a. Vật liệu nghiên cứu
- 40 mẫu giò, 40 mẫu chả và 40 mẫu thịt lợn nướng được lấy ở 5 khu chợ
quanh địa bàn thành phố Thái Nguyên.
b. Hóa chất, môi trường
- Môi trường PCA (Plate Count Agar): Peptone 10g; NaCl 5g; Cao thịt 5g; Glucose 1g; thạch bột 17g; nước cất vừa đủ 1000ml. Đun sôi hòa tan các hóa chất,
điều chỉnh pH môi trường bằng dung dịch NaOH 0,1N sao cho pH= 7,0±0,2. Cho môi trường vào bình thủy tinh vô trùng, hấp khử trùng ở 1210C trong 15 phút.
- Dung dịch nước muối sinh lý 0,9% (cân 0,9g NaCl định mức trong 100ml. Hút ra các ống nghiệm 9ml để pha loãng mẫu; hấp khử trùng ở nhiệt độ 1210C trong 20 phút.
- Canh thang lauryl tryptose: Tryptose 20g; Lactose 5g; K2HPO4 2,75g,; KH2PO4 2,75g; NaCl 5g; Natri lauryl sunfat 0,1g; nước cất vừa đủ 1000ml. Môi trường hấp khử trùng ở 1210C trong 15 phút.
- Canh thang Brilliant Green Bile 2% Broth: Bile (Mật bò khô) 20g; Lactose 1g; Peptone 10g; Brilliant Green 0,013g. Môi trường được hấp khử trùng ở 1210C trong 15 phút.
- Môi trường Endo: Pepton 10 g; K2HPO4 2,5 g; lactose 10 g; Na2SO3 3,3 g; fucshin kiềm 0,3 g; thạch 12,5 g; H2O cho đủ 1000ml; pH: 7,4 ± 0,2 ở 25°C. Môi trường hấp khử trùng ở nhiệt độ 1210C trong 15 phút.
- Dung dịch đệm Pepton: pepton 5g; NaCl 5g; Na2HPO4 9g; KH2PO4 1,5g; pH = 7; H2O định mức đủ 1000ml. Thanh trùng bằng nồi hấp áp lực ở nhiệt độ 1210C trong thời gian 20 phút.
- Thạch Macconkey agar: Peptone 20g; Lactose 10g; Bile salts 1,5g; Sodium chloride 5g; Neutral red 0,03g; Crystal violet 0,001g; Agar 15g. Pha 51,5g trong 1000ml nước. Hấp khử trùng ở 1210C trong 15 phút sau đó đổ môi trường ra đĩa petri.
- Canh thang Clark-lub: Peptone 5g, K2HPO4 5g; glucose 5g; nước cất vừa
- Thuốc thử Kowac: Cồn isoamyl 150ml; paradimethylamino bensaldehyt 10g; HCl đặc 50ml.
- Thuốc thử MR: Methyl red 0,01g; ethanol 95%; nước cất vừa đủ 500ml - Thuốc thử VP: Dung dịch 1: α-Naphtol 2g, alcohol (tuyệt đối) 100ml; dung dịch 2: KOH 40g, nước cất vừa đủ 100ml
- Nước thịt Nutrient broth: Meat peptone 5g; meat extract 3g. Sấy trong tủ sấy cho đến sôi.
- Canh thang EC: Tryptose 20g; lactose 5g; muối mật 1,5g; K2HPO4 4g; KH2PO4 1,5g; NaCl 5g; nước cất vừa đủ 1000ml
Lưu ý: Các môi trường và hóa chất pha đúng theo chỉ dẫn của nhà sản xuất
c. Dụng cụ, thiết bị
Thiết bị
Đề tài nghiên cứu sử dụng các thiết bịđược thống kê dưới bảng 3.1
Bảng 3.1: Các thiết bị sử dụng trong nghiên cứu
STT Tên thiết bị Hãng sản xuất Quốc gia
1 Cân phân tích Sartorius AG Đức
2 Máy đo pH Hana Italia
3 Nồi hấp tiệt
trùng CL-32 LDP Nhật Bản
4 Tủ ATSH cấp 2 Euroclone S.p.A-Bio Air Division Italia 5 Tủấm 280C Sanyo Electric Co.,Ltd Nhật Bản 6 Tủ âm 370C Sanyo Electric Co.,Ltd Nhật Bản
7 Tủấm 420C Memmer Đức
8 Tủ sấy nhỏ
(2500C,40L) Đức
9 Vortexer Bio-RAD Mỹ
Dụng cụ
Bảng 3.2: Các dụng cụ sử dụng trong nghiên cứu
STT Dụng cụ Nước sản xuất
1 Đĩa petri thủy tinh đường kính 90-100mm Việt Nam 2 Pipet có chia độ loại 1ml, 5ml, 10ml Việt Nam 3 Bình thủy tinh dung tích 250-500ml Đức 4 Ống nghiệm loại 16-160mm và lớn hơn Đức
5 Đèn cồn Việt Nam
6 Kéo, pank, quả bóp Việt Nam
7 Que cấy Việt Nam