TIỂU LUẬN môn PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM đề tài ĐỊNH LƯỢNG BACILLUSCEREUS

BỘ CÔNG THƯƠNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM KHOA DINH DƯỠNG ẨM THỰC ^^Q^^ TIỂU LUẬN MƠN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI ĐỊNH LƯỢNG BACILLUSCEREUS GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ Nhóm 7: Danh sách thành viên: Nguyễn Như Quỳnh Hồ An Ni Hoàng Hải Quỳnh Nguyễn Thị Yến Nhi Nguyễn Hoàng Phương Năm 2021 2005191240 2005191517 2005190550 2005190431 2005191506 P MỤC LỤC 2.1 TIÊU CHUẨN VIỆT NAM TCVN 4992 : 2005 (ISO 7932:2004): VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM VÀ THỨC ĂN CHĂN NUÔI - PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG BACILLUS CEREUS GIẢ ĐỊNH TRÊN ĐĨA THẠCH - KỸ THUẬT ĐẾM Tình hình nhiễm Bacillus cereus 1.1 Các ổ chứa lối sống Bacillus cereus Bacillus cereus có mặt khắp nơi tự nhiên tìm thấy nhiều loại đất, trầm tích, bụi thực vật Bào tử lây lan cách thụ động tìm thấy bên ngồi mơi trường sống tự nhiên Người ta tin B cereus sensu lato tồn đất dạng bào tử, nảy mầm phát triển tiếp xúc với chất hữu vật chủ côn trùng động vật Sự quan tâm đến hệ sinh thái vi khuẩn thúc đẩy nghiên cứu B cereus nảy mầm, phát triển tạo bào tử đất, thể vịng đời hoại sinh Hơn nữa, kiểu hình đa bào với phương thức sinh trưởng dạng sợi quan sát đề xuất phương tiện chuyển vị qua đất Một phương thức phát triển đa bào, hình sợi quan sát thấy ruột côn trùng Ruột côn trùng gợi ý làm môi trường sống cho B cereus vi khuẩn tạo bào tử, sau xác định B cereus, phân lập từ ruột loài chân đốt sống đất khác nhau, nơi vi khuẩn dường tồn cộng sinh với vật chủ động vật không xương sống chúng (Margulis cộng sự, 1998) Vai trò cộng đồng vi sinh vật đường ruột côn trùng vị trí thích hợp tự nhiên cho phần vòng đời B cereus xa hơn, người ta gợi ý tồn chế độ hình thái khác B cereus sử dụng, chẳng hạn chế độ dạng sợi, thích nghi với chu kỳ sống khác chu kỳ sống 'bình thường' lồi cộng sinh khơng thường xun vịng đời gây bệnh với tốc độ phát triển nhanh chóng Bacillus cereus báo cáo có phân người khỏe mạnh mức độ khác Sự diện mức độ thấp phổ biến mơi trường, thức ăn thực phẩm đảm bảo B cereus diện thoáng qua ruột động vật có vú Tuy nhiên, liệu gen từ chủng loại B cereus ATCC 14579 từ B anthracis cho thấy khả trao đổi chất chúng thích nghi với việc sử dụng protein làm nguồn dinh dưỡng carbohydrate, gen để thành lập vật chủ bảo tồn Thêm sắc thái khác vào tranh, so sánh gần kiểu gen kiểu hình chủng B cereus ATCC 14579 ATCC 10987 cho thấy chủng ATCC 14579 thực có khả chuyển hóa số lượng lớn cacbohydrat so với tin tưởng ban đầu dựa phân tích gen Những liệu cho thấy ngồi vịng đời đầy đủ đất, nơi diện phong phú, B cereus thích nghi với lối sống vật chủ, mầm bệnhhoặc