tích điển hình từ: - dụng cụ pipet cầm tay nhỏ nhất, ví dụ µl đến - dụng cụ xả thể tích có bệ đứng phịng thí nghiệm lớn nhất, ví dụ 100 ml TCVN 10505-1 (ISO 8655-1) đưa yêu cầu thuật ngữ chung Giới hạn thể tích chi tiết cho loại dụng cụ quy định tiêu chuẩn TCVN 10505 (ISO 8655), Bảng sai số cho phép lớn phù hợp, nghĩa pipet pittông [TCVN 10505-2 (ISO 86552)], buret pittông [TCVN 10505-3 (ISO 8655-3)], dụng cụ pha loãng [TCVN 10505-4 (ISO 8655-4)] dụng cụ phân phối định lượng [TCVN 10505-5 (ISO 8655-5)] TCVN 10505-6 (ISO 8655-6) phương pháp tham chiếu cho thử nghiệm điển hình thử nghiệm phù hợp Đây phương pháp khối lượng bao gồm hướng dẫn độ xác thiết kế để giới hạn thay đổi quy trình sở nguồn sai số - cần thiết thử nghiệm điển hình thử nghiệm phù hợp Phương pháp trắc quang phương pháp chuẩn độ mô tả tiêu chuẩn này, chủ ý đưa dạng phương pháp tóm tắt (xem ví dụ phụ lục tham khảo), vậy, phịng thí nghiệm khác có thiết bị có sẵn riêng, làm việc với u cầu độ khơng đảm bảo đo khác nhau, chấp nhận phương pháp phương pháp khối lượng Nếu phịng thí nghiệm thực theo hệ thống TCVN ISO 9000 công nhận phù hợp với TCVN ISO/IEC 17025, phương pháp chấp nhận cụ thể công nhận cho kết tương đương với phương pháp cho phương pháp khối lượng quy định TCVN 10505-6 (ISO 86556) Tiêu chuẩn áp dụng cho thử nghiệm cho: - dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng với mục đích nằm ngồi thử nghiệm điển hình thử nghiệm phù hợp mà yêu cầu trước công bố chứng nhận phù hợp - vị trí người sử dụng, khơng có cân phương tiện đo phù hợp để thực phương pháp tham chiếu đưa TCVN 10505-6 (ISO 8655-6), có máy đo quang phổ máy chuẩn độ tự động phù hợp Khi người sử dụng đưa mong muốn có phép thử thay công nhận, tham khảo thông tin để lựa chọn phương pháp thử phù hợp cho mục đích a) Phương pháp khối lượng: Giá trị độ khơng đảm bảo đo gia tăng thể tích có trị số µl, gia tăng độ khơng đảm bảo đo cân, đặc biệt vị trí có độ ẩm thấp (vị trí có nguy bay tăng) ảnh hưởng điện tĩnh Các ảnh hưởng điều chỉnh giảm qua thiết kế tính toán phương pháp thử quy định TCVN 10505-6 (ISO 8655-6), áp dụng cho giới hạn thể tích quy định TCVN 10505-2 (ISO 8655-2) đến TCVN 10505-5 (ISO 8655-5) b) Phương pháp trắc quang: Phương pháp phương pháp lựa chọn cho phịng thí nghiệm có máy đo quang phổ UV/VIS có bước sóng dải bước sóng phù hợp Độ khơng đảm bảo đo phương pháp có khuynh hướng trở nên thấp thể tích thử giảm thấp thể tích thử sử dụng bước pha loãng chuẩn bị dung dịch chuẩn so sánh, sử dụng dụng cụ thủy tinh Loại A có dung tích lớn (ví dụ 100 ml dung dịch nhóm mang màu pha lỗng đến 000 ml có độ khơng đảm bảo đo thấp so với 10 ml pha loãng đến 100 ml) c) Phương pháp chuẩn độ: Đây phương pháp lựa chọn phịng thí nghiệm có máy chuẩn độ có tính chất quy định 6.2 C.4.1 Phụ lục C Phương pháp phù hợp để thử nghiệm dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng có khoảng dung tích làm việc 500 µl Mặt khác, độ khơng đảm bảo đo giảm xuống dụng cụ đo thể tích Loại A có dung tích lớn khối lượng thuốc thử rắn lớn sử dụng để chuẩn bị dung dịch chuẩn Nếu phương pháp chấp nhận, độ không đảm bảo đo mở rộng cần tính tốn để so sánh với phương pháp tham chiếu Trong trường hợp nào, người sử dụng phải xác định rằng, độ không đảm bảo đo phương pháp chọn phù hợp cho mục đích dự kiến Các phép thử quy định tiêu chuẩn TCVN 10505 (ISO 8655) phải thực kỹ thuật viên đào tạo DỤNG CỤ ĐO THỂ TÍCH CĨ CƠ CẤU PITTƠNG - PHẦN 7: ĐÁNH GIÁ TÍNH NĂNG CỦA THIẾT BỊ KHÔNG SỬ DỤNG PHƯƠNG PHÁP KHỐI LƯỢNG Piston-operated volumetric apparatus - Part 7: Non-gravimetric methods for the assessment of equipment performance CẢNH BÁO - Việc sử dụng tiêu chuẩn bao gồm vật liệu, thao tác thiết bị nguy hiểm Tiêu chuẩn không đề cập đến vấn đề an toàn liên quan sử dụng tiêu chuẩn Người sử dụng tiêu chuẩn phải có trách nhiệm thiết lập biện pháp an toàn, bảo vệ sức khỏe phù hợp xác định việc áp dụng giới hạn điều chỉnh trước sử dụng Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định việc xác định sai số phép đo dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng phương pháp trắc quang chuẩn độ Các phép thử áp dụng cho hệ thống hoàn chỉnh bao gồm dụng cụ tất phận chọn để sử dụng với dụng cụ, dùng lần tái sử dụng, bao gồm phép đo quy trình xả Có thể áp dụng phương pháp phi khối lượng để - hỗ trợ việc đảm bảo chất lượng nhà cung cấp, - hiệu chuẩn đảm bảo chất lượng định kỳ người sử dụng, - thử nghiệm định kỳ sau sửa chữa Các phương pháp mô tả tiêu chuẩn không áp dụng để thay cho phương pháp khối lượng quy định TCVN 10505-6 (ISO 8655-6), phương pháp phù hợp làm sở cho công bố nhà cung cấp chứng nhận độc lập phù hợp CHÚ THÍCH Các yêu cầu đo lường dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng, đặc biệt sai số cho phép lớn quy định TCVN 10505-2 (ISO 8655-2) đến TCVN 10505-5 (ISO 8655-5) CHÚ THÍCH Đối với phép thử phù hợp