Nghiên cứu ảnh hưởng của thành phần môi trường tới chất lượng

Một phần của tài liệu Nghiên cứu nhân giống in vitro một số dòng lan huệ lai (hispeastrum equestre) (Trang 52)

chồi in vitro

Thành phần môi trường ảnh hưởng trực tiếp tới chất lượng nuôi cấy mô tế bào thực vật. Trong đó, chất hữu cơ bổ sung như nước dừa hay hàm lượng

đường là yếu tố quan trọng. Những hợp chất tự nhiên, acid amin, phytohormone có trong nước dừa rất cần thiết đối với cây in vitro khi sống dị

dưỡng hay khả năng tích trữ dinh dưỡng trong củ đối với Lan huệ. Vì vậy, chồi in vitro được đưa vào môi trường MS bổ sung đường hoặc nước dừa với các dải nồng độ khác nhau.

Thí nghim 7. nh hưởng ca hàm lượng nước da ti cht lượng chồi in vitro

Nước dừa là một hợp chất tự nhiên được dùng nhiều trong nuôi cấy mô tế bào thực vật. Thành phần nước dừa có chứa nhiều các amino acid tự do, amino acid dạng liên kết có trong protein và peptid, acid hữu cơ, saccaroza, ARN, ADN. Ngoài ra, nước dừa còn chứa các hợp chất quan trọng với các tế

bào nuôi cấy phân lập như: myoinositol, các hợp chất có hoạt tính auxin và cytokinin dạng glycoside. Nhiều nghiên cứu cho thấy khi bổ sung hàm lượng nước dừa nhất định vào môi trường nuôi cấy sẽ có tác dụng tốt đến sinh trưởng và phát triển của chồi. Khi tiến hành các thí nghiệm nhân nhanh này, chúng tôi nhận thấy hệ số nhân chồi đã được cải thiện đáng kể nhưng chất lượng chồi chưa thật đẹp, khỏe. Do đó, nhằm nâng cao hơn nữa hệ số nhân chồi, đặc biệt là chất lượng củ in vitro to, khỏe và để tăng khả năng sinh trưởng và phát triển chồi trên môi trường tạo cây hoàn chỉnh, chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng nước dừa lên sự sinh trưởng và phát triển của chồi, củin vitro. Thí nghiệm được tiến hành trên môi trường nền MS + 30g/l Saccaroza + 6,5g/l agar, pH = 5.7. Kết quả thí nghiệm sau 4 tuần nghiên cứu được thể hiện qua bảng sau:

Hc vin Nông nghip Vit Nam – Lun văn Thc s Khoa hc Nông nghip Page 44

Bng 4.7. nh hưởng ca hàm lượng nước da ti cht lượng chồiin vitro sau 4 tun nuôi cy

ND

(ml/l)

Chiu cao cây (cm) S lá (Lá/cây) Đường kính c (mm)

H1 H3 H5 H12 H37 H85 H1 H3 H5 H12 H37 H85 H1 H3 H5 H12 H37 H85 0 1,32 1,83 1,50 1,64 1,28 1,34 1,41 1,79 2,36 1,82 1,56 1,34 2,64 2,85 4,69 3,00 2,88 2,78 20 1,96 2,44 2,19 2,44 2,28 2,06 1,62 1,70 3,42 2,10 2,03 1,98 3,00 3,72 5,52 3,22 3,26 3,87 40 2,88 3,88 2,70 3,00 3,44 2,84 1,94 2,00 3,60 2,46 2,56 2,12 3,26 3,50 5,55 4,44 5,68 4,21 60 4,12 5,38 4,40 4,22 4,22 3,98 2,24 2,10 2,57 3,44 3,66 4,00 5,12 5,21 7,80 5,68 6,66 5,44 80 3,56 4,47 3,38 3,26 3,22 3,66 2,04 1,95 2,46 3,84 3,04 3,62 3,86 4,64 5,80 5,02 6,00 5,34 LSD 5% 0,16 0,18 0,17 0,11 0,16 0,13 0,74 0,12 0,16 0,11 0,16 0,13 0,19 0,20 0,42 0,21 0,29 0,29 CV (%) 3,2 2,8 3,4 2,0 3,0 2,5 2,2 3,6 3,1 2,0 3,4 2,6 2,9 2,7 3,9 2,7 3,2 3,6

Bng 4.8. nh hưởng ca hàm lượng đường ti cht lượng chồiin vitro sau 4 tun nuôi cy

Saccaroza

(g/l)

Chiu cao cây (cm) S lá (Lá/cây) Đường kính c (mm)

H1 H3 H5 H12 H37 H85 H1 H3 H5 H12 H37 H85 H1 H3 H5 H12 H37 H85 0 1,62 1,8 1,18 1,71 1,88 1,42 1,12 1,55 1,20 1,34 1,21 1,40 3,06 3,08 4,14 3,07 3,00 3,08 20 2,31 3,60 1,51 2,06 2,43 2,00 1,86 2,12 1,67 1,82 1,62 1,72 3,12 3,07 5,19 4,21 3,21 3,24 40 3,62 3,42 1,71 2,88 3,26 2,66 1,92 2,40 2,00 2,09 1,90 1,94 3,84 4,66 5,70 5,00 4,33 3,80 60 4,38 4,05 2,20 4,00 3,98 3,24 2,26 1,76 2,28 2,66 2,44 2,08 5,66 5,92 6,07 5,46 7,64 4,32 80 5,12 5,49 3,81 3,33 3,32 4,20 2,59 2,40 2,62 2,42 2,08 2,66 5,20 5,28 8,18 5,95 5,21 5,96 LSD 5% 0,16 0,19 0,12 0,21 0,20 0,13 0,10 0,11 0,09 0,13 0,14 0,13 0,23 0,21 0,41 0,21 0,27 0,22 CV (%) 2,6 2,9 3,3 4,1 3,7 2,6 3,0 2,9 2,5 3,3 4,2 3,5 3,1 2,7 4,1 2,4 3,5 3,1

Hc vin Nông nghip Vit Nam – Lun văn Thc s Khoa hc Nông nghip Page 45 Bảng 4.7 cho thấy, khi tăng dần hàm lượng nước dừa từ 0 – 80 ml/l nước dừa thì chiều cao và đường kính củ tăng và đạt chất lượng củ tốt nhất ở

hàm lượng 60ml/l nước dừa. Đặc biệt, đối với hầu hết các dòng lai, đường kính củ cũng như chất lượng chồi đều tăng lên và đạt cao nhất ở công thức 4 (60ml/l nước dừa). Cụ thể

Đối với dòng H3: Chiều cao cây tăng từ 1,83 – 5,38 cm, đường kính củ

tăng từ 2,85 – 5,21 mm với số lá dao động từ 1,70 – 2,10 lá/cây. Chiều cao cây và đường kính củ đạt cao nhất khi sử dụng môi trường có hàm lượng nước dừa là 60 ml/l.

Cũng với hàm lượng nước dừa là 60 ml/l thì các dòng còn lại đều đạt chiều cao cây và đường kính cao nhất.

Kết luận: Công thức 4 (hàm lượng nước dừa là 60ml/l) là công thức có hiệu quả nhất trong việc nâng cao chất lượng chồi và củ nhỏin vitro.

Thí nghim 8. nh hưởng ca hàm lượng đường ti cht lượng chồi in vitro

Nồng độ đường saccaroza với các nồng độ khác nhau được đánh giá là có ảnh hưởng rõ rệt tới chất lượng củ, đường kính củ và phản ứng tạo củ của nhóm cây thân hành. Các chồi hoa Lan huệ sau khi đã tạo ra sẽđược tách và cấy vào môi trường MTN: MS + 6,5g agar/l + 60ml/l ND + Saccaroza với các nồng độ khác nhau. Kết quả thí nghiệm được trình bày qua bảng 4.8.

Kết quả từ bảng 4.8 cho thấy nồng độ đường có ảnh hưởng rõ rệt tới chất lượng củ cũng như chồi in vitro cây hoa Lan huệ. Nồng độ đường cho

đường kính củ lớn nhất và chất lượng chồi đẹp nhất ở hầu hết các dòng lai là bổ sung từ 60-80g/l.

Nhân nhanh in vitro dòng hoa Lan huệ lai bị ảnh hưởng rõ rệt bởi hàm lượng đường. Trong thí nghiệm này khi ta tăng hàm lượng đường từ 0-80g/l thì chiều cao chồi, số lá cũng nhưđường kính củ của các dòng lai đều tăng lên

Hc vin Nông nghip Vit Nam – Lun văn Thc s Khoa hc Nông nghip Page 46

Kết lun: Dòng lai H1, H3, H37: B sung 60g/l saccaroza là tt nht cho c

nh in vitro đạt kích thước c ln lượt là 5,66cm; 5,92; 7,64cm.

