- Pha h n dịch ào t : Lấy m t vòng que cấy ào t Streptomyces 166.28,
23
đƣ c h n dịch ào t ở đ pha loãng 10-1 (định ƣớc). Sau đó d ng 1ml h n dịch ào t này pha loãng đến nồng đ 10-6
làm mẫu chứng, 9ml còn l i đƣ c đƣa vào đĩa Petri vô tr ng đ tiến hành đ t iến ằng nh s ng UV.
- Đ t iến ằng ánh sáng UV: với c c thông số là ƣớc sóng: λ=254nm; khoảng c ch chiếu: 60cm; thời gian chiếu: 5 ph t. Sau đó, lấy đĩa Petri ra, đ ch tối 2h, rồi pha loãng đến nồng đ 10-4, 10-5.
- Cấy c c ào t sau đ t iến: Cấy c c ào t sau đ t iến ở hai nồng đ là 10-4, 10-5 lên môi trƣờng MT2 trong đĩa Petri. Mẫu chứng: cấy ào t ở nồng đ 10-
6. M i nồng đ pha loãng làm 3 đĩa song song. C c đĩa Petri sau khi cấy đƣ c ủ ở nhiệt đ 280
C – 290C trong 6 – 10 ngày cho xuất hiện c c khuẩn l c. Đếm c c khuẩn l c, x c định % đ sống sót theo công thức:
% đ sống sót = (Nm/N0) × 10-6+k×100%
Trong đó: Nm: Số khuẩn l c sau đ t iến có nồng đ 10-k
, No: Số khuẩn l c trong mẫu chứng.
- Tiến hành sàng lọc với c c khuẩn l c sau khi đ t iến tƣơng tự nhƣ phƣơng pháp sàng lọc ngẫu nhiên. Chú ý: làm song song mẫu chứng.
Phần trăm iến đổi ho t tính đƣ c x c định theo công thức: % iến đổi ho t tính = i 100% o D D Trong đó: i
D : Đƣờng kính trung ình vòng vô khuẩn của iến chủng thứ i sau đ t iến,
o
D : Đƣờng kính trung ình vòng vô khuẩn của mẫu chứng.
- Dựa vào kết quả thu đƣ c, lựa chọn ra c c iến chủng có % iến đổi ho t tính (+) cao nhất d ng cho c c nghiên cứu tiếp theo.