phép thử điển hình để cơng bố chứng nhận phù hợp, tham chiếu phương pháp khối lượng quy định TCVN 10505-6 (ISO 8655-6) Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 4851 (ISO 3696), Nước dùng để phân tích phịng thí nghiệm - u cầu kỹ thuật phương pháp thử; TCVN 7151 (ISO 648), Dụng cụ thí nghiệm thủy tinh - Pipet mức; TCVN 7153 (ISO 1042), Dụng cụ thí nghiệm thủy tinh - Bình định mức; TCVN 10505-1:2015 (ISO 8655-1:2002), Dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng - Phần 1: Thuật ngữ, yêu cầu chung khuyến nghị người sử dụng TCVN 10505-2:2015 (ISO 8655-2:2015), Dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng - Phần 2: Pipet pittông TCVN 10505-3:2015 (ISO 8655-3:2002), Dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng - Phần 3: Buret pittơng TCVN 10505-4: 2015 (ISO 8655-4:2002), Dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng - Phần 4: Dụng cụ pha lỗng TCVN 10505-5 (ISO 8655-5:2002), Dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng - Phần 5: Dụng cụ phân phối định lượng TCVN 10505-6 (ISO 8655-6), Dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng - Phần 6: Xác định sai số phép đo phương pháp khối lượng Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ định nghĩa nêu TCVN 10505-1 (ISO 86551) Nguyên tắc 4.1 Phương pháp trắc quang Phương pháp trắc quang dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng dựa mối tương quan nồng độ nhóm mang màu dung dịch độ hấp thụ ánh sáng nhóm mang màu bước sóng quy định, theo định luật Bee-Lambert Phương pháp sử dụng hai quy trình, phụ thuộc vào yêu cầu việc hiệu chuẩn Trong hai phương pháp, thể tích cần đo chất lỏng thử xả dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng vào thể tích biết chất lỏng, độ pha loãng tính tốn từ phép đo trắc quang Phương pháp thứ phù hợp thể tích thử > 20 % thể tích tổng Thể tích tổng phụ thuộc vào kích cỡ cuvet đo trắc quang phải đủ rộng để đặt vừa cuvet vào máy quang phổ UV-VIS Trong phương pháp này, thể tích biết dung dịch chuẩn bị có độ hấp thụ gần mức giới hạn làm việc máy quang phổ độ hấp thụ dung dịch xác định Dùng dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng cần thử để thêm thể tích chưa biết chất pha lỗng, ví dụ nước dung dịch đệm Dung dịch nhận được trộn kỹ đo độ hấp thụ Có thể tính thể tích xả chưa biết từ suy giảm độ hấp thụ Phương pháp thứ hai phù hợp thể tích thử < 20 % thể tích tổng Trong phương pháp thể tích biết chất pha lỗng chuẩn bị Dùng dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng để thêm vào thể tích chưa biết dung dịch mẫu nhóm mang mầu có độ hấp thụ biết Dung dịch nhận được trộn kỹ đo độ hấp thụ Có thể tính thể tích xả chưa biết từ gia tăng độ hấp thụ Phụ lục A Phụ lục B nêu ví dụ quy trình thử tính tốn Có thể sử dụng phương pháp trắc quang khác miễn cơng nhận phù hợp cho mục đích dự kiến 4.2 Phương pháp chuẩn độ Phương pháp chuẩn độ phù hợp với thể tích thử dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng ≥ 500 µl Nói chung, sử dụng phương pháp chuẩn độ miễn công nhận phù hợp cho mục đích dự kiến Ví dụ, sử dụng dung dịch kali clorua (KCl) làm chất lỏng thử để xả dụng cụ cần thử vào chất lỏng axit hóa Dung dịch thu chuẩn độ dung dịch bạc nitrat (AgNO3) Điểm tương đương xác định phương pháp đo điện thế, ví dụ điện cực bạc Nếu thiết bị cần thử buret pittông, nồng độ biết kali clorua bình hứng chuẩn độ điện bạc nitrat, sử dụng buret pittông cần thử Phụ lục C đưa ví dụ quy trình thử Thuốc thử Tất hợp phần dung dịch thuốc thử phải có thành phần độ tinh khiết cấp phân tích cơng nhận 5.1 Thuốc thử phương pháp trắc quang Nếu dung dịch gốc bảo quản khoảng thời gian phải thử độ bền hóa học, cần thiết cho thêm chất bảo quản để ngăn cản phát triển vi sinh vật Nếu thuốc thử bị biến chất tiếp xúc với ánh sáng, thuốc thử phải bảo quản phù hợp để ngăn biến chất CHÚ THÍCH Sự không bền thuốc thử tiếp xúc với ánh sáng ngun nhân độ khơng đảm bảo đo cần xác định mức độ biến chất 5.1.1 Nước, phù hợp với Loại theo TCVN 4851 (ISO 3696) 5.1.2 Dung dịch nhóm mang màu Đặc tính xả dung dịch nhóm mang màu chịu ảnh hưởng thông số vật liệu sức căng bề mặt, tỉ trọng độ nhớt, phải tương đương tốt so sánh với đặc tính nước để tạo lập mối tương quan phương pháp trắc quang phương pháp khối lượng Phải xem xét khả hấp thụ nhóm mang màu lên thành dụng cụ Nếu sai lệch đặc tính xả dung dịch nhóm mang màu nước ghi lại trình nghiên cứu tương quan phương pháp, sai lệch phải tính đến đánh giá độ khơng đảm bảo đo Nhóm mang màu chọn phải hịa tan hồn tồn nồng độ cao theo yêu cầu CHÚ THÍCH Các nhóm mang màu phù hợp 2,2-azino-đi-[3-etylbenzthiazolin sulfonat (6)] (ABTS, khối lượng phân tử tương đối Mr = 547,7), kali đicromat K2Cr2O7, Ponceau S Orange G Ví dụ hệ thống thuốc thử dựa Ponceau S nêu Phụ lục A 5.1.3 Hệ thống thuốc thử Hệ thống thuốc thử, bao gồm nhóm mang màu, chất pha loãng, chất