2.3.3.1. Kích thước tiểu phân và phân bố kích thước của tiểu phân Px.
Nguyên tắc đo KTTP và phân bố kích thước được trình bày ở phần b mục 2.3.1.1. Hòa loãng 0,1 g gel trong 20 ml nước cất. Đo KTTP bằng máy đo kích thước tiểu phân với các thông số nhiệt độ, chỉ số khúc xạ được trình bày ở phần b mục 2.3.1.1. 2.3.3.2. pH.
Đo pH bằng các phương pháp:
+ Đo pH của gel bằng chỉ thị pH, so màu với bảng màu chỉ thị.
+ Hòa loãng 25 mg gel trong 25 ml nước cất, đo pH bằng máy đo pH. 2.3.3.3. Độ nhớt.
Theo dõi độ nhớt của gel trong thời gian 3 tuần ở điều kiện phòng thí nghiệm. Nguyên tắc của phương pháp: theo nguyên tắc đo độ nhớt của nhớt kế quay. Kim đo độ nhớt được gắn với trục máy và nhúng chìm vào chất lỏng cần đo độ nhớt. Cho kim quay với tốc độ xác định, độ nhớt càng lớn thì sức cản càng mạnh khiến dây xoắn gắn giữa kim và trục máy càng chịu một lực xoắn lớn. Lực xoắn đo được tỉ lệ với độ nhớt.
Độ nhớt được đo ở 270C. Sử dụng kim số 64. Tốc độ quay 30 vòng/phút. 2.3.3.4. Định lượng Px trong gel.
Phương pháp: đo quang phổ UV-VIS so sánh với mẫu chuẩn ở bước sóng 254 nm. Mẫu thử: cân khoảng 0,1 g gel hòa loãng trong 25 ml methanol, lọc kết tủa qua màng lọc cellulose acetat 0,45 µm.
Mẫu chuẩn: hòa tan Px chuẩn trong methanol để được Cc chính xác khoảng 10 µg/ml. Hàm lượng piroxicam trong gel được tính bằng công thức:
K =
Rút gọn K = 2500 (%)
K : Hàm lượng piroxicam trong gel (%). Dt , Dc : Mật độ quang mẫu thử, mẫu chuẩn. Cc : Nồng độ mẫu chuẩn (g/ml).
m : Khối lượng gel (g).
Thí nghiệm đượclặp lại 3 lần, lấy kết quả trung bình.
2.3.3.5. Đánh giá khả năng giải phóng dược chất qua giác mạc thỏ bóc tách.
So sánh khả năng giải phóng dược chất qua giác mạc thỏ của gel chứa Px nano và gel chứa Px thô cùng hàm lượng dược chất. Thí nghiệm sử dụng hệ thống giải phóng thuốc qua màng Hanson Research với các điều kiện cụ thể:
- Môi trường khuếch tán: dung dịch NMNT có thành phần như phần c mục 2.3.1.2 - Nhiệt độ môi trường khuếch tán: 37,5 0C.
- Tốc độ khuấy: 400 vòng/ phút
- Lấy mẫu: 2 giờ đầu hút mẫu sau mỗi 30 phút. 3 giờ tiếp theo hút mẫu sau mỗi 1 giờ. Lượng mẫu hút: 1 ml, bổ sung môi trường khuếch tán sau khi hút mẫu. - Giác mạc thỏ bóc tách: Bóc tách giác mạc thỏ từ thỏ trắng cân nặng từ 2,5 – 3
kg. Thời gian từ khi thỏ bị giết đến khi bóc tách giác mạc không quá 2 giờ. Dùng các dụng cụ lấy mắt, cắt bỏ các mô xung quanh, loại bỏ thủy tinh thể và các phần trong mắt, giác mạc được ngâm trong nước muối sinh lí đến khi sử dụng.
- Lượng mẫu thử: 0,4 g gel.
- Thể tích môi trường khuếch tán: Do nhấn chìm giác mạc mắt thỏ được phủ gel tra mắt nên thể tích còn lại của bình khuếch tán Franz nhỏ hơn 7 ml. Coi phần
giác mạc chứa thuốc là hình bán cầu, bán kính r = 0,5 cm (bán kính ngăn nhận của bình khuếch tán Franz)
Thể tích phần nhấn chìm: = 0,26 ml
Vậy thể tích môi trường trong bình khuếch tán Franz là: 7- 0,26 = 6,74 ml - Định lượng piroxicam giải phóng bằng phương pháp HPLC với các điều kiện: + Pha động: Methanol - dung dịch đệm (60 : 40).
+ Dung dịch đệm: Trộn dung dịch (1) chứa 5,35 g dinatri hydrophosphat trong 100 ml nước vào dung dịch (2) chứa 7,72 g acid citric trong 400 ml nước, sau đó pha loãng bằng nước thành 1000 ml.
+ Dung dịch chuẩn: Cân chính xác khoảng 25 mg Px hòa tan trong 50 ml methanol 0,01N hydroclorid. Pha loãng đến nồng độ 20 µg/ml bằng methanol 0,01N hydroclorid.
+ Điều kiện sắc ký:
Cột C18 (25 cm, 4,6 µm).
Detector quang phổ tử ngoại có bước sóng 254 nm. Thể tích tiêm: 20 l.
Tốc độ dòng: 1 ml/phút.
- Nồng độ Px trong môi trường khuếch tán tại thời điểm t: Ct =
- Lượng Px Giải phóng từ các mẫu gel tại thời điểm t: Qt = Ct V + ∑
Qt : Tổng lượng Px đã giải phóng tại thời điểm t V: thể tích môi trường khuếch tán = 6.74 ml
: Thể tích mỗi lần lấy mẫu = 1ml.
Ci, Ct: Nồng độ Px trong môi trường khuếch tán tại thời điểm t=I và thời điểm t Sc , St: Diện tích pic mẫu chuẩn, mẫu thử.
PHẦN 3: KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM.