5.1.1. Phạm vi áp dụng
Phương pháp này xác định hàm lượng hoạt chất N-(phosphonomethyl) glycine trong thuốc trừ cỏ.
5.1.2. Tài liệu tham khảo
CIPAC volume 1C – Năm 1985 – Trang 2132.
CIPAC volume H - Năm 1998 – Trang 182.
5.1.3. Nguyên tắc phương pháp
Hoạt chất được hòa tan trong pha động và định lượng bằng máy HPLC, detector UV, cột trao đổi anion (SAX) theo phương pháp ngoại chuẩn.
5.1.4. Thiết bị - Dụng cụ - Hóa chất 5.1.4.1. Thiết bị - dụng cụ 5.1.4.1. Thiết bị - dụng cụ
Máy HPLC Agilent 1260 Infinity/Detector UV.
Cột Zorbax SAX 250 x 4.6mm i.d.
Cân phân tích chính xác 0.1mg.
Bể rửa siêu âm.
Bình định mức 20ml.
Máy đo ph.
Syringe 50 µl.
5.1.4.2. Hóa chất
Methanol (MeOH) dùng cho HPLC.
Nước cất dùng cho HPLC.
KH2PO4 P.A.
Chất chuẩn Glyphosate có nồng độ chính xác ~ 98%. Sấy 2h ở 1500C và để nguội trước khi cân.
5.1.5. Cách tiến hành 5.1.5.1. Pha pha động 5.1.5.1. Pha pha động
Cân chính xác 0.8437g KH2PO4 và cốc thủy tinh 1L thêm 960 ml nước vào 40 ml MeOH. Khuấy cho tan đều đưa về pH = 2.1 bằng H3PO4 85%. Lọc qua màng lọc 0.45 µmvà đuổi khí trước khi sử dụng.
5.1.5.2. Pha dung dịch chuẩn
Cân 50 mg (chính xác 0.1mg) chất chuẩn (Wst) vào bình định mức 10 ml và định mức bằng pha động đến vạch. Lắc tan đều. Siêu tốc đuổi khí. Bơm pha động đi qua cột từ 1đến 2 h cho cột đạt trạng thái cân bằng. Sau đó bơm dung dịch chuẩn qua cột vài lần cho đến khi đường nền ổn định nếu cần. Sai số mỗi lần bơm không vượt quá 1%.
5.1.5.3. Pha dung dịch mẫu
Cân (chính xác 0.1 mg) chất mẫu (Wsp) sao cho có hàm lượng hoạt chất tương đương chất chuẩn vào bình định mức 10 ml và định mức đến vạch bằng pha động. Lắc cho tan đều. Siêu tốc đuổi khí trước khi bơm vào máy. Nếu thấy mẫu lắng cặn thì lọc qua màng lọc 0.45 μm rồi bơm vào máy. Sai số mỗi lần bơm không vượt quá 1%.
Cột Zorbax SAX 250 x 4.6 mm i.d. Bước sóng: 195 nm. Pha động KH2PO4 0.05M: MeOH = 96: 4 v/v (pH = 2.1). Tốc độ dòng: 1.5 ml/min. Thể tích buồng tiêm 20 µl. TR = 7.2 – 7.3.
Độ lệch thời gian lưu giữa chuẩn và mẫu < 0.1 phút.
5.1.6. Cách tính
Hàm lượng muối (Isopropylamin) = %w/w a.e x F.
Sst: Diện tích pick chuẩn.
Ssp: Diện tích pick mẫu.
Wsp: Lượng cân mẫu (mg).
Wst: Lượng cân chuẩn (mg).
P: Độ tinh khiết chất chuẩn (%)
Hệ số chuyển đổi = 1.349
Theo Hoechst: Khi sử dụng cột mới phải cho octan chạy qua cột (hoặc tương tự). Cột được nối với hệ thống bơm nhưng không nối với detector. Sau đó cho các dung môi sau đây chạy qua cột với tốc độ 1 – 2 ml/min.
CH2Cl2 50 ml + H3PO4 0.1M 50 ml.