bảo quản (nếu cần thiết) dung dịch đệm (nếu cần thiết) phải chọn theo tiêu chí định trước Trong tất trường hợp, độ không đảm bảo đo nguồn khác nhau, ví dụ độ khơng đảm bảo đo pH, phải đánh giá bao gồm liệu tổng hợp độ khơng đảm bảo CHÚ THÍCH Ví dụ nêu ISO/TR 16153[1] Mối tương quan nồng độ độ hấp thụ hệ thống thuốc thử phải ghi đầy đủ tài liệu xác định người sử dụng Bước sóng chọn để đo độ hấp thụ phải xấp xỉ độ hấp thụ tối đa hệ thống thuốc thử để giảm thiểu ảnh hưởng sai số bước sóng lên kết Hệ thống thuốc thử phải không phụ thuộc vào pH đệm để mức thay đổi pH khoảng giới hạn chấp nhận, thiết lập liệu tổng hợp độ không đảm bảo đo Hệ thống thuốc thử phải không phụ thuộc vào nhiệt độ kết phải tính tốn bù nhiệt độ 5.1.4 Dung dịch thuốc thử, để chuẩn bị nồng độ phụ thuộc vào thể tích cần thử 5.2 Các thuốc thử phương pháp chuẩn độ Nếu chuẩn độ kali clorua với bạc nitrat sử dụng làm phương pháp chuẩn độ, phải sử dụng dung dịch từ 5.2.1 đến 5.2.4 5.2.1 Nước, phù hợp với Loại theo TCVN 4851 (ISO 3696) 5.2.2 Axit nitric, c(HNO3) = mol/l axit sulfuric c(H2SO4) = 0,5 mol/l 5.2.3 Các dung dịch chuẩn kali clorua, c(KCl) = mol/l, c(KCl) = 0,1 mol/l c(KCl) = 0,01 mol/l 5.2.4 Dung dịch chuẩn bạc nitrat, c(AgNO3) = 0,1 mol/l Dung dịch phải bảo quản tránh ánh sáng Thiết bị, dụng cụ Tất thiết bị, dụng cụ phải chọn cho độ không đảm bảo đo đạt theo u cầu Ví dụ việc tính độ khơng đảm bảo đo mở rộng phương pháp trắc quang quy định ISO/TR 16153[1] Tất thiết bị, dụng cụ phải phù hợp với tiêu chuẩn quốc tế quốc gia có số đọc, độ xác, độ tái lập độ ổn định phù hợp, quán với độ không đảm bảo đo mở rộng phép đo theo yêu cầu 6.1 Phương pháp trắc quang 6.1.1 Quang phổ kế UV/VIS, với độ phân giải, độ tuyến tính, độ lặp lại, dải bước sóng, độ xác độ hấp thụ độ xác bước sóng dải độ hấp thụ sử dụng phương pháp Ví dụ nêu A.4.1 Bảng A.3 6.1.2 Cuvet đo, có chất lượng quang học phù hợp Nếu chưa biết chiều dày cuvet với độ xác đủ để đáp ứng yêu cầu độ không đảm bảo đo mở rộng, sử dụng thuốc thử thứ hai với nồng độ độ hấp thụ cho trước để tính tốn bù ảnh hưởng chiều dày cuvet lên kết Ví dụ nêu A.4.2 Phân tích xạ kế áp dụng để xác định thể tích chưa biết mà không cần tham chiếu chiều dày cuvet đo 6.1.3 Nhiệt kế Nếu kết phụ thuộc vào nhiệt độ, nhiệt độ dung dịch phải đo nhiệt kế có độ khơng đảm bảo đo phù hợp để tính độ khơng đảm bảo đo mở rộng 6.1.4 Dụng cụ đo thể tích, Loại A Thể tích biết chất pha lỗng dung dịch thuốc thử chuẩn bị dụng cụ đo thể tích thủy tinh Loại A, cân, trường hợp phải biết tỉ trọng dung dịch Nếu sử dụng dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng để chuẩn bị dung dịch, dụng cụ phải phù hợp với tiêu chuẩn tương ứng tiêu chuẩn TCVN 10505 (ISO 8655) (xem Điều 2) phải hiệu chuẩn theo TCVN 10505-6 (ISO 8655-6) 6.2 Phương pháp chuẩn độ 6.2.1 Thiết bị chuẩn độ hoàn chỉnh, bao gồm buret, ví dụ theo TCVN 10505-3 (ISO 8655-3), hệ thống cảm biến để phát điểm tương đương phép chuẩn độ chọn 6.2.2 Điện cực Nếu sử dụng phương pháp chuẩn độ kali clorua dung dịch bạc nitrat, nên sử dụng điện cực bạc kết hợp để thị điện điểm tương đương Tốt bề mặt phủ bạc điện cực phải phủ AgCl Ag2S (xem C.4.2) 6.2.3 Dụng cụ thủy tinh thể tích Loại A, ví dụ pipet mức phù hợp với TCVN 7151 (ISO 648) bình định mức phù hợp với TCVN 7153 (ISO 1042) Nếu sử dụng dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng để chuẩn bị dung dịch, dụng cụ phải phù hợp với tiêu chuẩn tương ứng tiêu chuẩn TCVN 10505 (ISO 8655) (xem Điều 2) phải hiệu chuẩn theo TCVN 10505-6 (ISO 8655-6) 6.2.4 Cân phân tích Nếu dung dịch chuẩn theo 5.2.3 5.2.4 chuẩn bị người sử dụng, phải sử dụng cân phân tích có tính phù hợp, ví dụ khối lượng tối thiểu phù hợp Các điều kiện thử 7.1 Phòng thử điều kiện chung phải phù hợp với 6.1 6.2 TCVN 10505-6:2015 (ISO 8655-6:2002) 7.2 Thể tích thử số lượng phép đo thể tích thử phụ thuộc vào yêu cầu người sử dụng Có thể xem hướng dẫn 7.1.1 7.1.2 TCVN 10505-6:2015 (ISO 8655-6:2002) Cách tiến hành 8.1 Quy định chung Chuẩn bị dung dịch phép đo nhiệt độ ổn định, tốt 20 °C (hoặc 27 °C trường hợp dụng cụ đo thể tích thực pittơng cần thử điều chỉnh nhiệt độ tham chiếu chuẩn này) Thực thử theo nguyên tắc chung quy định 4.1 4.2, theo hướng dẫn nhà sản xuất dụng cụ quy định 6.1 6.2 8.2 Phương pháp trắc quang Hai ví dụ chi tiết việc áp dụng phương pháp trắc quang bao gồm việc tính thể tích thử xả, nêu Phụ lục A Phụ lục B Ví dụ đầu tiên, cuvet đo rời (cũng gọi cuvet lọ) chứa thể tích cho trước chất pha loãng đặt máy quang phổ UV/VIS thể tích thử xả vào cuvet nằm máy quang phổ UV/VIS Đọc độ hấp thụ hỗn hợp sau trộn Ví dụ thứ hai (xem Phụ lục B), thể tích thử xả vào lọ chứa thể tích biết chất pha lỗng, dung dịch trộn, phần dung dịch đưa vào cuvet dòng máy quang phổ UV/VIS độ hấp thụ đo Trong hai trường hợp, thể tích chưa biết tính theo định luật Beer-Lambert, dựa độ hấp thụ đo