2. Nhiệm vụ của đề tài
4.2.Xác định cấu trúc hóa học của hợp chất 2: Cholest-7-en-3β,5,6β-triol
Hợp chất 2 cũng được dự đoán là một hợp chất dạng steroit khi hiện
bằng thuốc thử axit sunfuric 10%. Kết quả phân tích phổ proton 1
H, cacbon
13C, DEPT, HSQC cũng cho thấy đây là một hợp chất steroit với 27 tín hiệu
cacbon. Phổ 1
H-NMR cho thấy tín hiệu của 5 nhóm metyl trong đó có 2 nhóm
metyl gắn với cacbon bậc 4 tại H 0,53 s (H-18); 0,89 brs (H-19) và 3 nhóm
metyl gắn với cacbon bậc 3 tại H 0,84 doublet với hằng số J =2,5 Hz (H-27);
0,85 doublet với hằng số J =2,5 Hz (H-26); 0,90 brs (H-21); tín hiệu của 2
nhóm oximetin tại H 3,37 m (H-6); 3,75 m (H-3). Ngoài ra còn xuất hiện một
tín hiệu proton của một nối đôi thế 3 lần cộng hưởng tại H 5,08 brs (H-7).
Hình 4.2.1. Phổ 1
Phổ 13
C-NMR và phổ DEPT cho thấy sự có mặt của 27 nguyên tử C trong đó có 5 nhóm metyl cộng hưởng tại C 11,78 (C-18); 17,64 (C-19); 18,63 (C-21); 22,34 (C-26); 22,62 (C-27); 10 nhóm metylen cộng hưởng tại
C 21,29 (C-15); 22,62 (C-23); 23,26 (C-11); 27,40 (C-16); 31,14 (C-1); 32,41 (C-2); 35,54 (C-22); 38,88 (C-24); 38,96 (C-4); 40,16 (C-12); 8 nhóm
metin cộng hưởng tại C 27,35 (C-25); 35,54 (C-20); 42,22 (C-9); 54,06 (C-
14); 55,54 (C-17); 119,39 (C-7) trong đó xuất hiện tín hiệu của 2 nhóm
oximetin tại C 65,92 (C-3) và 72,10 (C-6). 4 tín hiệu của cacbon bậc 4 cộng
hưởng tại C 36,59 (C-10); 43,04 (C-13); 139,67 (C-8) và có một tín hiệu cacbon bậc 4 cộng hưởng tại C 74,42(C-5), sự chuyển dịch của tín hiệu cacbon này về phía vùng trường yếu hơn gợi ý sự có mặt của một nhóm hydroxyl liên kết trực tiếp với cacbon này. Ngoài ra còn có tín hiệu của 1 nối đôi thế 3 lần tại C 119,39 (C-7) và C 139,67 (C-8).
Hình 4.2.2. Phổ 13
Hình 4.2.3. Phổ DETP của hợp chất 2
Từ bảng số liệu nhận thấy giá trị tín hiệu cacbon từ C-20 đến C-27 của 2 khá phù hợp với các tín hiệu cacbon của 1 ở trên chứng tỏ hợp chất 1 và 2 có cùng một dạng mạch nhánh.
So sánh các dữ liệu phổ NMR của 2 với các hợp chất có cấu trúc tương tự có thể gợi ý 2 là 3β,5,6β-triolcholest-7-en. Tuy nhiên, không có tài liệu nào công bố đầy đủ các số liệu phổ NMR của hợp chất này. Do đó, kết hợp so
sánh số liệu phổ của hợp chất 2 với 2 hợp chất có phần cấu trúc tương tự là
hợp chất 1 và hợp chất 3β,5α,6β-triolcholest-7-en-24-methylene. Kết quả cho
thấy tại các phần có cấu trúc tương tự thì số liệu phổ thu được là hoàn toàn phù hợp (bảng 4.2).
