4. Nội dung nghiên cứu
2.6.3. Thông số cột tách
- Hãng sản xuất: Supelco Lot: 28471-U
- Tên cột: SLB-5ms Nhiệt độ max: 340o C
- Thành phần chính cột: poly(5% diphenyl/95% dimethyl siloxane)
- Độ dài x Đƣờng kính cột x Bề dày lớp film: 30m x 0,25mm x 0,25μm
2.7. PHƢƠNG PHÁP KHẢO SÁT ĐÁNH GIÁ
2.7.1. Khoảng tuyến tính và đƣờng chuẩn định lƣợng của phƣơng pháp 2.7.1.1. Định tính.
Dựa vào thời gian lƣu tR của cấu tử phân tích và thời gian lƣu của chất chuẩn trong cùng điều kiện phân tích sắc ký. Tuy nhiên thời gian lƣu không đảm bảo hai chất trùng nhau hoàn toàn, để đảm bảo hơn cho việc định danh có thể so sánh thời gian lƣu của chất phân tích và chất chuẩn trên hai pha tĩnh khác nhau.
2.7.1.2. Định lƣợng.
Diện tích mũi sắc ký trên sắc ký đồ tỉ lệ với nồng độ của chất từ đó có thể tính đƣợc chính xác nồng độ của mỗi thành phần trong hỗn hợp. Chúng tôi sử dụng phƣơng pháp nội chuẩn để định lƣợng:
So sánh gián tiếp mũi sắc ký của chất phân tích theo diện tích mũi sắc ký của chất chuẩn thông qua diện tích của chất nội chuẩn từ đó suy ra nồng độ của chất phân tích trong mẫu.
Chất nội chuẩn đƣợc sử dụng cần có các tính chất:
- Có lý tính và hoá tính gần giống với chất cần phân tích.
- Không hiện diện trong thành phần mẫu.
- Có thời gian lƣu gần với các chất cần phân tích nhƣng phải tách hoàn toàn khỏi chất phân tích.
- Cƣờng độ tín hiệu đo tƣơng đƣơng với chất cần phân tích.
- Không tham gia phản ứng với chất phân tích.
Phƣơng pháp nội chuẩn có ƣu điểm là cho kết quả chính xác hơn, tránh đƣợc sai số do thể tích mẫu đƣa vào máy sắc ký không đều nhau. Tuy nhiên cần phải chọn đƣợc chất nội chuẩn phù hợp với điều kiện phân tích.
Phƣơng trình đƣờng chuẩn trong phƣơng pháp nội chuẩn:
b kC A A x IS x
Ax, AIS: diện tích của chất cần phân tích và chất nội chuẩn
Cx: nồng độ của chất cần phân tích.
2.7.2. Khảo sát giới hạn phát hi n (LOD) và giới hạn định lƣợng (LOQ) của phƣơng pháp
độ nhỏ nhất của chất phân tích mà có tín hiệu sắc ký lớn gấp 3 lần tín hiệu đƣờng nền. (LOD – xác định theo quy tắc 3 (xicma) Đây là một thông số đặc trƣng cho độ nhạy của phƣơng pháp.
LOD = tín hiệu chiều cao pic/nhi u đƣờng nền 3.
Giới hạn định lƣợng (LOQ: limit of quantitation) là nồng độ nhỏ nhất đo đƣợc của phƣơng pháp, đó là nồng độ tối thiểu của một chất trong một nền mẫu xác định mà thiết bị có thể đo đúng đƣợc với một RSD% quy định, thƣờng LOQ là nồng độ chất phân tích mà cho tín hiệu gấp 10 lần tín hiệu đƣờng nền