thể tích chất pha lỗng 8.3 Phương pháp chuẩn độ Phụ lục C nêu ví dụ chi tiết việc áp dụng phương pháp chuẩn độ, bao gồm việc tính tốn thể tích thử xả Nếu chuẩn độ kali clorua dung dịch bạc nitrat sử dụng làm phương pháp chuẩn độ, phải chọn dung dịch cho Bảng Nước để chuẩn bị cho tất dung dịch phải phù hợp với TCVN 4851 (ISO 3696), Loại Bảng - Các dung dịch phương pháp chuẩn độ Thể tích thử Chất lỏng thử Chất lỏng nhận chất lỏng thử Dung dịch chuẩn độ c(KCl) H2O c(HNO3) = mol/l c(AgNO3) mol/l ml ml mol/l 0,5 đến 1 100 0,1 > đến 10 0,1 100 0,1 > 10 đến 200 0,01 100 0,1 ml Xả chất lỏng thử (KCl) dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng cần thử vào dung dịch nhận axit hóa, tham khảo hướng dẫn nhà sản xuất việc sử dụng yêu cầu thử nghiệm dụng cụ đo thể tích có cấu pittông cụ thể TCVN 10505-6 (ISO 8655-6), từ 7.2 đến 7.7 CHÚ THÍCH Các yêu cầu thử riêng chi tiết trình xả pipet pittơng đơn kênh có mặt phân cách khơng khí quy định TCVN 10505-6:2015 (ISO 8655-6:2002), 7.2 Sau trộn kỹ chất lỏng thử xả với dung dịch nhận, chuẩn độ dung dịch thu dung dịch bạc nitrat 0,1 mol/l, tham khảo hướng dẫn nhà sản xuất thiết bị chuẩn độ quy định 6.2 Tính tốn Từ thể tích xả từ dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng cần thử, sai số hệ thống ngẫu nhiên phép đo và, thích hợp, độ khơng đảm bảo đo phải tính theo công thức nêu TCVN 10505-6:2015 (ISO 8655-6:2002), từ 8.4 đến 8.6 10 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm tối thiểu phải bao gồm thông tin quy định TCVN 10505-6:2015 (ISO 8655-6:2002), Điều Báo cáo thử nghiệm phải nêu phương pháp thử áp dụng liệu liên quan đến độ không đảm bảo đo mở rộng Phụ lục A (tham khảo) Ví dụ phương pháp trắc quang A.1 Mục đích Phụ lục mơ tả chi tiết phương pháp trắc quang để đo thể tích chất lỏng microlit xả dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng Ví dụ sử dụng lọ tái sử dụng máy quang phổ UV/VIS Nếu chọn phương pháp này, cách tiến hành phải sau A.2 Tóm tắt phương pháp Phương pháp dùng để sử dụng cuvet đo (lọ) dùng lần nạp đầy trước, chưa biết chiều dày cuvet Chuẩn bị chất pha lỗng có chứa nhóm mang màu có pic hấp thụ bước sóng λ2 hấp thụ khơng hấp thụ bước sóng λ1 Dung dịch nhóm mang màu gốc chuẩn bị cách hịa tan nhóm mang màu nước có pic hấp thụ λ1 Dung dịch chuẩn chuẩn bị cách pha lỗng xác vài mililit dung dịch gốc với chất pha loãng Xả phần dung dịch chuẩn vào lọ, đo độ hấp thụ hai bước sóng Nạp trước lọ thủy tinh dùng lần với thể tích xác chất pha lỗng Để bắt đầu hiệu chuẩn trắc quang, tháo nắp lọ đưa vào máy quang phổ UV/VIS Đọc độ hấp thụ hai bước sóng Đối với máy quang phổ UV/VIS, số đọc λ1 cho giá trị “0” Sau xả dung dịch gốc từ dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng cần thử vào lọ Máy quang phổ UV/VIS lắp thiết bị trộn trộn kỹ thể tích chưa biết thêm vào với chất pha loãng Sau trộn, đọc độ hấp thụ λ1 Có thể tính thể tích xả theo định luật Beer-Lambert sử dụng độ hấp thụ đo được, thể tích chất pha lỗng tỉ lệ pha loãng sử dụng chuẩn bị dung dịch chuẩn A.3 Thuốc thử Tất hợp phần dung dịch thuốc thử phải có thành phần độ tinh khiết cấp phân tích công nhận A.3.1 Nước, phù hợp với Loại theo TCVN 4851 (ISO 3696) A.3.2 Các dung dịch thử Tất phép đo so sánh với phép đo hiệu chuẩn dung dịch chuẩn chuẩn bị cách sử dụng thể tích lớn dung dịch gốc chất pha loãng Việc pha loãng phải thực với độ xác cao, ví dụ sử dụng dụng cụ đo thể tích thủy tinh Loại A phương pháp khối lượng Tất dung dịch phải trộn kỹ, ví dụ lộn ngược 10 lần để đảm bảo độ lặp lại độ xác kết A.3.3 Dung dịch gốc Hòa tan thuốc nhuộm Ponceau S nước Các nồng độ khác quy định phụ thuộc vào dung tích danh định dung tích chọn dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng cần đo Có thể sử dụng nồng độ dung dịch gốc biết lớn khoảng đo thể tích 5:1 Chọn nồng độ dung dịch gốc cho độ hấp thụ mẫu pha lỗng nằm phạm vi tuyến tính máy quang phổ UV/VIS VÍ DỤ Đối với ml chất pha loãng cho mẫu lọ 18 mm, Bảng A.1 đưa nồng độ dung dịch gốc yêu cầu Tiếp theo, lọc dung dịch gốc qua phễu lọc 0,2 µm bảo quản lọ thủy tinh Nồng độ dung dịch gốc định dung dịch chuẩn chuẩn bị trước đọc thời gian áp dụng phương pháp Nếu cần lưu lại dung dịch chuẩn dung dịch chuẩn dung dịch gốc phải bảo quản chai thủy tinh đậy chặt nắp có hàm lượng actinic thấp, để lạnh, bóng tối cho tránh bay biến chất Hầu hết dung dịch gốc đặc lắng xuống để lạnh; nhiên, hịa tan lại cách làm ấm trộn Các dung dịch pha loãng Ponceau S số thuốc nhuộm khác thay đổi màu nhẹ để ánh sáng phịng thơng thường Độ hấp thụ giảm nhẹ (đến 0,2 %), sau khơi phục lại sau 10 bóng tối Để việc thực đạt độ xác cao nhất, phải để tất mẫu pha lỗng cân bóng tối trước đọc Bảng A.1 - Các dung dịch gốc thuốc nhuộm Ponceau S Dung dịch gốc Thể tích lựa chọn Độ hấp thụ danh định dung dịch gốc Dung dịch cuối Thuốc nhuộm Ponceau S Số µl Trên 10 mm chiều dày cuvet