3.3.1. Ứng dụng Kit CATT chế tạo từ kháng nguyên tái tổ hợp nghiên cứu tình hình nhiễm tiên mao trùng ở trâu tại huyện Sơn Dương, tỉnh Tuyên Quang
- Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu tại huyện Sơn Dương, tỉnh Tuyên Quang.
- Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu theo lứa tuổi. - Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu theo tính biệt.
- Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu theo các tháng trong năm.
3.3.2. Nghiên cứu thử nghiệm phác đồđiều trị bệnh tiên mao trùng cho trâu và
đề xuất biện pháp phòng chống
3.3.2.1. Xây dựng phác đồđiều trị bệnh tiên mao trùng
- Thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng trên diện hẹp. - Thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng trên diện rộng.
3.3.2.2. Đề xuất biện pháp phòng chống bệnh tiên mao trùng cho trâu ở
3.4. Phương pháp nghiên cứu
3.4.1. Phương pháp thu thập mẫu
* Lấy mẫu máu trâu: Sát trùng vùng tĩnh mạch cổ trâu bằng cồn 700
. Dùng xilanh nhựa 3 ml lấy máu tĩnh mạch cổ trâu. Tiêm ngay 0,2 ml máu vào phúc mạc chuột bạch. Ghi ký hiệu mẫu; thể trạng trâu; triệu chứng lâm sàng (nếu có); tên chủ hộ; địa chỉ; ngày lấy mẫu. Bảo quản ở 40
C.
* Chắt huyết thanh: để nghiêng xilanh 450 sao cho diện tích bề mặt máu rộng tối đa. Cố định xilanh cho đến khi máu đông, chắt lấy huyết thanh. Bảo quản huyết thanh ở nhiệt độ -150C, thời gian bảo quản không quá 4 tháng.
* Phương pháp lấy máu chuột: dùng kim chích vào chóp đuôi chuột, vuốt nhẹ đuôi để máu chảy, nhỏ 1 giọt lên phiến kính, đậy lamen để soi tươi hoặc phết kính nhuộm giemsa.
3.4.2. Phương pháp phát hiện tiên mao trùng trong mẫu
3.4.2.1. Phương pháp Kit CATT
* Thành phần của Kit:
- Tube màu vàng: chứa 1,5 ml kháng nguyên RoTAT 1.2 phủ hạt latex - Tube màu xanh: chứa 1 ml huyết thanh âm tính chuẩn
- Tube màu đỏ: chứa 1 ml huyết thanh dương tính chuẩn đặc hiệu với
Trypanosoma evansi
- Ống falcon chứa 20 ml dung dịch pha loãng huyết thanh: 1 ống - Card phản ứng: 3 card
- Que khuấy: 5 cái
* Các bước làm phản ứng CATT:
- Bước 1: Chuyển Kit về nhiệt độ phòng trước khi sử dụng.
- Bước 2: Dùng micropipet lấy 0,5 ml dung dịch pha loãng huyết thanh vào ống eppendorf.
- Bước 3: Lấy 0,1 ml huyết thanh cần chẩn đoán trộn đều vào ống eppendorf có chứa dung dịch pha loãng huyết thanh.
- Bước 4: Nhỏ lên các ô tròn trên card phản ứng, mỗi ô (10 µl) kháng nguyên RoTAT 1.2 phủ hạt latex.
- Bước 5: Nhỏ các mẫu huyết thanh cần chẩn đoán (đã chuẩn bị ở bước 3), huyết thanh dương tính chuẩn, huyết thanh âm tính chuẩn vào các ô đã gắn kháng nguyên, mỗi ô 10 µl.
- Bước 6: Dùng que khuấy, trộn đều kháng nguyên và kháng thể. Sau 3 đến 5 phút đọc kết quả dựa trên sự hình thành đám ngưng kết.
+ Có hiện tượng ngưng kết: Dương tính (+) + Không có hiện tượng ngưng kết: Âm tính (-)
+ Có hiện tượng ngưng kết nhưng không rõ: Nghi ngờ (±)
3.4.2.2. Phương pháp tiêm truyền động vật thí nghiệm
Tiêm trực tiếp máu trâu vừa lấy cho chuột bạch (không sử dụng chất chống đông). Mỗi chuột tiêm 0,2 ml máu, vào phúc mạc. Theo dõi biểu hiện của chuột thí nghiệm sau tiêm truyền. Mỗi ngày kiểm tra máu chuột thí nghiệm 1 lần để phát hiện tiên mao trùng bằng phương pháp xem tươi.
