VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu
3.3.5. Xác định khả năng sống của nấm men.
Xác định tỷ lệ phần trăm tế bào sống của các chủng nấm men vào cuối quá trình lên men bằng phương pháp nhuộm xanh metylen trên buồng đếm hồng cầu.
3.3.6. Xác định hàm lượng cồn bằng dụng cụ cất cồn.
Tiến hành:
Lấy 100ml dịch lọc giấm chớn cú nhiệt độ xấp xỉ 200C cho vào bình định mức 100ml, rót dịch giấm vào bình cất rồi trỏng bỡnh bằng 100ml nước cất rồi cũng đổ vào bỡnh cú dung tích khoảng 300ml. Tiến hành chưng cất cho tới khi dịch trong bỡnh cũn khoảng 1/3 thì ngừng. sau đó định mức lên 250 ml và làm lạnh tới 200C. Tiếp theo thực hiện xác định độ rượu bằng bình tỷ trọng dựa vào bảng tra độ rượu theo tỷ trọng của dịch ethanol ở 200C.
Tính toán: d20= (m3 – m1)/(m2 - m1).
Trong đó: m1: khối lượng bỡnh khụng (g).
m2: khối lượng nước ở 200C và bình (g). m3: khối lượng dung dịch ethanol ở 200C (g). Xác định sinh khối nấm men bằng phương pháp đo OD.
Nguyên lý: Tế bào nấm men phát triển sẽ làm đục dịch nuôi cấy và làm cho dịch nuôi cấy chuyển sang dạng huyền phù. Độ đục của dịch nuôi cấy tỷ lệ thuận với mật độ của tế bào nấm men.
Dựa vào khả năng hấp phụ ánh sáng ở bước sóng 550 – 620 nm của dịch nấm men, khả năng hấp phụ ánh sáng càng cao thì mật độ tế bào nấm men trong dịch nuôi cấy càng nhiều và cho giá trị OD càng lớn.
Tiến hành:
Bật máy so màu sau đó chờ cho máy khởi động xong, chuyển sang bước sóng 620 nm.
Hút vào curvet 1 -2 ml mẫu đối chứng sau đó đưa vào giếng đo chờ cho máy hiển thị kết quả, chọn setting blank, đổ mẫu đối chứng vào 1 ống efpendof, rửa sạch curvet bằng nước cất vô trùng, lau khô.
Cho 1 – 2ml mẫu cần đo vào curvet đưa vào giếng đo đậy nắp chờ cho máy hiện kết quả.
Ghi lại giá trị OD hiển thị trờn mỏy.