ml g 50 đến 200 21,67 000 0,476 10 đến 50 84,4 000 1,86 đến 10 418 500 4,58 0,5 đến 111 100 2,44 A.3.4 Chất pha loãng Chất pha loãng dung dịch đệm phtalat 0,02 mol/l (pH 6,0) thêm đồng clorua EDTA để tạo pic hấp thụ 730 nm Chuẩn bị dung dịch đệm cách pha loãng 4,08 g kali hyđro phtalat khoảng 800 ml nước thêm 13,3 ml NaOH 1,0 mol/l Sau cho thêm 3,74 g tetranatri EDTA 1,12 g CuCl2-2H2O hòa tan dung dịch Nếu cần thiết, điều chỉnh pH đến pH 6,0 HCl mol/l NaOH 0,1 mol/l Sau lọc dung dịch qua phễu lọc 0,2 µl thêm nước đến 000 ml Chất pha loãng bảo quản đến tháng giữ lạnh A.3.5 Dung dịch chuẩn Chuẩn bị dung dịch chuẩn cho nồng độ dung dịch gốc Độ hấp thụ dung dịch chuẩn phải nằm ngưỡng phạm vi tuyến tính Các dung dịch chuẩn phải đậy chặt nắp để ngăn thay đổi nồng độ bay Có thể chuẩn bị dung dịch chuẩn cho lần hiệu chuẩn để tránh biến chất trình bảo quản Bảng A.2 nêu mức pha loãng cần thiết để chuẩn bị chuẩn Trong bảng này, dung dịch chuẩn Số chuẩn bị cách pha loãng dung dịch gốc số từ Bảng A.1, vv Bảng A.2 - Các dung dịch chuẩn Dung dịch chuẩn Dung dịch gốc Chất pha loãng Số a Pha loãng lần thứ hai a Pha loãng lần đầu Tỷ lệ pha loãng Pha loãng Chất pha loãng R ml ml ml ml 125 - - 3,846 x 10-2 10 000 - - 9,901 x 10-3 000 - - 1,996 x 10-3 000 100 2,369 x 10-4 Sự pha lỗng lần thứ hai phải tính đến tính tốn độ khơng đảm bảo đo Tỉ lệ pha lỗng R tính theo cơng thức R= VS VS + VD (A.1) Vs thể tích dung dịch gốc VD thể tích chất pha lỗng A.4 Thiết bị, dụng cụ Tất thiết bị, dụng cụ phải chọn cho đạt độ khơng đảm bảo đo theo u cầu Ví dụ việc tính độ khơng đảm bảo đo mở rộng phương pháp trắc quang nêu ISO/TR 16153 [1] Tất thiết bị, dụng cụ phải phù hợp với tiêu chuẩn quốc tế quốc gia có số đọc, độ xác, độ tái lập độ ổn định phù hợp, quán với độ không đảm bảo đo mở rộng theo yêu cầu A.4.1 Máy quang phổ UV/VIS, có độ xác độ tuyến tính phù hợp Việc lựa chọn máy quang phổ UV/VIS phụ thuộc vào độ không đảm bảo đo yêu cầu người sử dụng Các yêu cầu tính máy quang phổ UV/VIS điển hình tham chiếu liệt kê Bảng A.3 Bảng A.3 - Yêu cầu tính máy quang phổ UV/VIS Thơng số Máy quang phổ UV/VIS phịng Máy quang phổ UV/VIS loại thí nghiệm điển hình a tham chiếu a Độ tái lập trắc quang A = < 0,001 < 0,000 Độ tái lập trắc quang A = 0,5 < 0,0015 < 0,000 Độ tái lập trắc quang A = < 0,0015 < 0,000 Độ tái lập trắc quang A = 1,5 < 0,0020 < 0,000 Độ tái lập bước sóng < 0,5 nm < 0,2 nm < 0,001 h-1 < 0,000 h-1 Độ ổn định trắc quang a Tất quy định áp dụng với dải bước sóng nm trung bình s A.4.2 Lọ ngăn giữ Ví dụ nêu sử dụng lọ hình trụ có đường kính 18 mm làm cuvet đo máy quang phổ Có thể sử dụng lọ khác có độ rõ nét quang học phù hợp Dung dịch chuẩn phải đọc nhiệt độ dung dịch chưa biết Thực điều cách để hai cân ngăn mẫu máy quang phổ Ngăn giữ phải cố định lọ chùm ánh sáng cho lọ không dịch chuyển suốt trình đo trộn A.5 Độ tuyến tính hệ thống A.5.1 Nguyên tắc chung Phương pháp dựa tuyến tính kết hợp máy quang phổ UV/VIS hệ thống nhuộm màu, vậy, chúng phải đo phương pháp cơng nhận Có thể đo độ tuyến tính cách đánh dấu độ pha loãng liên tiếp mẫu, bắt đầu giới hạn phạm vi độ hấp thụ Chất pha loãng phải giống chất pha loãng sử dụng để chuẩn bị dung dịch chưa biết dung dịch chuẩn A.5.2 Quy trình đo độ tuyến tính Quy trình sau phải sử dụng để đo độ tuyến tính a) Thêm vào hai phần thể tích dung dịch gốc Số (xem Bảng A.1) 25 phần thể tích chất pha lỗng, dung dịch có độ hấp thụ khoảng 1,6 b) Sử dụng dụng cụ thủy tinh Loại A, đo xác phần thể tích dung dịch này, thêm phần thể tích chất pha lỗng trộn kỹ c) Lặp lại, sử dụng xác thể tích trường hợp, đến hồn thành pha lỗng liên tiếp năm lần Việc pha loãng mở rộng phạm vi độ hấp thụ từ 0,3 đến 1,6 d) Để nhiệt độ dung dịch pha loãng cân bóng tối đọc độ hấp thụ máy quang phổ UV/VIS cách nhỏ liên tục dung dịch pha loãng vào cuvet 10 mm có chất lượng quang học cao đặt cố định máy quang phổ UV/VIS e) Vẽ đồ thị tỉ lệ độ hấp thụ (độ hấp thụ đo được chia độ hấp thụ dung dịch pha loãng lần đầu) so với tỉ lệ pha loãng Đồ thị nhận phải tuyến tính f) Xác định độ lệch theo tỉ lệ phần trăm lớn điểm liệu từ hồi quy tuyến tính Nếu độ lệch khơng hiệu chỉnh cho độ khơng đảm bảo khơng tuyến tính Trong trường hợp độ không đảm bảo đo không tuyến tính khơng chấp nhận ứng dụng đưa ra, chuẩn bị nhiều nồng độ dung dịch gốc hơn, với độ hấp thụ gần tương đương nhau, hạn chế dải động hệ thống cho độ tuyến tính tốt Nếu có u cầu, xây dựng thuật tốn phép việc bù khơng tuyến tính, chuẩn bị dung dịch chuẩn cho dung tích pipet để giảm thiểu vấn đề độ tuyến tính hệ thống A.6 Quy trình thử A.6.1 Ngun tắc chung Sử dụng quy trình để có đủ điểm liệu thể tích nhằm đáp ứng u cầu thí nghiệm Trong quy trình mô tả đây, điểm liệu yêu cầu sử dụng dụng cụ chứa mẫu Có thể thêm nhiều dung dịch gốc vào dụng cụ chứa mẫu dải động hệ thống đủ rộng độ tuyến tính phù hợp phải sửa đổi việc tính