3.4.2.3. Phương pháp xem tươi (Direct smear)
Cho 1 giọt máu tươi lên phiến kính; đậy lamen lên để dàn máu thành một lớp mỏng; soi dưới kính hiển vi (10 x 20 hoặc 10 x 40) để phát hiện tiên mao trùng qua sự di chuyển của chúng (dẫn theo Nguyễn Thị Kim Lan và cs, 2008 [8]).
Kết quả: Dương tính khi thấy tiên mao trùng di động trong huyết tương.
Âm tính khi chỉ nhìn thấy hồng cầu trên tiêu bản.
3.4.3. Một số quy định trong nghiên cứu đặc điểm dịch tễ
* Quy định về tuổi trâu
- Tuổi trâu nghiên cứu được phân ra theo 4 lứa tuổi: ≤ 2 năm tuổi
> 2 – 5 năm tuổi
> 5 – 8 năm tuổi > 8 năm tuổi
* Các tháng theo dõi trong năm
3.4.4. Xây dựng phác đồđiều trị bệnh tiên mao trùng
Xây dựng 3 phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng, mỗi phác đồ gồm: thuốc diệt tiên mao trùng, thuốc trợ tim, thuốc nâng cao thể trạng và sức đề kháng.
- Thuốc diệt tiên mao trùng:
+ Phác đồ I: trypanosoma liều 1 mg/kgTT/lần (Lọ 1,25 g pha trong 6 ml sinh lý nước mặn), lọ thuốc bột pha tiêm chứa 125 mg chlorhydrat chlorur isometamidium. Nhà sản xuất: Công ty thuốc thú y Hanvet.
+ Phác đồ II: trypamidium samorin liều 1 mg/kgTT/lần (Lọ 1,25 g pha 6,25 ml sinh lý nước mặn), gói thuốc bột pha tiêm 125 mg chứa 125 mg isometamidium chloride hypochloride. Nhà sản xuất: MERIAL Pháp.
+ Phác đồ III: phar – trypazen liều 1,18 g/150kgTT/lần (Lọ 1,18 g pha trong 7 ml sinh lý nước mặn), lọ thuốc bột pha tiêm 1,18 g chứa 525 mg diminazen diaceturat. Nhà sản xuất: Công ty thuốc thú y Pharmavet.
- Thuốc trợ tim: cafein natri benzoat 20% liều 15 ml/con/lần. Nhà sản xuất: Công ty thuốc thú y Hanvet.
- Thuốc trợ sức, trợ lực: nước sinh lý mặn 200 ml/con, vitamin C 5% (15 ml/con/lần), vitamin B1 2,5% (15 ml/con/lần).
Đường đưa thuốc:
- Tiêm sâu bắp thịt: không được tiêm quá 15 ml một vị trí tiêm. - Truyền tĩnh mạch: truyền thật chậm.
Để xác định hiệu lực của phác đồ điều trị, chúng tôi đã bố trí các thử nghiệm trên diện hẹp và trên thực địa. Sau đó lựa chọn một phác đồ tốt nhất để điều trị bệnh tiên mao trùng cho trâu ở địa phương.
3.4.5. Đề xuất và ứng dụng biện pháp phòng chống bệnh hiệu quả
Dựa trên kết quả nghiên cứu về tình hình dịch tễ và kết quả thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng cho trâu tại huyện Sơn Dương tỉnh Tuyên Quang, chúng tôi đề xuất và khuyến cáo người chăn nuôi ứng dụng,
đánh giá hiệu quả của các biện pháp phòng chống bệnh tiên mao trùng cho đàn trâu của huyện.
3.5. Phương pháp xử lý số liệu
Số liệu thu được được xử lý bằng phương pháp thống kê sinh học (Theo tài liệu của Nguyễn Văn Thiện, 2008) [27], trên phần mềm Excel 2007.
