C: lượng tinh bột bị thủy phân 1000: hệ số chuyể n mg thành g
5)Xác định hoạt độ catalase bằng phương pháp chuẩn độ (theo mô tả của
Phạm Thị Trân Châu) [1]
Nguyên tắc: Catalase xúc tác cho phản ứng:
Để định lượng catalase có thể dùng dung dịch KMnO4 0,1N để xác định lượng H2O2trước và sau khi enzym tác dụng, từ đó tính lượng H2O2 đã bị chuyển hóa.
Từ phản ứng trên có 1ml dung dịch KMnO4 0,1N tương ứng với 1,7mg H2O2. Hóa chất: Đệm photphat 50mM (pH 7,0): (a) hòa tan 6,81g KH2PHO4 trong 1000ml nước cất; (b) hòa tan 11,41g KH2PHO4.3H2O trong 1000ml nước cất; trộn dung dịch a và b cho đến khi đạt pH 7,0. KMnO4 0,1N, H2SO4 10%, H2O2 0,1% trong đệm photphat 50mM (pH 7). Chiết enzym: cân 1g mẫu, nghiền trong 10ml đệm photphat (pH 7,0) 50mM, li tâm lạnh ở 17000g/15 phút/20C, dịch trong phía trên là dịch chiết enzym thu được.
Dụng cụ, thiết bị: Cân phân tích, cối chày sứ, máy li tâm, máy chuẩn pH, buret, cốc thủy tinh, pipet…
5H2O2 + 2KMnO4 2MnSO3H2SO4, 8H2O 4 + K2SO4 + 5O2
Cách tiến hành:
Lấy 2 bình nón dung tích 100ml
Bình thí nghiệm
Dung dịch H2O2 0,1% (10 ml), dịch chiết enzym (10ml), giữ ở 300C trong 30 phút Axit H2SO4 10% (5ml), chuẩn độ H2O2 dư thừa bằng KMnO4 0,1N đến khi xuất hiện màu hồng bền
Bình đối chứng
Dịch chiết enzym (10ml), đun sôi cách thủy trong 5 phút để biến tính enzym, lấy ra để nguội, dung dịch H2O2 0,1% (10 ml), giữ ở 300C trong 30 phút Axit H2SO4 10% (5 ml), chuẩn độ H2O2 dư thừa bằng KMnO4 0,1N đến khi xuất hiện màu hồng bền.
Cách tính hoạt độ:
Tính số mg H2O2 bị phân giải dưới tác dụng của enzym có trong a(g) mẫu: x =(A−B). 1,7. V
V . a
A: số ml KMnO4 0,1N đã dùng để chuẩn độ H2O2 dư thừa trong bình đối chứng B: số ml KMnO4 0,1N đã dùng để chuẩn độ H2O2 dư thừa trong bình thí nghiệm