phần hệ thực vật đường ruột, để phát triển loại thực phẩm Khả thích nghi B cereus với mơi trường ruột động vật sở cho tác dụng lợi khuẩn đề xuất chúng Việc sử dụng coi an tồn người tất chủng B cereus tạo độc tố liên quan đến bệnh tiêu chảy Tuy nhiên, số chủng tạo lượng độc tố không đáng kể 37 C Cơ quan An toàn Thực phẩm Châu Âu (EFSA) cho phép sử dụng chế phẩm sinh học Có mặt nhiều môi trường vậy, người ta cho B cereus nên tìm thấy nước; nhiên, khơng có nhiều liệu diện B cereus nguồn nước phương pháp tiêu chuẩn để phát từ nước khơng có sẵn Các vùng nước bề mặt Na Uy điều tra diện bào tử B cereus chủng gây độc tế bào phân lập từ số sông Điều cho thấy khả nguồn cung cấp nước phương tiện để B cereus xâm nhập vào dây chuyền chế biến thực phẩm 1.2 Bacillus cereus chuyển từ đất sang thực phẩm Bacillus cereus phân lập từ nhiều loại thực phẩm thành phần thực phẩm khác nhau, bao gồm gạo, sản phẩm từ sữa, gia vị, thực phẩm khô rau Sự lây nhiễm chéo phân phối bào tử tế bào sang thực phẩm khác, chẳng hạn sản phẩm thịt Khi thu hoạch, tế bào bào tử B cereus nguyên liệu thực vật vào khu vực sản xuất thực phẩm hình thành thiết bị chế biến thực phẩm Bacillus cereus chất gây ô nhiễm phổ biến sữa, gây khuyết tật gọi sữa đông sản phẩm sữa Bào tử tế bào B cereus gây nhiễm bầu vú bị trình chăn thả, xâm nhập vào trang trại bị sữa qua vật liệu lót chuồng thức ăn Trong nghiên cứu gần đây, số lượng lớn B cereus tìm thấy lớp chăn ga gối đệm trang trại bò sữa Bào tử Bacillus cereus đại diện cho lợi to lớn sinh vật, cho phép gắn kết, tồn xử lý nhiệt quy trình khác để loại bỏ lồi vi khuẩn sinh dưỡng phát triển mạnh B cereus Sự khác biệt sức căng đặc điểm bào tử, chẳng hạn tính kỵ nước, ngăn chứa phần phụ, chứng minh ảnh hưởng đáng kể đến khả bám bào tử vào bề mặt dây chuyền chế biến thực phẩm Bào tử Bacillus cereus không thiết phải bị loại bỏ cách làm bề mặt thường xuyên Khả B cereus xâm nhập vào lối sống khác hình thành màng sinh học có tầm quan trọng tồn nótrong thiết bị cơng nghiệp thực phẩm, chẳng hạn đường ống dẫn sữa Màng sinh học bảo vệ bào tử tế bào sinh dưỡng chống lại bất hoạt chất khử trùng 10 Công nghệ sản xuất thực phẩm đại, quy mô lớn, với việc sử dụng rộng rãi việc làm lạnh phương tiện bảo tồn, tạo ngách lạnh thích hợp cho vi khuẩn khơng có khả cạnh tranh cao, tồn qua xử lý nhiệt phát triển nhiệt độ thấp Ví dụ, B weihenstephanensis B cereus loài Bacillus khác thường phân lập từ sản phẩm sữa môi trường sử dụng rộng rãi việc làm mát phương tiện kiểm soát phát triển vi sinh vật Ngoài sản phẩm từ sữa, loại thực phẩm xử lý nhiệt nhẹ với thời gian bảo quản lâu môi trường thuận lợi cho lồi thuộc nhóm B cereus 11 Xét đến diện phổ biến B cereus, bào tử có khả phục hồi chất khơng khó tính vi sinh vật này, khơng loại thực phẩm