CAN 50 ml + H2O 15 ml.
H2O 50 ml + KH2PO4 0.1M 200 ml.
Sau đó nối với detector. Và cho pha động chay qua cho đến khi đường nền ổn định. Thời gian khoảng 8h.
Ssp Wst
Hàm lượng hoạt chất = P = % w/w(a.e) Sst Wsp
Ghi chú:
Độ lặp lại r% ≤ 2.0
Độ tái lặp R% ≤ 3.5
Hệ số chuyển đổi từ Amonium sang IPA:
Glyphosate Amonium = Glyphosate IPA x 0.8155 5.1.7. Kết quả[pl1]
Hàm lường glyphosate = 487,6 g/
5.1.8. Nhận xét.
Hàm lượng Glyphosate đạt yêu cầu.
5.2. Xác định hàm lượng chlorpyriphos ethyl - lambdacyhaclothrin bằng phương pháp GC/FID pháp GC/FID
5.2.1. Phạm vi áp dụng
Phương pháp này xác định hàm lượng hoạt O,O-diethyl O-(3,5,6-trichloro-2- pyridinyl) phosphorothioate(chlor-ethyl) và 3-cyclohexyl-1,5,6,7-
tetrahydrocyclopentapyrimidine-2,4(3H)-dione (Lambacyhalothrin)trong thuốc trừ sâu.
5.2.2. Tài liệu tham khảo
Tài liệu của hãng Mitsu Industries Ltd.India và Dupont.
5.2.3. Nguyên tắc của phương pháp
Mẫu phân tích được hòa tan trong dung môi hữu cơ và được định lượng trên máy sắc ký khí, detector FID theo phương pháp nội chuẩn.
5.2.4. Thiết bị - Hóa chất - Dụng cụ 5.2.4.1. Thiết bị - Dụng cụ 5.2.4.1. Thiết bị - Dụng cụ
Máy sắc ký khí Agilent 7890N/ FID.
Cân phân tích chính xác 0.1 mg.
Bình định mức 10 ml.
Bơm tự động Agilent 7683B, Syringe 10 l.
Pipette 1 ml, 10 ml.
Máy nén khí.
5.2.4.2. Hóa chất
Chất chuẩn có độ tinh khiết lớn hơn 97% nối với chlor-ethyl, 97% đối với lambda. Bảo quản trong tủ lạnh ở nhiệt độ nhỏ hơn 100C.
Aceton P.A.
Chất nội chuẩn Diocthyl phthalate (DOP) P.A. Pha nồng độ 6.0 mg/ml trong aceton.
Khí mang N2 99.9%.
Khí cung cấp cho detector FID: (H2, Air).
5.2.5. Cách tiến hành
5.2.5.1. Pha dung dịch chuẩn
Cân 5.0mg(chính xác 0.1 mg) chất chuẩn Lambda(Wst(Lambda)), 40.0 mg(chính xác 0.1 mg) chất chuẩn Chlor-ethyl(Wst(Chlor-E)) và dùng pipette thêm 2ml dung dịch chất nội chuẩn DOP(WISTD) vào bình định mức 10mlvà định mức bằng aceton đến vạch. Lắc cho tan đều. Bơm 1 l vào máy. Sai số tỉ số giữa diện tích peak chất chuẩn mỗi lần bơm không vượt quá 1%.
5.2.5.2. Pha dung dịch mẫu
Cân mẫu (chính xác 0.1mg) (Wsp) sao cho có hàm lượng hoặt chất tương đương chất chuẩn và dùng pipette thêm 2ml dung dịch nội chuẩn DOP(WISTD) vào bình định mức 10mlvà định mức bằng aceton đến vạch. Lắc cho tan đều. Bơm 1l vào máy. Sai số tỷ số giữa diện tích peack mẫu với diện tích peack nội chuẩn mỗi lần tiên không vượt quá 1%.
5.2.5.3. Điều kiện phân tích trên máy 2500C
Nhiệt độ cột. 4min
Nhiệt độ buồng tiêm 2800C. 1800C 500C/min
Nhiệt độ detector 3000C. 1 min
Khí nén (Air) 400 ml/min.