Phần 4
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
4.1. Xác định tình hình nhiễm tiên mao trùng ở trâu tại huyện Sơn Dương, tỉnh Tuyên Quang Dương, tỉnh Tuyên Quang
4.1.1. Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở một số xã thuộc huyện Sơn Dương, tỉnh Tuyên Quang Tuyên Quang
Để nghiên cứu tình hình nhiễm tiên mao trùng ở trâu tại huyện Sơn Dương, chúng tôi tiến hành lấy ngẫu nhiên mẫu máu của trâu tại 3 xã là Hợp Thành, Bình Yên và Kháng Nhật để kiểm tra. Tổng số mẫu máu kiểm tra là 205 mẫu. Kết quả kiểm tra mẫu máu được trình bày trong bảng 4.1.
Bảng 4.1. Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu tại một số xã thuộc huyện Sơn Dương, tỉnh Tuyên Quang
Địa phương (xã) Số trâu kiểm tra (con) Phương pháp Kit CATT Phương pháp tiêm truyền chuột Số trâu nhiễm (con) Tỷ lệ nhiễm (%) Số trâu nhiễm (con) Tỷ lệ nhiễm (%) Hợp Thành 61 6 9,84 6 9,84 Bình Yên 75 8 10,67 8 10,67 Kháng Nhật 69 7 10,14 7 10,14 Tính chung 205 21 10,24 21 10,24
Hình 4.1: Biểu đồ tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu xác định bằng phương pháp Kit CATT và tiêm truyền chuột (%)
Kết quả bảng 4.1 hình 4.1 cho thấy:
Phương pháp tiêm truyền chuột là phương pháp chẩn đoán bệnh tiên mao trùng chính xác nhất. Qua kết quả trên, chúng tôi thấy Kit CATT cũng phát hiện bệnh chính xác tương đương phương pháp tiêm chuyền chuột.
Như vậy, xác định trâu nhiễm tiên mao trùng bằng phương pháp Kit CATT nhanh, tốn ít thời gian, dễ thực hiện.
Trong tổng số 205 trâu kiểm tra ở 3 xã thuộc huyện Sơn Dương có 21 con trâu mắc bệnh, chiếm 10,24%. Xã Bình Yên kiểm tra 75 trâu phát hiện 8/75 (10,67%) trâu nhiễm tiên mao trùng tỷ lệ nhiễm cao nhất trong 3 xã. Xã Bình Yên kiểm tra 69 trâu phát hiện 7/69 (10,14%) trâu nhiễm tiên mao trùng. Xã Hợp Thành kiểm tra 61 con, phát hiện 6/61 (9,84%) trâu nhiễm tiên mao trùng thấp nhất trong 3 xã.
Như vậy, tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu tại địa phương có sự khác nhau. Xã Hợp Thành gần đường quốc lộ, người dân chủ yếu làm nghề buôn bán, trâu ít phải lao động nặng nhọc. Mặt khác, số lượng cây cối , thảm thực vật thưa nên ruồi, mòng không có điều kiện sinh sản, đốt, hút máu trâu truyền bệnh. Vì vậy, tỷ lệ trâu mắc bệnh ở đây thấp nhất. Xã Bình Yên và Kháng Nhật do xa đường quốc lộ, kinh tế chưa phát triển nhiều, phương thức chăn nuôi chủ yếu là chăn thả hoàn toàn nên trâu chăm sóc, nuôi dưỡng không tốt.
Vào vụ mùa, trâu phải làm viêc nặng nhọc ngoài đồng, thời gian tiếp xúc với ruồi mòng nhiều. Vì vậy, tỷ lệ trâu nhiễm tiên mao trùng xã này cao hơn so với xã Hợp Thành.
4.1.2. Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu theo lứa tuổi
Tuổi của vật nuôi là một trong những yếu tố có thể ảnh hưởng đến tính cảm thụ đối với bệnh ký sinh trùng. Vì vậy, tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng theo tuổi trâu là một chỉ tiêu xác định trâu ở lứa tuổi nào dễ cảm nhiễm tiên mao trùng nhất để có kế hoạch phòng trị thích hợp. Kết quả tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng theo tuổi trâu được trình bày ở bảng 4.2.
