Đun hồi lưu, t0 (150-1600C),6-12h
Hình 3.9. Sơđồ tổng hợp N-phthaloyl-3’-nitrotyrosin
Tiến hành: Chuẩn bị dụng cụ bao gồm: một bình cầu 2 cổ 250ml có nút mài, một pipet chia vạch 10ml, quả bóp, một đũa thủy tinh, một que gãi, máy khuấy từ có gia nhiệt, một con khuấy từ, một nhiệt kế, cân kỹ thuật và hệ thống sinh hàn thích hợp. Cốđịnh bình cầu chứa con khuấy từ và hệ thống sinh hàn lên giá đỡ. Đầu tiên, cân 0,5g anhydrid phthalic (3,37mmol) và 0,76g 3’-nitrotyrosin (3,37mmol), cho vào bình cầu 2 cổ và thêm 5ml acid acetic đặc (87,34mmol), lắp bình cầu với hệ thống sinh hàn thich hợp. Tiến hành đun hồi lưu trong 6 giờ.
Theo dõi tiến triển phản ứng bằng sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi là n-buthanol: acid acetic: nước (9: 2: 2,5) và hiện màu bằng đèn tử ngoại ở bước sóng 254nm. Dưới đây là hình ảnh SKLM minh họa (với 1 và 3 là nguyên liệu ban đầu và 2 là hỗn hợp phản ứng):
Hình 3.10. Hình ảnh theo dõi phản ứng bằng SKLM của phản ứng tạo chất IV
Xử lý hỗn hợp phản ứng: Sau khi phản ứng kết thúc, bình cầu được để nguội về nhiệt độ phòng, lọc lấy dịch và kết tinh cũng xuất hiện dần, hòa tan trong ethanol 960 với thể tích vừa đủ, sau đó cho 0,3g than hoạt để tẩy màu (vừa đun vừa lắc), lọc lấy dịch tiếp,lấy dịch này cất quay chân không, hòa tan trong ethanol 960 để kết tinh lại (thêm ít nước cất vào nếu chậm kết tinh lại), sau đó để trong tủ lạnh 2 giờ, tiến hành lọc lấy tủa bằng phễu Buchner có nối sẵn với bộ phận hút chân không và rửa tủa bằng nước cất với thể tích vừa đủ. Sấy khô dưới đèn hồng ngoại và đem cân.
Kết quả:
- Thu được 1g sản phẩm.
- Cảm quan : Bột màu vàng nhạt
- Độ tan: Không tan trong nước và dichloromethan, tan trong ethanol 960, tan tốt trong cồn nóng và aceton.
- Nhiệt độ nóng chảy: 2200C- 2230C
- Hiệu suất: 83,33 %
- Độ tinh khiết: Kiểm tra bằng SKLM với hệ dung môi khai triển là n-buthanol: acid acetic: nước (9: 2: 2,5) thì cho một vết gọn, rõ, Rf = 0,80