Hidro (H2) 30 ml/min.
Khí N2 6.0 ml/min.
Tỷ lệ chia dòng 20:1
Thời gian lưu:
TR (DOP) 1.63min TR (Chlor) 1.70 min TR(Lambda) 2.86 – 2.87min
Độ sai lệch thời gian lưu giữa chuẩn và mẫu: TR < 0.1 phút.
5.2.6. Cách tính
5.2.6.1. Hàm lượng lambda
SISTD : Diện tích peak chất nội chuẩn trong dung dịch chuẩn. SST(Lambda) : Diện tích peak chất chuẩn.
WST(Lambda) : Lượng cân chất chuẩn (mg).
WISTD : Lượng cân chất nội chuẩn (mg) trong dung dịch chuẩn. P(Lambda) : Độ tinh khiết của chất chuẩn (%).
SISTD Wst(Lambda) P(Lambda) Hàm số FLambd =
Sst(Lambda) WISTD 100
Ssp(Lambda) WISTD
Hàm lượng Lambda = FLambda 100 (% W/W) SISTD Wsp(Lambda)
F(Lambda) : Hệ số F.
SSP(Lambda) : Diện tích peak mẫu.
SISTD : Diện tích peak chất nội chuẩn trong dung dịch mẫu. WISTD : Lượng cân chất nội chuẩn (mg) trong dungdịch mẫu.
WSP(Lambda) : Lượng cân mẫu (mg).
Hàm lượng lambdacyhalothrin tính theo gam trên lít:
5.2.6.2. Hàm lượng chlorpyriphos - ethyl
SISTD : Diện tích peak chất nội chuẩn trong dung dịch mẫu. SST(Chlor) : Diện tích peak chất chuẩn.
WST(Chlor) : Lượng cân chất chuẩn (mg).
WISTD : Lượng cân chất nội chuẩn (mg) trong dungdịch chuẩn. P(Chlor) : Độ tinh khiết của chất chuẩn (%).
F(Chlor) : Hệ số F.
SSP(Chlor) : Diện tích peak mẫu.
SISTD : Diện tích peak nội chuẩn trong dung dịch mẫu.
WISTD : Lượng cân chất nội chuẩn (mg) trong dung dịch mẫu.. WSP(Chlor) : Lượng cân mẫu (mg).
SISTD Wst(Chlor) P(Chlor) Hệ số FChlor =
Sst(Chlor) WISTD 100
Ssp(Chlor) WISTD
Hàm lượng Chlor -ethyl =FChlor 100 (% W/W) SISTD Wsp(Chlor)
Hàm lượng lambda (g/l) = %W/W (Lambda) * d20 *10
Hàm lượng chlor – ethyl tính theo gam trên lít:
Ghi chú:
Độ lặp lại %r 2.
Độ tái lặp %R 3.5.
Khi diện tích peak nội chuẩn lớn hơn một cách bất thường so với tỉ lệ khối lượng chất nội chuẩn, thì phải tiến hành chạy mẫu không cho chất nội chuẩn vào để xem có sự hiện diện của chất nội chuẩn hoặc những chất có cùng thời gian lưu với chất nội chuẩn ở trong mẫu không.
5.2.7. Kết quả[pl2]
Hàm lượng chlor – ethyl = 234,5 g/l Hàm lượng lambda = 10,3 g/l
5.2.8. Nhận xét.
Hàm lượng chlopyriphos ethyl – lambdacyhaclothrin đạt yêu cầu.
5.3. Xác định hàm lượng lambda – cyhalothrin bằng phương pháp GC/FID 5.3.1. Phạm vi áp dụng 5.3.1. Phạm vi áp dụng
Phương pháp này xác định hàm lượng hoạt chất –cyano-3-phenoxybenzyl-3-(2- chloro – 3,3,3 – trifluoroprop – 1 – enyl) – 2,2 – dimethyl cyclopropane carboxylate trong thuốc trừ sâu.
