3.2.1.1. Flavonoid
Cân 0,5g dƣợc liệu cho vào ống nghiệm lớn, thêm 15ml cồn 90o đun trực tiếp 10 phút. Lọc nóng qua bông, dịch lọc thu đƣợc dùng để làm các phản ứng.
- Phản ứng với NH4OH
Nhỏ một 2 giọt dịch chiết cồn lên 2 tờ giấy lọc, sấy khô, đem một tờ giấy lọc hơ trên miệng lọ NH4OH đặc thấy màu vàng của vết dịch chiết đậm và sáng hơn hẳn so với vết dịch chiết trên tờ giấy lọc còn lại. (Phản ứng dƣơng tính).
- Phản ứng với NaOH 10%:
Cho vào ống nghiệm nhỏ 1ml dịch chiết, thêm 3 giọt NaOH 10%, thấy xuất hiện nhiều tủa vàng. (Phản ứng dƣơng tính).
- Phản ứng Cyanidyn
Cho vào ống nghiệm khoảng 1ml dịch chiết, thêm một ít bột Mg kim loại, sau đó nhỏ vài giọt HCl đặc, thấy xuất hiện màu đỏ. (Phản ứng dƣơng tính).
- Phản ứng với FeCl3
Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết, nhỏ 2 giọt FeCl3 5% thấy xuất hiện màu xanh đen. (Phản ứng dƣơng tính).
Sơ bộ kết luận trong lá xoài tròn có flavonoid.
3.2.1.2. Coumarin
Cân 10g dƣợc liệu cho vào bình nón 100ml, thêm 50ml cồn 90, đun trực tiếp 10 phút, lọc nóng qua giấy lọc. Dịch lọc thu đƣợc dùng để làm phản ứng.
- Phản ứng mở đóng vòng lacton
Cho vào hai ống nghiệm mỗi ống 1ml dịch chiết. Thêm vào ống 1 0,5ml dung dịch NaOH 10%. Ống 2 để nguyên. Sau khi thêm kiềm, ống 1 xuất hiện tủa vàng.
Đun cả hai ống nghiệm đến sôi. Để nguội. Ống 1 có tủa vàng. Ống 2 trong Thêm vào cả hai ống mỗi ống 2ml nƣớc cất, lắc đều. Ống 1 có tủa đục. Ống 2 trong suốt.
Acid hóa ống 1 bằng 5-6 giọt HCl đặc, ống 1 vẫn có tủa đục, ống 2 trong suốt. (Phản ứng âm tính).
Phản ứng Diazo hóa:
Cho 1ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2ml dung dịch NaOH 10%. Nhỏ 5 giọt thuốc thử Diazo mới pha, lắc đều, đun nóng cách thủy, thấy xuất hiện màu đỏ. (Phản ứng dƣơng tính).
Phản ứng huỳnh quang:
Nhỏ 1 giọt dịch chiết lên giấy lọc, sấy khô, nhỏ một giọt NaOH 10% chồng lên trên, sấy khô. Che một phần vết bằng một đồng xu kim loại, đặt dƣới ánh sáng UV 366nm. Phần không bị che phát quang màu vàng xanh. Sau 1 phút, bỏ đồng xu kim loại ra thấy phần bị che và phần bị che phát quang giống nhau. (Phản ứng âm tính).
Vi thăng hoa:
Cho một ít dƣợc liệu vào nắp nhôm. Đặt lên bếp hồng ngoại, cho bay hơi hết hơi nƣớc trong dƣợc liệu. Đặt lên nắp nhôm một phiến kính, trên phiến kính để một ít bông tẩm nƣớc lạnh, sau 5phút lấy phiến kính ra để nguội, nhỏ thêm một giọt thuốc thử KI 10% lên phiến kính. Soi dƣới kính hiển vi không thấy có tinh thể. (Phản ứng âm tính).
Sơ bộ kết luận trong lá xoài tròn không có coumarin.
3.2.1.3. Saponin
Hiện tượng tạo bọt: Cân 10g dƣợc liệu cho vào bình nón dung tích 100ml,
thêm 30ml nƣớc, đun sôi trực tiếp 10 phút, lọc nóng qua bông. Cho 5ml dịch lọc vào một ống nghiệm lớn, thêm 5ml nƣớc lắc mạnh trong 5phút, cột bọt tồn tại trong khoảng 6 phút. (Phản ứng âm tính).
Sơ bộ kết luận trong lá xoài tròn không có saponin.
3.2.1.4. Alcaloid
Cân 10g bột lá xoài cho vào bình nón 100ml, thêm 30ml H2SO4 1N, đun sôi 20 phút. Để nguội, lọc dịch chiết vào bình gạn dung tích 100ml, kiềm hóa bằng NH4OH6N đến pH kiềm, thử bằng giấy quì. Chiết bằng 5ml CHCl3 x 3 lần, gạn lấy
lớp CHCl3. Sau đó chiết tiếp với dung dịch 5ml H2SO4 x 2 lần. Dich chiết thu đƣợc chia đều vào 3 ống nghiệm nhỏ. Nhỏ vào từng ống nghiệm lần lƣợt 3 giọt các thuốc thử sau: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Ống 1: TT Mayer. Qan sát không thấy tủa trắng. (Phản ứng âm tính). Ống 2: TT Bouchardart. Quan sát không thấy tủa nâu. (Phản ứng âm tính). Ống 3: TT Dragendoff. Quan sát không thấy tủa vàng. (Phản ứng âm tính).
