Model: HPLC 1200 Infinity better Series với đầu dò UV. Hãng sản xuất: Agilent Technologies.
4.2.3.1. Khởi động thiết bị
Chuẩn bị pha động: Sử dụng hóa chất chuyên dụng (nguyên chất, tinh khiết), pha xong lọc qua màng lọc 0.45 μm (47mmID) và phải lắc siêu âm trong thời gian ít nhất 15 phút.
Chuẩn bị cột: Lựa chọn cột phân tích phù hợp (chú ý: cột pha thuận hay pha đảo để chọn pha động tương đương).
Chuẩn bị mẫu thử và mẫu chuẩn: Mẫu phải được pha trong dung dịch dùng cho sắc ký, sau đó lọc qua màng lọc 0.45um (13 mm ID).
Lắp cột vào giá đỡ (nếu có tháo cột cất khi tắt hệ thống).
Cho đầu lọc tương ứng của các kênh vào lọ chứa dung môi (pha động). Bật công tắc nguồn HPLC 1200 Infinity better Series (bộ nguồn 24V) trước
Bật công tắc nguồn các module trong hệ thống máy tính, máy in. Mở phần mềm
Instrument 1 online.
Mở van xả ở bơm dung môi (Drain valve) theo chiều ngược kim đồng hồ khoảng 180o để điền đầy dung môi vào ống dẫn, xả dung môi nếu kênh muốn sử dụng chứa dung môi mới không hòa tan dung môi cũ… Vào phần mềm Agilent HPLC (online) Bấm Instrument chọn Pump control, trong cửa sổ Pump control, mục Pump chọn chế độ ON, mục Seal Wash Pump chọn chế độ Single Wash (rửa đơn), nhập thời gian tại
ô Duration nhập tốc độ dòng, nhấn OK máy mặc định tốc độ dòng đó.
Khi xả dung môi ta có thể chọn cả 4 kênh đồng thời, mục Seal Wash Pump chọn chế độ Periodic nhập tốc độ dòng và thời gian rửa tại ô Period, sau đó nhấn OK.
Thông thường mất khoảng 3 đến 5 phút sẽ hết bọt khí (dung môi mới đã được điền đầy ống dẫn).
Đóng chặt van Drain lại bằng cách xoay theo chiều kim đồng hồ cho đến khi vừa chặt tay.
Thực hiện rửa đường ống cho bơm: thực hiện rửa các đường ống nếu trong ống có bọt khí.
Vặn van Drain ngược chiều kim đồng hồ 180o
Cũng vào phần mềm Agilent HPLC ONLINE Bấm Instrument chọn Pump
control, trong cửa sổ Pump control, mục Pump chọn chế độ ON, mục Seal Wash
Pump chọn chế độ Single Wash (rửa đơn) , sau nhập thời gian tại ô Duration nhập tốc độ dòng, nhấn OK máy mặc định tốc độ dòng đó, thường l0 ml/ phút.
Cửa sổ Pump control:
Khi rửa các đường ống nếu trong ống có bọt khí ta có thể chọn cả 4 kênh đồng thời, mục Seal Wash Pump chọn chế độ Periodic nhập tốc độ dòng và thời gian rửa cho từng kênh tại ô Period, sau đó nhấn OK.
Kích đúp (Double –click) trên biểu tượng Instrument 1 ONLINE trên màn hình máy tính. Hoặc “Start” → “Program” → Chromatography → “Instrument” - Kích đúp vào mục có tên mặc định là Instrument trên thanh công cụ.
- Lúc này đã khởi động xong phần nềm HPLC Agilent (bản online) và sẽ có một cửa sổ mới để ta có thể cài đặt thông số và chạy mẫu…
Phần mềm Instrument 1 ONLINE cũng có 3 chế độ màn hình chính:
Method And Run Control (lập phương pháp và chạy mẫu).
Data Analysis (Xử lý số liệu).
Report Layout (Thay đổi dạng báo cáo).
Để chuyển đổi giữa các chế độ, ta vào mục View và click vào chế độ cần chuyển tới. Dạng báo cáo thường ở chế độ ngầm định nên chế độ 3 không sử dụng.
4.2.3.2. Tạo một phương pháp mới
Để lập phương pháp chạy mẫu, ta chuyển màn hình ở chế độ 1.
Trên thanh công cụ Method > New method khi đó trên màn hình màu xanh trên cùng cửa sổ xuất hiện tên mặc định là Instrumen 1 Online.
Đối với các phương pháp mới ta cần đặt các thông số cho các module. Trong cửa sổ “Instrument 1 online”. Chọn mục Method.
Khai báo thông tin cho mẫu bằng chọn “Method Information” trong hộp thoại này hiện ra cửa sổ Sample info: instrument 1.
Trong ô Data file thay đổi Path, có nghĩa nơi lưu trử phương pháp.
Subdirectory, tên thư mục con.
Chọn chế độ Prefix/counter nhập ngày truy cập tại Prefix và số tiền tố tại counter. Còn ô Sample parameters (thông số mẫu): Gồm Location (vị trí lọ mẫu trong khây): vial 1. Nhập tên mẫu tại ô Sample name. Multiplier và Dilution là 1. Sau đó chọn OK.
Pupm: Click chuột phải vào đối tượng chọn dòng Set up Pump
hiện ra của sổ, chúng ta tiến hành khai báo thông tin cần thiết như Flow (tốc dộ dòng) 1.000 ml/phút, Stop time thường 10.00 phút, nhấn OK như hình bên dưới
Và cài đặt thông số Pump Control cũng Click chuột phải vào đối tượng
chọn dòng Control… hiện ra của sổ, chúng ta tiến hành khai báo thông tin tương tự hình bên dưới.
Pump ở chế độ ON, Seal Wash Pump để ở chế độ OFF, sau đó nhấn OK để xác nhận.
Cài đặt lại thông số đèn cho đầu dò. Click chuột phải vào đối tượng chọn dòng Set up VWD, khai báo các thông số như hình ảnh bên dưới.
Lamp ở chế độ ON, Analog Output Range là 1V, Sau đó chọn OK
Để lưu lại phương pháp dùng lệnh Method-> As Save Method. Khi đó xuất hiện cửa sổ.
Chọn thư mục lưu phương pháp là Method hoặc tạo Folder bất kỳ, trong các ổ cứng máy tính.
Không nên lưu data ở ổ C, vì khi máy tính trục trặc sẽ mất hết dữ liệu. Đặt tên cho phương pháp (tên phải dễ nhớ, nên lưu theo tên mẫu). Sau khi đặt xong, nhấn nút Save để lưu phương pháp.
Chú ý: Phương pháp nên lưu trong thư mục Method.
Mở phương pháp đã có sẵn
Khi đã có sẵn phương pháp phù hợp với mẫu mà ta muốn phân tích (thường thì phương pháp mà ta đã tạo cho mẫu này ở lần chạy trước) khi đó ta chỉ cần mở phương pháp này để chạy mà ta không cần tạo phương pháp mới. Các bước thực hiện mở một phương pháp mới như sau. Click chọn biểu tượng trên thanh công cụ, sau đó tìm kiếm tên phương pháp đã lưu trong Method sau đó click chuột trái chọn phương pháp. Máy mặc định làm theo phương pháp đã chọn.