5.3.2. Tài liệu tham khảo
CIPAC Volume F – Naêm 1995 – Trang 49.
5.3.3. Nguyên tắc của phương pháp
Mẫu phân tích được hòa tan trong dung môi hữu cơ và được định lượng trên máy sắc ký khí, detector FID theo phương pháp nội chuẩn.
5.3.4. Thiết bị - Hóa chất - Dụng cụ 5.3.4.1. Thiết bị dụng cụ 5.3.4.1. Thiết bị dụng cụ
Máy sắc ký khí Agilent 7890N/ FID.
Cột HP-5, dài 15 m, đường kính trong 0.320 mm, lớp pha tĩnh 0.250 miro.
Cân phân tích chính xác 0.1 mg.
Bình định mức 10 ml.
Bơm tự động Agilent 7683B, Syringe 10 l.
Pipette 1 ml, 10 ml.
Máy nén khí
5.3.4.2. Hóa chất
Chất chuẩn có độ tinh khiết lớn hơn 97%. Bảo quản trong tủ lạnh ở nhiệt độ nhỏ hơn 100C.
Aceton P.A.
Chất nội chuẩn Dibuthyl phthalate (DBP) P.A. Pha nồng độ 6.0mg/ml trong aceton.
Khí mang N2 99.9%.
Khí cung cấp cho detector FID: ( H2, Air).
5.3.5. Cách tiến hành
5.3.5.1. Pha dung dịch chuẩn
Cân 20mg(chính xác 0.1 mg) chất chuẩn (Wst) và dùng pipette thêm 2 ml dung dịch chất nội chuẩn DBP(WISTD) vào bình định mức 10 mlvà định mức bằng aceton đến vạch. Lắc cho tan đều. Bơm 1 l vào máy. Sai số tỉ số giữa diện tích peak chất chuẩn mỗi lần bơm không vượt quá 1%.
5.3.5.2. Pha dung dịch mẫu
Cân mẫu (chính xác 0.1 mg) (Wsp) sao cho có hàm lượng hoặt chất tương đương chất chuẩn và dùng pipette thêm 2ml dung dịch nội chuẩn DBP(WISTD) vào bình định
mức 10 mlvà định mức bằng aceton đến vạch. Lắc cho tan đều. Bơm 1 l vào máy. Sai số tỷ số giữa diện tích peack mẫu với diện tích peack nội chuẩn mỗi lần tiên không vượt quá 1%.
5.3.5.3. Điều kiện phân tích trên máy 2500C
Nhiệt độ cột. 2 min
Nhiệt độ buồng tiêm 2800C. 2200C 200C/min
Nhiệt độ detector 3000C. 1 min
Khí nén (Air) 400 ml/min.
Hidro (H2) 30 ml/min.
Khí N2 10 ml/min.
Tỷ lệ chia dòng 10:1
Thời gian lưu:
TR (DBP) 0.9 – 1 min.
TR (ST) 2.8 – 2.9 min.
Độ sai lệch thời gian lưu giữa chuẩn và mẫu: TR < 0.1 phút.
5.3.6. Cách tính Hàm lượng Hàm lượng
SISTD : Diện tích peak chất nội chuẩn trong dung dịch chuẩn. SST : Diện tích peak chất chuẩn.
WST : Lượng cân chất chuẩn (mg).
WISTD : Lượng cân chất nội chuẩn (mg) trong dung dịch chuẩn. P : Độ tinh khiết của chất chuẩn (%).
SISTD Wst P Hệ số F = Sst WISTD 100 Ssp WISTD Hàm lượng hoạt chất = F 100 (% W/W) SISTD Wsp
F : Hệ số F.
SSP : Diện tích peak mẫu.
SISTD : Diện tích peak chất nội chuẩn trong dung dịch mẫu. WISTD : Lượng cân chất nội chuẩn (mg) trong dungdịch mẫu.
WSP : Lượng cân mẫu (mg). Chú ý
Độ lặp lại %r 1.8, đối với dạng tech.
