Cao hạt cần tây được chiết xuất theo 3 qui trình khác nhau do TS. Nguyễn Thu Hằng và nhóm nghiên cứu thực hiện tại Bộ môn Dược liệu - Trường Đại học Dược Hà Nội thu được các cao chiết ký hiệu lần lượt là QT1, QT2 và QT3. Qui trình chiết xuất cụ thể như sau:
Qui trình 1
Bột dược liệu (1 kg) đã xay thô được ngâm với ethanol 96% ở nhiệt độ phòng 3 lần, mỗi lần 72 giờ. Gộp các dịch chiết, cất thu hồi dung môi dưới áp suất
giảm. Sản phẩm thu được được sấy trong tủ sấy ở 700
C đến khi trở thành cao đặc được ký hiệu là QT1.
Qui trình 1 chiết xuất cao đặc từ hạt cần tây được tóm tắt ở sơ đồ hình 2.3.
Hình 2.3. Sơ đồ tóm tắt qui trình chiết xuất cao hạt cần tây QT1
Qui trình 2
Bột dược liệu (1 kg) đã xay thô được ngâm với ethanol 96% ở nhiệt độ phòng 3 lần, mỗi lần 72 giờ. Gộp các dịch chiết, cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm đến khi thể tích dịch chiết còn 1/2 thu được dịch chiết đặc. Dịch chiết đặc được để vào tủ lạnh qua đêm, sau đó đem lọc thu được dịch lọc. Cất thu hồi dịch lọc dưới áp suất giảm và tiếp tục sấy ở 700C thu được cao đặc, ký hiệu là QT2.
Qui trình 2 chiết xuất cao đặc từ hạt cần tây được tóm tắt ở sơ đồ hình 2.4.
Qui trình 3
Bột hạt cần tây (1 kg) đã xay thô được ngâm với ethanol 96% ở nhiệt độ phòng 3 lần, mỗi lần 72 giờ. Gộp các dịch chiết đem cất thu hồi dung môi dưới áp
22
suất giảm đến khi thể tích dịch chiết còn 1/3 thu được dịch chiết đặc. Phân tán dịch chiết đặc trong nước theo tỉ lệ 1/4 rồi lắc với ether dầu hỏa đến khi dịch chiết ether dầu hỏa không còn chất béo. Dịch chiết sau khi lắc với ether dầu hỏa được đem cô cách thủy ở 800C tới khi thu được cao đặc, ký hiệu là QT3.
Qui trình 3 chiết xuất cao đặc từ hạt cần tây được tóm tắt ở sơ đồ hình 2.5.
Hình 2.4. Sơ đồ tóm tắt qui trình chiết xuất cao hạt cần tây QT2
23
Sử dụng 3 cao đặc chiết xuất từ 3 qui trình trên để tiến hành nghiên cứu sàng
lọc đánh giá tác dụng hạ acid uric thông qua khả năng ức chế enzym XO in vitro để
chọn ra qui trình có tiềm năng nhất. Sử dụng qui trình vừa lựa chọn để chiết xuất cao hạt cần tây dùng cho các thử nghiệm in vivo tiếp theo.
Chuột nhắt trắng chủng Swiss, cả giống đực và giống cái, khỏe mạnh, cân nặng từ 18 - 22 g, do Viện Vệ sinh dịch tễ trung ương cung cấp.
Chuột cống trắng chủng Wistar, giống đực, 8 tuần tuổi, khỏe mạnh, cân nặng từ 130 - 150 g, do Học viện Quân y cung cấp.
Động vật được nuôi ổn định với điều kiện phòng thí nghiệm ít nhất 5 ngày trước khi thực hiện nghiên cứu, được nuôi dưỡng bằng thức ăn tiêu chuẩn do Viện Vệ sinh dịch tễ trung ương cung cấp, uống nước tự do.
2.1.4.
‒ Thuốc đối chiếu: Allopurinol (Sigma Aldrich), độ tinh khiết 99,21%.
‒ Acid uric, ≥ 99%, dạng tinh thể, dùng cho nghiên cứu và phát triển
(Sigma Aldrich).
‒ Acid acetic dùng pha dung dịch 1% (Merck), pha theo Dược điển Việt Nam IV.
‒ Bộ hóa chất định lượng acid uric huyết thanh gồm hóa chất phản ứng và acid uric chuẩn (Teco Diagnostics).
‒ Carrageenan (Sigma Aldrich).
‒ Indomethacin, tiêu chuẩn phân tích (Viện Kiểm nghiệm thuốc TW - Bộ Y tế).
‒ ẫ Dimethyl sulfoxid (Merck).
‒ Kali oxonat, 97%, dùng cho nghiên cứu và phát triển (Sigma Aldrich).
‒ Xanthin, ≥ 99% (Sigma Aldrich).
‒ Xanthin oxidase từ sữa bò (0,8 U/mg protein, 9 mg protein/ml, Sigma Aldrich).
‒ Các dung môi cho chiết xuất: ethanol, ether dầu hỏa đạt tiêu chuẩn phân tích.
‒ Hóa chất pha đệm Na2HPO4.2H2O, KH2PO4, HCl, NaOH (Sigma Aldrich).
24