tốn để phản ánh thay đổi thể tích chất pha loãng điểm liệu Dung dịch chuẩn phải đọc thời gian với số đọc dung dịch chưa biết, trừ thu thập liệu phù hợp chứng minh ổn định thuốc thử máy quang phổ UV/VIS Bảo đảm khơng có bọt khí lọ thời điểm lấy số đọc A.6.2 Chuẩn bị lọ mẫu Nạp xác dụng cụ chứa mẫu (ví dụ lọ thủy tinh 15 ml) với thể tích VD chất pha lỗng Trong ví dụ nêu A.3.3, VD ml Có thể chuẩn bị trước dụng cụ chứa đậy nắp Tất dụng cụ chứa mẫu, ví dụ lọ, phải lấy từ lô sản phẩm để bảo đảm đồng độ hấp thụ lọ Nếu cần thiết, độ tái lập kết lọ phải thử tính đến độ không đảm bảo đo A.6.3 Điều chỉnh điểm “0” máy quang phổ UV/VIS Đặt lọ chứa dung dịch đệm 0,02 M pH 6,0 (xem A.3.4) vào máy quang phổ UV/VIS điều chỉnh điểm “0” bước sóng 520 nm 730 nm A.6.4 Độ hấp thụ dung dịch chuẩn Không làm xáo trộn lọ máy quang phổ UV/VIS, lấy dung dịch đệm ra, ví dụ sử dụng pipet chuyển Pasteur, tráng lọ ba lần dung dịch chuẩn, nạp dung dịch chuẩn vào lọ Đọc độ hấp thụ AS1 AS2 bước sóng 520 nm 730 nm tương ứng Lấy lọ khỏi máy quang phổ UV/VIS loại bỏ A.6.5 Độ hấp thụ chất pha loãng Tháo nắp khỏi lọ chứa chất pha loãng, đặt vào máy quang phổ UV/VIS đọc độ hấp thụ AD1 AD2 bước sóng 520 nm 720 nm tương ứng A.6.6 Xả mẫu thử Sử dụng dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng cần thử để xả lượng dung dịch gốc vào lọ chứa chất pha loãng đặt máy quang phổ UV/VIS Lưu ý yêu cầu xả áp dụng cho dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng quy định TCVN 10505-6:2002 (ISO 8655-6:2002), từ 7.2 đến 7.7 Khởi động cấu trộn để trộn kỹ hỗn hợp A.6.7 Độ hấp thụ hỗn hợp Đo độ hấp thụ AU hỗn hợp nhận sau trộn bước sóng 520 nm A.7 Tính tốn thể tích xả Tính thể tích chưa biết VU xả dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng thử theo cơng thức suy từ định luật Beer-Lambert sau:   A U − A D1   A D2 − A D1   VU = VD   − R  A S1  A U − A D1     −      R  A S  A D2 − A D1   (A.2) VU thể tích chưa biết dung dịch gốc xả dụng cụ đo thể tích pittơng thử; VD thể tích chất pha lỗng lọ mẫu; VU độ hấp thụ hỗn hợp dung dịch gốc chất pha loãng đo bước sóng 520 nm; VD1 độ hấp thụ chất pha lỗng bước sóng 520 nm; VD2 độ hấp thụ chất pha lỗng bước sóng 730 nm; R tỉ lệ pha loãng dung dịch gốc với chất pha loãng dùng để tạo thành dung dịch chuẩn; AS1 độ hấp thụ dung dịch chuẩn bước sóng 520 nm; AS2 độ hấp thụ dung dịch chuẩn bước sóng 730 nm Đạo hàm công thức quy định ISO/TR 16153 [1] Phụ lục B (tham khảo) Ví dụ phương pháp trắc quang B.1 Mục đích Phụ lục mơ tả chi tiết phương pháp trắc quang việc đo thể tích microlít chất lỏng xả dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng Ví dụ sử dụng cuvet dịng cuvet thơng thường có chiều dày 10 mm máy quang phổ UV/VIS Nếu chọn phương pháp cách tiến hành phải sau B.2 Tóm tắt phương pháp Phương pháp thiết kế để sử dụng cuvet dòng máy quang phổ UV/VIS Tất phép đo thực xạ để tránh phát sinh sai số độ không đảm bảo chiều dày cuvet nồng độ dung dịch mẫu Phương pháp phù hợp môi trường mà cân vi lượng không thực sức đẩy dao động khơng khí Dung dịch nhóm mang màu gốc chuẩn bị cách hịa tan lượng thích hợp nhóm mang màu vào nước Một nhiều chuẩn pha loãng chuẩn bị từ dung dịch gốc sử dụng dụng cụ đo thể tích thủy tinh Loại A phù hợp với TCVN 7151 (ISO 648) TCVN 7153 (ISO 1042) Khi thực pha lỗng, thể tích dung dịch gốc chất pha loãng phải đủ cho độ khơng đảm bảo đo việc pha lỗng nhỏ tương ứng với nguồn không đảm bảo khác Dụng cụ chứa mẫu chuẩn bị cách xả xác chất pha lỗng vào dụng cụ Sau đó, sử dụng dụng cụ đo thể tích có cấu pittông cần thử thêm lượng chưa biết dung dịch gốc, sau đậy chặt nắp dụng cụ chứa trộn kỹ Mỗi dụng cụ chứa yêu cầu cho điểm liệu Độ hấp thụ dung dịch chuẩn đọc cuvet dòng máy quang phổ UV/VIS, sau đọc từ dụng cụ chứa mẫu Theo định luật Beer-Lambert, tính thể tích chưa biết từ thể tích chất pha loãng, tỉ lệ pha loãng sử dụng để tạo dung dịch chuẩn độ hấp thụ đo B.3 Thuốc thử Tất hợp phần dung dịch thuốc thử phải có thành phần độ tinh khiết cấp phân tích cơng nhận B.3.1 Dung dịch thử Các dung dịch thử phải chuẩn bị theo A.3.2 B.3.2 Dung dịch gốc Chọn nồng độ phù hợp, theo A.3.3 Bảng B.1 cho độ hấp thụ mẫu pha loãng tốt nằm giới hạn từ 0,3 đến 1,5 cuvet dòng cuvet có chiều dày 10 mm Bảng B.1 - Dung dịch gốc phương pháp trắc quang cuvet dòng Dung dịch gốc Thể tích chọn Số µl Độ hấp thụ danh định dung dịch gốc Dung dịch cuối Thuốc nhuộm Ponceau S ml g Trên chiều dày cuvet 10 mm 50 đến 200 39 000 0,856 10 đến 50 152 000 3,34 đến 10 752 500 8,25 0,5 đến 2 000 100 4,39 B.3.3 Chất pha loãng Chất pha loãng đệm phtalat 0,02 mol/l (pH 6,0) Chuẩn bị chất pha lỗng cách hịa tan 4,08 g kali hyđro phtalat 13,3 ml NaOH 1,0 mol/l nước làm đầy đến l Sau chuẩn bị, cần thiết, điều chỉnh pH cách cho thêm NaCl NaOH lọc chất pha loãng qua phễu lọc 0,2 µm Chất pha lỗng lưu giữ đến tháng bảo quản lạnh B.3.1 Dung dịch chuẩn