%r 3.4, đối với dạng thành phẩm. Độ tái lặp %R 3.15, đối với dạng teck.
%R 3.15, đối với dạng thành phẩm.
Khi diện tích peak nội chuẩn lớn hơn một cách bất thường so với tỉ lệ khối lượng chất nội chuẩn, thì phải tiến hành chạy mẫu không cho chất nội chuẩn vào để xem có sự hiện diện của chất nội chuẩn hoặc những chất có cùng thời gian lưu với chất nội chuẩn ở trong mẫu không.
5.3.7. Kết quả.[pl3]
Hàm lượng lambda = 96,11%
5.3.8. Nhận xét.
Hàm lượng lambda – cyhalothrin đạt yêu cầu.
5.4. Xác định hàm lượng paraquat dichloride bằng phương pháp HPLC 5.4.1. Phạm vi áp dụng 5.4.1. Phạm vi áp dụng
Phương pháp này xác định hàm lượng hoạt chất propyl 1,1’-dimethyl-4,4’- bipyridinium. Dichloride trong thuốc trừ cỏ.
5.4.2. Tài liệu tham khảo
5.4.3. Nguyên tắc của phương pháp
Mẫu phân tích được hòa tan trong nước cất và được định lượng trên máy HPLC, detector UV, cột pha đảo theo phương pháp ngoại chuẩn.
5.4.4. Thiết bị – Dụng cụ – Hóa chất 5.4.4.1. Thiết bị – Dụng cụ 5.4.4.1. Thiết bị – Dụng cụ
Máy HPLC Agilent 1260 Infinity Series, detector UV.
Cột Zorbax XDB C8 15cm x 4.6mm i.d.
Cân phân tích chính xác 0.1mg.
Bình định mức 10ml.
Syringe 50µl.
Pipette .
Bể rửa siêu âm.
5.4.4.2. Hóa chất
Chất chuẩn paraquat dichoride có độ tinh khiết cao.
Nước cất dùng cho HPLC.
H3PO4 85%.
5.4.5. Cách tiến hành
5.4.5.1. Pha dung dịch chuẩn
Cân 10 mg(chính xác 0.1 mg) chất chuẩn(Wst) vào bình định mức 10 ml và định mức bằng nước đến vạch. Lắc cho tan đều. Siêu tốc đuổi khí trước khi bơm vào máy . Sai số mỗi lần tiêm không vượt quá 1%.
Cân mẫu(chính xác 0.1 mg) (Wsp) sao cho có hàm lượng hoạt chất tương đương chất chuẩn vào bình định mức 10 ml và định mức bằng nước đến vạch. Lắc cho tan đều. Siêu tốc đuổi khí trướ khi bơm vào máy. Sai số mỗi lần tiêm không vượt quá 1%.
5.4.5.3. Điều kiện phân tích trên máy
Cột Zorbax XDB C8 15 cm x 4.6 mm i.d. Bước sóng: 290 nm. Pha động H3PO4 0.5%. Tốc độ dịng: 1 ml/min. Thể tích buồn tim 20µl. tR(ST) ˷ 2 min.
Độ sai lệch thời gian lưu giửa chuẩn và mẫu: TR < 0.1 phút.
5.4.6. Cách tính
Ssp : Diện tích peak mẫu. SST : Diện tích peak chất chuẩn. WST : Lượng cân chất chuẩn(mg). Wsp : Lượng cân mẫu (mg).
P : Độ tinh khiết của chất chuẩn(%). Ghi chú:
Độ lập lại %r 1.94. Độ tái lặp %R 2.85.
5.4.7. Kết quả.[pl4]
Hàm lượng paraquat dichloride = 285,9 g/l
Ssp Wst
Hàm lượng hoạt chất = x P = %(w/w) Sst Wsp
5.4.8. Nhận xét.
Hàm lượng paraquat dichloride đat yêu cầu.