Hình 4.2.4. Cấu trúc hóa học của 2 hợp chất tham khảo
Cấu trúc của hợp chất 2 được khẳng định thêm dựa trên kết quả phân
tích phổ HSQC, HMBC. Proton H-7 xuất hiện tương tác HMBC với cacbon C-6, C-9 và C-14; proton của nhóm methyl CH3-18 xuất hiện tương tác với cacbon C-12, C-13, C-14 và C-17; proton của nhóm methyl CH3-19 có sự tương tác với các tín hiệu cacbon C-1, C-5, C-9 và C-10; tín hiệu proton của
nhóm methyl CH3-21 tương tác với cacbon C-17, C-20 và C-22; proton của 2
nhóm methyl CH3-26 và CH3-27 có sự tương tác với cacbon C-24, C-25, C-26
Hình 4.2.6.Phổ HMBC của hợp chất 2
Hình 4.2.7. Các tƣơng tác HMBC chính của 2
Qua đây có thể kết luận hợp chất 2 chính là 3β,5,6β-triolcholest-7-en với công thức phân tử C27H46O3 tương ứng với số khối M = 418.
Bảng 4.2. Số liệu phổ NMR của hợp chất 2 và chất tham khảo C δC1 δC2 δCa. c DEPT δHc. d (J, Hz) HMBC (HC) 1 31,8 - 31,14 CH2 2 34,0 - 32,41 CH2 3 68,4 - 65,92 CH 3,75 m 4 40,9 - 38,96 CH2 5 77,0 - 74,42 C 6 74,4 - 72,10 CH 3,39 m 7 119,2 - 119,39 CH 5,08 brs 6, 9, 14 8 143,8 - 139,67 C 9 44,5 - 42,22 CH 10 38,2 - 36,59 C 11 23,0 - 23,26 CH2 12 40,6 - 40,16 CH2 13 44,9 - 43,04 C 14 55,9 - 54,06 CH 15 24,0 - 21,29 CH2 16 28,7 - 27,40 CH2 17 57,6 - 55,54 CH 18 12,4 - 11,78 CH3 0,53 s 12,13,14,17 19 18,8 - 17,64 CH3 0,89 brs 2, 5, 9, 10 20 - 35,8 35,54 CH 21 - 18,96 18,63 CH3 0,90 brs 17, 20, 22 22 - 36,28 35,54 CH2 23 - 23,92 22,62 CH2 24 - 39,58 38,88 CH2 25 - 28,09 27,35 CH 26 - 22,64 22,34 CH3 0,85 (d, J = 2,5 Hz) 24,25,27 27 - 22,88 22,62 CH3 0,84 (d, J = 2,5 Hz) 24, 25, 26
aĐo trong CDCl3&CD3OD, b125 MHz, c500 MHz,d DMSO-d6 *C 3β-hydroxycholest-5-en-7-one,
KẾT LUẬN
Khóa luận tốt nghiệp với đề tài: “Nghiên cứu phân lập các steroit của
loài hải miên Mycale plumose” đã thu được các kết quả sau:
1, Bằng phương pháp sắc ký cột nhồi chất hấp phụ Silica gel pha thường và sắc kí lớp mỏng điều chế đã phân lập được hai hợp chất steroit từ
hải miên Mycale plumose.
Hợp chất 1: 3β-Hydroxycholest-5-en-7-one
Hợp chất 2: Cholest-7-en-3β,5,6β-triol
2, Cấu trúc của các hợp chất này được xác định nhờ phương pháp phổ hiện đại, bao gồm: phổ cộng hưởng từ hạt nhân một chiều (1
H-NMR, 13C-
NMR, DETP 135, DETP 90), phổ cộng hưởng từ hạt nhân hai chiều (HSQC, HMBC) và các dữ liệu phổ đã được công bố.