Dung dịch chuẩn phải chuẩn bị theo A.3.5 B.4 Thiết bị, dụng cụ Tất thiết bị phải chọn cho đạt độ khơng đảm đo theo u cầu Ví dụ việc tính độ khơng đảm bảo đo mở rộng phương pháp trắc quang nêu ISO/TR 16153 [1] Tất thiết bị, dụng cụ phải phù hợp với tiêu chuẩn quốc tế quốc gia có số đọc, độ xác, độ tái lập độ ổn định phù hợp, quán với độ không đảm bảo đo mở rộng B.4.1 Máy quang phổ UV/VIS Nếu có thể, máy quang phổ UV/VIS phải đặt chương trình để lập số đọc hai bước sóng: a) Tại pic hấp thụ 520 nm; b) Tại 650 nm, thuốc nhuộm không hấp phụ Chương trình sau trừ hai số đọc để kết bị ảnh hưởng có mặt không chủ ý phần tử nhỏ dung dịch Nếu máy đo quang phổ UV/VIS không đặt chương trình, phải lấy số đọc hai bước sóng thực trừ thủ cơng B.4.2 Cuvet dòng Độ hấp thụ tất mẫu phải đọc cuvet dòng chiều dày cuvet 10 mm với thể tích khơng nhiều ml, bảo đảm cuvet dịng khơng bị nhiễu q trình đọc mẫu Mẫu phải kiểm soát nhiệt độ khoảng 0,2 °C thời điểm đọc Sử dụng bể cách thủy nối với ngăn giữ cuvet bọc để kiểm sốt nhiệt độ cuvet Để đẩy nhanh nhiệt độ đạt đến cân bằng, hút mẫu vào cuvet qua chiều dài ống thép không gỉ có đường kính nhỏ, ví dụ, chiều dài 30 cm với ống có đường kính 0,1 cm, bọc kiểm soát nhiệt độ loại nước tuần hồn qua lớp bọc cuvet dịng Thể tích tổng cuvet dịng nối với ống đầu vào phễu lọc đầu vào không nhiều ml B.4.3 Điều hịa mẫu Có thể hút mẫu vào cuvet dòng bơm nhu động nối với đầu cuvet Nhiệt độ mẫu phải đặt thấp chút so với nhiệt độ phòng để ngăn khơng khí xâm nhập vào dung dịch tạo thành bọt bám vào thành cuvet dòng, gây số đọc sai Việc chuẩn bị mẫu đo phải thực nhiệt độ cố định, tốt 20 °C Để ngăn việc tạo thành bọt, giảm áp suất xuống 67 kPa thấp khuấy vài giờ, loại khí nước sử dụng để chuẩn bị dung dịch Có thể sử dụng phễu lọc vải dệt thép khơng gỉ có đường kính lỗ 60 µm để lọc mẫu mẫu hút vào cuvet Khi hút ml mẫu mới, có từ % đến % mẫu cũ cuvet trộn với mẫu Thể tích yêu cầu mẫu để phun đủ phải xác định thực nghiệm Sự có mặt phần mẫu cũ dẫn đến việc đánh giá khơng độ xác kết B.5 Độ tuyến tính hệ thống Sử dụng quy trình A.5 để đo độ tuyến tính; nhiên thể tích dung dịch gốc phải điều chỉnh trong điểm a) sau a) Thêm vào phần thể tích dung dịch gốc Số (xem Bảng A.1), 25 phần thể tích chất pha lỗng, dung dịch có độ hấp thụ khoảng 1,5 Sau thực quy trình theo A.5.2 từ b) đến f) B.6 Quy trình thử B.6.1 Mục đích Sử dụng quy trình để nhận đủ điểm liệu thể tích để đáp ứng yêu cầu thí nghiệm Mỗi điểm liệu sử dụng dụng cụ chứa mẫu B.6.2 Chuẩn bị mẫu thử Nạp đầy xác dụng cụ chứa mẫu, ví dụ lọ thủy tinh 15 ml, với ml chất pha lỗng Có thể chuẩn bị trước dụng cụ chứa đậy nắp Sử dụng dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng cần thử, xả lượng dung dịch gốc phù hợp vào dụng cụ chứa mẫu Lưu ý yêu cầu xả áp dụng cho dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng quy định TCVN 10505-6:2015 (ISO 8655-6:2002) từ 7.2 đến 7.7 Sau trộn kỹ, mẫu thử để cân bóng tối đến nhiệt độ nhiệt độ dung dịch chuẩn (xem B.4.3) B.6.3 Điều chỉnh điểm “0” máy quang phổ UV/VIS Xả kỹ cuvet dòng chất pha lỗng đến độ hấp thụ khơng thay đổi thêm Đặt đường máy quang phổ UV/VIS cho số đọc hai bước sóng 520 nm 650 nm “0” B.6.4 Độ hấp thụ dung dịch chuẩn mẫu thử Hút dung dịch chuẩn vào cuvet dịng đo độ hấp thụ Sau hút hết mẫu thử vào cuvet dòng đo độ hấp thụ Sau có số đọc, đo lại dung dịch chuẩn kiểm tra lại điểm “0” để xác định độ trơi xảy suốt q trình đọc B.7 Tính tốn thể tích xả Tính thể tích chưa biết VU xả dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng theo công thức suy từ định luật Beer-Lambert sau  A UR   VU = VD   A S − A UR  VD thể tích chất pha lỗng sử dụng lọ mẫu; VU độ hấp thụ mẫu thử AS độ hấp thụ chuẩn R tỉ lệ pha loãng gốc với chất pha loãng, mà sử dụng để chuẩn bị dung dịch chuẩn Đạo hàm công thức quy định ISO/TR 16153 [1]) Phụ lục C (tham khảo) Ví dụ phương pháp chuẩn độ C.1 Mục đích Phụ lục mô tả chi tiết phương pháp chuẩn độ việc đo thể tích chất lỏng ≥ 500 µl xả dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng Ví dụ sử dụng phương pháp chuẩn độ tự động, thực chuẩn độ động học nhận biết điểm tương đương Nếu chọn phương pháp này, cách tiến hành phải sau C.2 Tóm tắt phương pháp Dung dịch kali clorua có nồng độ chưa biết chuẩn bị xả dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng cần thử Dung dịch xả mà khơng cần pha lỗng Cho thêm axit nitric axit sulfuric để điều chỉnh xác giá trị pH Thêm nước vào cho màng ngăn cuvet tham chiếu ngập nước khuấy Máy chuẩn độ thực chuẩn độ phương pháp động học; điều có nghĩa nấc chuẩn độ nhỏ vùng điểm uốn Thời gian hồn thành quy trình chuẩn độ khơng q Có thể thêm hoạt chất bề mặt khơng có clorua để tạo kết tủa tốt giữ điện cực Máy chuẩn độ tính tốn điểm uốn tính thể tích “chưa biết” xả dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng cần thử Dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng cần thử phận máy chuẩn độ, ví dụ buret pittơng Trong trường hợp này, cần phải biết nồng độ dung dịch kali clorua Việc tính tốn phải phù hợp C.3 Thuốc thử Tất hợp phần dung dịch thử phải có thành phần độ tinh khiết cấp phân tích cơng nhận C.3.1 Dung dịch thử Dung dịch thử phải chuẩn bị theo Bảng Đối với dung dịch KCl 0,1 mol/l, hòa tan 7,455 g KCl (cấp phân tích) khoảng 800 ml nước làm đầy đến l Trong trường hợp có khối lượng KCl khác, nồng độ dung dịch phải tính theo cơng thức sau: c(KCl) = (khối lượng KCl, tính gam) (74,551 x thể tích tính lít) (C.1) Tất dung dịch phải chuẩn bị sử dụng dụng cụ đo thể tích thủy tinh Loại A dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng theo 6.2.3 C.3.2 Dung dịch chuẩn độ Thuốc thử chuẩn độ dung dịch AgNO3, c(AgNO3) = 0,1 mol/l Nồng độ phải kiểm tra cách xác định độ chuẩn dung dịch chuẩn Không xác định độ chuẩn dung dịch thử Phải sử dụng dung dịch chuẩn riêng biệt Việc xác định độ chuẩn nên thực mười lần Độ lệch chuẩn 10 lần chuẩn độ phải nhỏ sai số ngẫu nhiên cho phép lớn quy định Bảng TCVN 10505-3:2015 (ISO 8655-3:2002) C.3.3 Dung dịch hỗ trợ Để điều chỉnh giá trị pH, sử dụng axit nitric (0,1 mol/l) axit sulfuric (0,5 mol/l) Cho thêm ml hai axit vào mẫu CHÚ THÍCH Vết chất hoạt động bề mặt khơng có clorua cải thiện độ xác chuẩn độ, làm cho điện cực kích cỡ phần tử chất kết tủa nhỏ C.4 Thiết bị, dụng cụ Tất thiết bị, dụng cụ phải chọn cho đạt độ khơng đảm đo theo yêu cầu Tất thiết bị, dụng cụ phải phù hợp với tiêu chuẩn quốc tế quốc gia có số đọc, độ xác, độ tái lập độ ổn định phù hợp, quán với độ không đảm bảo đo mở rộng C.4.1 Máy chuẩn độ Máy chuẩn độ phải - thực chuẩn độ động học - kiểm soát việc chuẩn độ trơi - tính điểm tương đương, - hiển thị in kết quả, - bao gồm đầu chuẩn độ khơng có khuếch tán trở lại Nên sử dụng dung tích xylanh buret sau để chuẩn độ nhằm tránh việc xylanh buret nạp lại trình chuẩn độ vùng điểm uốn: Bảng C.1- Dung tích xylanh buret Thể tích điểm tương đương Dung tích xy lanh khuyến nghị ml ml 0,5 đến đến 10 đến 18 20 18 đến 48 50 Phương pháp chuẩn độ phải hoàn toàn phê duyệt để đảm bảo kết xác C.4.2 Điện cực thiết bị phụ trợ Điện cực phải điện cực thị bạc điện cực so sánh Điện cực bạc có lớp phủ sulfit Điện cực so sánh phải nạp dung dịch KNO3 (ví dụ mol/l) Chất điện phân so sánh chứa vết KCl (tối đa 0,001 mol/l) Thường sử dụng điện cực kết hợp, điện cực thị điện cực so sánh dụng cụ dị CHÚ THÍCH Lớp phủ cho điện điện cực ổn định thời gian đáp ứng ngắn Điện cực phải điều kiện tốt C.5 Độ tuyến tính hệ thống C.5.1 Độ tuyến tính máy chuẩn độ Thơng thường độ tuyến tính máy chuẩn độ cung cấp nhà sản xuất ghi giấy chứng nhận máy chuẩn độ Nếu yêu cầu thực phép thử độ tuyến tính, phương pháp thử phải giống quy trình thử C.5.12 Độ tuyến tính quy trình chuẩn độ Độ tuyến tính yếu tố việc cơng nhận quy trình chuẩn độ Quy trình chuẩn độ đầy đủ phải phê duyệt trước sử dụng để bảo đảm kết xác C.6 Quy trình thử C.6.1 Nguyên tắc chung Phải sử dụng kỹ thuật phịng thí nghiệm tốt thực chuẩn độ C.6.2 Chuẩn bị mẫu thử Xả thể tích cần thử vào bình chuẩn độ, thêm ml axit chuẩn bị (HNO3 H2SO4) làm đầy đến khoảng 100 ml Điện cực phải nhúng dung dịch cho màng ngăn điện cực so sánh ngập khuấy Nếu có thể, thêm vào vài giọt chất hoạt động bề mặt pha lỗng chất hoạt động bề mặt cơng nhận không chứa clorua C.6.3 Chuẩn độ Nhúng điện cực đầu ống xả chuẩn độ vào dung dịch bắt đầu chuẩn độ Các thông số đầu vào phải là: nhận dạng mẫu, nồng độ KCl AgNO3 C.6.4 Đánh giá chuẩn độ Kết chuẩn độ tính từ đạo hàm bậc bậc hai đường cong chuẩn độ Với cấp đạo hàm, nhiễu đường cong bị nhân đôi Quan trọng nhận đường cong hồn chỉnh Hình C.1 nêu đường cong chuẩn độ điển hình xác định KCl dung dịch AgNO3 Do điện không cần thiết việc tính tốn kết quả, việc ln có điện điểm bắt đầu kết thúc không quan trọng Quan trọng chênh lệch giá trị đo ban đầu cuối, tính milivol Điện điểm tương đương khơng thay đổi giới hạn quy định (nghĩa ± 20 mV) CHÚ DẪN X milimét Y milivol Hình C.1 - Đường cong chuẩn độ điển hình C.6.5 Tính tốn thể tích xả Tính thể tích chưa biết VU xả dụng cụ đo thể tích có cấu pittơng cần thử theo cơng thức sau: VU = EQ x [c(AgNO3 / c(KCl)] (C.2) EQ điểm tương đương, tính mililít; c(AgNO3) nồng độ AgNO3 tính mol lít; c(KCl) nồng độ KCl, tính mol lít Ví dụ việc xác định độ khơng đảm bảo đo sử dụng phương pháp chuẩn độ nêu Thư mục tài liệu tham khảo [2] THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1 ] ISO/TR 16153, Pittông-operated volumetric instruments - Determination of uncertainty for volume measurements made using the photometric method [2] Determination of uncertainty for volume measurements made using the titration method To be obtained from: Secretariat of ISO/TC 48, Theodor-Heuss-Allee 25, 60486 Frankfut, Germany Also available in American Laboratory, Oct 2004, pp 14-22