Đun hồi lưu, t0 (150-1600C),6-12h
Hình 3.11. Sơ đồ tổng hợp N-phthaloyl-3’,5’dinitrotyrosin
Tiến hành: Chuẩn bị dụng cụ bao gồm: một bình cầu 2 cổ 250ml có nút mài, một pipet chia vạch 10ml, quả bóp, một đũa thủy tinh, một que gãi, máy khuấy từ
có gia nhiệt, một con khuấy từ, một nhiệt kế, cân kỹ thuật và hệ thống sinh hàn thích hợp. Cốđịnh bình cầu chứa con khuấy từ và hệ thống sinh hàn lên giá đỡ. Đầu tiên, cân 5,0g anhydrid phthalic (33,75mmol) và 9,1g 3’-nitrotyrosin (33,56mmol), cho vào bình cầu 2 cổ và thêm 50ml acid acetic đặc (873,43mmol), lắp bình cầu với hệ thống sinh hàn thich hợp. Tiến hành đun hồi lưu trong 12 giờ.
Theo dõi tiến triển phản ứng bằng sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi là n-buthanol: acid acetic: nước (9: 2: 2,5) và hiện màu bằng đèn tử ngoại ở bước sóng 254nm. Dưới đây là hinh ảnh SKLM minh họa (với 1 và 3 là nguyên liệu ban đầu và 2 là hỗn hợp phản ứng):
Hình 3.12. Hình ảnh theo dõi phản ứng bằng SKLM của phản ứng tạo chất V
Xử lý hỗn hợp phản ứng: Sau khi phản ứng kết thúc, bình cầu được để nguội về nhiệt độ phòng, lọc lấy dịch và kết tinh cũng xuất hiện dần, hòa tan trong ethanol 960 với thể tích vừa đủ, sau đó cho 3,0g than hoạt để tẩy màu (vừa đun vừa lắc), lọc lấy dịch tiếp, lấy dịch này cất quay chân không đến kiệt, hòa tan trong ethanol 960 để kết tinh lại (them ít nước cất vào nếu chậm kết tinh lại), sau đó để trong tủ lạnh 2 giờ, tiến hành lọc lấy tủa bằng phễu Buchner có nối sẵn với bộ phận hút chân không và rửa tủa bằng nước cất với thể tích vừa đủ. Sấy khô dưới đèn hồng ngoại và đem cân.
Kết quả:
- Thu được 7g sản phẩm.
- Cảm quan : Bột màu vàng.
- Độ tan: Không tan trong nước và dichloromethan, tan trong ethanol 960, tan tốt trong cồn nóng và aceton.
- Nhiệt độ nóng chảy: 2080C- 2100C
- Hiệu suất: 51,70 %
- Độ tinh khiết: Kiểm tra bằng SKLM với hệ dung môi khai triển là n-buthanol: acid acetic: nước (9: 2: 2,5) thì cho một vết gọn, rõ, Rf = 0,80
Như vậy, chúng tôi đã tổng hợp được 5 chất. Sau đây là bảng tóm tắt kết quả tổng hợp hóa học:
Bảng 3.1. Tóm tắt kết quả tổng hợp hóa học STT Chất CTCT Cảm quan tonc(oC) Hiệu suất (%) 1 I tinh thể màu trắng 102-103 56,04 2 II tinh thể màu vàng nhạt 113-115,5 72,70 3 III bột màu trắng 161-164 85,71 4 IV bột màu vàng nhạt 220-223 83,33 5 V bột màu vàng 208-210 51,70
3.4. Kiểm tra độ tinh khiết của các dẫn chất tổng hợp được
Sau khi tổng hợp được, chúng tôi đã tiến hành kiểm tra độ tinh khiết của các chất bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng và đo nhiệt độ nóng chảy như sau:
• SKLM được tiến hành trên bản nhôm tráng sẵn silicagel Merck 70-230 mesh, quan sát dưới đèn tử ngoại ở bước sóng 254 nm.
- Dung môi hòa tan: Ethanol hay aceton.
- Hệ dung môi khai triển là dicloromethan: methanol (9: 1) và n-buthanol: acid acetic: nước (9: 2: 2,5).
Kết quả thu được trên sắc ký đồđối với hệ dung môi triển khai trên đều thấy một vết rõ, gọn, không có vết phụ, Rf khác biệt khi soi dưới ánh sáng đèn tử ngoại có bước sóng 254nm.
• Đo nhiệt độ nóng chảy bằng máy đo nhiệt độ nóng chảy EZ-Melt: 5 chất sau khi tinh chếđều có dạng chất rắn, được sấy khô và đo nhiệt độ nóng chảy. Giá trị Rf và nhiệt độ nóng chảy (t°nc) của các chất được được tóm tắt trong bảng 3.2
Bảng 3.2. Giá trị Rf và nhiệt độ nóng chảy (t°nc) của các chất tổng hợp được:
Chất Hệ dung môi khai triển Rf t°nc (°C) I Dicloromethan: methanol (9:1) 0,82 102-103
II Dicloromethan: methanol (9:1) 0,91 113-115,5
III n-buthanol: acid acetic: nước (9:2:2,5) 0,89 161-164
IV n-buthanol: acid acetic: nước (9:2:2,5) 0,80 220-223
V n-buthanol: acid acetic: nước (9:2:2,5) 0,80 208-210
Nhận xét: -Với hệ dung môi triển khai (9: 1), các chất tổng hợp được có vết gọn, rõ trên bản sắc ký.
+ nhiệt độ nóng chảy của chất I có khoảng dao động hẹp (≤10C). Như
vậy, có thể kết luận sơ bộ chất tổng hợp được là tinh khiết.
+ nhiệt độ nóng chảy của chất II có khoảng dao động 2,50C. Như vậy, có thể kết luận sơ bộ chất tổng hợp được là tinh khiết.
- Với hệ dung môi triển khai (9: 2: 2,5), các chất tổng hợp được có vết gọn, rõ trên bản sắc ký.
+ nhiệt độ nóng chảy của chất III, IV và V có khoảng dao động
1-30C. Như vậy, có thể kết luận sơ bộ các chất tổng hợp được là khá tinh khiết.
3.5. Xác định cấu trúc của các chất tổng hợp được
Để xác định cấu trúc của các chất tổng hợp được, chúng tôi đã tiến hành phân tích phổ hồng ngoại (IR), phổ khối lượng phân tử (MS) và phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (1H-NMR).