Bảng 4.2. Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu theo lứa tuổi Lứa tuổi
(năm)
Số trâu kiểm tra (con) Số trâu nhiễm (con) Tỷ lệ nhiễm (%) ≤ 2 43 3 6,98 >2 – 5 56 5 8,93 >5 – 8 52 6 11,54 > 8 54 7 12,96 Tính chung 205 21 10,24
Qua bảng 4.2 cho thấy:
Trâu ở mọi lứa tuổi đều bị nhiễm tiên mao trùng, nhưng tỷ lệ nhiễm thay đổi theo lứa tuổi. Kiểm tra mẫu máu của trâu dưới 2 tuổi có 3/43 (6,98%) trâu bị nhiễm tiên mao trùng. Trâu từ 2 đến 5 tuổi kiểm tra 56 con có 5/56 trâu (8,93%) con nhiễm tiên mao trùng. Trâu từ 5 đến 8 tuổi có 6/52 (11,54%) trâu nhiễm tiên mao trùng. Đối với những trâu trên 8 tuổi, qua kiểm tra thấy 7/54 (12/96%) con nhiễm tiên mao trùng.
6.98 8.93 11.54 12.96 0 2 4 6 8 10 12 14 ≤ 2 > 2 – 5 > 5 – 8 > 8 Tỷ lệ nhiễm (%)
Hình 4.2: Đồ thị tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu theo lứa tuổi
Qua hình 4.2 ta thấy: tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu có xu hướng tăng dần theo tuổi. Tỷ lệ nhiễm thấp nhất ở trâu dưới 2 năm tuổi 6,98%; trâu từ 2 đến 8 năm tuổi có tỷ lệ nhiễm tăng lên 8,93% đến 11,54%; trâu trên 8 năm tuổi nhiễm tiên mao trùng với tỷ lệ cao nhất (12,96%). Kết quả của chúng tôi phù hợp với nhận xét của Phan Lục và cs (1996) [16]: ở mọi lứa tuổi trâu, bò đều bị nhiễm ký sinh trùng đường máu Trypanosoma, song tuổi càng tăng thì tỷ lệ nhiễm càng tăng. Theo kết quả nghiên cứu của Nguyễn Thị Kim Lan và cs (2014) [12]: trâu nuôi tại 3 huyện Yên Sơn, Hàm Yên, Chiêm Hóa của tỉnh Tuyên Quang nhiễm tiên mao trùng ở mọi lứa tuổi, tỷ lệ nhiễm tăng dần theo tuổi, đặc biệt là những trâu trên 8 tuổi nhiễm tiên mao trùng nhiều nhất.
Trâu dưới 2 năm tuổi nhiễm tiên mao trùng với tỷ lệ thấp, do tuổi còn nhỏ, trâu chưa có nhiều thời gian tiếp xúc với côn trùng hút máu, ở tuổi này con vật chạy nhảy nhiều nên vật môi giới truyền bệnh khó bám và hút máu hơn. Đồng thời, khả năng tái tạo máu ở lứa tuổi này cũng nhanh hơn, nên khi nhiễm tiên mao trùng khả năng phục hồi cũng nhanh hơn lứa tuổi khác.
Giai đoạn từ 2 đến 8 tuổi, trâu ở nhiều địa phương thường chăn thả tập trung theo bầy, đàn; phạm vi kiếm ăn của trâu rộng và xa hơn; nhiều trâu phải
lao tác ngoài đồng, nên cơ hội tiếp xúc và bị ruồi, mòng hút máu, truyền tiên mao trùng nhiều hơn. Vì vậy, tỷ lệ trâu nhiễm tiên mao trùng tăng.
Trâu trên 8 tuổi tỷ lệ nhiễm cao nhất do trâu tuổi đã cao phải lao động nặng nhọc, kết hợp điều kiện chăm sóc, nuôi dưỡng kém làm sức đề kháng giảm. Mặt khác, do thời gian tiếp xúc với ruồi, mòng nhiều hơn khả năng bị đốt, hút máu khi lao tác hoặc chăn thả tăng lên. Đó là những nguyên nhân trâu lứa tuổi này nhiễm tiên mao trùng với tỷ lệ cao nhất.