Dòng lai H5, H12, H85: B sung 80g/l saccaroza là tt nht cho c nh in vitro đạt kích thước c ln lượt là 8,18cm; 5,95 cm; 5,96cm

Dòng lai H3 Dòng lai H5 Dòng lai H1 Dòng lai H12 Dòng lai H37 Dòng lai H85

Hình 4.4. nh hưởng ca hàm lượng nước da và hàm lượng đường ti cht lượng cin vitro sau 4 tun nuôi cy

Hc vin Nông nghip Vit Nam – Lun văn Thc s Khoa hc Nông nghip Page 47

4.4. Giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh

Bộ rễ là cơ quan quan trọng nhất đối với cây trồng. Trong nuôi cấy mô, một cây in vitro sau khi kết thúc giai đoạn sống dị dưỡng chuyển sang giai

đoạn sống tự dưỡng trong tự nhiên cần phải có bộ rễ khỏe, hoàn chỉnh giúp cây có khả năng hút nước và dinh dưỡng tốt, làm tiền đề cho sự sinh trưởng và phát triển sau này.

Chính vì vậy giai đoạn kích thích sự ra rễ của các chồi là giai đoạn quan trọng và không thể thiếu. Khi kết thúc giai đoạn nhân nhanh chúng tôi

đã tạo ra được số lượng chồi đồng nhất và khỏe mạnh. Các chồi này được đưa vào giai đoạn kích thích ra rễ. Trong môi trường này bộ rễ phát triển hoàn hảo hơn, đảm bảo tỷ lệ sống và khả năng sinh trưởng cao khi đưa ra ngoài vườn

ươm.

Khi các chồi đạt tiêu chuẩn cho ra rễ, có chiều cao 3 - 5 cm, chồi mập khỏe, lá to, xanh thì được chuyển sang các môi trường ra rễ để tạo cây hoàn chỉnh.

Thí nghim 9: Nghiên cu nh hưởng ca α-NAA đến kh năng ra r và cht lượng r

Các thí nghiệm được tiến hành trên môi trường nền (MTN): MS + 30g/l saccaroza + 60ml/l ND + 6,5g/l agar.

Axit α-naphtylaxetic(α-NAA) được tổng hợp chủ yếu ở đỉnh ngọn chồi và từđó được vận chuyển xuống dưới (hướng gốc), là một auxin có tác dụng tốt đến các quá trình sinh trưởng của tế bào, hoạt động của tầng phân sinh, hiện tượng ưu thế ngọn, tính hướng của thực vật, sự sinh trưởng của quả và tạo ra quả không hạt, và có tác dụng đặc biệt trong sự hình thành rễ. Nhưng nếu kích thích với hàm lượng quá cao, tác dụng quá mạnh sẽ xảy ra hiện tượng ức chế ngược trở lại, lúc này auxin sẽ trở thành chất ức chế.

Môi trường ra rễ thường được bổ sung các auxin để kích thích và nâng cao khả năng ra rễ cũng như chất lượng rễ. Trong đó, α-NAA là một auxin

Hc vin Nông nghip Vit Nam – Lun văn Thc s Khoa hc Nông nghip Page 48 điển hình được dùng nhiều và cho hiệu quả rất tốt ở nhiều đối tượng cây trồng. Chính vì vậy chúng tôi tiến hành nghiên cứu thí nghiệm có bổ sung nồng độα-NAA từ 0-2,0mg/l vào môi trường ra rễ nhằm khảo sát ảnh hưởng của α-NAA đến sự ra rễ của chồi hoa Lan huệ lai. Kết quả thí nghiệm được trình bày qua bảng 4.9 (sau 4 tuần)

Qua kết quả theo dõi, chúng tôi nhận thấy, ở công thức đối chứng tỉ lệ

mẫu ra rễ thấp hơn các công thức còn lại. Tỉ lệ mẫu ra rễ đạt cao nhất 100% và công thức ra rễ tốt nhất cho đa số các dòng lai là 2,0mg/l. Chỉ duy nhất đối với dòng lai H3, công thức ra rễ phù hợp là 1,5mg/l. Kết quả xử lý số liệu trung IRRISTART cho thấy số rễ/mẫu ở tất cả các dòng lai đều đạt trên 4,0 rễ/mẫu. Các rễđều to, mập và có màu trắng.

