Nhiều tác giả đã tổng kết rằng sự biệt hóa cơ quan thực vật in vitro là kết quả tác động qua lại giữa hai nhóm auxin và cytokinin. Tỷ lệ
auxin/cytokinin cao sẽ kích thích sự ra rễ, trái lại sẽ đẩy mạnh sự biệt hóa chồi, ở tỷ lệ trung bình thì hình thành mô sẹo. Để nghiên cứu nhân nhanh nhằm thu được các chồi có chất lượng tốt cho các giai đoạn tiếp theo, chúng tôi tiến hành nghiên cứu phối hợp giữa BAP, Kinetin và α-NAA, IBA với các nồng độ khác nhau.
Thí nghiệm 3. Ảnh hưởng của BA, kinetin và IBA đến khả năng phát sinh chồi từ vảy củđôi
Từ kết quả thí nghiệm trong Bảng 4.3 ta có nhận xét sau: Với cả 6 dòng Lan huệ H3, H5, H1, H12, H37, H85 ở công thức 2 (tổ hợp giữa 3,0mg/l BA, 1,0mg/l Kinetin và 0,25mg/l IBA) đều cho hiệu quả tái sinh cao, tỷ lệ số
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 35 chồi/mẫu và chiều cao chồi cao hơn so với đối chứng và tất cả các công thức còn lại. Ở công thức này, số chồi hình thành đạt cao nhất ở dòng H5 (3,56 chồi/mẫu), chiều cao chồi đạt cao nhất ở dòng H12 (13,33cm). Với những dòng Lan huệ còn lại, số chồi hình thành dao động từ 2,55 chồi/mẫu (H12) đến 3,21 chồi/mẫu (H3).
Từ các kết quả thí nghiệm cho thấy sự khác biệt rõ ràng khi sử dụng phối hợp hai loại phytohormon là auxin và cytokinin. Kết quả cho thấy hệ số
nhân tăng lên đáng kể so với thí nghiệm sử dụng riêng rẽ từng loại phytohormon. Môi trường thích hợp nhất cho hệ số nhân chồi cao từ vảy củ đôi của các dòng Lan huệ lai là 2,0 – 3,0 mg/l BA + 1,0mg/l kinetin + 0,25 mg/l IBA
Thí nghiệm 4. Ảnh hưởng của BA, kinetin và α-NAA đến khả năng phát sinh chồi từ vảy củđôi
Kết quả xử lý thống kê hàm ANOVA một nhân tố cho thấy, giữa các công thức có sự khác biệt rõ rệt về số lượng chồi, chiều cao chồi ở độ tin cậy 95% và khác biệt so với đối chứng.
Theo kết quả thu được ở Bảng 4.4 cho thấy, môi trường có bổ sung từ
2,0 – 3,0 mg/l BA + 1,0mg/l Kinetin + 0,25mg/l α-NAA (H1, H3, H5, H12) và 0,5 mg/l α-NAA (H37, H85) cũng cho số chồi và chiều cao chồi lớn hơn so với công thức đối chứng. Ở các môi trường có nồng độα-NAA khác thì thấp hơn, số lượng chồi dao động từ 2,78 – 3,75 chồi/mẫu. Về chất lượng chồi thì
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 36
Bảng 4.3. Ảnh hưởng của BA, kinetin và IBA đến khả năng tái sinh chồi in vitro từ vảy củđôi IBA
(mg/l) H1 H3 Số chH5 H12 H37 H85 H1 ồi/mẫu (chồi) H3 Chiều cao chH5 H12 H37 H85 H1 ồi (cm) H3 ĐặH5 H12 H37 H85 c điểm chồi
0 2,43 2,55 3,32 2,41 2,49 2,29 7,21 7,55 8,76 9,21 8,43 7,12 ++ ++ ++ ++ ++ ++ 0,25 3,02 3,21 3,56 2,55 2,65 2,76 8,13 11,22 12,24 13,33 9,88 7,98 +++ +++ +++ ++ +++ ++ 0,5 2,37 2,67 3,38 2,49 2,51 2,32 7,62 9,10 9,35 10,81 9,11 8,34 ++ ++ ++ +++ ++ +++ 0,75 2,92 2,78 3,12 2,87 2,94 1,95 6,44 6,12 8,45 8,66 6,23 7,21 ++ + ++ ++ + + 1,0 2,61 2,01 2,88 1,93 2,09 1,19 7,55 8,96 7,97 7,45 6,44 6,53 + + + + + + LSD5% 3,0 4,1 3,6 4,8 4,2 3,7 0,34 0,68 0,53 0,75 0,77 0,44 CV (%) 0,14 0,19 0,21 0,21 0,19 0,14 2,5 4,3 3,1 4,2 5,3 3,3
Bảng 4.4. Ảnh hưởng của BA, kinetin và α-NAAđến khả năng tái sinh chồi in vitro từ vảy củđôi
α-NAA
(mg/l) Số chồi/mẫu (chồi) Chiều cao chồi (cm) Đặc điểm chồi
H1 H3 H5 H12 H37 H85 H1 H3 H5 H12 H37 H85 H1 H3 H5 H12 H37 H85 0 2,43 2,55 3,32 2,41 2,49 2,29 7,21 7,55 8,76 9,21 8,43 7,12 ++ ++ ++ ++ ++ ++ 0,25 3,07 3,36 3,75 2,87 2,78 2,84 9,23 13,65 14,23 11,11 8,98 8,22 ++ ++ ++ ++ ++ ++ 0,5 2,81 2,65 2,62 2,31 2,61 2,45 7,61 8,18 10,82 8,49 10,12 8,47 ++ ++ ++ +++ ++ +++ 0,75 2,33 3,03 2,39 2,00 2,44 1,88 6,23 11,64 9,46 7,88 7,33 7,54 ++ + ++ ++ + + 1,0 2,09 1,98 3,16 1,80 1,91 1,79 7,35 7,93 8,39 6,11 7,12 6,67 + + + + + + LSD 5% 0,18 0,27 0,21 0,17 0,16 0,22 0,41 0,86 0,66 0,68 0,88 0,42 CV (%) 4,0 5,4 3,8 4,2 3,7 5,3 3,0 4,8 3,5 4,4 5,8 3,1
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 37
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 38 H5 H3 H1 H85 H12 H37
Hình 4.2. Ảnh hưởng của sự phối hợp giữa Auxin (α-NAA) và cytokinin đến khả năng nhân nhanh chồi từ vảy củđôi hoa Lan huệ lai (sau 4 tuần nuôi cấy)
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 39
4.2.2. Ảnh hưởng của sự phối hợp 2 nhóm chất cytokinin và auxin đến hệsố nhân nhanh chồi từchồi in vitro