Sơ bộ kết luận lá xoài tròn không có alcaloid.
3.2.1.5. Anthranoid
Cân 5g dƣợc liệu cho vào bình nón thêm 25ml H2SO4 1N, đun sôi trực tiếp 5 phút, lọc nóng qua bông vào bình gạn 50ml. Để nguội, thêm 5ml ethyl ether, lắc nhẹ, gạn bỏ lớp nƣớc, giữ lại lớp ether, cô về 1ml, thêm 1ml dung dịch NaOH 10%, lắc nhẹ. Lớp nƣớc không thấy xuất hiện màu đỏ sim. (Phản ứng âm tính).
Sơ bộ kết luận trong lá xoài tròn không có athranoid.
3.2.1.6. Tannin
Cho vào ống nghiệm lớn 1g bột lá xoài, thêm 10ml nƣớc cất, đun sôi trực tiếp trong 10phút. Lọc nóng qua bông. Dịch lọc thu đƣợc đem làm các phản ứng: - Phản ứng với genlatin 1%
Cho vào ống nghiệm nhỏ 1ml dịch lọc, thêm 3 giọt gelatin 1%. Thấy xuất hiện tủa bông trắng. (Phản ứng dƣơng tính).
- Phản ứng với chì acetat 10%
Cho vào ống nghiệm nhỏ 1ml dịch lọc, thêm 3 giọt chì acetat thấy xuất hiện kết tủa bông vàng tƣơi. (Phản ứng dƣơng tính).
- Phản ứng với FeCl3
Cho vào ống nghiệm 1ml dịch lọc, thêm 3 giọt FeCl3 thấy xuất hiện tủa đen. (Phản ứng dƣơng tính).
Sơ bộ kết luận lá xoài tròn có tannin.
3.2.1.7. Chất béo, carotenoid, sterol
Cân 10g bột lá xoài cho vào bình nón có nút mài dung tích 100ml, thêm 40ml ether dầu hỏa, đậy kín, ngâm trong 24h, lọc qua giấy lọc, dịch chiết thu đƣợc
dùng làm phản ứng.
* Định tính chất béo
Nhỏ dịch chiết lên một mảnh giấy lọc, hơ đến khô, không thấy có vết mờ trên giấy. (Phản ứng âm tính)
Sơ bộ kết luận lá xoài tròn không có chất béo.
* Định tính steroid-tritepenoid
Cho vào một ống nghiệm nhỏ 5ml dịch chiết, cô cách thủy đến cắn. Hòa tan cắn bằng 1ml anhydride acetic, nghiêng ống nghiệm 45o nhỏ từ từ theo thành ống nghiệm 1ml H2SO4 đặc, thấy xuất hiện vòng nâu tím. (Phản ứng dƣơng tính).
Sơ bộ kết luận lá xoài tròn có sterol-triterpenoid.
* Định tính carotenoid
Cho vào một ống nghiệm nhỏ 3 giọt dịch chiết, cô cách thủy đến cắn, thêm khoảng 3 giọt H2SO4 đặc, lắc nhẹ, thấy xuất hiện màu xanh ve. (Phản ứng dƣơng tính).
Sơ bộ kết luận lá xoài tròn có carotenoid.
3.2.1.8. Đƣờng khử, acid amin, polysacharid
Cân 5g bột lá xoài cho vào bình nón, thêm 20ml nƣớc. Đun sôi trực tiếp 10 phút, lọc nóng qua bông. Dịch lọc thu đƣợc đem tiến hành phản ứng xác định sự có mặt của đƣờng khử, acid amin, polysacharid:
* Acid hữu cơ
Cho vào ống nghiệm nhỏ 1ml dịch chiết, thêm vào ống nghiệm một ít tinh thể Na2CO3. Không thấy xuất hiện bọt khí. (Phản ứng âm tính).
Sơ bộ kết luận trong lá xoài tròn không có acid hữu cơ. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
* Đường khử
Cho vào ống nghiệm nhỏ 1ml dịch chiết, thêm vào ống nghiệm 3 giọt thuốc thử Fehling A và 3 giọt thuốc thử Fehling B, đun cách thủy 10 phút thấy xuất hiện tủa màu đỏ gạch. (Phản ứng dƣơng tính).
Sơ bộ kết luận trong lá xoài tròn có đường khử. * Polysacharid
Ống 1: cho vào ống nghiệm 2ml dịch chiết + 5 giọt thuốc thử Lugol. Ống 2: 2ml nƣớc cất + 5 giọt thuốc thử Lugol.
Ống 3: 2ml dịch chiết.
Màu của ống 1 đậm hơn màu của ống 2 nhƣng không đậm hơn màu của ống 3. (Phản ứng âm tính).
Sơ bộ kết luận trong lá xoài tròn không có polysacharid.
* Acid amin
Lấy 2ml dịch lọc cho vào ống nghiệm nhỏ, thêm khoảng 5 giọt thuốc thử Nynhidrin 3%. Đun cách thủy 10 phút, không thấy xuất hiện màu xanh tím. (Phản ứng âm tính).
Sơ bộ kết luân lá xoài tròn không có acid amin.
Nhận xét: Các kết quả định tính bằng phản ứng hóa học cho thấy trong lá xoài tròn có các nhóm hợp chất: flavonoid, tanin, đƣờng khử, steroid-triterpenoid, carotenoid.