có độ pH> 4,8 bị loại trừ phương tiện xảy nguy hư hỏng thực phẩm bệnh thực phẩm Người tiêu dùng không tuân thủ quy tắc chuẩn bị thực phẩm bản, tức làm lạnh chậm không đủ, bảo quản nhiệt độ môi trường xung quanh giữ nhiệt kéo dài Đăch điểm ni cấy: - Hiếu khí khị khí tùy ý - Nhiệt độ 5-50°C, tối ưu 35-40°C - pH 4,5-9,3 thích hợp 7-7,2 - Trên môi trường NA hay TSA sau 24 tạo nhóm lớn, nhăn nheo, xù xì - Trên mơi trường MYP: khóm hồng xung quanh có vịng sáng - Trên mơi trường Mossel: khóm to hồng chung quanh có vịng sáng - Trên mơi trường canh NB, TSB: đục tạo váng, sau cặn lợn cợn > Tính chất sinh hóa: - Trên mơi trường đường: lên men glucose điều kiện hiếu khí khị khí, khơng lên men mannitol - Khử nitrat nitrit - Phản ứng khử VP (+) - Phân giải Tyroxin - Catalase (+), Citrate (+) - Mọc NB + 0,001% lyzozym > Đặc điểm gây bệnh - độc tố - triệu chứng: 13 Vi khuẩn Bacillus cereus phân bố nhiều tự nhiên, nhiễm vào loại thức ăn qua đêm trữ lạnh lâu, thường gây ngộ độc thực phẩm 14 15 Độc tố: vi khuẩn sản sinh loại độc tố: • Độc tố gây tiêu chảy (Type 1): Diarrhoed toxin Vi khuẩn sản sinh độc tố thịt, rau quả, gia vị Bản chất loại protein gây phân hủy hoại biểu bì niêm mạc ruột gây tiêu chảy nguy hiểm đến tính mạng 16.• Độc tố gây nơn mữa (Type 2): emetic toxin Vi khuẩn nhiễm gạo, com nguội, đậu loại Bản chất độc tố phospholipit có tính ổn định cao không bị phân hủy nhiệt độ cao dịch dày 17 Ngồi vi khuẩn cịn có enzyme hemolyzin loại protein gây độc mạnh gây chết người Độc tố bị trung hịa cholesterol huyết góp phần cho phát triển vi khuẩn 18 Bacillus Cereus gây nhiễm trùng nhiễm độc khác như: nhiễm trùng máu, viêm màng não nhiễm trùng mắt 19 Triệu chứng gây độc: - Thực ăn chứa mật độ vi khuẩn: 10 vi khuẩn/g thực phẩm đủ gây độc - Biểu hiện: đau bụng, buồn nôn, nôn sau 1-5 ăn phải thực phẩm nhiễm vi khuẩn Bệnh kéo dài 24 - Biện pháp phịng ngừa: khơng ăn thức ăn để nguội qua đêm, thức ăn ln hâm nóng 80°C trước ăn CƠ SỞ PHÂN TÍCH 3.1 TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 6404:2016 (ISO 7218:2007 WITH AMENDMENT 1:2013): VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM VÀ THỨC ĂN CHĂN NUÔI - YÊU CẦU’ CHUNG VÀ HƯỚNG DẪN KIỂM TRA VI SINH VẬT 20 Phạm vi áp dụng 21 Tiêu chuẩn đưa yêu cầu chung hướng dẫn/lựa chọn cho ba mục đích sử dụng sau đây: - Áp dụng tiêu chuẩn Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia có liên quan để phát định lượng vi sinh vật - Thực hành phòng thử nghiệm tốt phòng thử nghiệm vi sinh vật thực phẩm - Hướng dẫn cơng nhận phịng thử nghiệm vi sinh thực phẩm (tiêu chuẩn mô tả yêu cầu kỹ thuật theo Phụ lục B TCVN ISO/IEC 17025 cơng nhận phịng thử nghiệm vi sinh tổ chức quốc gia) - Các hướng dẫn bổ sung lĩnh vực kiểm tra sinh học phân tử quy định TCVN 11134 (ISO 