5.5. Xác định hàm lượng alpha – cypermethrin bằng phương pháp GC/FID 5.5.1. Phạm vi áp dụng 5.5.1. Phạm vi áp dụng
Phương pháp này xác định hàm lượng hoạt chất [1(S*),3]-(±)-cyano (3- phenoxyphenyl) methyl 3-(2,2-dichloroethenyl)-2,2-dimethylcyclopopanecarboxylate trong thuốc trừ sâu.
5.5.2. Tài liệu tham khảo
CIPAC volume H – Năm 1998 – Trang 14.
5.5.3. Nguyên tắc của phương pháp
Mẫu phân tích được hòa tan trong dung môi hữu cơ và được định lượng trên máy sắc ký khí, detector FID theo phương pháp nội chuẩn.
5.5.4. Thiết bị – Dụng cụ – Hóa chất 5.5.4.1.Thiết bị – Dụng cụ 5.5.4.1.Thiết bị – Dụng cụ
Máy sắc ký khí Agilent 6890N/ FID.
Cột HP-5, dài15 m, đường kính trong 0.53 mm, lớp pha tĩnh 1.50 miro.
Cân phân tích chính xác 0.1 mg.
Bình định mức 10 ml.
Bơm tự động Agilent 7683B, Syringe 10 l.
Pipette 2 ml, 10 ml.
Máy nén khí.
5.5.4.2. Hóa chất
Chất chuẩn có nồng độ chính xác, hàm lượng hoạt chất lớn hơn 95%, bảo quản ở <100C Aceton P.A.
Chất nội chuẩn Dioctylphthalate (DOP) P.A. Pha nồng độ 8 mg/ml trong aceton.
Khí mang N2 99.9%.
Khí cung cấp cho detector FID: (H2, Air).
5.5.5. Cách tiến hành
5.5.5.1. Pha dung dịch chuẩn
Cân 20 mg(chính xác 0.1 mg) chất chuẩn(Wst) và dùng pipette thêm 2 ml dung dịch chất nội chuẩn DOP(WISTD) vào bình định mức 10 ml và định mức bằng aceton đến vạch. Lắc cho tan đều. Bơm 1 l vào máy. Sai số tỷ số giữa diện tích peak chất chuẩn mỗi lần tiêm không vượt quá 1%.
5.5.5.2. Pha dung dịch mẫu
Cân mẫu(chính xác 0.1 mg) (Wsp) sao cho có hàm lượng hoạt chất tương đương chất chuẩn và dùng pipette thêm 2ml dung dịch nội chuẩn DOP(WISTD) vào bình định mức 10 ml và định mức bằng aceton đến vạch. Lắc cho tan đều. Bơm 1 l vào máy. Sai số tỷ số giữa diện tích peak mẫu với diện tích peak nội chuẩn mỗi lần tiêm không vượt quá 1%.
5.5.5.3. Điều kiện phân tích trên máy
Nhiệt độ cột 2600C.
Nhiệt độ buồng tiêm 2800C.
Nhiệt độ detector 3000C.
Khí nén(Air) 400 ml/min.
Hidro(H2) 30 ml/min.
Khí N2 8.0 ml/min.
Tỷ lệ chia dòng 7:1.
Thời gian lưu:
TR(ST) 2.38min
Độ sai lệch thời gian lưu giửa chuẩn và mẫu: TR < 0.1 phút.
5.5.6. Cách tính
SISTD : Diện tích peak chất nội chuẩn trong dung dịch chuẩn. SST : Diện tích peak chất chuẩn.
WST : Lượng cân chất chuẩn(mg).
WISTD : Lượng cân chất nội chuẩn(mg) trong dung dịch chuẩn. P : Độ tinh khiết của chất chuẩn(%).
F : Hệ số F.
SSP : Diện tích peak mẫu.
SISTD: Diện tích peak chất nội chuẩn trong dung dịch mẫu. WISTD: Lượng cân chất nội chuẩn(mg) trong dung dịch mẫu. WSP : Lượng cân mẫu(mg).
Ghi chú:
Độ lập lại %r 2. Độ tái lặp %R 3.5
Khi diện tích peak chất nội chuẩn lớn hơn một cách bất thường so với tỷ lệ khối