Hợp chất 1:
3β-Hydroxycholest-5-en-7-one
Hợp chất 2:
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt
[1] Châu Văn Minh, Phan Văn Kiệm, Nguyễn Hải Đăng, (2007), "Các hợp chất có hoạt tính sinh học từ sinh vật biển", Nhà xuất bản Khoa học và Kĩ thuật Hà Nội.
[2] Phan Văn Kiệm, Phạm Hải Yến, Hoàng Lê Tuấn Anh, Châu Văn Minh, Đan Thị Thúy Hằng, Nguyễn Thị Cúc, Dương Thị Hải Yến, Dương Thị
Dung, (2012), " Các hợp chất sterol phân lập từ loài hải miên Haliclona
subarmigera", Tạp chí hóa học, T. 50(3) 365-368.
[3] Phan Văn Kiệm, Hoàng Lê Tuấn Anh, Phạm Hải Yến, Châu Văn Minh, Đan Thúy Hằng, Nguyễn Thị Cúc, Dương Thị Hải Yến, Dương Thị
Dung, Nguyễn Xuân Nhiệm, Bùi Hữu Tài, Trần Hồng
Quang, (2012), '' Các hợp chất steroit phân lập từ loài hải miên Mycale
plumose", Tạp chí hóa học, T.50(6) 737-741.
Tài liệu tiếng anh
[4] Maysayosh Arai, Shunsuke Ishida, Andi Setiawan, Motomasa Kobayashi (2009), “ Haliclonacyclamines, Tetracyclic, Alkylpiperidine, Alkaloids, as Anti-dormant, Mycobacterial substances from a marine sponge of
Haliclona sp.”, Chem. Parm. Bul, 57(10) 1136 - 1138.
[5] Ru-Ping Wang, Hou-Wen Lin, Ling-zhi Li, Pin-Yi Gao, Ying Xu, Shao-
Jiang Song (2012), “Monoindole alkaloids from a marine sponge Mycale
fibrexilis”, Biochemical Systematics and Ecology, 43(2012) 210 – 213.
[6] Liu R., Cui C. B., Duan L., Gu Q. Q., Zhu W. M. (2005), “Potent in vitro
anticancer activity of metacycloprodigiosin and undecylprodigiosin from
a sponge-derived actinomycete Saccharopolyspora sp. nov..”, Arch
[7] Mar a J. O., Eva Z., M. Carmen S., Javier S., Carballo J. L (2004),
“Structure and cytotoxicity of new metabolites from the sponge Mycale
cecilia”. Tetrahedron, 60(11), 2517-2524.
[8] Peter T. N., John W. B., Murray H. G. M (1991), “Pateamine: a potent
cytotoxin from the New Zealand Marine sponge Mycale sp.”,
Tetrahedron Letters, 32(44), 6411-6414.
[9] P. K. Agrawal (1992), “ NMR spectrosccopy in the structural elucidation of oligosaccharides and glycoside”, Phytochemistry, Vol. 31, 3307 – 3330.
[10] Dictionary of Natural Products on DVD, version 18.1, Copyright® 1982-2009 CRC Press.
[11] Cannell RJP. Natural Products Isolation (1998).
[12] Yong-Cheng Ning. Structure identification of organic compounds with
spectroscopic techniques. WILEY-VCH (2005).
[13] Maria I., Luigi M., Raffaele R. (1988), “Polar steroids from the marine scallop Patinopecten yessoensis”, Journal of Natural Products, 51(6), 1098-1103.
[14] Radhika, p.; Cabeza, M.; Bratoeff, E.; Garcia, G. (2004), “5α-Reductase inhibition activity of steroids isolated from marine soft corals”, Steroids, 69(7), 439-444.
[15] Simon A, Toth G, Liktor-Busa E, Kele Z, Takacs M, Gergely A, Bathori
M. (2007) Three new steroids from the roots of Serratula wolffii.
Steroids, 72, 751-755.
[16] Zsuzsa Szendi, Peter Forgo, Frederick Sweet (1995) “ Complete 1H and
13