Như vậy, môi trường tốt nhất với thí nghiệm trên là:

Dòng lai H1, H5, H12, H37, H85: MS+ 2,0mg/l α-NAA cho khả năng ra rễ và chất lượng rễ tốt nhất.

Dòng lai H3: MS+1,5mg/l α-NAA cho khả năng ra rễ và chất lượng rễ

tốt nhất.

Thí nghim 10. nh hưởng ca than hot tính đến kh năng ra r cây Lan hu lai

Vai trò tích cực của than hoạt tính đã được chứng minh trong nhiều nghiên cứu trên các đối tượng khác nhau. Theo đó, than hoạt tính có tác dụng hấp thụ các chất màu, các hợp chất phenol, các sản phẩm trao đổi thứ cấp… Và đặc biệt, than hoạt tính làm thay đổi môi trường ánh sáng do làm cho môi trường sẫm màu, nên có thể kích thích sự hình thành và sinh trưởng của rễ

(Vũ Văn Vụ, 2006). Vì vậy, trong thí nghiệm này chúng tôi sử dụng than hoạt tính với các nồng độ khác nhau bổ sung vào môi trường MTN: MS + 30g/l saccaroza + 6,5g/l agar để xác định vai trò của than hoạt tính đối với sự ra rễ

Hc vin Nông nghip Vit Nam – Lun văn Thc s Khoa hc Nông nghip Page 49

Bng 4.9. nh hưởng ca α-NAAđến kh năng ra r các dòng Lan hu lai in vitro

α-NAA (mg/l) T l mu to r (%) S r/mu (r) Đặc đim r H1 H3 H5 H12 H37 H85 H1 H3 H5 H12 H37 H85 H1 H3 H5 H12 H37 H85 0 23,6 13,1 21,3 19,7 22,8 13,4 1,21 1,42 1,63 1,32 1,38 1,34 + + + + + + 0,5 33,1 35,3 41,4 37,9 33,2 39,1 2,31 2,32 2,78 2,45 2,28 2,21 + ++ + ++ + + 1,0 86,7 96,4 93,2 87,4 76,9 83,8 2,45 3,39 3,19 2,87 2,66 2,26 ++ ++ + ++ + ++ 1,5 100 100 96,3 100 99,6 100 3,19 4,10 3,07 3,92 3,09 2,98 ++ +++ ++ + ++ ++ 2,0 100 100 100 100 100 100 4,57 3,84 4,57 4,09 4,01 4,26 +++ ++ +++ ++ ++ +++ LSD 5% 0,16 0,23 0,20 0,20 0,19 0,24 CV (%) 3,2 4,2 3,6 3,7 4,1 5,0

Bng 4.10. nh hưởng ca than hot tính đến kh năng ra r các dòng Lan hu lai in vitro

C (g/l) H1 H3 T l mH5 u to rH12 H37 H85 (%) H1 H3 S rH5 /mu (rH12 H37 H85 ) H1 H3 ĐặH5 c đim rH12 H37 H85 0 23,6 13,1 21,3 19,7 22,8 13,4 1,21 1,42 0,91 1,32 1,38 1,34 + + + + + + 0,1 73,1 75,6 68,1 57,9 53,2 49,9 1,31 1,20 1,28 1,44 1,88 2,33 + ++ + ++ + + 0,3 84,7 83,6 83,6 86,7 86,6 83,8 1,56 1,13 1,22 2,87 1,66 2,42 ++ ++ + ++ + ++ 0,5 100 92,4 81,7 91,3 94,6 100 2,09 1,57 1,63 2,96 2,21 2,98 ++ ++ ++ +++ ++ +++ 0,7 88,3 84,9 87,8 77,4 88,1 100 2,57 1,69 1,79 2,65 2,73 2,56 +++ +++ +++ ++ +++ ++ LSD 5% 0,11 0,11 0,07 0,16 0,20 0,18 CV (%) 3,4 4,2 2,8 4,0 5,6 4,2

Ghi chú: +++: Tt (Rđẹp, mp, màu trng) ++: Trung bình (R màu trng, mnh)

Hc vin Nông nghip Vit Nam – Lun văn Thc s Khoa hc Nông nghip Page 50 Từ kết quả ở Bảng 4.10 chúng tôi nhận thấy tỷ lệ ra rễ ở các dòng lai chưa cao so với công thức bổ sung α NAA, tuy nhiên, chất lượng bộ rễ tăng lên đáng kể khi sử dụng than hoạt tính. Số rễ/chồi và chất lượng rễ đều lớn hơn so với công thức đối chứng.