4.1.3. Tỷ lệ nhiễm bệnh tiên mao trùng ở trâu theo tính biệt
Để xác định tỷ lệ nhiễm T. evansi theo tính biệt, chúng tôi đã xét nghiệm mẫu máu của 91 trâu đực và 114 trâu cái. Kết quả được trình bày ở bảng 4.3.
Bảng 4.3. Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu theo tính biệt Tính biệt Số trâu kiểm tra
(con) Số trâu nhiễm (con) Tỷ lệ nhiễm (%) Đực 91 9 9,89 Cái 114 12 10,53 Tính chung 205 21 10,24
Hình 4.3: Biểu đồ tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng theo tính biệt (%)
Kiểm tra mẫu máu của trâu đực có 9/91 (9,89%) số trâu bị nhiễm tiên mao trùng. Trong tổng số 114 mẫu máu trâu cái được xét nghiệm có 12 mẫu máu trâu nhiễm tiên mao trùng, chiếm 10,53%;
Như vậy, trâu cái có tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng cao hơn trâu đực. Điều này theo chúng tôi là do các nguyên nhân sau: trâu cái trong thời gian động dục, mang thai và nuôi con sức đề kháng thường giảm, dễ bị nhiễm tiên mao trùng hơn so với trâu đực. Kết quả của chúng tôi phù hợp với nghiên cứu của tác giả Lê Đức Quyết và cs (1995) [25] khi nghiên cứu về tình hình nhiễm bệnh tiên mao trùng theo tính biệt ở gia súc, tác giả cho biết gia súc nhiễm tiên mao trùng phần lớn là gia súc cái.
Vì vậy, trong công tác phòng và trị bệnh cần lưu ý đến gia súc cái nhiều hơn hơn, cần phải chẩn đoán để phát hiện kịp thời những con nhiễm bệnh, từ đó có biện pháp phòng trị kịp thời để đảm bảo gia súc không bị sảy thai do tác động của T. evansi.
4.1.4. Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu theo các tháng trong năm
Để công tác phòng, trị bệnh tiên mao trùng cho đàn trâu mang lại hiệu quả cao, ngoài việc theo dõi tỷ lệ nhiễm theo lứa tuổi và tính biệt, chúng tôi cũng tiến hành theo dõi tỷ lệ nhiễm theo tháng. Kết quả về tỷ lệ nhiễm theo tháng trong năm được thể hiện ở bảng 4.4
Bảng 4.4. Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu theo các tháng trong năm Tháng Số trâu kiểm tra
(con) Số trâu nhiễm (con) Tỷ lệ nhiễm (%) 6 23 1 4,35 7 41 3 7,32 8 55 6 10,91 9 52 6 11,54 10 34 5 14,71 Tính chung 205 21 10,24
Hình 4.4: Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu theo các tháng trong năm (%)
Qua bảng 4.4 và hình 4.4 cho ta thấy: Kiểm tra mẫu máu của trâu tháng 6, có 1/23 (4,35%) con bị nhiễm tiên mao trùng. Tháng 7, có 3/41 (7,32%) con bị nhiễm tiên mao trùng. Tháng 8 có 6/55 (10,91%) con bị nhiễm tiên mao trùng. Tháng 9 có 6/52 (11,54%) con bị nhiễm tiên mao trùng. Tháng 10 có 5/34 (14,71%) con bị nhiễm tiên mao trùng.
Như vậy, tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng tăng dần qua các tháng kiểm tra. Tháng 6 tỷ lệ nhiễm thấp nhất 4,35%. Tỷ lệ nhiễm từ tháng 7 đến tháng 9 tăng lên 7,32% đến 11,54%. Tỷ lệ nhiễm cao nhất vào tháng 10, chiếm 14,71%. Do các tháng này nóng ẩm, mưa nhiều nên ruồi, mòng hoạt động mạnh, chúng hút máu và gieo truyền bệnh cho trâu nhanh chóng. Tháng 10 vào cuối mùa thu, thời tiết chuyển dần sang lạnh, gia súc phải làm việc nặng nhọc do tháng vào vụ gặt, sức đề kháng suy giảm. Vì vậy, vào tháng 10 những trâu nhiễm tiên mao trùng ở các tháng trước có khả năng phát bệnh nhiều hơn.