22174) - Tiêu chuẩn bao gồm việc kiểm tra vi khuẩn, nấm men nấm mốc sử dụng bổ sung hướng dẫn cụ thể prion (các phần tử lây nhiễm có protein), ký sinh trùng virut Tiêu chuẩn không bao gồm việc kiểm tra độc tố chất chuyển hóa khác (ví dụ: amin) từ vi sinh vật - Tiêu chuẩn áp dụng cho vi sinh vật thực phẩm, thức ăn chăn nuôi môi trường sản xuất thực phẩm môi trường sản xuất ban đầu - Mục đích tiêu chuẩn giúp đảm bảo tính hợp thức cơng việc kiểm tra nhằm xác định tính đồng kỹ thuật chung sử dụng khuẩn lạc khẳng định thu đĩa độ pha loãng chọn cho kết có ý nghĩa khẳng định theo phép thử qui định 34 Phép thử 35 Ph 36 ép38 thử Thực 37 định Kết khẳng 39 40 41 Bacillus cereus giả định 43 Từ đĩa chọn, lấy năm khuẩn lạc giả định Nếu đĩa có năm khuẩn lạc, lấy tất khuẩn lạc 45 Hình thành khuẩn 42 Th giả định có mặt lạc màu ạch hồng bao quanh 44 Nếu đĩa, khuẩn lạc MYP mọc dày vùng kết tủa khơng thể chọn khuẩn lạc phân lập tốt, cấy ria năm khuẩn lạc giả định lên đĩa đựng mơi trường hồn 47 Cấy ria, cấy đâm sâu 46 Th chấm 49 Phản ứng dương hồng khuẩn lạc chọn lên mặt thạch huyết cầu tính, độ cừu theo cách cho thể thạch rộng vùng hồng cầu tốt huyết thay đổi phản ứng hồng cầu cừu 30oC 24 h ± h 50 Cá 48 53 Ủ ,ạc giả định khuẩn lạc lớn, màu hồng (cho thấy c khuẩn không lên men ol) thường bao quanh vùng kết tủa (cho thấy mannit hình thành Lase) lexitir 54 chứa nhiều vi sinh vật lên men mannitol dẫn đến sinh axit, 51 Nế màu u đĩa ưng khuẩn lạc B.cereus bị nhạt biến hồn hồng đặc tr 55 ng B.cereus sinh khơng sinh lexitinase Các tồn khuẩn lạc 56 57 GIỚI HẠN CHO PHÉP B CEREUS 58 Theo Quyết định 46/2007/QĐ-BYT Bộ Y tế việc ban hành “Quy định giới hạn tối đa ô nhiễm sinh học hoá học thực phẩm” 59 Sản phẩm 61 Sữa dạng bột 63.65 Sản phẩm chế biến từ ngũ cốc, 60 GIỚI HẠN B cereus (Trong 1g 1ml sản phẩm) 62 102 64 102 66 (có 68 khoai củ, đậu, đỗ: bánh, bột (dùng trực tiếp, không qua xử lý nhiệt trước sử 70 Rau muối, rau khô 72 Thức ăn khô thức ăn dinh dưỡng cho trẻ em, thức ăn thay đặc biệt (phải xử lý nhiệt trước sử 74 Thức ăn khô thức ăn dinh dưỡng cho trẻ em, thức ăn thay đặc biệt (dùng trực tiếp, không qua xử lý 76 77 67 củ, đậu đỗ: bột, miến, mỳ sợi xử lý Sản phẩm chế biến từ ngũ cốc, 69 10 71 102 73 102 75 10 Theo QCVN 8-3: 2012/BYT QUY CHUẨN KỸ THUẬT QUỐC GIA ĐỐI VỚI Ô NHIỄM VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM 79 78 Sản phẩm 83 Sản phẩm dinh dưỡng công thức dạng bột cho 86 Sản phẩm dinh dưỡng công thức với mục đích y tế đặc biệt cho trẻ 89 Giới hạn cho phép B cereus giả định (CFU/ml 81 m 82 M 84 5X101 85 5x102 87 5X101 88 5x102 Quy trình phân tích 90 Cân 10g mẫu rắn hút 10ml mẫu lỏng + 90ml 91 Saline Peptone Water 92 Đồng mẫu máy Stomacher 60 giây 93 94 95 96 Đếm khuẩn lạc Khẳng định B.cereus giả định môi trường