Khi tăng nồng độ than từ 0,1-0,7g/l thì số rễ trung bình/chồi tăng dần ở

hầu hết các dòng lai và đạt số rễ cao nhất là 2.96 rễ/mẫu ở nồng độ 0,5g/l đối với dòng H12. Với nồng độ 0,7g/l là công thức tốt nhất đối với sự ra rễở các dòng Lan huệ còn lại: H1, H37, H85 đạt số rễ/mẫu lần lượt là 2,57; 2,73; 2,56 rễ/mẫu.

Như vậy, việc bổ sung than hoạt tính đã có tác động tích cực lên số

lượng rễ và chất lượng rễ. Khi theo dõi sự sinh trưởng và phát triển của cây chúng tôi nhận thấy cây từ các công thức có bổ sung than hoạt tính không những phát sinh rễ tốt và sự sinh trưởng và phát triển của cây đều tốt hơn rất nhiều so với công thức đối chứng (Bảng 4.10).

Hc vin Nông nghip Vit Nam – Lun văn Thc s Khoa hc Nông nghip Page 51

Dòng lai H3

Dòng lai H5

Hc vin Nông nghip Vit Nam – Lun văn Thc s Khoa hc Nông nghip Page 52

Dòng lai H37

Dòng lai H85

Dòng lai H1

Hình 4.5. Ảnh hưởng α-NAA của đến khả năng ra rễ và chất lượng rễ của sáu dòng lai hoa Lan huệ (Sau 4 tuần)

Hc vin Nông nghip Vit Nam – Lun văn Thc s Khoa hc Nông nghip Page 53

4.5. Giai đoạn vườm ươm

Thí nghim 11: Nghiên cu nh hưởng ca mt s loi giá th đến t l sng và sinh trưởng và phát trin ca cây Lan hu lai ngoài vườn ươm

Đây là giai đoạn cuối của quá trình nhân giống in vitro. Giai đoạn này có tính chất quyết định đến khả năng ứng dụng của kỹ thuật nhân giống vô tính in vitro trong nhân giống cây trồng.

Trong nuôi cấy in vitro, cây con sinh trưởng dưới điều kiện rất đặc biệt: Môi trường có ánh sáng thấp, độ ẩm cao và dinh dưỡng được kiểm soát. Trong khi điều kiện tự nhiên có ánh sáng cao, độẩm cao và dinh dưỡng khó kiểm soát. Do đó, khi chuyển cây con sang giai đoạn nuôi trồng trực tiếp ở

nhà lưới hoặc trong điều kiện tự nhiên thường có tỷ lệ chết cao.

Cây in vitro khi chuyển từ trạng thái dị dưỡng sang tự dưỡng phải chịu nhiều yếu tố tác động của ngoại cảnh như ánh sáng, nhiệt độ, độ ẩm không khí, sâu bệnh...sẽ ảnh hưởng không nhỏ tới sự sinh trưởng và phát triển của cây. Do đó xác định điều kiện tối ưu để ra cây cấy mô là điều vô cùng quan trọng và cần thiết. Trên cơ sởđó chúng tôi tiến hành ra cây với một số loại giá thể khác nhau.

Giá thể không chỉ là nơi để cây trồng bám rễđứng vững mà còn là nơi cung cấp nước và chất dinh dưỡng cần thiết cho cây. Giá thể chính là nơi tiếp xúc đầu tiên để cây trồng làm quen với môi trường tự nhiên. Điều này rất quan trọng với cây nuôi cấy mô vì chúng thường có bộ rễ yếu.

Giá thể là cách gọi chung cho tất cả các hỗn hợp của các vật liệu có thể

Một phần của tài liệu Nghiên cứu nhân giống in vitro một số dòng lan huệ lai (hispeastrum equestre) (Trang 52)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(110 trang)