thạch máu cừu phản ứng Haemolysin Ủ 30°C/24 97 Tính biểu thị kết 98 Quy trình định lượng B.cereus giả định 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 Dụng cụ, môi trường, thiết bị 131 Bảng dụng cụ 132 135 138 133 Dụng cụ 136 Bình tam giác 139 Pipet 134 Mục đích 137 Chứa dung dịch hóa chất, chứa mẫu 140 Vận chuyển lượng thể tích (huyền phù 141 142 Đĩa petri 144 145 Que cấy trải 147.150 148 Quy trải 143 Nuôi cấy vi sinh vật 146 Trải dịch mẫu lên khắp bề mặt đĩa 149 Trải mẫu vật, làm mịn bề mặt thạch 151 152 Bảng mơi trường hóa chất 153 Mơi trường hóa 154 Mục đích 155 SPW (Saline Peptone 156 Pha loãng mẫu 157 MYP agar base (Mannitol 159 Polymixin B 161 Egg Yolk 163 Blood agar base 165 Sheep blood 167 HCl NaOH 10% 169 158 Nuôi cấy B cereus 164 Khẳng định B cereus giả định 166 Được bổ sung vào môi trường nhằm tăng khả 168 Điều chỉnh pH 170 Bảng thiết bị 171 172 Thiết bị 175 Cân 173 Mục đích 174 177 Cân lượng mẫu rắn 176 *- - 179 Máy lắc vortex 178 180 Trộn mẫu 182 Máy dập Stomacher 181 183 Đồng mẫu dịch pha loãng 185 Máy đếm khuẩn lạc 186 Nhìn thấy độ khuếch đại khuẩn 184 lạc để dễ dàng đếm 188 Nồi hấp tiệt trùng 187 191 Tiệt trùng vi khuẩn cho thiết bị, 189 dụng cụ hóa chất 190 192 Các bước tiến hành 193 Bước Chuẩn bị mẫu thử huyền phù ban đầu 194 Cân xác 10g mẫu rắn đong mẫu với thể tích 10ml mẫu lỏng phần mẫu thử đại diện với sai số cho phép ± 5%, cho vào túi nhựa vơ trùng (bình tam giác) Cho dung dịch pha loãng SPW 90ml (sai số cho phép ± 5% ) vơ trùng vào túi nhựa (bình tam giác) chứa mẫu Đồng mẫu dịch pha loãng SPW máy dập mẫu phút lắc bình tam giác có mẫu dịch pha lỗng 2:3 phút Để vi sinh vật khơng bị tổn thương thay đổi nhiệt độ đột ngột, nhiệt độ dịch pha lỗng suốt q trình thao tác phải giữ xấp xỉ nhiệt độ phòng Do bào tử lắng xuống nhanh pipet, nên để pipet tư nằm ngang (không để đứng) làm đầy với thể tích huyền phù dung dịch pha lỗng thích hợp Lắc huyền phù ban đầu dung dịch pha loãng máy vortex để tránh phần tử có vi sinh vật lắng xuống 195 Bước Pha loãng mẫu 196 Dùng pipet vô trùng lấy 1ml huyền phù ban đầu với sai số ± 5% cho vào ống nghiệm chứa ml dịch pha lỗng SPW vơ trùng nhiệt độ thích hợp Trộn kỹ máy vortex - 10 giây để thu dung dịch pha loãng 10-2 (đối với loại mẫu làm từ ngun chất thu dung dịch pha lỗng 10-1 ) Nếu cần, lặp lại thao tác để có dung dịch pha lỗng 10-3, 104, 10-5, thu lượng vi khuẩn thích hợp 197 Bước Cấy ủ mẫu 198 Dùng pipet vô trùng chuyển 0,1ml mẫu thử dạng lỏng 0,1ml huyền phù ban đầu sản phẩm dạng khác cho vào đĩa petri Lặp lại qui trình với dung dịch pha loãng thập phân tiếp theo, cần Sử dụng nồng độ pha loãng liên tiếp, nồng độ đĩa petri Dùng que cấy trải trải dịch mẫu lên khắp bề mặt đĩa petri, sử dụng que trải vô trùng cho đĩa Để đĩa khoảng 15 phút nhiệt độ phòng để chất cấy bám vào thạch Lật úp đĩa ủ 30oC 24 199 Bước Đếm chọn khuẩn lạc để khẳng định 200 Đếm đĩa có số khuẩn lạc 150 sau 24 nuôi cấy Khuẩn lạc B cereus giả định khuẩn lạc lớn, màu hồng, bao quanh vòng kết tủa Đếm khuẩn lạc B cereus giả định đĩa có số đếm phù hợp Lấy khuẩn lạc giả định, đĩa có khuẩn lạc lấy tất khuẩn lạc giả định có mặt Cấy ria, cấy đâm sâu chấm khuẩn lạc chọn lên mặt thạch máu cừu, ủ 30oC 24 Đọc kết 201 *Kết 202 B cereus giả định 1g/1ml mẫu (X) tính theo cơng thức: 203 204. (c XR1)+(c2 XR2)+(c3 XR3)+(C4 XR4) ™T/ X = )^) (CFU/g hay CFU/ml) 205 V X (n 1+ U.1 Xfy) X ũ 206 C1,2,3,4: Số khuẩn lạc B cereus giả định đếm tương ứng đĩa hai độ 207 pha loãng liên tiếp giữ lại 208 V: Thể tích dịch cấy cấy đĩa, tính mililit 209 n1: Số đĩa độ pha loãng thứ giữ lại 210 n2: Số đĩa độ pha loãng thứ hai giữ lại 211 d : hệ số pha loãng ứng với độ pha loãng thứ giữ lại 212 R1,2,3,4: tỉ lệ khẳng định dương tính tương ứng đĩa petri giữ lại hai 213 độ pha loãng liên tiếp 214 *Biểu thị kết 215 - Biểu thị kết dạng thập phân số 1.0 9.9 nhân với 10n (n số mũ thích hợp 10) 216 + Nếu chênh lệch giá trị đậm độ lớn lần, lấy giá trị đậm độ pha lỗng thấp để tính kết 217 + Nếu đĩa sản phẩm lỏng nguyên chất đậm độ pha lỗng ban đầu có 15 khuẩn lạc tính kết trung bình cộng khuẩn lạc đếm đĩa tính cho 1g 1ml sản phẩm 218 + Nếu tất đĩa khơng có khuẩn lạc mọc, đánh giá kết sau: • Ít khuẩn lạc Bacillus 1ml sản phẩm • Ít 1/d khuẩn lạc Bacillus 1g sản phẩm 219 An tồn phân tích 220 - Các u cầu phòng vi sinh 221 + Hạn chế tiếp cận khu vực phịng thí nghiệm Vi sinh: 222.+ Có biển cảnh báo hạn chế tiếp cận “Không phận sự, không phép vào khu vực này” người khơng phận sự, trước vào khu vực phịng thí nghiệm Vi sinh 223.+ Những nhân viên khơng có phận sự, khơng phép tiếp cận khu vực phịng thí nghiệm vi sinh 224.+ Khách tham quan, người liên hệ công tác, nhân viên cần tiếp , cận, phải đồng ý Phụ trách phòng có nhân viên phận hướng dẫn lại khu vực phịng thí nghiệm 225 + Các bề mặt: bàn làm việc phịng thí nghiệm phải vê sinh kỹ 226 cồn 70 % trước sau làm việc 227 + Các thao tác với chủng vi sinh vật: chuẩn phải thực tủ an 228 toàn sinh học cấp 229.+ Khi chuẩn bị hóa chất mơi trường có cảnh báo nguy hiểm, cần đọc kỹ tuân theo hướng dẫn pha chế MSDS hóa chất mơi trường 230.+ Khi vận hành thiết bị có liên quan đến tính an tồn (nồi hấp, đèn Bunsen), cần đọc kỹ tuân thủ hướng dẫn sử dụng thiết bị 231 - Yêu cầu Rác thải mẫu kiểm nghiệm xong phòng vi sinh 232 + Rác thải vi sinh phải phận loại xử lý: • Rác thủy tinh vỡ vật dụng sắc nhọn (kim tiêm): gom vào thùng dày, có nắp đậy kín • Rác thải nhiễm mẫu thực phẩm nhiễm vi sinh phải hấp tiêt trùng 1210C, 30 phút trước cho vào thùng có nắp kín, chuyển cho dịch vụ thu gom rác cuối ngày làm viêc 233 + Rác thải nhiễm vi sinh bao gồm loại sau: • Mẫu thực phẩm, mơi trường ni cấy vật dụng chứa (túi mẫu, đĩa petri, ống nghiêm) sau cấy ni ủ; • Đầu tip, khay đựng mẫu, cốc đựng típ, que cấy, que trang, giá ống nghiêm vật: dụng tiếp xúc trực tiếp với mẫu nhiễm có nguy bị mẫu nhiễm rơi đổ; • Gặng tay, trang, bơng gịn vê sinh mặt: bàn thao tác với mẫu nhiễm; KẾT LUẬN 234 Trong môi trường chọn lọc, B.Cereus tạo khuẩn lạc to, mọc lặn, rìa nhặn Vi khuẩn diện loại thực phẩm (Sữa, thịt, rau quả, hỗn hợp gia vị, sản phẩm khơ ) Hình thành loại độc tố diarrhoeal toxin gậy tiêu chảy emetic toxin gậy nôn mửa 235 B.Cereus phát định lượng môi trường thạch chọn lọc Mannitol - Egg Yolk - Polymein (MYP) Cereus Selective Agar (MOSSEL), Polymycin Elgelb Mannitol Bromothymol Blue Agar (PEMBA) Khuẩn lạc tiếp tục khẳng định dựa thử nghiệm sinh hóa với đặc điểm lên men đường glucose sinh acid điều kiện kỵ khí, khử nitrate thành nitrite, thử nghiệm VP(+), thủy phận L-tyrosine, tặng trưởng 0,001 % lysozyme Ngoài B.cereus định lượng phương pháp MPN 236 LỜI CẢM ƠN 237 Nhóm em xin cảm ơn thầy Hồng Xn Thế dày cơng truyền đạt kiến thức, hướng dẫn bảo nhóm chúng em trình giảng dạy trình làm để nhóm chúng em hồn thành tiểu luận cách tốt 238 Tuy hạn chế khơng có nhiều kiến thức thực nghiệm nên cịn nhiều khiếm khuyết làm, nhóm chúng em mong thầy góp ý giúp chúng em hồn thiện 239 Một lần xin cảm ơn thầy dành thời gian để đọc nhóm chúng em Trong tình hình dịch bệnh căng thẳng phức tạp, nhóm chúng em xin chúc thầy cô năm giảng dạy đầy hiệu gặt hái nhiều thành công 240 NHẬN XÉT CỦA THẦY 241 Nhóm chúng em mong nhận thầy nhận xét để hoàn thiện sửa chữa sai sót 242 TÀI LIỆU THAM KHẢO 243 TIÊU CHUẨN VIỆT NAM TCVN 4992 : 2005 (ISO 7932 : 2004) 244 TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 6404:2016 (ISO 7218:2007 WITH AMENDMENT 1:2013) 245 Quyết định 46/2007/QĐ-BYT Bộ Y tế việc ban hành “Quy định giới hạn tối đa nhiễm sinh học hố học thực phẩm” 246 QCVN 8-3: 2012/BYT Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia ô nhiễm vi sinh vật thực phẩm 247 Lotte Arnesen, From soil to gut: Bacillus cereus and its food poisoning toxins, 2008 ... gia có liên quan để phát định lượng vi sinh vật - Thực hành phòng thử nghiệm tốt phòng thử nghiệm vi sinh vật thực phẩm - Hướng dẫn công nhận phòng thử nghiệm vi sinh thực phẩm (tiêu chuẩn mô tả... nhiều loại thực phẩm thành phần thực phẩm khác nhau, bao gồm gạo, sản phẩm từ sữa, gia vị, thực phẩm khô rau Sự lây nhiễm chéo phân phối bào tử tế bào sang thực phẩm khác, chẳng hạn sản phẩm thịt... khơng khó tính vi sinh vật này, khơng loại thực phẩm có độ pH> 4,8 bị loại trừ phương tiện xảy nguy hư hỏng thực phẩm bệnh thực phẩm Người tiêu dùng không tuân thủ quy tắc chuẩn bị thực phẩm bản,